pcDNA6 TR哺乳动物表达载体说明
真核细胞常见的表达载体及真核细胞表达外源基因的调控(精)

真核细胞常见表达载体1. pCMVp-NEO-BAN载体特点: 该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对,主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成,在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。
更重要的是,由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在,转染细胞后,用G418筛选,可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。
插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。
注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。
2. pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白,在PCMV启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。
Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成,能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。
此外,载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制,而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点,将外源基因扦入这些位点,将合成外源基因和EGFP的融合基因。
借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。
亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1。
Excitation maximum = 488 nm; Emission maximum = 507图示为启动子分泌信号肽和多克隆位点区域:Ase1.pCMV…ccg cta gcg cta ccg gtc gcc acc atg- .EGFP…BamH1…SV40 poly A+Nhe1 Age13. pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体特点: pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因,在PCMV启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达。
真核细胞常见表达载体

真核细胞常见表达载体1、pCMVp-NEO-BAN载体特点: 该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对,主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成,在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。
更重要的是,由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在,转染细胞后,用G41 8筛选,可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。
插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。
注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。
2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector)特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白,在PCMV启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。
Neo抗性盒由SV4 0早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成,能应用G4 18筛选稳定转染的真核细胞株。
此外,载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制,而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点,将外源基因扦入这些位点,将合成外源基因和EGFP的融合基因。
借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。
亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)。
3、pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体特点: pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因,在PCMV启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。
pTRE3G-Luc哺乳动物表达载体说明

pTRE3G-Luc哺乳动物表达载体说明pTRE3G-Luc编号载体名称北京华越洋⽣物VECT6088 pTRE3G--‐LucpTRE3G--‐Luc载体基本信息载体名称: pTRE3G-Luc质粒类型: 哺乳细胞表达;四环素调控载体⾼拷贝/低拷贝: --启动⼦: --克隆⽅法: 多克隆位点,限制性内切酶载体⼤⼩: 5075bp5' 测序引物及序列: --3' 测序引物及序列: --载体标签: --载体抗性: 氨苄青霉素(Ampicillin)筛选标记: --备注: --稳定性: --组成型: --病毒/⾮病毒: --pTRE3G--‐Luc载体质粒图谱和多克隆位点信息其他哺乳动物表达载体:pCHO1.0 pBApo-CMV-Pur pOPRSVIpcDNA3.1/His C pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO pREP4pcDNA3.1/His B pcDNA5/FRT/TO-TOPO pDual-GCpcDNA3.1/His A pcDNA5/TO pBK-RSVpIRESpuro3 pcDNA5/FRT/TO pBK-CMVpIRES2-EGFP pcDNA5/FRT pBI-CMV4pTT5 pFLAG-CMV2 pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ pNFkB-DD-tdTomato pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO pOPI3CAT pBI-CMV5 pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO pGene/V5-His B pSEAP2-Basic pOptiVEC-TOPO pSwitchpSEAP2-Control pCMV-MEKK1 pCMVLacIpBI-CMV3 pCMV-MEK1 pVgRxRpBI-CMV2 pCMV-PKA pINDpBI-CMV1 pcDNA6.2/nTC-Tag-DEST pTRE3G-LucpNFκB-MetLuc2-Reporter pcDNA6.2/cTC-Tag-DEST pTRE3GpCRE-MetLuc2-Reporter pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO pTRE2-hygropAcGFP1-Actin pcDNA6.2/V5/GW/D-TOPO pTRE-TightpAcGFP1-N In-Fusion Ready pcDNA6.2/nGeneBLAzer-GW/D-TOPO pTK-hygpAcGFP1-C3 pcDNA6.2/C-YFP-DEST pTet-OnpAcGFP1-C pcDNA6.2/cGeneBLAzer-DEST pTet-OffpAcGFP1-p53 pcDNA6/V5-His A pTet on advanced pAcGFP1-Mito pcDNA6/V5-His B pRevTREpAcGFP1-Mem pcDNA6/V5-His C pRevTet-OnpAcGFP1-Lam pcDNA6/myc-His C pRevTet-OffpAcGFP1-Golgi pcDNA6/myc-His A pCMV-Tet3GpAcGFP1-F pcDNA6/myc-His B pTRE2pAcGFP1-Hyg-C1 pcDNA6.2/nGeneBLAzer-DEST pBD-NF-κBpAsRed2-N1 pcDNA4/HisMax-TOPO pCMV-ADptdTomato-N1 pcDNA6.2/nLumio-DEST pCMV-BDpCMV-tdTomato pcDNA6.2/cLumio-DEST pBIND-Id ControlpCRE-DD-tdTomato pcDNA4/myc-His C pBINDpCMV-DsRed-Express2 pcDNA4/HisMax C pG5 luciferasepEF1α-tdTomato pcDNA4/HisMax A pACT-MyoDpCRE-hrGFP c-Flag pcDNA3 pACTptdTomato-C1 pcDNA4/HisMax B pCMV-SPORT6 pAsRed2-C1 pcDNA4/myc-His B pGL4.13pGL3-Promoter pcDNA4/myc-His A pGL4.19pGL3 basic pcDNA4/His C pGL4.26pAcGFP1-C2 pcDNA4/His B pGL4.20pAcGFP1-C1 pcDNA4/His A pGL4.29pAcGFP1-N3 pcDNA6/TR pGL4.30pAcGFP1-N2 pcDNA4/TO/Myc-His A pGL4.27pAcGFP1-N1 pcDNA4/TO pGL4.75pAcGFP1-C In-Fusion Ready pcDNA4/TO/Myc-His B pGL4.10pCRE-DD-AmCyan1 pcDNA4/TO/Myc-His C pGRN145pNFkB-DD-AmCyan1 pcDNA3.3-TOPO pSecTag2 A pDsRed2-Bid pBudCE4.1 pEBVHis B pDsRED2-Mito pFLAG-CMV-4 pEBVHis ApDD-AmCyan1 Reporter pFLAG-CMV-3 pCMV-Tag 3C pAmCyan1-N1 pFLAG-CMV-2 pCMV-Tag 3A pAmCyan1-C1 pFLAG-CMV-5a pCMV-Tag 3BpEF1α-IRES-DsRed-Express2 p3XFLAG-CMV-9 pCMV-Tag 5CpEF1α-DsRed-Monomer-N1 p3xFLAG-CMV-10 pCMV-Tag 5A pDsRED-Monomer-N1 p3XFLAG-CMV-8 pCMV-Tag 4A pDsRed-Express-N1 p3XFLAG-CMV-7.1 pCMV-Tag 5Bp3XFLAG-CMV-7 pDsRed-Monomer-N In-Fusion Ready pCMV-Tag 4B pDsRed-Express-C1 p3XFLAG-CMV-13 pCMV-Tag2C pIRES2-ZsGreen1 p3XFLAG-CMV-14 pCMV-Tag 2B pDsRed-Express2-C1 plRES2-ZsGreen1 pCMV-Tag 2A pDsRed-Express2-N1 pBApo-EF1α-pur pCMV-LacZpEF1α-DsRed-Express2 pBApo-EF1α-neo pCMV-MycpIRES2-DsRed-Express pBApo-CMV pEF1α-IRES-AcGFP1 pIRES2-DsRed-Express2 pBApo-CMV-neo pEF1α-IRES-ZsGreen1 pIRES-hrGFP-1a pIRES-EGFP pEF1α-AcGFP1-N1 pIRESneo2 pIRESneo3 pIRES2-DsRed2 pIRESneo pDsRed-Monomer pIRES2-AcGFP1 pIREShyg3 pIRES。
pAd-BLOCK-iT-DEST使用说明

pAd-BLOCK-iT-DESTpAd-BLOCK-iT-DEST Gateway载体基本信息:载体名称: pAd-BLOCK-iT-DEST质粒类型: RNAi载体;Gateway载体;腺病毒载体高拷贝/低拷贝: 低拷贝启动子: U6克隆方法: Gateway载体大小: 34864bp5' 测序引物及序列: 5′-GACTTTGACCGTTTACGTGGAGAC-3′3' 测序引物及序列: 5′-CCTTAAGCCACGCCCACACATTTC-3′RNAi类型: shRNA载体抗性: 氨苄青霉素筛选标记: --克隆菌株: ccdB阳性筛选 DB3.1感受态细胞,阴性筛选用 OmniMAX2-T1感受态细胞重组腺病毒载体的复制扩增则最好使用 Stbl3感受态细胞,使用DH5a则常常会发生质粒拷贝数降低、小提提不出质粒、质粒大小改变等现象。
备注: 对应的入门载体是 pENTR/U6腺病毒包装可以选用Invitrogen出品的293A包装细胞系,或者使用bj5183菌株。
稳定性: 稳表达组成型: 组成型病毒/非病毒: 腺病毒pAd-BLOCK-iT-DEST载体质粒图谱和多克隆位点信息:pAd-BLOCK-iT-DEST载体简介:pAd-BLOCK-iT-DEST RNAi Gateway 载体(pAd-BLOCK-iT-DEST RNAi Gateway Vector) 可用于在体内高效导入和瞬时表达来自腺病毒载体的短发夹RNA (shRNA)。
新型克隆方法将约50 bp DNA 寡核苷酸克隆到BLOCK-iT-U6 入门载体中紧随U6 polIII 启动子之后的位置。
将入门载体高效重组到pAd-BLOCK-iT-DEST 载体后进行病毒制备和转导,随后U6 启动子驱动的shRNA 可在大多数分裂或非分裂哺乳动物细胞类型中瞬时表达。
生成的shRNA 可避开宿主防御机制,将有效产生RNAi 基因抑制反应。
各种表达载体

表达载体一、原核细胞表达载体1. pBAD载体:特点; 该表达质粒含有araBAD(arabinose)操纵子的P BAD启动子和编码该启动子的正负调控子基因araC,具有紧密调控功能和高水平表达外源蛋白质的原核细胞表达载体。
请注意:1. 当要扦入其他信号肽片段,改建此载体时,请不要利用该载体上的Nde1 EcoR1 BamH1 Kpn1和Pst1位点,以免造成重组困难,因为前述内切酶在此载体上均有二个位点,最好使用只有一个酶切位点的Sac1和Hind111位点。
同时记住,如在不含任何信号肽的P BAD表达质粒扦入信号肽,其非编码N-末端要包含核糖体结合位点(RBS)核苷酸序列。
2在使用含Omp A分泌信号肽的P BAD表达质粒时,请应用Omp A分泌信号肽上的Sac1以及载体Hind111酶切位点,这些在载体序列上都是单个酶切位点。
