实验二(血清TC+TG测定)课件

特异性
ＴＧ+３H2O ＬＰＬ 甘油+３脂肪酸 甘油 +ＡＴＰ GK ，Ｍg2+ 3-磷酸甘油+ＡＤＰ 3-磷酸甘油+O2 +2H2 O GPO 2H2O2+磷酸二羟丙酮 2H2O2+4-AAP+4-氯酚 POD 苯醌亚胺+2H2O+HCL
干扰
【试剂】
1. 试剂组成: R1: GOODs缓冲液
4 - 氯酚 ATP GK POD GPO R2: LPL 4-AAP 2. TG标准液 3. 待检样品
【临床意义】
1. 高TC血症是冠心病的主要危险因素之一。 高TC有原发与继发两类。原发的如家族性高胆固醇血 症、家族性apoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合 性高脂蛋白血症；继发的如糖尿病、肾病综合征、甲 状腺功能减退、妊娠等。
2. 低TC血症也有原发和继发。前者如家族性无或低β 脂蛋白血症；后者如营养不良、甲亢、药物治疗过程 中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。
二、TG测定
【原理】 酶法（GPO-PAP法）
甘油三酯经脂蛋白脂酶（LPL）作用，可以水解 为甘油和游离脂肪酸（FFA），甘油在ATP和甘油 激酶（GK）的作用下，生成3—磷酸甘油，再经磷 酸甘油氧化酶（GPO）作用氧化生成磷酸二羟丙 酮和过氧化氢（H2O2），H2O2与4-氨基安替比林 （4-AAP）及4-氯酚在过氧化物酶（POD）作用下， 生成红色醌类化合物，其显色程度与TG的浓度成 正比。
【计算】
测定管吸光度 TC（mmol／L＝ 校准管吸光度 ×TC校准液浓度
【报告方式】
血清(浆)TC： △. △ △ mmol/L
【参考范围】
理想范围： ﹤ 5.2 mmol／L (﹤ 200mg /dl)
【注意事项】
1. 试剂中酶的质量影响测定结果 2. 检测标本可为血清或者血浆 3. 常规TC酶法测定中所用校准物，为试剂盒所带 4. 加样准确
≥12.0KU／L
R2：
CEH
≥1.0KU／L
COD
≥0.5KU／L
4-AAP
1.20mmol／L
2.TC校准液：5.00
【器材】
mmol/L
半自动生化分析仪、试管、吸管、加样器
【操作歩骤】
取试管10支，标明测定管(U)、标准管(S)、空白管(B) 按如下操作：
氧化酶法测TC操作步骤
加人物（ml） 测定管(U1~ U8) 标准管 (S) 空白管(B)
能减退、妊娠等
操作歩骤顺序如下： 第一步：准备试管10支，分别标明U、S、B 第二步：在U、S、B每一管 中各加试剂1ml 第三步：加待检血清0.01ml于U中 第四步：加TC校准液0.01ml于S中 第五步：加纯水0.01ml于B中 第六步：将U、S、B各管分别混匀 第七步：置37℃水浴中，保温10分钟 第八步：比色
特异性
胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+脂肪酸 胆固醇 +O2 COD △4胆甾烯酮+H2O2 2 H2O2 +4-AAP +酚 POD 醌亚胺+4H2O
胆红素、维生素C、尿 酸、Hb负干扰
【试剂】
1.试剂组成
R1：
酚
12mmol／L
胆酸钠
1.20mmol／L
抗坏血酸氧化酶
≥1.0KU／L
POD
氧化酶法测TG操作步骤
加人物（ml） 测定管(U) 标准管 (S) 空白管(B)
待检血清
0 .01
校准液
0.01
纯水
0.01
工作液
1.0
1.0
1.0
混匀，置37℃水浴中，保温10min，在波长505nm处，以空白管调零， 读取各管吸光度A值并记录。
【计算】
TG（mmol／L＝
测定管吸光度 校准管吸光度
吸光度
计算值
操作者
空白
标准
1
2
报告…：
7. 讨论
技术关键、误差来源（质控）、就结果讨论、 存在的问题及建议、主要收获、结果意义
8.组内实验分工 （操作、实验报告书写、审核）
书写者、审核
注意:
实验报告由各班收齐 后星期一交到周盈老 师处!
