JC 线粒体膜电位的检测方法
线粒体膜电位标准_概述及解释说明
线粒体膜电位标准概述及解释说明1. 引言1.1 概述线粒体膜电位是指线粒体内外质间存在的一种电压差。
在细胞呼吸过程中，通过线粒体内外质间的质子转运，维持产生和维持着该电位。
线粒体膜电位不仅是维持细胞能量代谢所必需的，也与许多生理病理状态密切相关。
1.2 文章结构本文将首先对线粒体膜电位进行解释说明，包括其定义、作用以及测量方法。
随后将进行线粒体膜电位标准概述，探讨其重要性和意义，常见的标准值及其影响因素，并介绍相关研究进展，探索线粒体膜电位变化与生理病理状态之间的关系。
最后得出结论点。
1.3 目的本文旨在全面了解和阐述线粒体膜电位标准及其相关内容，从而增加对该领域的认识和理解。
同时，通过对相关研究进展的概述和分析，为今后深入研究提供思路和启示。
注意：以上内容仅为示例，请根据实际情况进行修改和适当补充。
2. 线粒体膜电位标准解释说明：2.1 线粒体膜电位的定义和作用：线粒体是细胞内的一个重要器官，它在维持细胞正常功能和生存中起着至关重要的作用。
线粒体膜电位（Mitochondrial Membrane Potential, MMP）指的是线粒体内外两侧膜的电势差。
具体来说，线粒体内侧带有负电荷，而线粒体外侧则带有正电荷，在这种情况下形成了一个负向电位。
MMP的主要作用之一是为ATP合成提供动力。
通过氧化磷酸化过程中所产生的负载（如NADH、FADH2），线粒体通过细胞呼吸链将这些负载传递给高效能合成ATP所需的蛋白质复合物。
这个过程需要由MMP提供能量驱动。
除了ATP合成外，MMP还参与调节许多其他的线粒体功能，如离子平衡、物质转运、抗氧化反应等。
此外，MMP也与细胞凋亡密切相关，高水平的MMP 可能导致细胞程序性死亡。
2.2 线粒体膜电位测量方法：目前，有各种各样的方法可用于测量线粒体膜电位。
其中最常用和可靠的方法是使用荧光探针染料。
这些染料可以穿过细胞膜并进入到线粒体内部，然后根据MMP的变化而发生荧光信号变化。
(完整版)线粒体膜电位检测(JC-1).
线粒体膜电位检测（JC-1)大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。
所需仪器或者试剂流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
2． JC-1避光保存及使用。
3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。
4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
流式细胞仪检测细胞凋亡操作流程 - 线粒体膜电位变化检测细胞凋亡
线粒体膜电位变化检测细胞凋亡实验原理JC-1（5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide）是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光（FL-2 通道）；在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1 为单体(monomer)，可以产生绿色荧光（FL-1 通道）。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1 单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为527nm；JC-1 聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实验用品1.12⨯75mm 的Falcon 管和15ml 聚苯乙烯离心管2.微量加样器和加样头3.线粒体检测试剂盒（货号551302，100tests），包括JC-1和10 ⨯ Assay Buffer, 注：每个KIT 包括 4 小瓶JC-1 试剂，每小瓶试剂足够检测25 个样本4.离心机5.CO2 培养箱6.流式细胞仪样本制备图1：试剂准备和JC-1 染色步骤总揽1.在JC-1粉末中加入125ulDMSO使其充分溶解，配成JC-1 Stock Solution，需根据实验的量分装-20度保存。
2.根据样本量配制JC-1 Working Solution，每个样品500ul 1×Assay Buffer + 5ulJC-1 Stock Solution。
jc-1数据处理方法
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm的理想荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
其数据处理方法包括以下步骤：
1. 采集荧光染色细胞样本。
2. 用JC-1工作液将样本进行染色。
3. 用JC-1检测试剂盒进行检测，得到荧光颜色转变的数据。
4. 根据荧光颜色转变情况，分析细胞线粒体膜电位的变化。
5. 根据细胞线粒体膜电位的变化，判断细胞的凋亡情况。
需要注意的是，JC-1工作液的配制需要严格按照说明书进行操作，先用纯水稀释JC-1(500×)，再加JC-1 Assay Buffer。
同时，JC-1在水中溶解度较小，可以通过37℃水浴或超声促进溶解。
JC-1使用说明
JC-1使用说明货号：J8030CAS：3520-43-2化学名：CBIC2(3)，5,5’,6,6’-Tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide结构式：分子式：C 25H 27Cl 4IN 4分子量：652.23性质：1.外观：红色粉末2.纯度：≥95%（HPL C）3.产品描述：JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，可以产生绿色荧光。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为529nm；JC-1聚合物的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