本公司目前有含Omp A分泌信号肽和不含任何信号肽的二种P BAD表达质粒,其多克隆位点区域图谱如下:(a)、含Omp A分泌信号肽的P BAD表达质粒多克隆区域SDP BAD….TACCCGTTTTTTTCC….GCTAGCAGGAGGAAACG ATG AAA AAG ACA GCT ATC GCG ATT GCA GTG GCA CTG GCT GGTA M ATTC GCT ACC GTA GCC ATG GCC GAG CTC GGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGCCTGCAGGCATCCAAGCTTNco1 Pst1 Hind111 (b)、不含分泌信号肽的P BAD表达质粒多克隆区域EcoR1 Kpn1 BamH1 Pst1P BAD….TACCCGTTTTTTTGG.GCTAGCGAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGCCTGCAGGCATCCAAGCTTNde1 Sac1 Smal 1 Hind111下图显示本公司应用pBAD表达载体完成的实验结果:pBAD载体驱动大分子蛋白质在原核细胞Origami(DE3)内高效表达2. pCAl-n & pCAl-pelB载体特点: 该原核细胞表达载体是来源于以T7 RNA聚合酶为基础的pET载体,含有T7/LacO启动子、编码钙调素结合多肽标鉴和凝血酶切点的核苷酸序列。
pcDNA4 myc-His C哺乳动物表达载体说明
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pcDNA4/myc-His C编号 载体名称北京华越洋生物VECT6123 pcDNA4/myc-‐His C pcDNA4/myc-‐His C载体基本信息载体名称: pcDNA4/myc-His C质粒类型: 哺乳动物表达载体;cDNA表达载体高拷贝/低拷贝: 高拷贝克隆方法: 多克隆位点,限制性内切酶启动子: CMV载体大小: 5071 bp5' 测序引物及序列: T7 Forward: 5’-TAATACGACTCACTATAGGG-3’ 3' 测序引物及序列: BGH Reverse: 5-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3 载体标签: His Tag (C-端), c-Myc Epitope Tag(C-端)载体抗性: 氨苄青霉素筛选标记: Zeocin克隆菌株: TOP10F´, DH5a, JM109, TOP10宿主细胞(系): 常规细胞系,如293、Hela等备注: pcDNA4/myc-His C 载体是哺乳动物表达载体,适用于cDNA的表达与克隆;CMV启动子驱动目的基因的高水平表达;pcDNA4/myc-His A,B,C的区别仅在于多克隆位点处。
稳定性: 瞬表达或稳表达组成型/诱导型: 组成型病毒/非病毒: 非病毒pcDNA4/myc-‐His C载体质粒图谱和多克隆位点信息pcDNA4/myc-‐His C载体描述pcDNA4/myc-His A, B, and C are 5.1 kb vectors designed for overproduction of recombinant proteins in mammalian cell lines. Features of the vectors allow purification and detection of expressed proteins (see pages 11-12 for more information). High-level stable and transient expression can be carried out in most mammalian cells. The vectors contain the following elements:Human cytomegalovirus immediate-early (CMV) promoter for high-level expression in a wide range of mammalian cellsThree reading frames to facilitate in-frame cloning with a C-terminal peptide encoding the myc (c-myc) epitope and a polyhistidine (6xHis) metal-binding tagZeocin resistance gene for selection of stable cell lines (Mulsant et al., 1988) (see page 14 for more information).Episomal replication in cell lines that are latently infected with SV40 or that express the SV40 large T antigen (e.g., COS7).The control plasmid, pcDNA4/myc-His/lacZ is included for use as a positive control for transfection, expression, and detection in the cell line of choice.实验流程:Use the following outline to clone and express your gene of interest in pcDNA4/myc-His:1.Consult the multiple cloning sites described on pages 3-4 to determine which vector (A, B, or C) to use for cloning your gene in frame with the C-terminal myc epitope and the polyhistidine tag.2.Ligate your insert into the appropriate vector and transform into E. coli. Select transformants on 50 to 100 μg/mL ampicillin or 25 to 50g/mL Zeocin in Low Salt LB. For more information.3.Analyze your transformants for the presence of insert by restriction digestion.4.Select a transformant with the correct restriction pattern and use sequencing to confirm that your gene is cloned in-frame with the C-terminal peptide.5.Transfect your construct into the cell line of choice using your own method of transfection. Generate a stable cell line, if desired.6.Test for expression of your recombinant gene by western blot analysis or functional assay. For antibodies to the myc epitope or the C-terminal polyhistidine tag.7.To purify your recombinant protein, you may use metal-chelating resin such as ProBond. ProBond resin is available separatelypcDNA4/myc-‐His C载体序列ORIGIN1 GACGGATCGG GAGATCTCCC GATCCCCTAT GGTCGACTCT CAGTACAATC TGCTCTGATG61 CCGCATAGTT AAGCCAGTAT CTGCTCCCTG CTTGTGTGTT GGAGGTCGCT GAGTAGTGCG 121 CGAGCAAAAT TTAAGCTACA ACAAGGCAAG GCTTGACCGA CAATTGCATG AAGAATCTGC 181 TTAGGGTTAG GCGTTTTGCG CTGCTTCGCG ATGTACGGGC CAGATATACG CGTTGACATT 241 GATTATTGAC TAGTTATTAA TAGTAATCAA TTACGGGGTC ATTAGTTCAT AGCCCATATA 301 TGGAGTTCCG CGTTACATAA CTTACGGTAA ATGGCCCGCC TGGCTGACCG CCCAACGACC 361 CCCGCCCATT GACGTCAATA ATGACGTATG TTCCCATAGT AACGCCAATA GGGACTTTCC 421 ATTGACGTCA ATGGGTGGAC TATTTACGGT AAACTGCCCA CTTGGCAGTA CATCAAGTGT 481 ATCATATGCC AAGTACGCCC CCTATTGACG TCAATGACGG TAAATGGCCC GCCTGGCATT 541 ATGCCCAGTA CATGACCTTA TGGGACTTTC CTACTTGGCA GTACATCTAC GTATTAGTCA 601 TCGCTATTAC CATGGTGATG CGGTTTTGGC AGTACATCAA TGGGCGTGGA TAGCGGTTTG 661 ACTCACGGGG ATTTCCAAGT CTCCACCCCA TTGACGTCAA TGGGAGTTTG TTTTGGCACC 721 AAAATCAACG GGACTTTCCA AAATGTCGTA ACAACTCCGC CCCATTGACG CAAATGGGCG 781 GTAGGCGTGT ACGGTGGGAG GTCTATATAA GCAGAGCTCT CTGGCTAACT AGAGAACCCA 841 CTGCTTACTG GCTTATCGAA ATTAATACGA CTCACTATAG GGAGACCCAA GCTGGCTAGT 901 TAAGCTTGGT ACCGAGCTCG GATCCACTAG TCCAGTGTGG TGGAATTCTG CAGATATCCA 961 GCACAGTGGC GGCCGCTCGA GGTCACCCAT TCGAACAAAA ACTCATCTCA GAAGAGGATC 1021 TGAATATGCA TACCGGTCAT CATCACCATC ACCATTGAGT TTAAACCCGC TGATCAGCCT 1081 CGACTGTGCC TTCTAGTTGC CAGCCATCTG TTGTTTGCCC CTCCCCCGTG CCTTCCTTGA 1141 CCCTGGAAGG TGCCACTCCC ACTGTCCTTT CCTAATAAAA TGAGGAAATT GCATCGCATT 1201 GTCTGAGTAG GTGTCATTCT ATTCTGGGGG GTGGGGTGGG GCAGGACAGC AAGGGGGAGG 1261 ATTGGGAAGA CAATAGCAGG CATGCTGGGG ATGCGGTGGG CTCTATGGCT TCTGAGGCGG 1321 AAAGAACCAG CTGGGGCTCT AGGGGGTATC CCCACGCGCC CTGTAGCGGC GCATTAAGCG 1381 CGGCGGGTGT GGTGGTTACG CGCAGCGTGA CCGCTACACT TGCCAGCGCC CTAGCGCCCG 1441 CTCCTTTCGC TTTCTTCCCT TCCTTTCTCG CCACGTTCGC CGGCTTTCCC CGTCAAGCTC 1501 TAAATCGGGG CATCCCTTTA GGGTTCCGAT TTAGTGCTTT ACGGCACCTC GACCCCAAAA 1561 AACTTGATTA GGGTGATGGT TCACGTAGTG GGCCATCGCC CTGATAGACG GTTTTTCGCC 1621 CTTTGACGTT GGAGTCCACG TTCTTTAATA GTGGACTCTT GTTCCAAACT GGAACAACAC 1681 TCAACCCTAT CTCGGTCTAT TCTTTTGATT TATAAGGGAT TTTGGGGATT TCGGCCTATT 1741 GGTTAAAAAA TGAGCTGATT TAACAAAAAT TTAACGCGAA TTAATTCTGT GGAATGTGTG 1801 TCAGTTAGGG TGTGGAAAGT CCCCAGGCTC CCCAGGCAGG CAGAAGTATG CAAAGCATGC 1861 ATCTCAATTA GTCAGCAACC AGGTGTGGAA AGTCCCCAGG CTCCCCAGCA GGCAGAAGTA 1921 TGCAAAGCAT GCATCTCAAT TAGTCAGCAA CCATAGTCCC GCCCCTAACT CCGCCCATCC 1981 CGCCCCTAAC TCCGCCCAGT TCCGCCCATT CTCCGCCCCA TGGCTGACTA ATTTTTTTTA 2041 TTTATGCAGA GGCCGAGGCC GCCTCTGCCT CTGAGCTATT CCAGAAGTAG TGAGGAGGCT 2101 TTTTTGGAGG CCTAGGCTTT TGCAAAAAGC TCCCGGGAGC TTGTATATCC ATTTTCGGAT 2161 CTGATCAGCA CGTGTTGACA ATTAATCATC GGCATAGTAT ATCGGCATAG TATAATACGA 2221 CAAGGTGAGG AACTAAACCA TGGCCAAGTT GACCAGTGCC GTTCCGGTGC TCACCGCGCG 2281 CGACGTCGCC GGAGCGGTCG AGTTCTGGAC CGACCGGCTC GGGTTCTCCC GGGACTTCGT 2341 GGAGGACGAC TTCGCCGGTG TGGTCCGGGA CGACGTGACC CTGTTCATCA GCGCGGTCCA 2401 GGACCAGGTG GTGCCGGACA ACACCCTGGC CTGGGTGTGG GTGCGCGGCC TGGACGAGCT 2461 GTACGCCGAG TGGTCGGAGG TCGTGTCCAC GAACTTCCGG GACGCCTCCG GGCCGGCCAT 2521 GACCGAGATC GGCGAGCAGC CGTGGGGGCG GGAGTTCGCC CTGCGCGACC CGGCCGGCAA 2581 CTGCGTGCAC TTCGTGGCCG AGGAGCAGGA CTGACACGTG CTACGAGATT TCGATTCCAC 2641 CGCCGCCTTC TATGAAAGGT TGGGCTTCGG AATCGTTTTC CGGGACGCCG GCTGGATGAT2701 CCTCCAGCGC GGGGATCTCA TGCTGGAGTT CTTCGCCCAC CCCAACTTGT TTATTGCAGC 2761 TTATAATGGT TACAAATAAA GCAATAGCAT CACAAATTTC ACAAATAAAG CATTTTTTTC 2821 ACTGCATTCT AGTTGTGGTT TGTCCAAACT CATCAATGTA TCTTATCATG TCTGTATACC 2881 GTCGACCTCT AGCTAGAGCT TGGCGTAATC