植物组培高效快繁技术ppt
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大学课程植物组织培养14章快繁--组培课件
●离体无性繁殖是在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养 基上繁殖的技术，跟常规的繁殖方法相比它是一种微型操作过程 ，因此，有时就直接称之为微繁
●离体无性繁殖是在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养 基上繁殖的技术，跟常规的繁殖方法相比它是一种离体的、无性 的繁殖、微型的操作过程。
● 整个植物组织培养技术体系中除“离体授粉”外都可以称为 离体无性繁殖方法。
非洲紫罗兰
风信子
四季秋海棠
特点：繁殖系数高。
叶插法 非洲紫罗兰用常规
，每片叶只能产生几个或十几个芽，但在组培条
件下可一次形成几十至几百个芽，一年可以培养成千上万个小植株，遗传稳定
性较好，但继代次数有限。培养物继代一定次数以后，不定芽形成能力即减弱，
需要重新起始无菌培养物，此外，不定芽需要进行生根培养才能形成真正的植
（2）外植体的取材部位和大小、生理状态。
离体植株增殖的几条途径：
（1）腋芽增殖 通过外源激素调整（特别是细胞分裂素的使用），最大可能
解除顶端优势，促进侧芽萌发。 其特点是：培养方法简单，能高度保持遗传稳定性，能长期
继代繁殖。目前采这一方式快速繁殖的植物有石竹、马铃薯、甘 薯、草莓、葡萄、月季等。这一繁殖方式需要严格控制激素浓度， 以防止产生愈伤组织。
该途径一般为遗传转化、无性系筛选、原生质体融合等植物离 体遗传重组技术的下游步骤。
一般不采用这一方法作为快繁途径（不稳定、费时、费力）。
3 影响快繁效果的几个因素： （1）植物种类、品种 （2）基本培养基 （3）激素 （4）培养条件（温度、光照） （4）生根、练苗处理
四 木本植物离体快繁 （1）一般情况下比草本植物困难
三 快繁的一般程序及几种途径 1 快繁的一般程序
●离体无性繁殖是在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养 基上繁殖的技术，跟常规的繁殖方法相比它是一种离体的、无性 的繁殖、微型的操作过程。
● 整个植物组织培养技术体系中除“离体授粉”外都可以称为 离体无性繁殖方法。
非洲紫罗兰
风信子
四季秋海棠
特点：繁殖系数高。
叶插法 非洲紫罗兰用常规
，每片叶只能产生几个或十几个芽，但在组培条
件下可一次形成几十至几百个芽，一年可以培养成千上万个小植株，遗传稳定
性较好，但继代次数有限。培养物继代一定次数以后，不定芽形成能力即减弱，
需要重新起始无菌培养物，此外，不定芽需要进行生根培养才能形成真正的植
（2）外植体的取材部位和大小、生理状态。
离体植株增殖的几条途径：
（1）腋芽增殖 通过外源激素调整（特别是细胞分裂素的使用），最大可能
解除顶端优势，促进侧芽萌发。 其特点是：培养方法简单，能高度保持遗传稳定性，能长期
继代繁殖。目前采这一方式快速繁殖的植物有石竹、马铃薯、甘 薯、草莓、葡萄、月季等。这一繁殖方式需要严格控制激素浓度， 以防止产生愈伤组织。
该途径一般为遗传转化、无性系筛选、原生质体融合等植物离 体遗传重组技术的下游步骤。
一般不采用这一方法作为快繁途径（不稳定、费时、费力）。
3 影响快繁效果的几个因素： （1）植物种类、品种 （2）基本培养基 （3）激素 （4）培养条件（温度、光照） （4）生根、练苗处理
四 木本植物离体快繁 （1）一般情况下比草本植物困难
三 快繁的一般程序及几种途径 1 快繁的一般程序
《植物组织培养技术》 精品课程.ppt
课程设计思路
课程的设计思路－－课程设计与开发流程
课程定位及服务面向
行业企业技术人员、专业教师
典型工作任务
社
Hale Waihona Puke 会 评知识、能力、素质要求
价
及
行 业
课程标准
调
查
课程内容结构
教材
教学过程设计
教学做一体化教学
校内外实训基地
教学内容的选取、组织与实施
• 教学内容的针对性与适用性
课程主要根据组培企业所需要的培养基制作 工、接种工、组培苗驯化工和组培生产管理员等 职业岗位实际工作任务制定课程标准，选取教学 内容，同时，兼顾学生未来的可持续发展，渗透 “必需、够用”的理论知识。
本课程教学队伍由7名专职教师和3名来自企业的兼职 教师组成。教师队伍 7名专任教师中有博士生研究生1名， 硕士研究生5名。专任教师主编和参编了国家及行业“十一 五”规划教材11本，其中主编1人，副主编2人；编写了具 有高等职业特色的校本教材4本。课程负责人近年来发表论 文14篇，第一作者发表的SCI论文1篇，国家级一级期刊论 文2篇，核心期刊论文2篇;主编校本教材一部。本团队的教 师近年来参与校外实训基地以及周边地区的技术服务项目 20多项，取得了较好的社会效益和经济效益。
务
课程学习项目设计
模块二 基本技术
模块三
模块四
拓展技术 综合应用
1、 导入
2、 解析
3、 实施
4、 展示
5、 评价
导
项项
项
项
项
项
项
向
目目
目
目
目
一二
三
四
五
目 六
目 七
组 培 必 备 知 识
课程的设计思路－－课程设计与开发流程
课程定位及服务面向
行业企业技术人员、专业教师
典型工作任务
社
Hale Waihona Puke 会 评知识、能力、素质要求
价
及
行 业
课程标准
调
查
课程内容结构
教材
教学过程设计
教学做一体化教学
校内外实训基地
教学内容的选取、组织与实施
• 教学内容的针对性与适用性
课程主要根据组培企业所需要的培养基制作 工、接种工、组培苗驯化工和组培生产管理员等 职业岗位实际工作任务制定课程标准，选取教学 内容，同时，兼顾学生未来的可持续发展，渗透 “必需、够用”的理论知识。
本课程教学队伍由7名专职教师和3名来自企业的兼职 教师组成。教师队伍 7名专任教师中有博士生研究生1名， 硕士研究生5名。专任教师主编和参编了国家及行业“十一 五”规划教材11本，其中主编1人，副主编2人；编写了具 有高等职业特色的校本教材4本。课程负责人近年来发表论 文14篇，第一作者发表的SCI论文1篇，国家级一级期刊论 文2篇，核心期刊论文2篇;主编校本教材一部。本团队的教 师近年来参与校外实训基地以及周边地区的技术服务项目 20多项，取得了较好的社会效益和经济效益。
务