JC-1用于检测细胞的线粒体膜电位时常用的浓度范围为1～20µg/mL，对于很多细胞适宜采用的JC-1浓度为10µg/mL。
储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
注意事项：1)如果一次使用量较小，需把每管再适当进行分装，尽量避免反复冻融。
2)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
线粒体膜电位测定方法
线粒体膜电位测定方法线粒体膜电位测定方法是一种用于研究线粒体膜电位的定量方法,能够确定线粒体膜内外离子浓度的差异,进而推断线粒体代谢活动的状态。
下面将介绍线粒体膜电位测定方法的基本原理和步骤,并对其进行拓展。
一、线粒体膜电位测定的基本原理线粒体是一种细胞质颗粒,在细胞内起着至关重要的作用,它是细胞呼吸过程中的关键环节。
线粒体膜的主要功能是屏障,可以限制溶液中的离子进入线粒体内部,同时也允许离子从线粒体膜外进入。
当线粒体膜内外的离子浓度存在差异时,就会影响线粒体膜的电性质,导致线粒体膜发生电位变化。
线粒体膜电位的变化可以通过测量膜内外的电势差来实现。
具体来说,可以使用电极技术来测定线粒体膜内外的电势差。
常用的电极包括pH电极和na+-K+-ATP酶电极。
pH电极可以测量线粒体膜外的pH值,而na+-K+-ATP酶电极则可以测量线粒体膜外K+离子的浓度,从而推断线粒体膜外的离子浓度。
二、线粒体膜电位测定的步骤线粒体膜电位测定通常包括以下几个步骤:1. 准备电极材料和测量液。
通常需要使用pH电极和na+-K+-ATP酶电极,并准备相应的测量液。
其中,pH电极的pH值范围为7.4-8.4,na+-K+-ATP酶电极的na+离子浓度范围为35-65mM,测量液的pH值和na+离子浓度也需符合上述范围。
2. 将电极材料和测量液放入仪器中。
然后,将仪器连接到电脑或传感器上,并启动仪器,进行测量。
3. 记录测量结果。
根据电极的pH值和na+-K+-ATP酶电极的电动势差,可以计算出线粒体膜电位的变化值。
拓展:线粒体膜电位测定方法不仅可以用于研究线粒体膜电位的变化,还可以用于确定线粒体代谢活动的状态。
例如,当线粒体膜内外的离子浓度差异较大时,可能会导致线粒体代谢活性的变化,从而影响细胞的生长和死亡。
因此,通过线粒体膜电位测定方法可以确定线粒体膜内外离子浓度的差异,进而推断线粒体代谢活动的状态。
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？JC-1来助力
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？JC-1来助力JC-1 检测线粒体膜电位（Membrane potential）原理：在细胞凋亡的过程中往往伴随着线粒体跨膜电位的破坏，这被广泛认为是细胞凋亡过程中zui早发生的事件之一。
线粒体膜电位的检测有很多方法，JC-1的流式检测是比较常见的一种方法。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，低浓度时，以单体存在，可检测到绿色荧光，用流式检测时，通常为FL-1通道(和FITC同通道）高浓度时，以多聚体存在，可检测到红光，流式检测通常为FL-2通道（和PE同通道)。
因JC-1浓度的变化,在单体和多聚体之间形成一个可逆的转变过程。
正常细胞，膜电位正常时，JC-1通过线粒体膜J性进入线粒体内，并因浓度升高而形成发射红色荧光的多聚体，而凋亡细胞，线粒体跨膜电位去J化，JC-1从线粒体内释放，浓度降低，逆转为发射绿色荧光的单体形式。
故而可以通过检测绿色和红色荧光来定性(细胞群的偏移）定量（细胞群的荧光强度）的检测线粒体膜电位的变化。
近年来研究发现线粒体功能状态和不少疾病的密切相关，多种细胞在不同因子作用下发生凋亡时均伴有MMP的下降，而检测线粒体膜电位(MMP)的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？我们可以通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
Abbkine线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）#KTA4001 就此提供了一种简单的方法，基于JC-1来检测线粒体跨膜电位的变化，区分健康和凋亡细胞。
在健康细胞中，这种染料在线粒体中积聚并聚集，在线粒体中形成明亮的红色荧光团块。
任何消除线粒体膜电位的事件都会阻止JC-1染料在线粒体中的积累，因此，染料以其单体形式保留在细胞质中，导致红色转变（聚集的JC-1，Ex/Em = 585/590nm）至绿色荧光（JC-1单体，Ex/Em = 510/527nm）。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)
仅供科研版本号：161213 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)【产品组成】【保存条件】-20℃,避光,12个月【产品概述】JC-1是一种检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential) 的理想荧光探针。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物，产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1丌能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，产生绿色荧光。