ATGGTCATAG CTGTTTCCTG TGTGAAATTG 2941 TTATCCGCTC ACAATTCCAC ACAACATACG AGCCGGAAGC ATAAAGTGTA AAGCCTGGGG 3001 TGCCTAATGA GTGAGCTAAC TCACATTAAT TGCGTTGCGC TCACTGCCCG CTTTCCAGTC 3061 GGGAAACCTG TCGTGCCAGC TGCATTAATG AATCGGCCAA CGCGCGGGGA GAGGCGGTTT 3121 GCGTATTGGG CGCTCTTCCG CTTCCTCGCT CACTGACTCG CTGCGCTCGG TCGTTCGGCT 3181 GCGGCGAGCG GTATCAGCTC ACTCAAAGGC GGTAATACGG TTATCCACAG AATCAGGGGA 3241 TAACGCAGGA AAGAACATGT GAGCAAAAGG CCAGCAAAAG GCCAGGAACC GTAAAAAGGC 3301 CGCGTTGCTG GCGTTTTTCC ATAGGCTCCG CCCCCCTGAC GAGCATCACA AAAATCGACG 3361 CTCAAGTCAG AGGTGGCGAA ACCCGACAGG ACTATAAAGA TACCAGGCGT TTCCCCCTGG 3421 AAGCTCCCTC GTGCGCTCTC CTGTTCCGAC CCTGCCGCTT ACCGGATACC TGTCCGCCTT 3481 TCTCCCTTCG GGAAGCGTGG CGCTTTCTCA ATGCTCACGC TGTAGGTATC TCAGTTCGGT 3541 GTAGGTCGTT CGCTCCAAGC TGGGCTGTGT GCACGAACCC CCCGTTCAGC CCGACCGCTG 3601 CGCCTTATCC GGTAACTATC GTCTTGAGTC CAACCCGGTA AGACACGACT TATCGCCACT 3661 GGCAGCAGCC ACTGGTAACA GGATTAGCAG AGCGAGGTAT GTAGGCGGTG CTACAGAGTT 3721 CTTGAAGTGG TGGCCTAACT ACGGCTACAC TAGAAGGACA GTATTTGGTA TCTGCGCTCT 3781 GCTGAAGCCA GTTACCTTCG GAAAAAGAGT TGGTAGCTCT TGATCCGGCA AACAAACCAC 3841 CGCTGGTAGC GGTGGTTTTT TTGTTTGCAA GCAGCAGATT ACGCGCAGAA AAAAAGGATC 3901 TCAAGAAGAT CCTTTGATCT TTTCTACGGG GTCTGACGCT CAGTGGAACG AAAACTCACG 3961 TTAAGGGATT TTGGTCATGA GATTATCAAA AAGGATCTTC ACCTAGATCC TTTTAAATTA 4021 AAAATGAAGT TTTAAATCAA TCTAAAGTAT ATATGAGTAA ACTTGGTCTG ACAGTTACCA 4081 ATGCTTAATC AGTGAGGCAC CTATCTCAGC GATCTGTCTA TTTCGTTCAT CCATAGTTGC 4141 CTGACTCCCC GTCGTGTAGA TAACTACGAT ACGGGAGGGC TTACCATCTG GCCCCAGTGC 4201 TGCAATGATA CCGCGAGACC CACGCTCACC GGCTCCAGAT TTATCAGCAA TAAACCAGCC 4261 AGCCGGAAGG GCCGAGCGCA GAAGTGGTCC TGCAACTTTA TCCGCCTCCA TCCAGTCTAT 4321 TAATTGTTGC CGGGAAGCTA GAGTAAGTAG TTCGCCAGTT AATAGTTTGC GCAACGTTGT 4381 TGCCATTGCT ACAGGCATCG TGGTGTCACG CTCGTCGTTT GGTATGGCTT CATTCAGCTC 4441 CGGTTCCCAA CGATCAAGGC GAGTTACATG ATCCCCCATG TTGTGCAAAA AAGCGGTTAG 4501 CTCCTTCGGT CCTCCGATCG TTGTCAGAAG TAAGTTGGCC GCAGTGTTAT CACTCATGGT 4561 TATGGCAGCA CTGCATAATT CTCTTACTGT CATGCCATCC GTAAGATGCT TTTCTGTGAC 4621 TGGTGAGTAC TCAACCAAGT CATTCTGAGA ATAGTGTATG CGGCGACCGA GTTGCTCTTG 4681 CCCGGCGTCA ATACGGGATA ATACCGCGCC ACATAGCAGA ACTTTAAAAG TGCTCATCAT 4741 TGGAAAACGT TCTTCGGGGC GAAAACTCTC AAGGATCTTA CCGCTGTTGA GATCCAGTTC 4801 GATGTAACCC ACTCGTGCAC CCAACTGATC TTCAGCATCT TTTACTTTCA CCAGCGTTTC 4861 TGGGTGAGCA AAAACAGGAA GGCAAAATGC CGCAAAAAAG GGAATAAGGG CGACACGGAA 4921 ATGTTGAATA CTCATACTCT TCCTTTTTCA ATATTATTGA AGCATTTATC AGGGTTATTG 4981 TCTCATGAGC GGATACATAT TTGAATGTAT TTAGAAAAAT AAACAAATAG GGGTTCCGCG 5041 CACATTTCCC CGAAAAGTGC CACCTGACGT C//其他哺乳动物表达载体:pCHO1.0 pBApo-CMV-Pur pOPRSVIpcDNA3.1/His C pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO pREP4pcDNA3.1/His B pcDNA5/FRT/TO-TOPO pDual-GCpcDNA3.1/His A pcDNA5/TO pBK-RSVpIRESpuro3 pcDNA5/FRT/TO pBK-CMVpIRES2-EGFP pcDNA5/FRT pBI-CMV4pTT5 pFLAG-CMV2 pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ pNFkB-DD-tdTomato pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO pOPI3CATpBI-CMV5 pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO pGene/V5-His B pSEAP2-Basic pOptiVEC-TOPO pSwitchpSEAP2-Control pCMV-MEKK1 pCMVLacIpBI-CMV3 pCMV-MEK1 pVgRxRpBI-CMV2 pCMV-PKA pINDpBI-CMV1 pcDNA6.2/nTC-Tag-DEST pTRE3G-LucpNFκB-MetLuc2-Reporter pcDNA6.2/cTC-Tag-DEST pTRE3GpCRE-MetLuc2-Reporter pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO pTRE2-hygropAcGFP1-Actin pcDNA6.2/V5/GW/D-TOPO pTRE-TightpAcGFP1-N In-Fusion Ready pcDNA6.2/nGeneBLAzer-GW/D-TOPO pTK-hygpAcGFP1-C3 pcDNA6.2/C-YFP-DEST pTet-OnpAcGFP1-C pcDNA6.2/cGeneBLAzer-DEST pTet-OffpAcGFP1-p53 pcDNA6/V5-His A pTet on advanced pAcGFP1-Mito pcDNA6/V5-His B pRevTREpAcGFP1-Mem pcDNA6/V5-His C pRevTet-OnpAcGFP1-Lam pcDNA6/myc-His C pRevTet-OffpAcGFP1-Golgi pcDNA6/myc-His A pCMV-Tet3GpAcGFP1-F pcDNA6/myc-His B pTRE2pAcGFP1-Hyg-C1 pcDNA6.2/nGeneBLAzer-DEST pBD-NF-κBpAsRed2-N1 pcDNA4/HisMax-TOPO pCMV-ADptdTomato-N1 pcDNA6.2/nLumio-DEST pCMV-BDpCMV-tdTomato pcDNA6.2/cLumio-DEST pBIND-Id ControlpCRE-DD-tdTomato pcDNA4/myc-His C pBINDpCMV-DsRed-Express2 pcDNA4/HisMax C pG5 luciferasepEF1α-tdTomato pcDNA4/HisMax A pACT-MyoDpCRE-hrGFP c-Flag pcDNA3 pACTptdTomato-C1 pcDNA4/HisMax B pCMV-SPORT6 pAsRed2-C1 pcDNA4/myc-His B pGL4.13pGL3-Promoter pcDNA4/myc-His A pGL4.19pGL3 basic pcDNA4/His C pGL4.26pAcGFP1-C2 pcDNA4/His B pGL4.20pAcGFP1-C1 pcDNA4/His A pGL4.29pAcGFP1-N3 pcDNA6/TR pGL4.30pAcGFP1-N2 pcDNA4/TO/Myc-His A pGL4.27pAcGFP1-N1 pcDNA4/TO pGL4.75pAcGFP1-C In-Fusion Ready pcDNA4/TO/Myc-His B pGL4.10pCRE-DD-AmCyan1 pcDNA4/TO/Myc-His C pGRN145pNFkB-DD-AmCyan1 pcDNA3.3-TOPO pSecTag2 A pDsRed2-Bid pBudCE4.1 pEBVHis B pDsRED2-Mito pFLAG-CMV-4 pEBVHis ApDD-AmCyan1 Reporter pFLAG-CMV-3 pCMV-Tag 3C pAmCyan1-N1 pFLAG-CMV-2 pCMV-Tag 3A pAmCyan1-C1 pFLAG-CMV-5a pCMV-Tag 3BpEF1α-IRES-DsRed-Express2 p3XFLAG-CMV-9 pCMV-Tag 5CpEF1α-DsRed-Monomer-N1 p3xFLAG-CMV-10 pCMV-Tag 5A pDsRED-Monomer-N1 p3XFLAG-CMV-8 pCMV-Tag 4A pDsRed-Express-N1 p3XFLAG-CMV-7.1 pCMV-Tag 5Bp3XFLAG-CMV-7 pDsRed-Monomer-N In-Fusion Ready pCMV-Tag 4B pDsRed-Express-C1 p3XFLAG-CMV-13 pCMV-Tag 2C pIRES2-ZsGreen1 p3XFLAG-CMV-14 pCMV-Tag 2B pDsRed-Express2-C1 plRES2-ZsGreen1 pCMV-Tag 2A pDsRed-Express2-N1 pBApo-EF1α-pur pCMV-LacZpEF1α-DsRed-Express2 pBApo-EF1α-neo pCMV-MycpIRES2-DsRed-Express pBApo-CMV pEF1α-IRES-AcGFP1 pIRES2-DsRed-Express2 pBApo-CMV-neo pEF1α-IRES-ZsGreen1 pIRES-hrGFP-1a pIRES-EGFP pEF1α-AcGFP1-N1 pIRESneo2 pIRESneo3 pIRES2-DsRed2 pIRESneo pDsRed-Monomer pIRES2-AcGFP1 pIREShyg3 pIRES。
真核表达载体
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常用的哺乳动物细胞表达载体和组成成分有SV40病毒表达载体、痘病毒表达载体、逆转录病毒表达载体,常见的哺乳动物表达载体的组成成分有:原核DNA序列、启动子、增强子、拼接信号、终止信号和多聚腺苷酸化信号、筛选标记及真核病毒序列等。
(1)原核DNA序列:为了能在大肠杆菌中增殖,得到大量能转染哺乳动物细胞的重组DNA,哺乳动物表达载体中通常有一段原核序列,包括一个能在大肠杆菌中自身复制的复制子,便于挑选含重组DNA细菌的抗生素抗性基因,以及便于把真核序列插入载体的少数单一限制性酶切位点。
当具备这些序列以后,外源的真核基因序列可由单一酶切位点插入载体中,形成的重组DNA可在大肠杆菌中增殖,经抗生素筛选后进行DNA提取,即可得到大量的所需的哺乳动物细胞表达载体。
(2)启动子:真核生物的启动子区域位于TATA区上游100bp到230bp之间,TAT区位于转录起始点上游25-30bp处。
启动子的转录效率因细胞而异。
因此需根据宿主细胞类型选择不同的启动子。
(3)增强子:增强子是使启动子的基因转录效率显著提高的一类顺式作用元件,有多个独立核苷酸序列组成。
它们的作用通常不具有方向性,在位于转录起始点的下游或离启动子很远时仍有活性。
许多增强子只能在特定的组织或细胞中起作用,即具有组织细胞的特异性,因此在构建真核表达载体的时候,应根据宿主细胞来选择增强子。
(4)剪接信号:真核基因由许多内含子和外显子组成。
被转录成mRNA前体以后,需通过剪除内含子、连接外显子才能成为成熟的mRNA。
一般mRNA拼接需要的基本序列位于内含子的5’和3’末端,因此,改变拼接位点5’和3’末端两侧的外显子序列可能会影响邻近拼接位点的使用效率,在替换外显子时应注意。
(5)终止信号和多聚腺苷化的信号:转录的终止信号常常位于多聚腺苷化位点下游的一端长度为几百个核苷酸碱基的DNA区域内。
多聚腺苷化需要两种序列:位于腺苷化位点下游的GU丰富区或U丰富区和位于腺苷化位点上游11-30个核苷酸处的一个有6个核苷酸碱基组成并高度保守的AAUAAA序列。
哺乳动物细胞表达系统原理
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哺乳动物细胞表达系统原理
哺乳动物细胞表达系统是一种用于生产重组蛋白和基因治疗的有效工具。
其原理主要基于哺乳动物细胞具有促使蛋白正确折叠和实现复杂修饰的功能,使得表达的蛋白更接近天然状态。
哺乳动物细胞表达系统有两种主要方式:瞬时转染表达和稳定转染表达(稳定细胞系构建)。
瞬时转染表达是指在短时间内表达出一定量的蛋白。
外源基因不整合到宿主染色体上,随着细胞的生长不断丢失,表达小量蛋白的过程。
这种方法简捷,实验周期短。
稳定转染/稳定细胞株筛选则是指将构建好的质粒线性化,在导入到培养好
的哺乳动物细胞内,通过一定的转染方法实现质粒与细胞的融合。
线性化的质粒进入到宿主细胞后,与细胞自身的基因组进行整合,同时随着细胞的生长繁殖而生长,过程中在经过一系列的筛选鉴定,排除未正确融合的重组子,或不能稳定表达下去的重组子,最终筛选出可以稳定表达的细胞株。
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载体——精选推荐
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原核表达 载体
