流行性乙型脑炎prM蛋白剪切位点突变的prM-E蛋白表达细胞系的建立

流行性乙型脑炎prM蛋白剪切位点突变的prM-E蛋白表达
细胞系的建立
李业南;陈振师;步志高;华荣虹
【期刊名称】《中国预防兽医学报》
【年(卷),期】2013(35)3
【摘要】In order to establish the BHK-21 cell lines stably co-expressing prM-E fusion protein of Japanese encephalitis virus (JEV) with a mutant furin site to disable the pre-peptide cleavage of prM, BHK-21 cells was transfected with the recombinant plasmid pCAG-JEV-prM(R89A)E, which was constructed by introducing a point mutation at the cleavage site of prM gene by PCR and cloned into eukaryotic vector pCAG-neo with E gene. Cells stably co-expressing prM-E fusion protein were selected in the present of G418 and identified by indirect immunofluorescence assay and western blot, In addition, the cells displaying high-level protein expression were purified through limiting dilution cloning. Eventfully, the results showed that the cell line was able to express the intact prM of prM-E fusion protein. The established cell line would provide a basis for further study the effect of the cleavage event on mature mechanism of JEV and the development of JEV subunit vaccine.%为建立稳定共表达乙型脑炎病-毒(JEV)完整M前体蛋白(prM)和E蛋白的BHK-21细胞系,本研究在prM蛋白furin 蛋白酶剪切位点编码基因中引入突变,将突变后的prM基因克隆于质粒中构建重组表达质粒pCAG-JEV-prM(R89A)E.将重组质粒转染BHK-21细胞,转染48 h后细
胞用含G418的选择性培养基选择培养,进一步经细胞克隆纯化制备表达剪切位点突变的JEV prM-E蛋白的稳定细胞系.经IFA和western blot鉴定表明,该细胞系能表达JEV prM与E蛋白,所表达的prM蛋白未发生剪切；细胞经多次传代后仍能够稳定地共表达prM与E蛋白.该细胞系的建立为研究prM蛋白剪切对JEV粒子形成的影响以及亚单位疫苗的制备奠定了基础.
【总页数】5页(P189-192,201)
【作者】李业南;陈振师;步志高;华荣虹
【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001
【正文语种】中文
【中图分类】S852.65
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