这样就可以通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化，常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，这种转变也可作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为529nm。
JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的装置即可。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)(Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1)是一种以JC-1为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测，CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断或其他用途。
【使用方法】1、配制JC-1染色工作液：取适量JC-1 Stain (200×)，按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1，剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。
然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后即为JC-1染色工作液。
6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每0.5～1.0×106细胞需0.5ml JC-1染色工作液。
jc1线粒体膜电位流式
jc1线粒体膜电位流式
JC-1 是一种荧光染料，可以用于测量线粒体膜电位的变化。
在低膜电位时，JC-1以其单体形式存在，发射绿色荧光。
而在高膜电位时，JC-1会形成聚集体，发射红色荧光。
流式细胞仪可以通过检测细胞中JC-1荧光的变化来测量细胞内线粒体膜电位的变化。
通过此测量，可以判断细胞的线粒体功能的状态，如是否发生线粒体膜电位的损失或增加。
流式细胞仪可以分析大量细胞的线粒体膜电位，同时可以对细胞进行分选，提取特定类型细胞进行后续实验。
这种技术可用于研究线粒体功能与细胞的生理和病理过程的关系。
JC-1单标法和JC-1 PI双标法荧光探针检测山羊附睾精子线粒体膜功能的研究
JC-1单标法和JC-1 PI双标法荧光探针检测山羊附睾精子线粒体膜功能的研究摘要：为准确、全面研究超低温冷冻技术对山羊附睾精子线粒体膜电位的影响效果，本试验采用荧光探针ＪＣ－１单标和ＪＣ－１／ＰＩ双标２种荧光染色方法，通过流式细胞仪和荧光显微镜两种检测手段对精子线粒体膜电位（Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｍｅｍｂｒａｎｅｐｏｔｅｎｔｉａｌ，MMP）变化进行检测分析，用ＪＣ－１单独染色，能准确、快速地区分高、低ＭＭＰ精子，但不能明确区分精子的存活状态，采用ＪＣ－１与碘化丙啶（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ）双标法，则能明显判定精子的存活状态。
通过对绒山羊附睾精子在冷冻前和解冻后线粒体膜电位检测，结果表明，单标记后高ＭＭＰ精子尾部呈橙红色，低ＭＭＰ精子尾部为绿色；双标后死亡精子头部呈红色（ＰＩ＋）。
对两种检测手段的比较研究，结果显示，荧光显微镜能够有效地区分出高、低ＭＭＰ及死精子，但对于活精子中ＭＭＰ的高低检测效果不理想；流式细胞仪则能够有效地区分活精子ＭＭＰ的高低，而且结果准确，速度快，敏感性高。
试验表明，两种检测方法相关性很高，分析同一处理样品时用ＪＣ＋％和ＪＣ＋／ＰＩ－％检测结果呈显著正相关（ｒ＝０．８１５，ｒ＝０．９８２，Ｐ＜０．０１）。
因此，对于精子线粒体ＭＭＰ的分析，采用ＪＣ－１单染与ＪＣ－１／ＰＩ双染的方法，利用流式细胞仪与荧光显微镜进行联合检测，能比较全面、准确的反映出精子线粒体的功能状态。
关键词：山羊；精子；线粒体膜电位；ＪＣ－１线粒体是活性氧形成的主要场所，活性氧的生成是导致电子传递过程的中断，氧化磷酸化与电子传递的耦合是维持高的线粒体膜电位（△ψｍ）的重要环节，而这种高的线粒体膜电位状态是细胞和精子维持活性在线粒体中产生ＡＴＰ能量所必需的保障，因此，在精子整个代谢过程所需的能量主要由线粒体提供［１，２］。
线粒体活性的改变会影响精子的能量供应［３］，且线粒体还是细胞凋亡的调控中枢［４］。
JC-10 线粒体膜电位的检测
贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的 BBcellProbe® M 系列、N 系列、L 系列、 E 系列、G 系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、 微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染 色试剂盒产品。
假去极化。 根椐细胞种类、实验条件不同流式细胞仪设置不同。 JC-10 染色并洗涤后尽量在 30 分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
悬浮细胞 1. 1X 染色缓冲液和 JC-10 染色工作液的配制： 根据样品数按下列比例配制 1X 染色缓冲液和 JC-10 染色工作液。 取 100ul 10×染 色缓冲液加 900ul 无菌纯水稀释，混匀并预热至 37℃，即成 1×染色缓冲液； 用 1×染色缓冲液将 JC-10 稀释 1000-3000 倍，充分混匀配成 JC-10 染色工作液。