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配套大肠 杆菌
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BL21(DE3) BL21(DE3)plysS Rosetta(DE3) Rosetta(DE3)plysS Rosetta-gami(DE3) Rosetta-gami B(DE3)pLysS Orgami(DE3) OrgamiB(DE3) BLR(DE3) pTWIN1 pTYB11 pMXB10 pTXB1 ER2566 pGEX-6P-1 pGEX-4T-2 pGEX-4T-3 pRset-a C41(DE3) BL21 codonplus(DE3)RIPL TAGZyme pQE-2 pQE-Trisystem pOG44 pORF-lacZ pORF-HSV1tk pSP73 pUC18 pUC19 pBR322 pSP64 pBluescript II SK(+) SuperCos 1 pGAPZα A pPICZα A
pTT5哺乳动物表达载体说明
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pTT5编号 载体名称北京华越洋生物VECT6098 pTT5pTT5载体基本信息载体名称: pTT5质粒类型: 哺乳动物细胞载体高拷贝/低拷贝: 高拷贝克隆方法: 限制性内切酶,多克隆位点启动子: CMV载体大小: 4401 bp5' 测序引物及序列: CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG 3' 测序引物及序列: --载体标签: 无载体抗性: 氨苄青霉素筛选标记: --克隆菌株: DH5α等宿主细胞(系): 常规细胞系(293、CV-1、CHO等)备注: 利用该质粒构建的基因表达是非融合表达,在构建质粒时需要在基因前面添加Kozak序列来增加蛋白表达效率。
稳定性: 瞬时表达组成型/诱导型: 诱导性病毒/非病毒: 非病毒pTT5载体质粒图谱和多克隆位点信息pTT5载体简介pTT5载体是很好的哺乳细胞瞬时蛋白表达载体,经常用于哺乳细胞的抗体轻链或者重链的表达。
pTT5载体序列ORIGIN1 GTACATTTAT ATTGGCTCAT GTCCAATATG ACCGCCATGT TGACATTGAT TATTGACTAG 61 TTATTAATAG TAATCAATTA CGGGGTCATT AGTTCATAGC CCATATATGG AGTTCCGCGT 121 TACATAACTT ACGGTAAATG GCCCGCCTGG CTGACCGCCC AACGACCCCC GCCCATTGAC 181 GTCAATAATG ACGTATGTTC CCATAGTAAC GCCAATAGGG ACTTTCCATT GACGTCAATG 241 GGTGGAGTAT TTACGGTAAA CTGCCCACTT GGCAGTACAT CAAGTGTATC ATATGCCAAG 301 TCCGCCCCCT ATTGACGTCA ATGACGGTAA ATGGCCCGCC TGGCATTATG CCCAGTACAT 361 GACCTTACGG GACTTTCCTA CTTGGCAGTA CATCTACGTA TTAGTCATCG CTATTACCAT 421 GGTGATGCGG TTTTGGCAGT ACACCAATGG GCGTGGATAG CGGTTTGACT CACGGGGATT 481 TCCAAGTCTC CACCCCATTG ACGTCAATGG GAGTTTGTTT TGGCACCAAA ATCAACGGGA 541 CTTTCCAAAA TGTCGTAATA ACCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG 601 GTGGGAGGTC TATATAAGCA GAGCTCGTTT AGTGAACCGT CAGATCCTCA CTCTCTTCCG 661 CATCGCTGTC TGCGAGGGCC AGCTGTTGGG CTCGCGGTTG AGGACAAACT CTTCGCGGTC721 TTTCCAGTAC TCTTGGATCG GAAACCCGTC GGCCTCCGAA CGGTACTCCG CCACCGAGGG 781 ACCTGAGCGA GTCCGCATCG ACCGGATCGG AAAACCTCTC GAGAAAGGCG TCTAACCAGT 841 CACAGTCGCA AGGTAGGCTG AGCACCGTGG CGGGCGGCAG CGGGTGGCGG TCGGGGTTGT 901 TTCTGGCGGA GGTGCTGCTG ATGATGTAAT TAAAGTAGGC GGTCTTGAGA CGGCGGATGG 961 TCGAGGTGAG GTGTGGCAGG CTTGAGATCC AGCTGTTGGG GTGAGTACTC CCTCTCAAAA 1021 GCGGGCATTA CTTCTGCGCT AAGATTGTCA GTTTCCAAAA ACGAGGAGGA TTTGATATTC 1081 ACCTGGCCCG ATCTGGCCAT ACACTTGAGT GACAATGACA TCCACTTTGC CTTTCTCTCC 1141 ACAGGTGTCC ACTCCCAGGT CCAAGTTTAA ACGGATCTCT AGCGAATTCC CTCTAGAGGG 1201 CCCGTTTCTG CTAGCAAGCT TGCTAGCGGC CGCTCGAGGC CGGCAAGGCC GGATCCCCCG 1261 ACCTCGACCT CTGGCTAATA AAGGAAATTT ATTTTCATTG CAATAGTGTG TTGGAATTTT 1321 TTGTGTCTCT CACTCGGAAG GACATATGGG AGGGCAAATC ATTTGGTCGA GATCCCTCGG 1381 AGATCTCTAG CTAGAGGATC GATCCCCGCC CCGGACGAAC TAAACCTGAC TACGACATCT 1441 CTGCCCCTTC TTCGCGGGGC AGTGCATGTA ATCCCTTCAG TTGGTTGGTA CAACTTGCCA 1501 ACTGAACCCT AAACGGGTAG CATATGCTTC CCGGGTAGTA GTATATACTA TCCAGACTAA 1561 CCCTAATTCA ATAGCATATG TTACCCAACG GGAAGCATAT GCTATCGAAT TAGGGTTAGT 1621 AAAAGGGTCC TAAGGAACAG CGATGTAGGT GGGCGGGCCA AGATAGGGGC GCGATTGCTG 1681 CGATCTGGAG GACAAATTAC ACACACTTGC GCCTGAGCGC CAAGCACAGG GTTGTTGGTC 1741 CTCATATTCA CGAGGTCGCT GAGAGCACGG TGGGCTAATG TTGCCATGGG TAGCATATAC 1801 TACCCAAATA TCTGGATAGC ATATGCTATC CTAATCTATA TCTGGGTAGC ATAGGCTATC 1861 CTAATCTATA TCTGGGTAGC ATATGCTATC CTAATCTATA TCTGGGTAGT ATATGCTATC 1921 CTAATTTATA TCTGGGTAGC ATAGGCTATC CTAATCTATA TCTGGGTAGC ATATGCTATC 1981 CTAATCTATA TCTGGGTAGT ATATGCTATC CTAATCTGTA TCCGGGTAGC ATATGCTATC 2041 CTAATAGAGA TTAGGGTAGT ATATGCTATC CTAATTTATA TCTGGGTAGC ATATACTACC 2101 CAAATATCTG GATAGCATAT GCTATCCTAA TCTATATCTG GGTAGCATAT GCTATCCTAA 2161 TCTATATCTG GGTAGCATAG GCTATCCTAA TCTATATCTG GGTAGCATAT GCTATCCTAA 2221 TCTATATCTG GGTAGTATAT GCTATCCTAA TTTATATCTG GGTAGCATAG GCTATCCTAA 2281 TCTATATCTG GGTAGCATAT GCTATCCTAA TCTATATCTG GGTAGTATAT GCTATCCTAA 2341 TCTGTATCCG GGTAGCATAT GCTATCCTCA TGATAAGCTG TCAAACATGA GAATTAATTC 2401 TTGAAGACGA AAGGGCCTCG TGATACGCCT ATTTTTATAG GTTAATGTCA TGATAATAAT 2461 GGTTTCTTAG ACGTCAGGTG GCACTTTTCG GGGAAATGTG CGCGGAACCC CTATTTGTTT 2521 ATTTTTCTAA ATACATTCAA ATATGTATCC GCTCATGAGA CAATAACCCT GATAAATGCT 2581 TCAATAATAT TGAAAAAGGA AGAGTATGAG TATTCAACAT TTCCGTGTCG CCCTTATTCC 2641 CTTTTTTGCG GCATTTTGCC TTCCTGTTTT TGCTCACCCA GAAACGCTGG TGAAAGTAAA 2701 AGATGCTGAA GATCAGTTGG GTGCACGAGT GGGTTACATC GAACTGGATC TCAACAGCGG 2761 TAAGATCCTT GAGAGTTTTC GCCCCGAAGA ACGTTTTCCA ATGATGAGCA CTTTTAAAGT 2821 TCTGCTATGT GGCGCGGTAT TATCCCGTGT TGACGCCGGG CAAGAGCAAC TCGGTCGCCG 2881 CATACACTAT TCTCAGAATG ACTTGGTTGA GTACTCACCA GTCACAGAAA AGCATCTTAC 2941 GGATGGCATG ACAGTAAGAG AATTATGCAG TGCTGCCATA ACCATGAGTG ATAACACTGC 3001 GGCCAACTTA CTTCTGACAA CGATCGGAGG ACCGAAGGAG CTAACCGCTT TTTTGCACAA 3061 CATGGGGGAT CATGTAACTC GCCTTGATCG TTGGGAACCG GAGCTGAATG AAGCCATACC 3121 AAACGACGAG CGTGACACCA CGATGCCTGC AGCAATGGCA ACAACGTTGC GCAAACTATT 3181 AACTGGCGAA CTACTTACTC TAGCTTCCCG GCAACAATTA ATAGACTGGA TGGAGGCGGA 3241 TAAAGTTGCA GGACCACTTC TGCGCTCGGC CCTTCCGGCT GGCTGGTTTA TTGCTGATAA 3301 ATCTGGAGCC GGTGAGCGTG GGTCTCGCGG TATCATTGCA GCACTGGGGC CAGATGGTAA3361 GCCCTCCCGT ATCGTAGTTA TCTACACGAC GGGGAGTCAG GCAACTATGG ATGAACGAAA3421 TAGACAGATC GCTGAGATAG GTGCCTCACT GATTAAGCAT TGGTAACTGT CAGACCAAGT3481 TTACTCATAT ATACTTTAGA TTGATTTAAA ACTTCATTTT TAATTTAAAA GGATCTAGGT3541 GAAGATCCTT TTTGATAATC TCATGACCAA AATCCCTTAA CGTGAGTTTT CGTTCCACTG3601 AGCGTCAGAC CCCGTAGAAA AGATCAAAGG ATCTTCTTGA GATCCTTTTT TTCTGCGCGT3661 AATCTGCTGC TTGCAAACAA AAAAACCACC GCTACCAGCG GTGGTTTGTT TGCCGGATCA3721 AGAGCTACCA ACTCTTTTTC CGAAGGTAAC TGGCTTCAGC AGAGCGCAGA TACCAAATAC3781 TGTTCTTCTA GTGTAGCCGT AGTTAGGCCA CCACTTCAAG AACTCTGTAG CACCGCCTAC3841 ATACCTCGCT CTGCTAATCC TGTTACCAGT GGCTGCTGCC AGTGGCGATA AGTCGTGTCT3901 TACCGGGTTG GACTCAAGAC GATAGTTACC GGATAAGGCG CAGCGGTCGG GCTGAACGGG3961 GGGTTCGTGC ACACAGCCCA GCTTGGAGCG AACGACCTAC ACCGAACTGA GATACCTACA4021 GCGTGAGCTA TGAGAAAGCG CCACGCTTCC CGAAGGGAGA AAGGCGGACA GGTATCCGGT4081 AAGCGGCAGG GTCGGAACAG GAGAGCGCAC GAGGGAGCTT CCAGGGGGAA ACGCCTGGTA4141 TCTTTATAGT CCTGTCGGGT TTCGCCACCT CTGACTTGAG CGTCGATTTT TGTGATGCTC4201 GTCAGGGGGG CGGAGCCTAT GGAAAAACGC CAGCAACGCG GCCTTTTTAC GGTTCCTGGC4261 CTTTTGCTGG CCTTTTGCTC ACATGTTCTT TCCTGCGTTA TCCCCTGATT CTGTGGATAA4321 CCGTATTACC GCCTTTGAGT GAGCTGATAC CGCTCGCCGC AGCCGAACGA CCGAGCGCAG4381 CGAGTCAGTG AGCGAGGAAG C//其他哺乳动物表达载体:pCHO1.0 pBApo-CMV-Pur pOPRSVIpcDNA3.1/His C pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO pREP4pcDNA3.1/His B pcDNA5/FRT/TO-TOPO pDual-GCpcDNA3.1/His A pcDNA5/TO pBK-RSVpIRESpuro3 pcDNA5/FRT/TO pBK-CMVpIRES2-EGFP pcDNA5/FRT pBI-CMV4pTT5 pFLAG-CMV2 pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ pNFkB-DD-tdTomato pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO pOPI3CATpBI-CMV5 pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO pGene/V5-His B pSEAP2-Basic pOptiVEC-TOPO pSwitchpSEAP2-Control pCMV-MEKK1 pCMVLacIpBI-CMV3 pCMV-MEK1 pVgRxRpBI-CMV2 pCMV-PKA pINDpBI-CMV1 pcDNA6.2/nTC-Tag-DEST pTRE3G-LucpNFκB-MetLuc2-Reporter pcDNA6.2/cTC-Tag-DEST pTRE3GpCRE-MetLuc2-Reporter pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO pTRE2-hygropAcGFP1-Actin pcDNA6.2/V5/GW/D-TOPO pTRE-TightpAcGFP1-N In-Fusion Ready pcDNA6.2/nGeneBLAzer-GW/D-TOPO pTK-hygpAcGFP1-C3 pcDNA6.2/C-YFP-DEST pTet-OnpAcGFP1-C 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pGRN145pNFkB-DD-AmCyan1 pcDNA3.3-TOPO pSecTag2 A pDsRed2-Bid pBudCE4.1 pEBVHis B pDsRED2-Mito pFLAG-CMV-4 pEBVHis ApDD-AmCyan1 Reporter pFLAG-CMV-3 pCMV-Tag 3C pAmCyan1-N1 pFLAG-CMV-2 pCMV-Tag 3A pAmCyan1-C1 pFLAG-CMV-5a pCMV-Tag 3BpEF1α-IRES-DsRed-Express2 p3XFLAG-CMV-9 pCMV-Tag 5CpEF1α-DsRed-Monomer-N1 p3xFLAG-CMV-10 pCMV-Tag 5A pDsRED-Monomer-N1 p3XFLAG-CMV-8 pCMV-Tag 4A pDsRed-Express-N1 p3XFLAG-CMV-7.1 pCMV-Tag 5Bp3XFLAG-CMV-7 pDsRed-Monomer-N In-Fusion Ready pCMV-Tag 4B pDsRed-Express-C1 p3XFLAG-CMV-13 pCMV-Tag 2C pIRES2-ZsGreen1 p3XFLAG-CMV-14 pCMV-Tag 2B pDsRed-Express2-C1 plRES2-ZsGreen1 pCMV-Tag 2A pDsRed-Express2-N1 pBApo-EF1α-pur pCMV-LacZpEF1α-DsRed-Express2 pBApo-EF1α-neo pCMV-MycpIRES2-DsRed-Express pBApo-CMV pEF1α-IRES-AcGFP1 pIRES2-DsRed-Express2 pBApo-CMV-neo pEF1α-IRES-ZsGreen1 pIRES-hrGFP-1a pIRES-EGFP pEF1α-AcGFP1-N1 pIRESneo2 pIRESneo3 pIRES2-DsRed2 pIRESneo pDsRed-Monomer pIRES2-AcGFP1 pIREShyg3 pIRES。
所有质粒载体汇总

酿酒酵母表达载体pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP,酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF,pY15TEF,pY16TEF,酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47,酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109;质粒pGADT7,pGBKT7;对照质粒pGBKT7-53,pGBKT7-lam,pGADT7-T,PCL1,酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190,毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZαA,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc,配套毕赤酵母Pichiapink,毕赤酵母宿主X33,KM71,KM71H,GS115,原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列,pET-GST,pGEX系列(含GST标签),pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列,pQE系列,pTrc99a,pTrcHis系列,pBV220,221,222,pTXB系列,pLLP-ompA,pIN-III-ompA (分泌型表达系列),pQBI63(原核表达带荧光)pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPinPoint-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF(+), pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk233-3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK (+),pBlueScript SK(-)pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒: pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒:pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1,pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣: pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞: DH5a JM101 JM103JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21(DE3)HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21(AI)BL21(DE3)plysS TG1 TB1 DH5a(pir)Tuner(DE3)Bl21 codonplusRIPL Novablue (DE3)Rosetta Rosetta(DE3)Rosetta(DE3)plys Rosetta-gami(DE3)Rosetta-gamiB(DE3), Rosetta-gamiB(DE3)plysS Orgami(DE3)OrgamiB(DE3)HMS174(DE3)植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301,pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2-YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIAsuper1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2,T-DNA插入载体(随机突变体库)pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43,pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK,pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641,pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01,配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700,WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33RNAi基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0,pSilencer 2.1-U6 hygro, pSilencer 3.1-H1 hygro,pSilencer 3.1-H1 neo, pSilencer 4.1-CMV neo, pSilencer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi载体(oligoengine)pSuper-puro RNAi逆转录病毒载体(clontech): RNAi-Ready pSIREN-Retro Q, RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen(Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide)RNAi慢病毒载体(addgene): pLKO.1哺乳动物表达载体pcDNA3.1+/-,pcDNA4/HisMax B,pSecTag2 A,pVAX1,pBudCE4.1,pTracer CMV2,pcDNA3.1(-)/myc-His A ,pcDNA6-Myc/His B,pCEP4, pIRES,pIRESneo,pIRES hyg3,pCMV-myc,pCMV-HA,pIRES-puro3,pIRES-neo3,pCAGGS哺乳动物双杂交系统pACT,pBIND,pACT-MyoD,pBIND-Id,pG5luc,pCMV-BD, pCMV-AD, pBD-p53, pFR-luc,Cytotrap Two-Hybrid System:pSos, pSos MAFB, pMyr蜕皮激素诱导系统pIND, pVgRxR,LacSwith II哺乳动物诱导表达系统:pOPRSVI ,pOPI3CAT,pCMVLacI,GeneSwitch System:pSwitch哺乳动物表面展示系统:pDisplay, 四环素调控系统(Invitrogen):pcDNA4/TO/Myc-His A,pcDNA4/TO/Myc-His B,pcDNA4/TO/Myc-His C,pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ,pcDNA6/TR四环素调控系统(Clontech):pTet-On,pTet-Off,pTRE2,pRevTRE,pRevTet-On,pRevTet-off信号通路报告载体:pGAS-TA-Luc,pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc,pIκB-EGFP,pNFAT-TA-Luc,pCaspase3-sensor,pAP1(PMA)-Luc;pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFA T-RE/Hygro],pGL4.75;p53-Luc,pAP-1-Luc, pNF-κB-Luc,pSRE-Luc,pFA2-Elk1,pFC-MEKK,pFR-luc,Gateway系统(invitrogen)pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative, pLenti 6/TR,pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR,乳酸菌表达载体及各种乳酸菌乳酸杆菌菌株,pNZ8148,pLEISS,pMG36e,pBBR1MCS-5,pBBR1MCS-6,pRV610,pLEM415,pHY3 00PLK,分泌型乳酸菌表达载体pVE5523,pPG611.1,pPG612.1等和乳酸杆菌菌株宿主菌NZ9000,MG1363,Lactobacillus casei 1.539,Lactobacillus casei,acidophilus NCFM,1.2,Lactobacillus sakei 23K,L.plantarum,L.rhamnosusGG,B.coagulans,Bifidobacterium bifidum,Bifidobacterium infantis,Lactococcus lactis M17,1663,Lactobacillus reuterii广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体pVLT33,pBBR1MCS-2,3,4,5,6, pJRD215,pJN105,pME6032,Cos载体pLAFR3,pMP2444(GFP), pHY300PLK,pRT102,pRL1063a, 转座子载体pUT-miniTn5,pMGS100, pWHM10,pKC1139,pSET152,pOJ260,pPG611.1,pPG612.1,腺病毒载体/慢病毒,逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒,腺病毒系统(Stratagene): pAdEasy-1,pShuttle-CMV,pShuttle,pAdTrack, pAdTrack-CMV, pShuttle-IRES-hrGFP-1、pShuttle-IRES-hrGFP-2、pShuttle-CMV-lacZ,pShuttle-CMV-EGFP-C,pXC1, pBHGE3, 配套大肠杆菌BJ5183,293,293T cellline 腺相关病毒系统(Stratagene): pAAV-MCS,pAAV-RC,pHelper,pAAV-LacZ,pAAV-IRES-hrGFP,pCMV-MCS,慢病毒载体:pLVX-DsRed-Monomer-N1,pLVX-IRES-ZsGreen1,pLVX-AcGFP1-N1,Lenti6/v 5-EDST-EGFP,pWPXL, FUGW,pLentilox 3.7,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q-ZsGreen,pSUPER.Retro-GFP/Neo,pSUPER-Retro-Neo, pSUPER.Retro-puro,PLNCX PLNCX2 pMSCV-HYG pMSCV-neo pMSCV-puro pLEGFP-C1 pLOX-CW-CRE pLOX-GFP-IRES-TK pRetroX-IRES-DsRedExpress, pLVX-IRES-mCherry质粒载体。
所有质粒载体汇总情况

