体外培育熊胆粉对小鼠中枢神经系统作用的一般药理学研究

实验研究
㊀基金项目:国家科技重大专项(Ｎｏ.２０１７ＺＸ０９３０９００６)ꎻ上海中医药大学预算内项目(Ｎｏ.２０１４ＹＳＮ２４)ꎻ∗同为通信作者㊀作者简介:陆锦遥ꎬ男ꎬ助理实验师ꎬ研究方向:中药毒理学研究ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｊｉｎｙａｏ.ｌｕ＠ｓｈｕｔｃｈ.ｅｄｕ.ｃｎ
㊀通信作者:张小利ꎬ女ꎬ高级工程师ꎬ研究方向:中药新药研发ꎬＴｅｌ:０２１－３７５７２０３０ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｘｌｚｈａｎｇ＿ｈａ＠１６３.ｃｏｍꎻ田雪松ꎬ男ꎬ博士研究生ꎬ研究员ꎬ研究方向:中药毒理及药物安全性评价ꎬＴｅｌ:０２１－５１３２２４０２ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｘｕｅｓｏｎｇ.ｔｉａｎ＠ｓｈｕｔｃｍ.ｅｄｕ.ｃｎ
体外培育熊胆粉对小鼠中枢神经系统作用的一般药理学研究
陆锦遥１ꎬ王琼１ꎬ王优杰１ꎬ谷颖敏１ꎬ章鑫１ꎬ谢家骏１ꎬ张小利２∗ꎬ田雪松１∗
(１.上海中医药大学创新中药研究院ꎬ上海２０１２０３ꎻ２.上海凯宝药业股份有限公司ꎬ上海２０１４０１)
摘要:目的㊀观察体外培育熊胆粉对小鼠中枢神经系统的影响ꎮ方法㊀小鼠分别灌胃低(０.８ｇ ｋｇ－１)㊁中(２.５
ｇ ｋｇ－１)和高(８.０ｇ ｋｇ－１)剂量的体外培育熊胆粉ꎬ观察药物对小鼠一般行为和自发活动㊁协调运动及阈下睡眠剂量戊巴比妥钠协同作用的影响ꎮ结果㊀在本实验条件下ꎬ给予体外培育熊胆粉后小鼠无异常行为ꎬ对自发活动及协调运动无明显影响ꎬ与阈下剂量的戊巴比妥钠无协同作用ꎮ结论㊀在所设计的剂量水平下ꎬ体外培育熊胆粉对小鼠中枢神经系统未见明显影响ꎮ这些结果进一步扩展了我们对体外培育熊胆粉安全性的认识ꎮ
关键词:体外培育熊胆粉ꎻ一般药理学ꎻ中枢神经系统ꎻ小鼠
中图分类号:Ｒ２８５.５㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２０)０６－０３１７－００４ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２０.０６.００２
ＧｅｎｅｒａｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＢｅａｒＢｉｌｅＰｏｗｄｅｒｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ
ｉｎｖｉｔｒｏｏｎｔｈｅｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍｏｆｍｉｃｅＬＵＪｉｎｙａｏ１ꎬＷＡＮＧＱｉｏｎｇ１ꎬＷＡＮＧＹｏｕｊｉｅ１ꎬＧＵＹｉｎｇｍｉｎ１ꎬＺＨＡＮＧＸｉｎ１ꎬ
ＸＩＥＪｉａｊｕｎ１ꎬＺＨＡＮＧＸｉａｏｌｉ２∗ꎬＴＩＡＮＸｕｅｓｏｎｇ１∗
(１.ＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈａｎｇｈａｉ２０１２０３ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＳｈａｎｇｈａｉＫａｉｂａｏ
ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ.ꎬＬｔｄ.ꎬＳｈａｎｇｈａｉ２０１４０１ꎬＣｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＢｅａｒＢｉｌｅＰｏｗｄｅｒｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏｏｎｔｈｅｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍｏｆ
ｍｉｃｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀
Ｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｇｅｎｅｒａｌｂｅｈａｖｉｏｒａｎｄｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｃｔｉｖｉｔｙꎬｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄｍｏｖｅｍｅｎｔꎬａｎｄｈｙｐｎｏｓｉｓｏｆ
ｓｕｂｌｉｍｉｎａｌｓｌｅｅｐｄｏｓｅｓｏｆｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌｓｏｄｉｕｍｉｎｍｉｃｅｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅＢｅａｒＢｉｌｅＰｏｗｄｅｒｃｕｌｔｉ￣ｖａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏａｔｔｈｅｌｏｗꎬｍｅｄｉｕｍａｎｄｈｉｇｈｄｏｓａｇｅｏｆ０.８ꎬ２.５ａｎｄ８.０ｇ ｋｇ－１ｂｙｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＵｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｔｈｉｓｔｅｓｔꎬｎｏａｂｎｏｒｍａｌｇｅｎｅｒａｌｂｅｈａｖｉｏｒｏｆｍｉｃｅｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＢｅａｒＢｉｌｅＰｏｗｄｅｒｃｕｌｔｉ￣ｖａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏ.ＴｈｅＢｅａｒＢｉｌｅＰｏｗｄｅｒｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏｈａｄｎｏｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｔｈｅｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄｍｏｖｅ￣ｍｅｎｔꎬａｎｄｓｈｏｗｅｄｎｏｓｙｎｅｒｇｅｔｉｃｈｙｐｎｏｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌｓｏｄｉｕｍｏｆｍｉｃｅ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＢｅａｒＢｉｌｅＰｏｗｄｅｒｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｅｆｆｅｃｔｓａｔｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｏｓａｇｅｓｏｎｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍｏｆｍｉｃｅ.Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｆｕｒｔｈｅｒｅｘｔｅｎｄ
ｏｕｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｓａｆｅｔｙｏｆＢｅａｒＢｉｌｅＰｏｗｄｅｒｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏ.
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＢｅａｒＢｉｌｅＰｏｗｄｅｒｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏꎻＧｅｎｅｒａｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎻＣｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍꎻＭｉｃｅ
㊀㊀熊胆是传统名贵中药ꎬ熊胆粉为熊科动物黑熊
(ＳｅｌｅｎａｒｅｔｏｓｔｈｉｂｅｔａｎｕｓＣｕｖｉｅｒ)经胆囊手术引流胆汁而得的干燥品ꎬ具有清热㊁平肝㊁明目等功效ꎬ用于治疗惊风抽搐ꎬ目赤肿痛ꎬ咽喉肿痛[１－３]ꎮ限于天然熊
胆粉来源的特殊性和稀缺性ꎬ其相关中药制剂的开发和使用受到了严重阻碍ꎬ因此通过合成或生物技术的手段寻找安全有效的熊胆粉替代品迫在眉睫[４－５]ꎮ上海中医药大学㊁上海凯宝药业股份有限
公司及重庆大学协作建立了熊胆粉体外培育生物转化技术ꎬ将家禽鸡胆粉体外转化为熊胆粉ꎬ以期替代天然熊胆粉应用于临床ꎮ为进一步探究基于该技术生产的体外培育熊胆粉的安全性ꎬ本实验按照«中药㊁天然药物一般药理学研究技术指导原则»对其进行一般药理学研究ꎬ观察其对小鼠中枢神经系统的影响ꎬ为临床应用提供安全性评价实验数据ꎬ并为进一步研发提供科学依据ꎮ
１㊀材料与方法
１.１㊀实验材料
１.１.１㊀动物㊀ＩＣＲ小鼠１６０只ꎬ雌雄各半ꎬ体质量１６~１８ｇꎬＳＰＦ级ꎬ购于上海西普尔－必凯实验动物有限公司ꎬ实验动物合格证号:ＳＣＸＫ(沪)２０１３－００１６ꎮ所有动物均饲养于上海中医药大学ＳＰＦ级动物房ꎬ环境温度２３~２４ħꎬ相对湿度４２％~６３％ꎬ换气次数ȡ１５次/ｈꎮ人工控制照明ꎬ昼夜交替时间为１２ｈ/１２ｈꎮ所有动物实验严格遵守上海中医药大学实验动物伦理委员会的要求ꎮ
１.１.２㊀药物与试剂㊀体外培育熊胆粉(上海凯宝药业股份有限公司ꎬ黄色至深棕色碎片㊁颗粒或粉末ꎬ含量:牛磺熊去氧胆酸３１.１％ꎬ牛磺鹅去氧胆酸１３.３％ꎬ批号:２０１６０８０１)ꎬ临用时ꎬ０.５％羧甲基纤维素钠溶液溶解配置成所需浓度的溶液ꎻ地西泮(上海信谊药厂有限公司ꎬ规格:２.５ｍｇ/片ꎬ批号:１４１６０３０)ꎮ羧甲基纤维素钠(ＣＭＣ－Ｎａꎬ国药集团化学试剂有限公司ꎬ微黄色纤维状粉末ꎬ批号:２０１５０４２１)ꎬ用前配制成０.５％(Ｗ/Ｖ)溶液ꎮ戊巴比妥钠(德国进口分装ꎬ白色粉末ꎬ纯度:ȡ９８％ꎬ批号:ＷＳ２０１４１１１０)ꎮ上述药品均密封ꎬ避光ꎬ置阴凉干燥处保存ꎮ