贝博® BBcellProbe® JC-10 线粒体膜电位检测试剂盒可以快速灵敏地检测细胞、组织 或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。试剂盒染料与其他的阳离子染 料如 DiOC6(3)和罗丹明 123 相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电 位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的 变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异 质性都能辨别。
线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm 的下降是细胞凋亡早期的一个标 志性事件，常用 JC-1 或 JC-10 来检测。虽然 JC-1 在许多实验中被广泛地的应用，但是其水 溶性差的特性也使其很难在一些实验中使用，即使是在浓度为 1uM 的条件下，JC-1 也会在 水的缓冲液中析出。JC-10 是一种可以在需要高浓度染料的实验中替代 JC-1 的产品，与 JC-1 相比，贝博® 的 JC-10 具有更好的水溶性。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)简介：JC-1是一种检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential) 的理想荧光探针。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物，产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，产生绿色荧光。
这样就可以通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化，常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，这种转变也可作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1单体的最大激发波长为，最大发射波长为。
JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为，最大发射波长为。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的装置即可。
Leagene 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)(Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1)是一种以JC-1为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测，CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 配制JC-1染色工作液：取适量JC-1 Stain (200×)，按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH 2O 的比例稀释JC-1，剧烈Vortex 充分溶解并混匀JC-1。
然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后即为JC-1染色工作液。
6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推； 对于细胞悬液每0.5～1.0×106细胞需JC-1染色工作液。
jc 是一种广泛用于检测线粒体膜电位
4. Chen K, Zhang Q, Wang J, Liu F, Mi M, Xu H, Chen F, Zeng K. Taurine protects transformed rat retinal ganglion cells from hypoxia-induced apoptosis by preventing mitochondrial dysfunction. Brain Res. 2009 Jul 7;1279:131-8. Epub 2009 May 7.
JC-1
产品编号 C2005
产品名称 JC-1
包装 1mg
产品简介： JC-1 也 称 CBIC2(3) 或 5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide ， 分 子 式 为 C25H27Cl4IN4 ， 分 子 量 为
652.23，CAS Number 3520-43-2，纯度>95%。 JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential) ∆Ψm 的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯
化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生 红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体(monomer)，可以产生绿色荧光。 这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化
jc1线粒体膜电位流式
jc1线粒体膜电位流式
摘要：
一、JC1 线粒体膜电位的检测原理
二、JC1 线粒体膜电位检测的流式方法
三、JC1 在低浓度和高浓度时的存在状态及其荧光表现
四、JC1 在线粒体膜电位检测中的应用
正文：
线粒体膜电位的检测是生物科学研究中的一个重要领域。
JC1 是一种常用的荧光染料，可以用于检测线粒体膜电位。
其原理主要基于JC1 在低浓度和高浓度时的存在状态变化及其对应的荧光表现。
JC1 有单体和多聚体两种存在状态。
在低浓度时，JC1 以单体存在，此时可以检测到绿色荧光。