酿酒酵母表达载体pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP,酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF pY15TEF pY16TEF,酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47,酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109 质粒pGADT7,pGBKT7对照质粒pGBKT7-53 pGBKT7-lam pGADT7-T PCL1,酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,丫187,丫190,毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZ aA,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPi nk hc , 配套毕赤酵母Pichiapink, 毕赤酵母宿主X33, KM71 KM71H GS115原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列, pET-GST pGEX 系列(含GST标签),pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis 系列,pQE系列,pTrc99a,pTrcHis 系列,pBV220,221,222,pTXB 系列, pLLP-ompA,plN-lll-ompA (分泌型表达系列),pQBI63 (原核表达带荧光)pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49bpET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-CpGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPi nPoi nt-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF +), pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk 233-3,pACYC184,pBR322,pUC119pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK(+),pBlueScript SK (-)pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒:pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒:pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1 , pRSFduet-1 Takara 公司大肠杆菌分子伴侣:pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞:DH5a JM101JM103JM105JM107JM109JM110Top10 Top10F BL21( DE3 HB101 ER2529E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21 ( AI)BL21(DE3 plysS TG1TB1 DH5a( pir) Tuner ( DE3 Bl21 codonplusRIPL Novablue(DE3 Rosetta Rosetta ( DE3 Rosetta ( DE3 plys Rosetta-gami ( DE3 Rosetta-gamiB ( DE3 , Rosetta-gamiB ( DE3 plysS Orgami ( DE3 OrgamiB(DE3 HMS174(DE3植物表达/RNAi 载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301,pUN1301,pRTL2 pRTL2-GFP pRTL2-CFP,pRTL2-RFP, pRTL2-YFP,pCAMBIA300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z, 1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIAsuper1300,pCAMBIA super1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RN 载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2, T-D插入载体(随机突变体库)pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1枯草芽抱杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43,pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK,pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641,pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01 配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700,WB800N,1012,FZB42,1A747广宿主质粒pVLT33RNAi基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0 , pSilencer 2.1-U6hygro , pSilencer 3.1-H1 hygro , pSilencer 3.1-H1 neo, pSilencer 4.1-CMV neo, pSile ncer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi 载体(oligoengine ) pSuper-puro RNAi 逆转录病毒载体(clontech ) : RNAi-Ready pSIREN-Retro Q , RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen (Luciferase shRNAAnnealed Oligonucleotide ) RNAi 慢病毒载体(addgene) : pLKO.1哺乳动物表达载体pcDNA3.1+/-,pcDNA4/HisMax B , pSecTag2 A, pVAX1pBudCE4.1,pTracer CMV2, pcDNA3.1 (-) /myc-His A , pcDNA6-Myc/His B, pCEP4 pIRES, pIRESneo pIRES hyg3, pCMV-myc pCMV-HA plRES-puro3 , pIRES-neo3,pCAGGS!乳动物双杂交系统pACT pBIND, pACT-MyoD pBIND-Id , pG5luc,pCMV-BD, pCMV-AD,pBD-p53, pFR-luc,Cytotrap Two-HybridSystem:pSos, pSos MAFB, pMyr 蜕皮激素诱导系统pIND, pVgRxR,LacSwith II 哺乳动物诱导表达系统:pOPRSVI ,pOPI3CAT pCMVLacl,GeneSwitch System:pSwitch哺乳动物表面展示系统:pDisplay, 四环素调控系统(Invitrogen ): pcDNA4/TO/Myc-His A,pcDNA4/TO/Myc-His B,pcDNA4/TO/Myc-His C,pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ,pcDNA6/TR四环素调控系统(Clontech): pTet-On, pTet-Off ,pTRE2,pRevTRE pRevTet-On, pRevTet-off 信号通路报告载体:pGAS-TA-Luc,pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc,pI K B-EGFPpNFAT-TA-Luc,pCaspase3-sensor,pAP1 ( PMA-Luc;pGL4.26[luc2P/mi nP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFAT-RE/Hygro],pGL4.75;p53-Luc,pAP-1-Luc,pNF- K B-Luc,pSRE-Luc,pFA2-Elk1,pFC-MEK,pFR-luc,Gateway 系统(invitrogen )pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative, pLe nti 6/TR,pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR,乳酸菌表达载体及各种乳酸菌乳酸杆菌菌株,pNZ8148,pLEISS,pMG36e,pBBR1MCS-5,pBBR1MCS-6,pRV610,pLEM415,pHY300PLK, 分泌型乳酸菌表达载体pVE5523 pPG611.1,pPG612.1等和乳酸杆菌菌株宿主菌NZ9000,MG1363,Lactobacillus casei 1.539,Lactobacilluscasei,acidophilus NCFM,1.2 ,L actobacillus sakei23K,L.pla ntaru m,L .rha mno sus GG,B.coagula ns,Bifidobacterium bifidum,Bifidobacterium infan tis, Lactococcus lactisM17,1663,Lactobacillus reuterii广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体pVLT33,pBBR1MCS-2,3,4,5,6, pJRD215,pJN105,pME6032,Cos 载体pLAFR3,pMP244(GFP , pHY300PLK,pRT102,pRL1063a,转座子载体pUT-mi niT n5,pMGS100, pWHM10,pKC1139,pSET15®,OJ260,pPG611.1,pPG612.1,腺病毒载体/慢病毒,逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒,腺病毒系统(Stratagene ): pAdEasy-1,pShuttle-CMV,pShuttle,pAdTrack, pAdTrack-CMV,pShuttle-IRES-hrGFP-1 、pShuttle-IRES-hrGFP-2、pShuttle-CMV-lacZ,pShuttle-CMV-EGFP-C,pXC1, pBHGE3,配套大肠杆菌BJ5183,293,293T cell line 腺相关病毒系统(Stratagene ) : pAAV-MC, pAAV-RC pHelper,pAAV-LacZ pAAV-IRES-hrGFP pCMV-MCS 慢病毒载体:pLVX-DsRed-Mo nomer-N1,pLVX-IRES-ZsGree n1,pLVX-AcGFP1-N1, Le nti6/v5- EDST-EGFP,pWPXL, FUGW,pLe ntilox 3.7,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q, RNAi-Ready pSIREN-Retro Q-ZsGree n, pSUPER.Retro-GFP/Neo,pSUPER-Retro-Neo, pSUPER.Retro-puro,PLNCX PLNCX2 pMSCV-HYG pMSCV- neo pMSCV-puro pLEGFP-C1 pLOX-CW-CRE pLOX-GFP-IRES-TK pRetroX-IRES-DsRedExpress, pLVX-IRES-mCherry 质粒载体。
pcdna瞬转原理

pcdna瞬转原理
pCDNA是一种质粒载体,常用于在分子生物学研究中进行基因
克隆和表达。
pCDNA的瞬转原理是指将外源基因插入pCDNA质粒中,然后利用化学方法将其转化(转染)到目标细胞中,使外源基因在
目标细胞内进行表达的过程。
首先,外源基因通常通过限制性内切酶酶切pCDNA质粒,然后
将其连接到质粒上。
这样,外源基因就被整合到了pCDNA质粒中,
形成了重组质粒。
接下来,将重组质粒转化到目标细胞中。
转化的方法可以是化
学转化、电穿孔法或者利用特定的细菌质粒转化方法。
在化学转化中,质粒和目标细胞会经历一系列处理,使得质粒能够进入细胞内。
一旦pCDNA质粒成功转化到目标细胞内,质粒会进入细胞质,
并在细胞内形成质粒DNA。
细胞内的转录和翻译机制会使得外源基
因在细胞内表达,从而产生目标蛋白质。
总的来说,pCDNA的瞬转原理包括将外源基因插入pCDNA质粒、转化质粒到目标细胞中,然后在目标细胞内进行基因表达的过程。
这一技术在基因克隆和蛋白表达研究中具有重要的应用价值。
希望这个回答能够全面地解释pCDNA的瞬转原理。
刘耀光_多靶点pCRISPR载体(单子叶和双子叶植物用)使用方法2015-4-14(new)(1)

CRISPR/Cas9-based genome editing technologyA robust CRISPR/Cas9 vector system for multiplex targeting ofgenomic sites in monocot and dicot plants亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室华南农业大学生命科学学院刘耀光课题组(**************.cn )1. pYLCRISPR/Cas9多靶点载体介绍CRISPR/Cas9是新近发展的基因组编辑技术(图1)。
CRISPR/Cas9切割靶序列仅需要single-guide RNA (sgRNA)以及由sgRNA 引导的Cas9蛋白,比锌指核酸酶(ZFNs ),TALENs 更加简便,高效,因而成为基因组编辑工具的首选。
我们利用CRISPR/Cas9技术可方便地进行多重靶向的特征,构建了一套用于单子叶和双子叶植物的多靶点CRISPR/Cas9基因打靶载体系统。
本套载体将Cas9蛋白表达盒整合到双元载体上,用于装载多个sgRNA 表达盒的多克隆位点Bsa I 位于靠近双元载体RB 位置。
sgRNA 表达盒元件设在中间质粒载体上,利用酶切连接和PCR 方法拼装好,再利用Golden Gate 或Gibson Assembly 克隆方法组装到双元载体上。
5’ NNNNNNNNNNNN GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Target SitePAM NNNNNNNNNNNN-3’3’ NNNNNNNNNNNN NCCNNNNNNNNNNNN-5’NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5’-G/A NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN GUUUUAGAGCUAG A A CGAUA GAAAACUAUUGCCUGAUCGGAAUAAAAUU Cas9nuclease Cleavage site genomesequenceRuvC-like domain HNH domain CUUGAAAAAGUGGCACCGA G CGUGGCU UUUUU-3’NGGFigure 1. A working model of the CRISPR/Cas9 system. The Cas9-sgRNA complex locates to the target site to cleave the DNA to produce double strand break (DSB).2.CRISPR/Cas9载体与sgRNA载体图谱2.1CRISPR/Cas9双元载体本套载体系统的双元载体骨架为pCAMBIA-1300 (ACCESSION: AF234296),Cas9p为本实验室设计合成的植物优化密码子基因,它模拟了禾本科植物基因具有5’端GC含量较高的特征(Figure 2)。