１.１.３㊀主要仪器㊀ＭＥ２０３型电子天平(仪器编号:２０１３１６７３ꎬ梅特勒￣托利多有限公司)ꎻＹＬＳ－１Ａ多功能小鼠自主活动记录仪(仪器编号:２００２０６２０㊁２００６１５６０ꎬ济南益延科技发展有限公司)ꎮ１.２㊀实验方法
１.２.１㊀小鼠一般行为和自发活动实验㊀取检疫合格的小鼠６０只ꎬ按给药前自发活动数随机分为５组ꎬ每组１２只ꎬ雌雄各半ꎬ分别为溶剂对照组㊁体外培育熊胆粉低剂量组㊁中剂量组㊁高剂量组和阳性对照组ꎮ低㊁中㊁高剂量组分别灌胃体外培育熊胆粉为０.８㊁２.５㊁８.０ｇ ｋｇ－１ꎻ阳性对照组灌胃地西泮２.０ｍｇ ｋｇ－１ꎻ溶剂对照组灌胃等容量２０ｍＬ ｋｇ－１的０.５％ＣＭＣ－Ｎａ溶液ꎮ给药前各组禁食３~５ｈꎬ观察给药后２.５ｈ内的一般行为变化(姿态㊁步态㊁流涎㊁流汗㊁肌颤及瞳孔变化等)ꎮ多功能小鼠自主活动记录仪记录给药前及给药后３０㊁６０㊁９０㊁１２０及１５０
ｍｉｎ小鼠的自发活动次数ꎮ每次记录前先将小鼠置于自主活动仪中适应３ｍｉｎꎬ记录５ｍｉｎ内小鼠的自发活动次数ꎮ
１.２.２㊀小鼠协调运动实验㊀给药前两天ꎬ每天用一根表面光滑㊁垂直竖立的金属棒(直径为１.５ｃｍꎬ长度８０.０ｃｍ)ꎬ训练小鼠爬竿ꎬ每天３次ꎮ给药当天ꎬ按协调运动障碍评级标准(见表１)ꎬ挑取检疫合格且评分０.０级小鼠５０只ꎬ体质量随机分为５组ꎬ每组１０只ꎬ雌雄各半ꎬ分别为溶剂对照组㊁体外培育熊胆粉低剂量组㊁中剂量组㊁高剂量组和阳性对照组(除给予阳性对照组地西泮３.０ｍｇ ｋｇ－１外ꎬ其他给药方法与剂量同自发活动实验)ꎮ给药前各组禁食３~５ｈꎬ分别于给药前及给药后３０㊁６０㊁９０㊁１２０及１５０ｍｉｎ将小鼠头朝下放在棒的顶端ꎬ任小鼠自然向下爬行ꎬ以测定协调运动情况ꎮ
表１　协调运动障碍评级标准
级别(级)评分标准
０.０一步一步向下爬行
０.５一步一步向下爬行ꎬ向下滑行或跳下长<２０ｃｍ
１.０向下滑行
１.５向下滑行ꎬ不能抓住棒<２０ｃｍ
２.０不能抓住棒
２.５不能抓住棒ꎬ翻正迟钝
３.０翻正反射消失
１.２.３㊀阈下睡眠剂量戊巴比妥钠协同作用实验[６]㊀取检疫合格的小鼠５０只ꎬ按体质量随机分为５组ꎬ每组１０只ꎬ雌雄各半ꎬ分别为溶剂对照组㊁体外培育熊胆粉低剂量组㊁中剂量组㊁高剂量组和阳性对照组(给药方法与剂量同小鼠协调运动实验)ꎮ给药前各组禁食３~５ｈꎬ给予溶剂及体外培育熊胆粉后６０ｍｉｎ(阳性对照组灌胃３.０ｍｇ ｋｇ－１地西泮后３０ｍｉｎ)ꎬ小鼠腹腔立即注射戊巴比妥钠３０ｍｇ ｋｇ－１ꎬ以翻正反射消失达１ｍｉｎ以上者计为发生睡眠ꎬ计算各组睡眠发生百分率ꎮ
１.３㊀统计学方法㊀实验数据均采用ＳＰＳＳ２１.０软件进行统计分析ꎮ计量资料均以平均值ʃ标准偏差(ｘʃｓ)表示ꎮ本实验对小鼠协调运动实验采用秩和检验ꎻ对阈下睡眠剂量戊巴比妥钠协同作用实验采用卡方检验ꎻ对小鼠自发活动实验按不同观察时间点ꎬ采用单因素方差分析ꎬ方差不齐时采用非参数检验ꎮＰ<０.０５为差异有统计学意义ꎮ
２㊀结果
２.１㊀体外培育熊胆粉对小鼠一般行为和自发活动的
影响㊀各剂量组的体外培育熊胆粉对小鼠姿态㊁步态㊁流涎㊁流汗㊁肌颤及瞳孔变化等一般行为无明显影响ꎮ在自发活动方面ꎬ低剂量㊁高剂量组与溶剂对照组在各时间点相比差异无统计学意义(Ｐ>０.０５)ꎮ中剂量组给药后６０ｍｉｎ自发活动减少ꎬ与溶剂对照组相比差异有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎬ其余时间点相比差异无统计学意义(Ｐ>０.０５)ꎮ阳性对照组给药后各时间点小鼠活动均减少ꎬ与溶剂对照组相比差异均有统计学意义(Ｐ<０.００１)ꎬ结果见表２ꎮ