在流式检测中，通常使用FL-1 通道（与FITC 同通道）进行检测。
而在高浓度时，JC1 以多聚体存在，可以检测到红光。
在流式检测中，通常使用FL-2 通道进行检测。
JC1 在线粒体膜电位检测中的应用十分广泛。
通过JC1 的流式检测，可以对线粒体膜电位进行快速、准确和定量的分析。
这对于研究线粒体在生物体内的功能和作用具有重要的意义。
综上所述，JC1 是一种非常有用的荧光染料，可以用于检测线粒体膜电位。
其原理主要基于JC1 在低浓度和高浓度时的存在状态变化及其对应的荧光表现。
jc1线粒体膜电位流式
jc1线粒体膜电位流式摘要：I.引言A.线粒体膜电位的检测意义B.JC1荧光探针的简介II.JC1的原理A.JC1的两种存在状态B.JC1在不同浓度下的荧光变化C.JC1与线粒体膜电位的关系III.流式检测原理A.流式细胞术的原理B.JC1在流式检测中的通道选择IV.JC1的应用A.JC1在科研领域的应用B.JC1在临床检测中的应用V.结论A.JC1线粒体膜电位流式的优点B.未来展望正文：I.引言线粒体是细胞中的能量工厂，负责生产细胞所需的能量（ATP）。
线粒体膜电位是反映线粒体功能的重要指标，对细胞的能量代谢和生理功能有重要影响。
因此，检测线粒体膜电位对于研究细胞生理和疾病发生发展机制具有重要意义。
JC1是一种荧光探针，可以有效地检测线粒体膜电位。
通过流式细胞术，我们可以对线粒体膜电位进行精确、快速的检测。
II.JC1的原理JC1探针有两种存在状态：单体和多聚体。
在低浓度时，JC1主要以单体存在，此时可以检测到绿色荧光。
随着浓度的增加，JC1分子间相互作用增强，形成多聚体，此时荧光颜色转变为红光。
JC1与线粒体膜电位密切相关。
线粒体膜电位改变时，会影响JC1的荧光性质。
当线粒体膜电位降低时，JC1的荧光强度减弱；反之，线粒体膜电位增加时，JC1的荧光强度增强。
III.流式检测原理流式细胞术是一种高通量的细胞检测技术，可以对细胞进行快速、准确的分析。
流式检测中，JC1通常与FITC通道一起使用，以便于区分不同浓度的JC1荧光信号。
同时，通过fl-2通道，我们可以进一步分析JC1多聚体的荧光信号。
IV.JC1的应用JC1线粒体膜电位流式在科研和临床领域有广泛的应用。
在科研领域，JC1可以用于研究线粒体功能、细胞凋亡、神经退行性疾病等方面的机制。
在临床检测中，JC1可以用于评估线粒体功能异常相关的疾病，如线粒体肌病、慢性疲劳综合症等。
V.结论JC1线粒体膜电位流式是一种有效的检测方法，具有高精度、高灵敏度、快速等优点。
JC-1线粒体膜电位检测
JC-1线粒体膜电位检测线粒体膜电位检测（JC-1) 大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ 的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。
所需仪器或者试剂流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
2．JC-1避光保存及使用。
3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。
4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
jc-1共聚焦步骤
jc-1共聚焦步骤
JC-1是一种荧光染料,常用于测定细胞线粒体膜电位。
其共聚焦显微镜观测步骤如下：
1. 将待测细胞接种在共聚焦培养皿中,使其附着并生长至适当的数量。
2. 用PBS缓冲液洗涤细胞1~2次,以去除培养液和细胞碎片等。
3. 将含1µM JC-1的PBS加入共聚焦培养皿中,孵育30分钟至1小时,使JC-1染料进入细胞,并形成线粒体膜电位相关的荧光染色体。
4. 用PBS缓冲液洗涤细胞1~2次,尽可能地去除未结合的JC-1染料。
5. 将培养皿放入共聚焦显微镜中,使用荧光激发光源激发JC-1的红色和绿色荧光。
6. 通过软件调节激发波长和滤镜,使观察到的荧光信号最佳。
7. 通过共聚焦显微镜观察线粒体膜电位的变化。
通常,高线粒体膜电位的细胞会表现出更多的红色荧光,而低线粒体膜电位的细胞会表现出更多的绿色荧光。
jc1线粒体膜电位流式
jc1线粒体膜电位流式线粒体是细胞内的一个重要器官，它在能量供应和调控细胞代谢方面起着至关重要的作用。
而线粒体膜电位则是线粒体正常功能的关键因素之一。
线粒体膜电位（Mitochondrial Membrane Potential，简称ΔΨm）是线粒体内外膜之间的电势差。
它由细胞内外各种因素的平衡和调节所决定，如质子泵、离子通道和载体蛋白等，它们通过主动转运质子、离子和分子等物质来维持线粒体膜电位的稳定性。
线粒体膜电位的变化会直接影响细胞的能量代谢和功能。
在正常情况下，线粒体膜电位维持在一定的范围内，以保持正常的细胞功能。
当线粒体膜电位过高或过低时，将引起线粒体功能障碍和细胞损伤。
例如，线粒体膜电位过高可能导致产生过多的活性氧自由基，进而引发细胞的氧化应激和凋亡；而线粒体膜电位过低则会降低线粒体内膜的ATP合成效率，影响细胞的能量供应。
如何准确、快速地检测线粒体膜电位是当前研究的热点之一。
目前，流式细胞术是最常用的方法之一。
通过特定的荧光探针，如JC-1（一种可以穿过线粒体膜的荧光染料），结合流式细胞仪的高灵敏度和高通量性能，可以准确地测量线粒体膜电位的变化。
JC-1荧光染料在高线粒体膜电位下会形成聚集态，发出红色荧光信号；而在低线粒体膜电位下，则会分散成单体态，发出绿色荧光信号。
通过测量红/绿荧光强度的比值，可以间接反映线粒体膜电位的高低。
在实际应用中，我们可以利用流式细胞仪的高通量性能，同时检测数千个细胞的线粒体膜电位。
这不仅提高了检测效率，还可以分析细胞群体中线粒体膜电位的分布情况，探究不同细胞类型、疾病状态及药物作用对线粒体膜电位的影响。
总的来说，线粒体膜电位是细胞内能量代谢的关键指标之一，它的变化与细胞的功能和生理状态密切相关。