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pcDNA6/TR编号载体名称北京华越洋生物VECT6027pcDNA6/TRpcDNA6/TR 载体基本信息载体名称: pcDNA6/TR质粒类型: 哺乳细胞表达;四环素调控载体 高拷贝/低拷贝:-- 启动子: CMV 克隆方法: -- 载体大小: 6662bp5' 测序引物及序列: pCAG-F; Bglob-intron-F3' 测序引物及序列:BGH Reverse: 5-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3 载体标签: 无载体抗性: 氨苄青霉素 筛选标记: Blasticidin克隆菌株: TOP10F´, DH5aF´, JM109, and INVaF´表达细胞(系):T-REx-293 R710-07;T-REx-HeLa R714-07;T-REx-U2OS R712-07; T-REx-Jurkat R722-07备注:pcDNA6/TR 载体是四环素诱导系统的调控载体;pcDNA6/TR 不能单独使用,必须与应答载体共转染细胞;对应的应答载体(表达载体)是含CMV/TO 启动子的表达载体如pcDNA 4/TO/myc-His A,B,C 稳定性: 瞬表达 或 稳表达 组成型: 诱导型 病毒/非病毒:非病毒pcDNA6/TR 载体质粒图谱和多克隆位点信息pcDNA6/TR载体简介T-REx四环素诱导系统A Tetracycline-Regulated Expression System without Viral TransactivatorsThe T-REx System yields higher levels of induced expression than any other regulated mammalian expression system. It utilizes the complete CMV promoter and adds control elementsfrom the bacterial tetracycline resistance operon to effectively repress and derepress transcription from one of the strongest mammalian promoter sequences known (1,2). Specific ActivationThe T-REx System uses a repressor mechanism that blocks transcription from the powerful CMV promoter in the absence of tetracycline. Because the T-REx System elements do not useviral transactivators, you can achieve high-level expression from the complete CMV promoter without secondary, non-specific activation of host genes.The T-REx MechanismThe T-REx transcriptional control elements are illustrated in Figure 1. Two tetracycline operator sequences (TetO2) have been inserted between the TATA box of the CMV promoter and the transcriptional start site. The TetO2 sequence itself has no effect on expression. When the tetracycline repressor protein (TR) is present, it effectively binds the TetO2 sites and blocks transcription initiation. Tetracycline added to the culture medium binds to, and changes the conformation of, the TR protein. This change causes the TR protein to release the TetO2 sites, derepressing transcription from the CMV promoter. The result is high-level expression of the gene of interest (Figure 2). Expression levels can be modulated based on the tetracycline concentration and can be induced to levels that are achieved with constitutive CMV expression vectors.T-REx is a powerful inducible mammalian expression system that allows you to regulate expression from the complete human cytomegalovirus (CMV) enhancer-promoter. T-RExinducible expression vectors offer the following features: Complete CMV enhancer-promoter sequence containing two copies of the tetracycline operator TetO2 sequence for high-level regulated expressionZeocin or hygromycin resistance gene for effective selection of stable mammalian cell linesLarge multiple cloning site to simplify cloningIn addition, pcDNA4/TO/myc-His offers a c-myc epitope for rapid detection of the recombinant protein with an Anti-myc Antibody and a polyhistidine (6xHis) sequence for simple purification of the recombinant protein with nickel-chelating resin and detection with Anti- His(C-term) Antibody.The regulatory vector, pcDNA6/TR, is provided for high-level expression of the tetracycline repressor (TR) protein. This vector expresses the Blasticidin resistance gene for rapid selection of mammalian cell lines that stably express the TR protein. pcDNA6/TR载体序列ORIGIN1 GACGGATCGG GAGATCTCCC GATCCCCTAT GGTGCACTCT CAGTACAATC TGCTCTGATG 61 CCGCATAGTT AAGCCAGTAT CTGCTCCCTG CTTGTGTGTT GGAGGTCGCT GAGTAGTGCG 121 CGAGCAAAAT TTAAGCTACA ACAAGGCAAG GCTTGACCGA CAATTGCATG AAGAATCTGC 181 TTAGGGTTAG GCGTTTTGCG CTGCTTCGCG ATGTACGGGC CAGATATACG CGTTGACATT 241 GATTATTGAC TAGTTATTAA TAGTAATCAA TTACGGGGTC ATTAGTTCAT AGCCCATATA 301 TGGAGTTCCG CGTTACATAA CTTACGGTAA ATGGCCCGCC TGGCTGACCG CCCAACGACC 361 CCCGCCCATT GACGTCAATA ATGACGTATG TTCCCATAGT AACGCCAATA GGGACTTTCC 421 ATTGACGTCA ATGGGTGGAG TATTTACGGT AAACTGCCCA CTTGGCAGTA CATCAAGTGT 481 ATCATATGCC AAGTACGCCC CCTATTGACG TCAATGACGG TAAATGGCCC GCCTGGCATT 541 ATGCCCAGTA CATGACCTTA TGGGACTTTC CTACTTGGCA GTACATCTAC GTATTAGTCA 601 TCGCTATTAC CATGGTGATG CGGTTTTGGC AGTACATCAA TGGGCGTGGA TAGCGGTTTG 661 ACTCACGGGG ATTTCCAAGT CTCCACCCCA TTGACGTCAA TGGGAGTTTG TTTTGGCACC 721 AAAATCAACG GGACTTTCCA AAATGTCGTA ACAACTCCGC CCCATTGACG CAAATGGGCG 781 GTAGGCGTGT ACGGTGGGAG GTCTATATAA GCAGAGCTCT CTGGCTAACT AGAGAACCCA 841 CTGCTTACTG GCTTATCGAA ATTAATACGA CTCACTATAG GGAGACCCAA GCTGGCTAGC 901 GTTTAAACTT AAGCTTGGTA CCCGGGGATC CTCTAGGGCC TCTGAGCTAT TCCAGAAGTA 961 GTGAAGAGGC TTTTTTGGAG GCCTAGGCTT TTGCAAAAAG CTCCGGATCG ATCCTGAGAA 1021 CTTCAGGGTG AGTTTGGGGA CCCTTGATTG TTCTTTCTTT TTCGCTATTG TAAAATTCAT 1081 GTTATATGGA GGGGGCAAAG TTTTCAGGGT GTTGTTTAGA ATGGGAAGAT GTCCCTTGTA 1141 TCACCATGGA CCCTCATGAT AATTTTGTTT CTTTCACTTT CTACTCTGTT GACAACCATT 1201 GTCTCCTCTT ATTTTCTTTT CATTTTCTGT AACTTTTTCG TTAAACTTTA GCTTGCATTT 1261 GTAACGAATT TTTAAATTCA CTTTTGTTTA TTTGTCAGAT TGTAAGTACT TTCTCTAATC 1321 ACTTTTTTTT CAAGGCAATC AGGGTATATT ATATTGTACT TCAGCACAGT TTTAGAGAAC1381 AATTGTTATA ATTAAATGAT AAGGTAGAAT ATTTCTGCAT ATAAATTCTG GCTGGCGTGG 1441 AAATATTCTT ATTGGTAGAA ACAACTACAT CCTGGTCATC ATCCTGCCTT TCTCTTTATG 1501 GTTACAATGA TATACACTGT TTGAGATGAG GATAAAATAC TCTGAGTCCA AACCGGGCCC 1561 CTCTGCTAAC CATGTTCATG CCTTCTTCTT TTTCCTACAG CTCCTGGGCA ACGTGCTGGT 1621 TATTGTGCTG TCTCATCATT TTGGCAAAGA ATTGTAATAC GACTCACTAT AGGGCGAATT 1681 GATATGTCTA GATTAGATAA AAGTAAAGTG ATTAACAGCG CATTAGAGCT GCTTAATGAG 1741 GTCGGAATCG AAGGTTTAAC AACCCGTAAA CTCGCCCAGA AGCTAGGTGT AGAGCAGCCT 1801 ACATTGTATT GGCATGTAAA AAATAAGCGG GCTTTGCTCG ACGCCTTAGC CATTGAGATG 1861 TTAGATAGGC ACCATACTCA CTTTTGCCCT TTAGAAGGGG AAAGCTGGCA AGATTTTTTA 1921 CGTAATAACG CTAAAAGTTT TAGATGTGCT TTACTAAGTC ATCGCGATGG AGCAAAAGTA 1981 CATTTAGGTA CACGGCCTAC AGAAAAACAG TATGAAACTC TCGAAAATCA ATTAGCCTTT 2041 TTATGCCAAC AAGGTTTTTC ACTAGAGAAT GCATTATATG CACTCAGCGC TGTGGGGCAT 2101 TTTACTTTAG GTTGCGTATT GGAAGATCAA GAGCATCAAG TCGCTAAAGA AGAAAGGGAA 2161 ACACCTACTA CTGATAGTAT GCCGCCATTA TTACGACAAG CTATCGAATT ATTTGATCAC 2221 CAAGGTGCAG AGCCAGCCTT CTTATTCGGC CTTGAATTGA TCATATGCGG ATTAGAAAAA 2281 CAACTTAAAT GTGAAAGTGG GTCCGCGTAC AGCGGATCCC GGGAATTCAG ATCTTATTAA 2341 AGCAGAACTT GTTTATTGCA GCTTATAATG GTTACAAATA AAGCAATAGC ATCACAAATT 2401 TCACAAATAA AGCATTTTTT TCACTGCATT CTAGTTGTGG TTTGTCCAAA CTCATCAATG 2461 TATCTTATCA TGTCTGGTCG AATCCATCAC ACTGGCGGCC GCTCGAGTCT AGAGGGCCCG 2521 CGGTTCGAAG GTAAGCCTAT CCCTAACCCT CTCCTCGGTC TCGATTCTAC GCGTACCGGT 2581 CATCATCACC ATCACCATTG AGTTTAAACC CGCTGATCAG CCTCGACTGT GCCTTCTAGT 2641 TGCCAGCCAT CTGTTGTTTG CCCCTCCCCC GTGCCTTCCT TGACCCTGGA AGGTGCCACT 2701 CCCACTGTCC TTTCCTAATA AAATGAGGAA ATTGCATCGC ATTGTCTGAG TAGGTGTCAT 2761 TCTATTCTGG GGGGTGGGGT GGGGCAGGAC AGCAAGGGGG AGGATTGGGA AGACAATAGC 2821 AGGCATGCTG GGGATGCGGT GGGCTCTATG GCTTCTGAGG CGGAAAGAAC CAGCTGGGGC 2881 TCTAGGGGGT ATCCCCACGC GCCCTGTAGC GGCGCATTAA GCGCGGCGGG TGTGGTGGTT 2941 ACGCGCAGCG TGACCGCTAC ACTTGCCAGC GCCCTAGCGC CCGCTCCTTT CGCTTTCTTC 3001 CCTTCCTTTC TCGCCACGTT CGCCGGCTTT CCCCGTCAAG CTCTAAATCG GGGGCTCCCT 3061 TTAGGGTTCC GATTTAGTGC TTTACGGCAC CTCGACCCCA AAAAACTTGA TTAGGGTGAT 3121 GGTTCACGTA GTGGGCCATC GCCCTGATAG ACGGTTTTTC GCCCTTTGAC GTTGGAGTCC 3181 ACGTTCTTTA ATAGTGGACT CTTGTTCCAA ACTGGAACAA CACTCAACCC TATCTCGGTC 