鱼虾中喹乙醇及其代谢标示物的同步检测

质谱法同步测定鱼虾中的OLA和MQCA的方 法，可对OLA和MQCA同步进行前处理和检 测，减少了实验步骤；同时对前处理方法进行了改 进和优化，可操作性增强。
1材料与方法
1.1仪器、试剂与材料 LC—20AD液相色谱（日本岛津）；QTRAP
4500三重四极杆质谱仪（美国AB SCIEX ）；十万 分之一电子天平（赛多利斯）；百分之一电子天平 （赛多利斯）；SHA — B双功能数显恒温振荡器 （上海梅香仪器有限公司）；平行蒸发仪（瑞士 BUQI） ； Milii — Q 超纯水仪（美国 Millipore ）； TDZ5 — WS离心机（湖南湘仪）；MS3涡旋混合器 （IKA）；JYS—A8000 绞肉机（九阳）
0. 5 cm的小块后混匀，绞肉机绞碎，装入洁净容 6 mL 5%甲醇水溶液淋洗，抽干，加入3 mL甲醇
器中，密封，一18°C以下冷冻保存$
洗脱，收集洗脱液于10 mL试管中，40 N氮气吹
1.3样品前处理方法
干$加入1. 00 mL水溶解，涡旋1 min,过0. 22
称取样品5. 00 g(精确至0. 01 g)于50 mL $m滤膜后供液相色谱一串联质谱联用仪分析$
〜200 $g/L范围内呈良好线性，相关系数均在0.999以上，方法检出限为0.50 $g/kg,定量限为1.00 $g/kg%
在1. 00,2. 00、10. 0 $g/kg加标水平下，OLA平均回收率为84. 5%〜107. 0% , MQCA平均回收率为74. 0%
〜106.0%，相对标准偏差（RSD）均小于10%。该方法灵敏度高，操作简单，可适用于鱼虾肌中喳乙醇及其代
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《河北渔业"020年第2期(总第314期%
O检验'检测
1.2试样制备
HLB固相萃取柱依次用3 mL甲醇、3 mL
鱼去鳞、去皮，沿脊背取肌肉部分；虾去头、
0. 1mol/L盐酸活化后，加入待净化溶液，不抽
壳，取肌肉部分，切成不大于0. 5 cm X 0. 5 cmX
真空，让其在重力作用下自然通过固相萃取柱，用
谢标示物的同步检测％
关键词：喳乙醇；3—甲基喳噁咻一2 — !酸；液相色谱一串联质谱（LC—MS/MS）；鱼虾；同步检测
唾乙醇又名酰胺醇，商品名有快育诺、倍育 诺、快育灵等,具有广谱抗菌和促进生长的双重作 用。该药物曾被作为添加剂广泛用于畜、禽、鱼、 虾饲料中/10。唾乙醇在可食动物源性食品中的残 留对人类有潜在的三致性［2 — 3］,其在美国和欧盟 都被禁止用作饲料添加剂。2005版《中国兽药 典》明确规定，唾乙醇被禁止用于家禽及水产养 殖。2018年1月11日颁布的中华人民共和国农 业部第2638号公告规定停止在食品动物中使用 唾乙醇。3—甲基唾噁林一2 — f酸（MQCA）是 唾乙醇主要代谢物之一，其在体内相对稳定，被定 为唾乙醇在动物体内代谢的残留标示物⑷。
目前水产品中唾乙醇及其代谢标示物的定量 检测方法主要有液相色谱法丁7、液相色谱一串 联质谱法［8—11］ $这些检测方法中OLA和MQ­ CA 的前处理和上机分析是分别进行的，不能通 过前处理同时提取OLA和MQCA。关于OLA 和MQCA同步检测的文章也有报道［12—13］，但由 于MQCA与蛋白紧密结合，仅采用酸溶液提取 很难将MQCA充分提取出来，而且水产品的酸 提取液比较浑浊，直接通过固相萃取柱困难，造成 可操作性差。液相色谱法使用紫外检测器或 DAD检测器，检测水产品中的MQCA时干扰较 大，灵敏度低且易出现假阳性。液相色谱一串联 质谱选择性强、灵敏度高，在定性定量检测方面具 有相当的优势，因此本文建立了液相色谱一串联
离心试管中，准确加入1. 00 mg/L的混合内标中
1.4液相色谱-串联质谱条件
间液50 $L,涡旋混合均匀，加入15 mL 0. 1 mol/
液相色谱条件：色谱柱phenomenex Kinetex
L盐酸，涡旋混匀2 min，置于37 N水浴避光振 C18(100X2. 1 mm, 2. 6 $m),柱温 40 N，流速
摘要：建立了液相色谱一串联三重四极杆质谱（LC-MS/MS）同步检测鱼虾中的喳乙醇（OLA）及其代谢标
示物3—甲基喳噁咻一2—
（MQCA）的方法。样品用0. 1 mol/L的盐酸37 °C水解16h,水解液乙睛萃
取，正己烷去脂，HLB固相萃取柱净化，LC—MS/MS分析，内标法定量%结果表明，OLA和MQCA在1.00
唾乙醇（OLA,纯度 97.89% ,Dr. Ehrenstorfer）；唾乙醇一D4（OLA— D4,纯度（99. 1 + 0.2）% ,WiTEGA）； 3—甲基唾噁咻一2 — f 酸 （MQCA,纯度 97.0% ,Dr. Ehrenstorfer） ；3 —甲 基唾噁咻一2 — f酸一D4（MQCA—D4,纯度（100 士2. 0）% ,BePure）。乙月青和甲醇（HPLC Grade, Merck）；甲酸（HPLC Grade, DIKMA）；盐酸（优 级纯，北京化工厂）；氯化钠（GR,国药）；HLB固 相萃取柱:3 mL, 60 mg （waters）;滤膜:0. 2 $m GH玖PALL）,实验用水为超纯水$
《河北渔业"020年第2期（总第314期% DOI：10.3969/j. issn. 1004-6755.2020.02.013
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鱼虾中唾乙醇及其代谢标示物的同步检测
马瑞欣12,苏欢欢12,周 凡12,李雪萍12,王晓静12
（1.河北省水产技术推广总站，河北石家庄050035;2.河北省水产品质量检验监测站，河北石家庄050035）
荡16 h,取出冷却至室温，加入5 g氯化钠，15 mL 0. 5 mL/min,进样量5来自$L,流动相A为0. 15 %
乙月青，涡旋振荡2 min,4 000 r/min离心5 min,取
(V/V)甲酸水溶液，B为0. 15% (V/V)甲酸甲醇
上层乙睛层至蒸发管中，再加入10 mL乙睛萃取 一次,合并乙月青层40 N蒸去乙月青。加入3 mL水
溶液$梯度洗脱程序：〜1 min,5%B；1〜3min, 5%B〜90%B；3〜4 min,90%B；4〜4. 1 min,