通过流式细胞术测定线粒体膜电位，我们可以更全面、准确地了解细胞的功能状态。
这对于研究线粒体相关的疾病、寻找新的治疗策略具有重要的指导意义。
未来，随着流式细胞仪技术的进一步发展，我们相信线粒体膜电位的研究将会为细胞生物学和医学科研领域提供更多有价值的信息。
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JC-1线粒体膜电位检测试剂盒
产品组成：
产品编号BB-4105-1 BB-4105-2 BB-4105-3
规格20 assays 50 assays 100 assays
JC-1 100ul 250ul 500ul
10×孵育缓冲液4ml 10ml 20ml
产品简介：
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性。
凋亡细胞则大多为FL1单阳性。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
贝博线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。
试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；
使用方法：
悬浮细胞
1、孵育缓冲液和JC-1染色工作液的配制：根据样品数按下列比例配制孵育缓冲液和JC-1染色工作液。
取100ul 10×孵育缓冲液加900ul无菌纯水稀释，混匀并预热至37℃，即成1×孵育缓冲液；在500ul 1×孵育缓冲液中加入5ul JC-1，涡旋混匀配成JC-1染色工作液；
2、收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。
细胞数量在2-5X105个。
3、用PBS洗涤细胞两次。
离心收集细胞。
4、用500ul JC-1染色工作液将细胞重悬，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15分钟。
5、常温离心收集细胞。
6、用500ul预热的孵育缓冲液将细胞重悬。
7、用流式细胞仪或荧光分光光度计检测分析结果，或者用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。
贴壁细胞
对于贴壁细胞，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
纯化线粒体
1、把配制好的JC-1 染色工作液再用JC-1孵育缓冲液(1×)稀释5 倍。
2、0.9mL 5倍稀释的JC-1 染色工作液中加入0.1mL 总蛋白量为10～100ug的纯化的线粒体。
3、结果检测。
组织样本
组织样本可以用玻璃匀浆器匀浆成单细胞悬液后按照细胞样本的方法检测。
也可以用其他细胞悬液制备的试剂盒处理组织后检测。
结果分析 ：
检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm；检测JC-1聚合物时，可以把激发光设置为525nm，发射光设置为590nm。
用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况，绿色荧光通过FL1通道检测；红色荧光通过FL2通道检测。
FL-1+,FL-2+为正常细胞，FL-1+,FL-2—为凋亡细胞。
用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察：检测JC-1单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置，如观察GFP或FITC时的设置；检测JC-1聚合物时可以参考观察其它红色荧光，如PI或Cy3时的设置。
出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降，并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。
出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。
用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：激发波长为485nm，发射波长为590nm。
如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm 时，可以在475～520nm 范围内设置激发波长。
阳性对照的设置
一般不需要设置，如果要制备阳性对照细胞，可以用去极化药物羰基氰化物间氯苯腙CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照，按以下方法操作：CCCP加入到细胞培养液中，终浓度10uM，处理细胞20 分钟。
随后进行线粒体膜电位的检测。
对于大多数细胞，通常10μM CCCP处理20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。
对于特定的细胞，CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定。
参考文献：
● Gang Wang, JunJie Wang, Jie Luo et al.
PEG2000-DPSE-coated quercetin nanoparticles remarkably enhanced anticancer effects
through induced programed cell death on C6 glioma cells
Journal of Biomedical Materials Research 2013 （IF=2.625）
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