3241 TATTCTTTTG ATTTATAAGG GATTTTGCCG ATTTCGGCCT ATTGGTTAAA AAATGAGCTG 3301 ATTTAACAAA AATTTAACGC GAATTAATTC TGTGGAATGT GTGTCAGTTA GGGTGTGGAA 3361 AGTCCCCAGG CTCCCCAGCA GGCAGAAGTA TGCAAAGCAT GCATCTCAAT TAGTCAGCAA 3421 CCAGGTGTGG AAAGTCCCCA GGCTCCCCAG CAGGCAGAAG TATGCAAAGC ATGCATCTCA 3481 ATTAGTCAGC AACCATAGTC CCGCCCCTAA CTCCGCCCAT CCCGCCCCTA ACTCCGCCCA 3541 GTTCCGCCCA TTCTCCGCCC CATGGCTGAC TAATTTTTTT TATTTATGCA GAGGCCGAGG 3601 CCGCCTCTGC CTCTGAGCTA TTCCAGAAGT AGTGAGGAGG CTTTTTTGGA GGCCTAGGCT 3661 TTTGCAAAAA GCTCCCGGGA GCTTGTATAT CCATTTTCGG ATCTGATCAG CACGTGTTGA 3721 CAATTAATCA TCGGCATAGT ATATCGGCAT AGTATAATAC GACAAGGTGA GGAACTAAAC 3781 CATGGCCAAG CCTTTGTCTC AAGAAGAATC CACCCTCATT GAAAGAGCAA CGGCTACAAT 3841 CAACAGCATC CCCATCTCTG AAGACTACAG CGTCGCCAGC GCAGCTCTCT CTAGCGACGG 3901 CCGCATCTTC ACTGGTGTCA ATGTATATCA TTTTACTGGG GGACCTTGTG CAGAACTCGT 3961 GGTGCTGGGC ACTGCTGCTG CTGCGGCAGC TGGCAACCTG ACTTGTATCG TCGCGATCGG4021 AAATGAGAAC AGGGGCATCT TGAGCCCCTG CGGACGGTGC CGACAGGTGC TTCTCGATCT 4081 GCATCCTGGG ATCAAAGCCA TAGTGAAGGA CAGTGATGGA CAGCCGACGG CAGTTGGGAT 4141 TCGTGAATTG CTGCCCTCTG GTTATGTGTG GGAGGGCTAA GCACTTCGTG GCCGAGGAGC 4201 AGGACTGACA CGTGCTACGA GATTTCGATT CCACCGCCGC CTTCTATGAA AGGTTGGGCT 4261 TCGGAATCGT TTTCCGGGAC GCCGGCTGGA TGATCCTCCA GCGCGGGGAT CTCATGCTGG 4321 AGTTCTTCGC CCACCCCAAC TTGTTTATTG CAGCTTATAA TGGTTACAAA TAAAGCAATA 4381 GCATCACAAA TTTCACAAAT AAAGCATTTT TTTCACTGCA TTCTAGTTGT GGTTTGTCCA 4441 AACTCATCAA TGTATCTTAT CATGTCTGTA TACCGTCGAC CTCTAGCTAG AGCTTGGCGT 4501 AATCATGGTC ATAGCTGTTT CCTGTGTGAA ATTGTTATCC GCTCACAATT CCACACAACA 4561 TACGAGCCGG AAGCATAAAG TGTAAAGCCT GGGGTGCCTA ATGAGTGAGC TAACTCACAT 4621 TAATTGCGTT GCGCTCACTG CCCGCTTTCC AGTCGGGAAA CCTGTCGTGC CAGCTGCATT 4681 AATGAATCGG CCAACGCGCG GGGAGAGGCG GTTTGCGTAT TGGGCGCTCT TCCGCTTCCT 4741 CGCTCACTGA CTCGCTGCGC TCGGTCGTTC GGCTGCGGCG AGCGGTATCA GCTCACTCAA 4801 AGGCGGTAAT ACGGTTATCC ACAGAATCAG GGGATAACGC AGGAAAGAAC ATGTGAGCAA 4861 AAGGCCAGCA AAAGGCCAGG AACCGTAAAA AGGCCGCGTT GCTGGCGTTT TTCCATAGGC 4921 TCCGCCCCCC TGACGAGCAT CACAAAAATC GACGCTCAAG TCAGAGGTGG CGAAACCCGA 4981 CAGGACTATA AAGATACCAG GCGTTTCCCC CTGGAAGCTC CCTCGTGCGC TCTCCTGTTC 5041 CGACCCTGCC GCTTACCGGA TACCTGTCCG CCTTTCTCCC TTCGGGAAGC GTGGCGCTTT 5101 CTCATAGCTC ACGCTGTAGG TATCTCAGTT CGGTGTAGGT CGTTCGCTCC AAGCTGGGCT 5161 GTGTGCACGA ACCCCCCGTT CAGCCCGACC GCTGCGCCTT ATCCGGTAAC TATCGTCTTG 5221 AGTCCAACCC GGTAAGACAC GACTTATCGC CACTGGCAGC AGCCACTGGT AACAGGATTA 5281 GCAGAGCGAG GTATGTAGGC GGTGCTACAG AGTTCTTGAA GTGGTGGCCT AACTACGGCT 5341 ACACTAGAAG AACAGTATTT GGTATCTGCG CTCTGCTGAA GCCAGTTACC TTCGGAAAAA 5401 GAGTTGGTAG CTCTTGATCC GGCAAACAAA CCACCGCTGG TAGCGGTTTT TTTGTTTGCA 5461 AGCAGCAGAT TACGCGCAGA AAAAAAGGAT CTCAAGAAGA TCCTTTGATC TTTTCTACGG 5521 GGTCTGACGC TCAGTGGAAC GAAAACTCAC GTTAAGGGAT TTTGGTCATG AGATTATCAA 5581 AAAGGATCTT CACCTAGATC CTTTTAAATT AAAAATGAAG TTTTAAATCA ATCTAAAGTA 5641 TATATGAGTA AACTTGGTCT GACAGTTACC AATGCTTAAT CAGTGAGGCA CCTATCTCAG 5701 CGATCTGTCT ATTTCGTTCA TCCATAGTTG CCTGACTCCC CGTCGTGTAG ATAACTACGA 5761 TACGGGAGGG CTTACCATCT GGCCCCAGTG CTGCAATGAT ACCGCGAGAC CCACGCTCAC 5821 CGGCTCCAGA TTTATCAGCA ATAAACCAGC CAGCCGGAAG GGCCGAGCGC AGAAGTGGTC 5881 CTGCAACTTT ATCCGCCTCC ATCCAGTCTA TTAATTGTTG CCGGGAAGCT AGAGTAAGTA 5941 GTTCGCCAGT TAATAGTTTG CGCAACGTTG TTGCCATTGC TACAGGCATC GTGGTGTCAC 6001 GCTCGTCGTT TGGTATGGCT TCATTCAGCT CCGGTTCCCA ACGATCAAGG CGAGTTACAT 6061 GATCCCCCAT GTTGTGCAAA AAAGCGGTTA GCTCCTTCGG TCCTCCGATC GTTGTCAGAA 6121 GTAAGTTGGC CGCAGTGTTA TCACTCATGG TTATGGCAGC ACTGCATAAT TCTCTTACTG 6181 TCATGCCATC CGTAAGATGC TTTTCTGTGA CTGGTGAGTA CTCAACCAAG TCATTCTGAG 6241 AATAGTGTAT GCGGCGACCG AGTTGCTCTT GCCCGGCGTC AATACGGGAT AATACCGCGC 6301 CACATAGCAG AACTTTAAAA GTGCTCATCA TTGGAAAACG TTCTTCGGGG CGAAAACTCT 6361 CAAGGATCTT ACCGCTGTTG AGATCCAGTT CGATGTAACC CACTCGTGCA CCCAACTGAT 6421 CTTCAGCATC TTTTACTTTC ACCAGCGTTT CTGGGTGAGC AAAAACAGGA AGGCAAAATG 6481 CCGCAAAAAA GGGAATAAGG GCGACACGGA AATGTTGAAT ACTCATACTC TTCCTTTTTC 6541 AATATTATTG AAGCATTTAT CAGGGTTATT GTCTCATGAG CGGATACATA TTTGAATGTA 6601 TTTAGAAAAA TAAACAAATA GGGGTTCCGC GCACATTTCC CCGAAAAGTG CCACCTGACG6661 TC//其他哺乳动物表达载体:pCHO1.0 pBApo-CMV-Pur pOPRSVIpcDNA3.1/His C pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO pREP4pcDNA3.1/His B pcDNA5/FRT/TO-TOPO pDual-GCpcDNA3.1/His A pcDNA5/TO pBK-RSVpIRESpuro3 pcDNA5/FRT/TO pBK-CMVpIRES2-EGFP pcDNA5/FRT pBI-CMV4pTT5 pFLAG-CMV2 pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ pNFkB-DD-tdTomato pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO pOPI3CATpBI-CMV5 pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO pGene/V5-His B pSEAP2-Basic pOptiVEC-TOPO pSwitchpSEAP2-Control pCMV-MEKK1 pCMVLacIpBI-CMV3 pCMV-MEK1 pVgRxRpBI-CMV2 pCMV-PKA pINDpBI-CMV1 pcDNA6.2/nTC-Tag-DEST pTRE3G-LucpNFκB-MetLuc2-Reporter pcDNA6.2/cTC-Tag-DEST pTRE3GpCRE-MetLuc2-Reporter pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO pTRE2-hygropAcGFP1-Actin pcDNA6.2/V5/GW/D-TOPO pTRE-TightpAcGFP1-N In-Fusion Ready pcDNA6.2/nGeneBLAzer-GW/D-TOPO pTK-hygpAcGFP1-C3 pcDNA6.2/C-YFP-DEST pTet-OnpAcGFP1-C pcDNA6.2/cGeneBLAzer-DEST pTet-OffpAcGFP1-p53 pcDNA6/V5-His A pTet on advanced pAcGFP1-Mito pcDNA6/V5-His B pRevTREpAcGFP1-Mem pcDNA6/V5-His C pRevTet-OnpAcGFP1-Lam pcDNA6/myc-His C pRevTet-OffpAcGFP1-Golgi pcDNA6/myc-His A pCMV-Tet3GpAcGFP1-F pcDNA6/myc-His B pTRE2pAcGFP1-Hyg-C1 pcDNA6.2/nGeneBLAzer-DEST pBD-NF-κBpAsRed2-N1 pcDNA4/HisMax-TOPO pCMV-ADptdTomato-N1 pcDNA6.2/nLumio-DEST pCMV-BDpCMV-tdTomato pcDNA6.2/cLumio-DEST pBIND-Id ControlpCRE-DD-tdTomato pcDNA4/myc-His C pBINDpCMV-DsRed-Express2 pcDNA4/HisMax C pG5 luciferasepEF1α-tdTomato pcDNA4/HisMax A pACT-MyoDpCRE-hrGFP c-Flag pcDNA3 pACTptdTomato-C1 pcDNA4/HisMax B pCMV-SPORT6 pAsRed2-C1 pcDNA4/myc-His B pGL4.13pGL3-Promoter pcDNA4/myc-His A pGL4.19pGL3 basic pcDNA4/His C pGL4.26pAcGFP1-C2 pcDNA4/His B pGL4.20pAcGFP1-C1 pcDNA4/His A pGL4.29pAcGFP1-N3 pcDNA6/TR pGL4.30pAcGFP1-N2 pcDNA4/TO/Myc-His A pGL4.27pAcGFP1-N1 pcDNA4/TO pGL4.75pAcGFP1-C In-Fusion Ready pcDNA4/TO/Myc-His B pGL4.10pCRE-DD-AmCyan1 pcDNA4/TO/Myc-His C pGRN145pNFkB-DD-AmCyan1 pcDNA3.3-TOPO pSecTag2 A pDsRed2-Bid pBudCE4.1 pEBVHis B pDsRED2-Mito pFLAG-CMV-4 pEBVHis ApDD-AmCyan1 Reporter pFLAG-CMV-3 pCMV-Tag 3C pAmCyan1-N1 pFLAG-CMV-2 pCMV-Tag 3A pAmCyan1-C1 pFLAG-CMV-5a pCMV-Tag 3BpEF1α-IRES-DsRed-Express2 p3XFLAG-CMV-9 pCMV-Tag 5CpEF1α-DsRed-Monomer-N1 p3xFLAG-CMV-10 pCMV-Tag 5A pDsRED-Monomer-N1 p3XFLAG-CMV-8 pCMV-Tag 4A pDsRed-Express-N1 p3XFLAG-CMV-7.1 pCMV-Tag 5Bp3XFLAG-CMV-7 pDsRed-Monomer-N In-Fusion Ready pCMV-Tag 4B pDsRed-Express-C1 p3XFLAG-CMV-13 pCMV-Tag 2C pIRES2-ZsGreen1 p3XFLAG-CMV-14 pCMV-Tag 2B pDsRed-Express2-C1 plRES2-ZsGreen1 pCMV-Tag 2A pDsRed-Express2-N1 pBApo-EF1α-pur pCMV-LacZpEF1α-DsRed-Express2 pBApo-EF1α-neo pCMV-MycpIRES2-DsRed-Express pBApo-CMV pEF1α-IRES-AcGFP1 pIRES2-DsRed-Express2 pBApo-CMV-neo pEF1α-IRES-ZsGreen1 pIRES-hrGFP-1a pIRES-EGFP pEF1α-AcGFP1-N1 pIRESneo2 pIRESneo3 pIRES2-DsRed2 pIRESneo pDsRed-Monomer pIRES2-AcGFP1 pIREShyg3 pIRES。