表２㊀体外培育熊胆粉对小鼠自发活动的影响(ｘʃｓꎬｎ＝１２)
组别给药前
/ｍｉｎ给药后/ｍｉｎ
３０６０９０１２０１５０
溶剂对照组２２６ʃ２３１７３ʃ３９１１８ʃ５３９０ʃ４０７８ʃ３２７２ʃ２１
低剂量组２２５ʃ２７１７４ʃ３０１１９ʃ３５１０５ʃ２８８５ʃ２２８７ʃ３２中剂量组２２２ʃ２１１６６ʃ４６８３ʃ３４∗９７ʃ５０８３ʃ４６７５ʃ５３高剂量组２２３ʃ１９１６４ʃ３８１０３ʃ３９７０ʃ３０６３ʃ３３６５ʃ３２阳性对照组２２６ʃ２１７２ʃ４２∗∗２４ʃ１６∗∗１９ʃ１５∗∗１０ʃ１０∗∗１４ʃ１２∗∗㊀注:与溶剂对照组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.００１
２.２㊀体外培育熊胆粉对小鼠协调运动的影响㊀各剂量组给药后各时间点与溶剂对照组相比ꎬ无显著性差异(Ｐ>０.０５)ꎮ与溶剂对照组比较ꎬ阳性对照组小鼠协调运动障碍的评级明显升高ꎬ在给药后各时间点差异均有统计学意义(Ｐ<０.００１)ꎬ结果见表３ꎮ表３㊀体外培育熊胆粉对小鼠协调运动的影响(ｎ＝１０)
组别评级给药前
ｍｉｎ给药后/ｍｉｎ
３０６０９０１２０１５０
溶剂对照组０.０级
０.５级
１.０级
１.５级
２.０级
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
低剂量组０.０级
０.５级
１.０级
１.５级
２.０级
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
中剂量组０.０级
０.５级
１.０级
１.５级
２.０级
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
９
１
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
高剂量组０.０级
０.５级
１.０级
１.５级
２.０级
１０
０
０
０
０
１０
０
０
０
０
７
３
０
０
０
７
３
０
０
０
８
２
０
０
０
１０
０
０
０
０
阳性对照组０.０级
０.５级
１.０级
１.５级
２.０级
１０
０
０
０
０
０∗∗
０∗∗
０∗∗
５∗∗
５∗∗
０∗∗
０∗∗
０∗∗
４∗∗
６∗∗
０∗∗
０∗∗
０∗∗
２∗∗
８∗∗
０∗∗
１∗∗
０∗∗
８∗∗
１∗∗
０∗∗
３∗∗
０∗∗
６∗∗
１∗∗
㊀注:与溶剂对照组比较ꎬ∗∗Ｐ<０.００１２.３㊀体外培育熊胆粉对阈下睡眠剂量戊巴比妥钠协同作用的影响㊀溶剂对照组(无小鼠睡眠)㊁低剂量(无小鼠睡眠)㊁中剂量[１０只小鼠１只(雌性)睡眠]㊁高剂量[１０只小鼠１只(雄性)睡眠]ꎬ睡眠发生的百分率与溶剂对照组相比ꎬ无统计学意义(Ｐ>０.０５)ꎮ给予阳性对照品３０ｍｉｎ时ꎬ腹腔注射阈下睡眠剂量的戊巴比妥钠ꎬ小鼠全部睡眠(５雌性ꎬ５雄性)ꎬ睡眠发生的百分率与溶剂对照组相比有统计学意义(Ｐ<０.００１)ꎬ结果见表４ꎮ
表４㊀体外培育熊胆粉与阈下睡眠剂量的戊巴比妥钠协同作用
对小鼠睡眠的影响(ｎ＝１０)
组别入睡动物数(性别)入睡率(％)溶剂对照组００
低剂量组００
中剂量组１(雌性)１０
高剂量组１(雄性)１０