血脂测定
•主要包括TC(FC+CE)、PL、TG
•以脂蛋白复合体形式在血循环中运输
•血脂水平可反映全身脂类代谢的状态
•临床检验诊断项目：TC、TG、HDL-C、LDLC、ApoA、ApoB、LP(a）
【目的】
掌握 原理、试剂主要成份及作用 计算及报告方式
熟悉 操作歩骤 临床意义及注意事项
一、TC测定
【注意事项】
1. 血清中游离的甘油对TG测定结果有一定的影响。 2. 方法中所用酶试剂在4~C避光保存，至少可稳定3d
至1周，出现红色时不可再用，试剂空白的吸光度 应≤0.15。 3. 标本4℃ ～8℃存放不宜超过3d，避免TG水解释放 出甘油。 4. 本实验方法的线性上限为10mmol／L，若所测TG 值超过了10.0mmol／L，可用生理盐水稀释后再测 。
【评价】
•测定范围 0.05～10.00mmol/L •不精密度 批内 CV≦ 4.1％ •不准确度 偏差≦5 ％ •干扰因素 胆红素205 ﹤ μmol/L；血红蛋白﹤ 6g/L
【临床意义】
高TG血症有原发与继发两类 •原发的见于家族性高TG血症、混合性高脂
(蛋白)血症等 •继发的见于糖尿病、肾病综合征、甲状腺功
【原理】 酶法（COD-PAP法）
血清中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为 与脂肪酸结合的胆固醇酯。胆固醇酯被胆固 醇酯酶水解为 游离胆固醇，后者被胆固醇 氧化酶氧化成△4-胆甾烯酮并产生过氧化氢， 过氧化氢在4-氨基安替比林和酚存在时，经 过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙 的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中总 胆固醇(TC)含量成正比。
×TG校准液浓度
【报告方式】
血清(浆)TG：△. △ △ mmol/L
【参考范围】
理想范围： ﹤1.7 mmol／L (﹤ 150mg /dl) 边缘升高：1.7 ～ 2.25 mmol／L （150 ～ 199 mg /dl） 增高： 2.26 ～ 5.64 mmol／L (200 ～ 499 mg /dl) 很高：≥5.65 mmol／L (≥500 mg /dl)
第九步：记录A值
实验报告
1. 实验名称 2. 实验目的（简写） 3. 实验原理（不能照抄，归纳） 4. 器材（所用的仪器型号、试剂的基本组成） 5. 操作方法（文字及图表均可、归纳、简洁、 忌照抄） 6. 实验结果及计算、报告 7. 讨论
就结果讨论、建议
6. 实验结果及计算（吸光度、计算公式、每个 标本的计算结果、报告）
待检血清
0 .01
校准液
纯水
工作液
1பைடு நூலகம்0
0.01
0.01
1.0
1.0
混匀，置37℃水浴中，保温10min，在波长505nm处，以空白 管调零，读取各管吸光度A值并记录。
（参数：不带标本空白终点法、温度—室温、主波长510nm、副波长0nm、延滞 期2秒、读数时间2秒、浓度---,吸液量400ul。只记录吸光度、不减空白吸 光度、计算浓度。）
【评价】
•测定范围 0.05～13.00mmol/L •不精密度 批内 CV≦ 3.0％ •不准确度 偏差≦3 ％ •干扰因素
胆红素﹤ 410 μmol/L；血红蛋白﹤ 7g/L，TG ﹤28.5mmol/L时对结果无明显干扰；抗坏血酸 与甲基多巴高于治疗水平时使结果偏低。
【临床意义】
影响TC水平的因素有： ①年龄与性别 ②长期的高胆固醇 、高饱和脂肪和高热量饮食 ③ 遗传因素 ④其它，如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等
【器材】
0.10mmol／L 2.20mmol／L
1.80mmol/L ≥1.50KU／L ≥12.50KU／L
≥3.00KU/L ≥30.00KU／L 1.30mmol／L 1.80mmol／L XX号血清
半自动生化分析仪、试管、吸管、加样器
【操作歩骤】
取试管10支，标明测定管(U)、标准管(S)、空白管(B) 按如下操作：