阿仑膦酸钠有关物质分析方法

阿仑膦酸钠有关物质分析方法
有关物质照高效液相色谱法（中国药典2020年版四部通则0512）测定。

氯甲酸-9-芴甲酯溶液称取氯甲酸-9-芴甲酯200mg，置50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，制成每1ml中约含4mg的溶液，该溶液应临用新制。

（注：测试溶液在加入氯甲酸-9-芴甲酯溶液后，应避免阳光直射，进样小瓶应使用棕色瓶）。

柠檬酸钠溶液称取二水柠檬酸钠29.4g，置1L量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，混匀。

硼酸钠溶液称取硼酸钠19.1g，置1L量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，混匀。

空白溶液精密量取5.0ml柠檬酸钠溶液，置于预先加有5.0ml硼酸钠溶液的具螺口塞子的50ml聚丙烯离心管中，精密加入乙腈5.0ml，氯甲酸-9-芴甲酯溶液5.0ml，振摇45秒后，在室温下静置30分钟，再加入二氯甲烷20ml，剧烈振摇60秒，离心5-10分钟，取上层清液，即得。

4-氨基丁酸溶液称取4-氨基丁酸约15mg，置于100ml量瓶中，加柠檬酸钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取该溶液10ml置于50ml量瓶中，加柠檬酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。

精密量取5.0ml，置于预先加有5.0ml硼酸钠溶液的具螺口塞子的50ml聚丙烯离心管中，精密加入乙腈5.0ml，氯甲酸-9-芴甲酯溶液5.0ml，振摇45秒后，在室温下静置30分钟，再加入二氯甲烷20ml，剧烈振摇60秒，离心5-10分钟，取上层清液，即得。

供试品溶液取本品60mg，精密称定，置于50ml量瓶中，用柠檬酸钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。

精密量取5.0ml，置于预先加有5.0ml硼酸钠溶液的具螺口塞子的50ml聚丙烯离心管中，精密加入乙腈5.0ml，氯甲酸-9-芴甲酯溶液5.0ml，振摇45秒后，在室温下静置30分钟，再加入二氯甲烷20ml，剧烈振摇60秒，离心5-10分钟，取上层清液，即得。

对照溶液精密量取供试品溶液1ml，置于100ml量瓶中，用柠檬酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。

再移取该溶液1ml，置10ml量瓶中，用柠檬酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。

系统适用性溶液取阿仑膦酸钠对照品30mg，精密称定，置于50ml量瓶中，用柠檬酸钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。

精密量取5.0ml，置于预先加有5.0ml硼酸钠溶液的具螺口塞子的50ml聚丙烯离心管中，精密加入乙腈5.0ml，氯甲酸-9-芴甲酯溶液5.0ml，振摇45秒后，在室温下静置30分钟，再加入二氯甲烷20ml，剧烈振摇60秒，离心5-10分钟，取上层清液，即得。

色谱条件用苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为填充剂；以缓冲溶液-乙腈（17：3）为流动相A，乙腈-缓冲溶液（7：3）为流动相B，流速1.8ml/min，按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为266nm；柱温为45℃；进样体积20μl。

缓冲溶液：取5.88g二水柠檬酸钠和2.84g无水磷酸氢二钠，置2L量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

用磷酸调节pH至8.0，用0.45μm微孔滤膜滤过。

流动相A：用过滤并脱气的的缓冲溶液和乙腈按17:3配制成混合溶液。

流动相B：用过滤并脱气的的乙腈和缓冲溶液按7:3配制成混合溶液。

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）
0 100 0
15 50 50
25 0 100
27 100 0
32 100 0
分自身对照法计算杂质含量，均应符合表中相应限度规定。

杂质名称相对校正因子（f）限度
4-氨基丁酸0.4 0.1%
其他单个杂质 1.0 0.10%
杂质总量/ 0.5%
杂质含量%=A杂/A对×f×1‰
式中：A杂为供试品溶液中各杂质峰的峰面积；
A对为对照溶液中阿仑磷酸钠峰面积；
f为各杂质的相对校正因子。

典型图谱：
空白溶剂：
4-氨基丁酸溶液：
杂质D:。