阳性对照组１０(５雌性ꎬ５雄性)㊀㊀１００∗∗㊀注:与溶剂对照组比较ꎬ∗∗Ｐ<０.００１
３　讨论
体外培育熊胆粉拟临床用于替代天然熊胆粉ꎬ但是其对中枢神经系统的影响尚未进行研究ꎬ其临床安全性及潜在受累器官均不清楚ꎮ前期实验显示ꎬ体外培育熊胆粉大鼠药效学有效剂量为０.３ｍｇ ｋｇ－１ꎬ按照安全药理学试验的剂量设定原则 应包括或超过主要药效学的有效剂量或治疗范围 ꎬ故本次实验低剂量设定为０.８ｇ ｋｇ－１ꎬ中㊁高剂量分别按等比设定为２.５和８.０ｇ ｋｇ－１[７]ꎮ此外文献报道ꎬ大鼠灌胃熊胆粉提取物后ꎬ熊去氧胆酸Ｔｍａｘ为(５５.０ʃ７.７)ｍｉｎꎬｔ１/２为(９７.５ʃ１７.７)ｍｉｎꎬ鹅去氧胆酸Ｔｍａｘ为(５２.５ʃ８.２)ｍｉｎꎬｔ１/２为(１１３.８ʃ２１.５)ｍｉｎꎮ故本次实验记录给药后３０㊁６０㊁９０㊁１２０及１５０ｍｉｎꎬ涵盖了体外培育熊胆粉主要组分的Ｔｍａｘ及ｔ１/２[８]ꎮ本实验结果显示ꎬ各剂量组的体外培育熊胆粉对小鼠一般行为无明显影响ꎬ但在自发活动方面ꎬ低㊁高剂量组与溶剂对照组相比差异无统计学意义ꎻ中剂量组在给药后６０ｍｉｎ自发活动减少ꎬ其余各时间点均差异无统计学意义ꎬ因该时间点一般行为无明显改变ꎬ协调运动亦差异无统计学意义ꎬ且高剂量组无类似改变ꎬ故认为此变化与药物毒性作用无关ꎻ阳性对照组给药后各时间点自发活动均减少ꎬ差异有统计学意义ꎮ在协调运动实验ꎬ低㊁中及高剂量的体外培育熊胆粉在各时间点对小鼠协调运动无明显影响ꎬ阳性对照组与溶剂对照组相比在各时间点差异均有统计学意义ꎮ在阈下睡眠剂量戊巴比妥钠实验ꎬ低剂量组无睡眠出现ꎬ中㊁高剂(下转第３３０页)
的测序过程中ꎬ由于离子信息的不完整ꎬ存在无法鉴别的碎片离子峰ꎬ同时也可能由于多肽的不稳定性ꎬ导致多肽样品氨基酸序列未能最终确定ꎮ随着相关测序软件的完善及质谱技术的不断发展ꎬ串联质谱法在多肽结构分析中将发挥更大的作用ꎬ我们也将采用新的技术对活性多肽的结构进行更加深入的分析ꎮ
参考文献:
[１]㊀李晶峰ꎬ孙佳明ꎬ张辉.僵蚕的化学成分及药理活性研究[Ｊ].吉林中医药ꎬ２０１５ꎬ３５(２):１７５－１７７.
[２]莫雪林ꎬ胡美变ꎬ肖禾ꎬ等.僵蚕的本草考证[Ｊ].中药与临床ꎬ２０１６ꎬ７(５):４７－５０.
[３]程锁明ꎬ李国玉ꎬ王航宇ꎬ等.白僵蚕化学成分的基础研究[Ｊ].中国现代中药ꎬ２０１３ꎬ１５(７):５４４－５４７. [４]徐冲ꎬ商思阳ꎬ刘梅ꎬ等.僵蚕化学成分和药理活性的研究进展[Ｊ].中国药房ꎬ２０１４ꎬ２５(３９):３７３２－３７３４. [５]冯会宾ꎬ单文超ꎬ贺娜娜ꎬ等.现代技术在僵蚕研究中的应用与展望:中华中医药学会中药化学分会第九届学
术年会论文集[Ｃ].２０１４:１３１－１３５.
[６]赵建国ꎬ曲伟红ꎬ彭新君ꎬ等.僵蚕抗凝活性的氨基酸分析[Ｊ].中国医院药学杂志ꎬ２００８ꎬ２８(２３):１９９９－２００１. [７]赵建国ꎬ彭新君ꎬ曾序求.僵蚕提取物中氨基酸种类与
含量测定[Ｊ].九江医学ꎬ２００８ꎬ２３(１):１－３.
[８]王赛君ꎬ伍振峰ꎬ杨明ꎬ等.中药提取新技术及其在国内的转化应用研究[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０１４ꎬ３９(８):１３６０
－１３６７.
[９]单宇ꎬ张伽妹ꎬ丁月珠ꎬ等.水提取法和仿生提取法研究水蛭不同体外炮制品的体外抗凝活性[Ｊ].中国中药杂
志ꎬ２０１６ꎬ４１(１０):１８４３－１８４８.
