模板 微生物实验报告

2018年南方医科大学微生物实验报告
日期：2018年5月10日
一、实验目的
1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的种类，掌握培养基制备的原则和一般方法；
2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法；
3.了解实验室和医院空气的有菌环境，加强消毒灭菌的观念；掌握医院病房空气的细菌检测方法；掌握空气的卫生细菌学监测指标及意义；
4.了解人体体表的有菌环境，加强消毒灭菌的观念；
5.掌握油镜的使用方法，掌握细菌涂片标本的制备及革兰氏染色法的原理及操作，熟悉细菌的基本形态
6.掌握几种常用的生化反应的名称、原理、方法、结果讨论及用途；
7.掌握血浆凝固酶的原理、方法、结果观察及判断；
8.掌握抗菌素敏感性试验的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法；
9.掌握玻片凝集反应试验的原理、方法、结果观察及判断。

二、实验器材
1.培养基的制备：试管架、移液管、棉塞、牛皮纸、手套、石棉网、橡皮筋、蒸馏水、天平、称量器皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、干粉培养基。

2.细菌的分离培养：接种环，酒精灯，打火机，浓汁标本1支，粪便标本1支；碘酒
棉球1瓶，酒精棉球1瓶，眼科镊子2把；伊红美蓝平板2个，营养琼脂平板5个。

3.细菌的纯培养：接种环，酒精灯，打火机，中性笔，斜面4支，细菌分离培养物（上次实验平板）
4.细菌的形态学检查：接种环，酒精灯，打火机，中性笔，斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，显微镜，革兰氏染色试剂6组，染色架8个。

5.细菌的生化试验等：接种环，接种针，酒精灯，打火机，中性笔，斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，镊子2把，兔血浆，生理盐水。

6.细菌的血清学试验、结果分析：接种环，酒精灯，打火机，玻片、志贺菌诊断血清，半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。

三、实验步骤
1.培养基的制备
1.1小组分工
8,9,10,12半固体琼脂 1.6563413支×4，小试管，高层1.2操作过程
⑤无菌取材：在火焰旁边，左手斜持标本管下端，右手小指夹住试管棉塞上端，缓慢拔出棉塞并夹持之（棉塞下端不得接触到管口外任何物体）→管口迅速通过火焰3次
6.1.2主要步骤
涂片：
①接种环取盐水3ul×2滴,水滴间距小于2cm。

②取菌苔少许（1mm小菌落半个）与盐水混匀，涂成大于1cm2均匀涂膜。

③涂毕→环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。

干燥：
①手持载玻片一端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间2～3秒钟。

②促使菌体蛋白质凝固，固定在载玻片上，以免染色水洗的时候，细菌被水洗掉。

染色：
7.2.2操作步骤
7.4.2操作过程
①接种针斜面取菌，从半固体中心,垂直刺入，到达培养基底部5分之4处，再循原来的路线,退出接种针。

②管口、接种针经火焰烧灼灭菌。

8.细菌的血清学试验、结果分析
8.1取洁净的载玻片一张，将磨面近端设为对照区，滴加生理盐水15ul。

远端设为试验区，滴加福氏志贺菌诊断血清15ul，
8.2用接种环分别取粉红色菌苔，约2个小菌落的菌量，研磨于盐水或血清内，混合均匀。

四、结果与讨论
1.培养基的制备
我们组是第7组，制备的是半固体培养基，小组四人分工合作，齐力完成。

2.洗手前后对比
2.1比较洗手前后细菌的种类和数目：
比较洗手前后细菌的种类和数目：洗前细菌种类多，洗后细菌种类少，说明洗手能洗掉大多数暂住菌比较常规和标准洗手的细菌数量：常规（简单）洗手，平板上细菌数量少。

标准洗手，平板上细菌数量多。

2.2若常规（简单）洗手，平板上细菌数量少。

标准洗手，平板上细菌数量多。

洗手前细菌数量少于洗手后细菌数量，这与预期结果（预期是洗手后细菌数量应少于洗手前）不一样，是因为常住菌数量大，牢固附着在皮肤上，常洗不掉，可洗松动，经摩擦接种、脱落到培养基上，因此显示细菌更多。

暂住菌大多都是致病菌，常住菌一般对人体无致病作用，因此外科手术人员在进行手术前应充分清洗双手并消毒，确保无菌的原则。

2.3碘酒和酒精棉球消毒以后，没有细菌生长。

3.空气中细菌检查结果
细菌菌落直径：1-4mm 采样地点：男卫生间
平板直径：7cm 放置时间：15min
形成菌落数;12个
小组内的丙同学划线结果最好，本人为丁同学，划得最差。

主要失误原因是第一次划平板，没经验，而且取的脓汁过多（细菌量多），划到后面的时候第五区基本
和第一区重复了，使得菌落十分密集，且杂乱无章，基本的单一的菌落，会对接下来的实验造成影响。

因此，第一次划平板可以先在背面用标记笔先划好五个区域，然后再用接种环划线就能减少不必要的误差。

5.细菌的纯培养
5.1从普通平板上挑取的金黄色或白色菌落接种的斜面，菌苔的颜色，还是原来菌落的颜色，金黄色或白色。

5.2从伊红美蓝平板上挑取的紫黑色或粉红色菌落接种的斜面，菌苔已没有原来菌落的颜色。

菌苔灰白色、表面湿润、光滑、不透明或半透明。

6.细菌的形态学检查结果
镜下观察结果：
6.1用普通平板，从浓汁标本中分离得到黄色、白色两种菌落，这两株细菌，显微镜油镜下均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌。

结合菌落色素，这两株葡萄球菌可能是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。

6.2用伊红美蓝平板，从粪便标本分离、获得紫黑色和粉红色半透明两种菌落。

紫黑色菌落可能是能分解乳糖的非致病菌大肠埃希菌。

粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌。

显微镜下，均为G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。

7.血浆凝固酶凝集试验结果
金黄色菌和血浆凝固酶凝集试验为阳性，白色为阴性，则金黄色菌为致病菌。

11.半固体接种法实验结果
11.1紫黑色菌在半固体中自接种部位向周围移动扩散生长，使培养基呈根须装或云雾。