鼠疫自然疫源地检测结果分析

鼠疫自然疫源地检测结果分析

研究德格县喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫流行状况。方法对喜马拉雅旱獭等材料进行细菌分离培养、鼠疫间接血凝试验（IHA）和反间接向血凝试验（RIHA）。结果细菌培养检测自毙喜马拉雅旱獭18份，分离鼠疫菌10株，细菌培养检测活体喜马拉雅57份，分离菌株2株；IHA检测旱獭血清56份、阳性1份，牧犬血清24份、阳性2份；RIHA检测组织悬液18份，阳性9份均为旱獭。结论从喜马拉雅旱獭分离出鼠疫菌，说明四川省德格县2009年正在发生动物鼠疫流行。

鼠疫是严重危害人类健康的烈性传染病，且在流行病学方面的危害也最大[l-4]。随着监测面的扩大，新的鼠疫疫源地的发现，我国鼠疫疫源地范围不断扩大，鼠疫防治工作的任务越来越艰巨[5]。2007年四川省德格县暴发喜马拉雅旱獭鼠疫流行，确定为喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地。2008年也有动物间鼠疫的流行，为保障农牧民的安全，2009年继续在德格进行鼠疫监测，现将鼠疫动物实验检测结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 捕获旱獭来自德格县柯落洞、更庆镇、八邦、和阿须4个乡镇，共57只。

1.1.2 自毙旱獭来自德格县更庆、柯洛洞和八邦3个乡镇，共18只。

作者单位：1 四川省疾病预防控制中心（四川成都610031）

2 甘孜州疾病预防控制中心

3 德格县疾病预防控制中心

作者简介祁腾(1984-)，男，大学本科，初级医师，自然疫源性疾病控制

1.1.3 其他自毙动物牧犬1份、褐家鼠5份、五指心颅跳鼠2份、长尾仓鼠1份，来自更庆。自毙家猫1份、来自八邦乡。

1.1.4 血清来源旱獭血清56份，来自柯洛洞、更庆、阿须、龚垭、和八邦5个乡镇；犬血清24份，来自更庆、八邦、打滚和阿须4个乡镇；藏系绵羊血清85份来自更庆、八邦、阿须3个乡镇。

1.1.5 蚤类获蚤48组673匹，谢氏山蚤79匹/12组、斧形盖蚤500匹/26组、不等单蚤1匹/1组、草原硬蜱49只/5组、指形盖蚤28匹/2组、人蚤15匹/1组、鼠兔角头蚤1匹/1组。

1.1.6 诊断试剂由青海省地方病预防控制所、中国疾病预防控制中心鼠疫布氏菌病预防控制基地提供，效期内按说明书使用。

1.2 方法

1.2.1 细菌培养无菌条件下解剖动物，将肝、脾等脏器切面直接点种于平板内，用接种环三线法划线，放入培养箱，培养温度为28℃。每只动物的肝、脾各接种1个平板。平板连续观察3d，每天记录，无可疑鼠疫菌生长即为阴性。

1.2.2 脏器悬液制备将动物肝脾组织以无菌剪刀取大约1g于离心管内，加3%甲醛兔血清生理盐水1ml研磨，然后加甲醛兔血清生理盐水稀释制成1：10脏器悬液，1000 r／min离心5min，取上清供试验用。

1.2.3 血清学检查IHA和RIHA按常规方法进行[6]，阳性判定标准按中华人民共和国卫生诊断标准鼠疫诊断标准（WS 279-2008）[7]执行。

2 结果

2.1 病原菌分离培养鼠疫细菌学检验各种动物材料85份，其中旱獭75份（活体57、自毙18），牧犬1份、褐家鼠5份、五指心颅跳鼠2份、长尾仓鼠1份、家猫1份;57只活体旱獭检获鼠疫菌2株,18只自毙旱獭中检获鼠疫菌10株。细菌学检验媒介昆虫材料673匹/48组，

谢氏山蚤79匹/12组、斧形盖蚤500匹/26组、不等单蚤1匹/1组、草原硬蜱49只/5组、指形盖蚤28匹/2组、人蚤15匹/1组、鼠兔角头蚤1匹/1组。，均未检获鼠疫菌（表1，表2）。

2.2 间接血凝试验检测各种活体动物血清165份，其中旱獭血清56份、牧犬血清24份，藏系绵羊85份，F1抗体检测阳性3份（表3）（旱獭1份、牧犬2份），滴度分别为1：1280、1：320、1：80。

2.3 反向血凝试验制作脏器、骨髓等反向材料20份，其中旱獭18份，家猫、牧犬各1份，鼠疫F1抗原阳性9份均为旱獭，滴度分别1：819200，1：409600，1：1600，1：6400和1：3200各1份。1：12800和1：51200各2份。自毙动物F1抗原检测结果(表4)。

3 讨论

2007年四川省德格县首次爆发动物间鼠疫。从33份旱獭标本中检出鼠疫F1抗原阳性材料10份，17份旱獭检材中检获鼠疫菌4株，确定四川省德格县为喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地。这是四川省首次发现喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地。

2009年分离鼠疫菌12株，细菌检出点由德格县更庆镇、八邦乡扩大到柯洛洞乡，2009年德格县喜马拉雅旱獭鼠疫监测结果，从病原学上再次证实喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地的存在。另外还在八邦乡检出鼠疫菌F1抗体阳性血清2份，活体旱獭1份，狗血清1份，滴度分别为1：1280、1:80。通过实验室检测数据显示，染疫动物有旱獭和牧犬。旱獭血清共56份，IHA阳性血清1份，阳性率为1.79%。牧犬血清24份、阳性2份，其中更庆镇、八邦各1份，滴度分别为1：320，阳性率为8.33%。藏系绵羊85份血清，鼠疫菌F1抗体监测阴性。

抗原检测了旱獭、家猫、牧犬3种动物，四川省首次在活体旱獭材料中分离鼠疫菌2株，检出率为3.51%。但是检出鼠疫菌株的活体旱獭的IHA监测F1抗体阴性，可能是由于旱獭染菌不久，体内没有产生相应的抗体或产生的抗体不能达到IHA检测的最低浓度。在自毙旱獭中检出鼠疫菌8株，检出率为34.6%。其中RIHA检测自毙旱獭的肝脾组织悬液18份，RIHA阳性9份。同时有1份RIHA为阳性的自毙旱獭没有分离到鼠疫菌，可能是由于旱獭曾经感染过鼠疫菌，体内只留下了鼠疫菌F1抗原，不存在活的鼠疫菌；或是细菌培养的时候没有取到有鼠疫抗原存在的组织；或是在分离鼠疫菌的时候没有发现鼠疫菌落。在自毙牧犬和家猫未检出鼠疫阳性材料。

2009年细菌培养谢氏山蚤、斧形盖蚤、不等单蚤、草原硬蜱、指形盖蚤、人蚤和鼠兔角头蚤，共673匹/48组，均未检获鼠疫菌。2007-09年间自毙旱獭检出的蚤细菌培养均阴性，说明在今后工作中要加大昆虫媒介检测力度，以便进一步确认媒介蚤在鼠疫流行中的传播作用。

通过实验室检测结果分析，说明2009年德格县境内动物鼠疫流行猛烈，而且在活体旱獭种分离出鼠疫菌株，旱獭活动与牧民的活动非常的紧密，另外旱獭型鼠疫菌是强毒株，危害高，疫源地目前处于活跃期，随时存在发生人间鼠疫的潜在威胁[8-9]。因此德格县鼠疫防治工作形势十分严峻，应长期做好鼠疫防治充分准备和储备工作，继续加强鼠疫监测。