[１０]高鹏.土鳖虫不同工艺提取物抗凝作用的比较研究[Ｊ].时珍国医国药ꎬ２０１２ꎬ２３(７):１８１６－１８１７.
[１１]程雪娇ꎬ胡美变ꎬ刘玉杰ꎬ等.僵蚕两种入药形式下的化学成分溶出性能与抗惊厥作用比较[Ｊ].中国药房ꎬ
２０１８ꎬ２９(９):１２４２－１２４５.
[１２]徐海红ꎬ林文珍ꎬ李锡安ꎬ等.生物活性多肽序列鉴定方法的研究[Ｊ].中国乳品工业ꎬ２０１５ꎬ４３(７):４－９. [１３]陈艳ꎬ吕春茂ꎬ韩金晶ꎬ等.榛子粕抗氧化肽的分离纯化及序列分析[Ｊ].食品工业科技ꎬ２０１８ꎬ３９(１５):１１４
－１１８.
[１４]王贤纯ꎬ梁宋平.电喷雾串联质谱图的叠合与多肽序列分析[Ｊ].生物化学与生物物理学报(英文版)ꎬ２００１ꎬ
３３(６):６６５－６７０.
[１５]陈兵ꎬ王雅珍ꎬ黄微薇ꎬ等.反相高效液相色谱－质谱联用法测定抑菌肽功能单元的氨基酸序列[Ｊ].食品与生
物技术学报ꎬ２０１４ꎬ３３(５):５２２－５２７.
(上接第３１９页)
量组各有１只睡眠ꎬ但无统计学差异ꎻ阳性对照组则全部睡眠ꎬ与溶剂对照组相比差异均有统计学意义ꎬ表明具有协同作用ꎮ
综合考虑认为ꎬ小鼠灌胃设计剂量的体外培育熊胆粉对中枢神经系统无明显影响ꎮ本实验进一步补充和完善了体外培育熊胆粉安全性实验数据ꎬ为其在临床上的应用提供了实验依据ꎮ
参考文献:
[１]㊀中华人民共和国卫生部.卫生部颁药品标准(新药转正标准中药:第１１册)[Ｓ].新药转正中药标准ꎬ１９９７:
４３－４５.
[２]洪泽宣ꎬ张梅ꎬ金美兰.熊胆粉的ＳＤ大鼠灌胃９０天毒性试验:中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十
五次学术讨论会论文集[Ｃ].２０１９:１５５.
[３]王佳婧ꎬ郑勇凤ꎬ秦晶ꎬ等.熊胆粉的药理作用与新剂型
研究进展[Ｊ].中国医院药学杂志ꎬ２０１６ꎬ３６(７):５９８
－６０２.
[４]王忠壮.理性看待熊胆粉入药问题[Ｊ].上海医药ꎬ２０１２ꎬ３３(５):３３－３５.
[５]王佳婧ꎬ郑勇凤ꎬ秦晶ꎬ等.熊胆粉的药理作用与新剂型研究进展[Ｊ].中国医院药学杂志ꎬ２０１６ꎬ３６(７):５９８
－６０２.
[６]潘梅ꎬ唐靖雯ꎬ陈真ꎬ等.热淋清颗粒的一般药理学研究[Ｊ].药学研究ꎬ２０１５ꎬ３４(４):１８７－１８９.
[７]国家食品药品监督管理总局药品审评中心.药物安全药理学研究技术指导原则[ＥＢ/ＯＬ].[２０１４－０５－１３].
ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｃｄｅ.ｏｒｇ.ｃｎ/ｚｄｙｚ.ｄｏ?ｍｅｔｈｏｄ＝ｌａｒｇｅＰａｇｅ＆ｉｄ
＝１８７.
[８]吴畅烜ꎬ缪明星ꎬ王毅兵ꎬ等.ＬＣ－ＭＳ法研究熊胆粉提取物中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸在大鼠体内药物代
谢动力学[Ｊ].中南药学ꎬ２０１６ꎬ１４(７):７１６－７２０.。