树脂型基因组DNA提纯试剂盒

树脂型™基因组DNA提纯试剂盒
操作方法
1.将全血轻轻混匀，转移0.5ml全血到1ml纯化树脂中，颠倒混匀5~6次。

室
温下放置3分钟，其间颠倒混匀一次，5,000rpm离心3秒，收集沉淀。

2.用1ml GN结合液将纯化树脂悬浮，颠倒混匀，5,000rpm离心3秒，收集沉
淀。

3.用0.5ml漂洗液漂洗纯化树脂两次，颠倒混匀，5,000rpm离心3秒，收集沉
淀。

如果纯化树脂仍然呈现黄色或褐色，重复第3步一次。

4.用0.8ml无水乙醇悬浮纯化树脂，装入离心纯化柱，13,000rpm离心1分钟，
倒掉废液收集管中的乙醇，13,000rpm再离心1分钟，尽量除尽乙醇。

5.将离心纯化柱套入一个干净的1.5ml或2ml离心管中，开盖放置2~3分钟使
乙醇挥发干净。

加入100µl TE缓冲液于纯化树脂上（不能粘在管壁上），室温下放置3分钟，13,000rpm离心2分钟。

如果对基因组DNA的需求量较大的话，则重复第5步1~2次，这样可以获得高产量的基因组DNA。

TE缓冲液的用量视用户对浓度的要求而定。

离心柱放入离心管中，若盖不上盖子，亦没有关系，可开盖离心。

6.离心管中收集的液体即是洗脱下来的基因组DNA，取2µl电泳（1%琼脂糖，
120V，20分钟）检测。

-20℃保存备用。

补充说明
本系统不仅用于从全血中快速提纯基因组DNA，而且还可以从细菌培养液、动物组织培养细胞、动物组织、植物细胞中提纯基因组DNA。

从细菌培养液中提纯基因组DNA
A.对于革兰氏阴性菌，将1.5ml培养过夜的菌液（约5×106培养细胞）13,000rpm
离心30秒，收集菌体，将菌体悬浮于0.5ml PBS缓冲液或TE缓冲液中，然后与1ml纯化树脂混匀。

后续实验操作与从全血中提纯基因组DNA的操作方法相同。

B.对于革兰氏阳性菌，由于革兰氏阳性菌细胞壁比较厚，肽聚糖含量很高，破
壁比较困难，从而影响基因组DNA的得率，甚至提纯失败。

因此，对于革兰氏阳性菌要进行特殊的破壁处理。

将1.5ml菌液（收集过多会影响破壁效果）离心收集菌体，将菌体重悬于400µl50mM EDTA溶液，加入50μl溶菌酶（100mg/ml）（溶菌酶的质量和浓度会影响破壁效果）混匀，37℃温育30~60分钟，其间缓慢摇动，然后加入250μl STEP溶液，50℃缓慢摇动至少2小时，后续实验操作与从全血中提纯基因组DNA的操作方法相同。

（若离心管容量不够可分两管操作）葡萄球菌株要用溶葡萄球菌素（Malatesta M.L.et.al.,1992, Biotechniques 12,70）处理，处理这类菌株一般不能仅用溶菌酶。

为使革兰氏阳性菌株有效裂解，建议将这两种酶混合使用。

从动物组织（肝脏、脾脏、脊髓等）与动物组织培养细胞中提纯基因组DNA A.对于动物组织，将约20mg~50mg的动物组织置于匀浆器中，用1ml的纯化树
脂使其匀浆化；或者用液氮将约20mg~50mg的动物组织研磨为细粉后，与1ml 的纯化树脂混匀。

后续实验操作与从全血中提纯基因组DNA的操作方法相同。

B.对于动物组织培养细胞，将1.5ml培养细胞（约5×106培养细胞）13,000rpm
离心30秒，收集培养细胞，将培养细胞重悬于500µl PBS缓冲液或TE缓冲液中，与1ml纯化树脂混匀。

后续实验操作与从全血中提纯基因组DNA的操作方法相同。

从植物细胞中提纯基因组DNA
将约50mg~100mg的植物组织置于预冷匀浆器中，用0.5ml CTAB萃取缓冲液使其匀浆化；或者用液氮将50mg~100mg的植物组织研磨为细粉，转移到已预热至65℃的0.5ml CTAB萃取缓冲液中。

65℃温育15~20分钟，其间颠倒混匀几次，然后与1ml纯化树脂混匀。

后续实验操作与从全血中提纯基因组DNA的操作方法相同。

缓冲液的配制
TE缓冲液：总体积100ml
将1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.6）和0.2ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）混匀，补超纯水至100ml，高压灭菌，室温保存。

PBS缓冲液：总体积100ml
在80ml超纯水中溶解0.8g NaCl、0.02g KCl、0.144g Na
2HPO
4
和0.024g KH
2
PO
4
，
用HCl调节溶液的pH值至7.4，补超纯水至100 ml，高压灭菌，室温保存。

CTAB萃取缓冲液：总体积100ml
将10ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.6），14ml 5mol/L NaCl，4.0ml 0.5mol/L EDTA （pH8.0），1g DTT和1g CTAB混匀，补超纯水至100ml，过滤灭菌，室温保存。

STEP溶液：
SDS 0.5%
Tris－HCl（pH8.0）150mM
EDTA 400mM
蛋白酶K 0.25mg/mL
常见问题及参考意见。