课程学习项目设计
模块二 基本技术
模块三
模块四
拓展技术 综合应用
1、 导入
2、 解析
3、 实施
4、 展示
5、 评价
导
项项
项
项
项
项
项
向
目目
目
目
目
一二
三
四
五
目 六
目 七
组 培 必 备 知 识
植物的快繁与脱毒培养PPT课件
16
第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物
• 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗
• 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养
• 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
17
二，（茎尖培养）脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存
– ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
– ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生
长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞
变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。201.来自毒病的危害及症状 正常的番茄果
番茄厥叶，卷叶病毒
21
番茄病毒病（植株）
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公)，病株一般 不抽花蕾，因近顶部叶片成束而得名。 是由病毒侵染植株而引起的, 是香蕉 致命病害,
蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%～10%, 产量损失 30%～60%。
香蕉束顶病
22
1.病毒病及其危害（续）
• （1）症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒：退化，叶片卷缩，产量逐年下降，
到PVS，PVA，PVM，PVX
• 卷叶型马铃薯病毒：PLRV • 香蕉束顶病：叶片越来越短小，植株矮缩，叶硬
18
1.病毒病及其危害
• 脱毒（virus elimination)培养： • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的
病毒，生产健康的无毒繁殖材料的过程。
19
1.2.植物病毒病及其危害
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物
• 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗
• 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养
• 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
17
二，（茎尖培养）脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存
– ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
– ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生
长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞
变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。201.来自毒病的危害及症状 正常的番茄果
番茄厥叶，卷叶病毒
21
番茄病毒病（植株）
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公)，病株一般 不抽花蕾，因近顶部叶片成束而得名。 是由病毒侵染植株而引起的, 是香蕉 致命病害,
蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%～10%, 产量损失 30%～60%。
香蕉束顶病
22
1.病毒病及其危害（续）
• （1）症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒：退化，叶片卷缩，产量逐年下降，
到PVS，PVA，PVM，PVX
• 卷叶型马铃薯病毒：PLRV • 香蕉束顶病：叶片越来越短小，植株矮缩，叶硬
18
1.病毒病及其危害
• 脱毒（virus elimination)培养： • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的
病毒，生产健康的无毒繁殖材料的过程。
19
1.2.植物病毒病及其危害
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
《植物组织培养与快繁技术》PPT课件第1 - 质量工程
２．奠基阶段（３０年代中至５０年代末）：这 一阶段植物组织培养得到了迅速的发展，广泛运 用于生物学和农业生产。
经典的工作有：
• 1934年美国的植物生理学家White培养番茄的根 建立了活跃的无性系并能继代培养，在以后的 28 年间转接了 1600 代仍能生长。 1939 年他们首 先发现了B族维生素对植物生长的意义 • 1955 年， Miller 等首次从鲱鱼精子中分离得到 细胞分裂素，定名为激动素（Kinetin）
• 外植体： 用于组织培养的离体材料称为外植体 （explant）。 • 初代培养：外植体的第一次培养 • 继代培养：初代培养后的培养体转移到 新鲜的培养基中，并反复的多次移植、 培养，统称为继代培养。
• 愈伤组织：原指植物在受伤以后于伤
口表面长出来的一团无特定结构和功
能的细胞团，组织培养中则指在人工
二、植物组织培养的基本技术
• 洗涤技术：玻璃器皿洗涤、塑料器皿洗涤 • 灭菌技术（培养基、培养用具灭菌）：湿 热灭菌、干热灭菌、过滤灭菌、化学灭菌、 辐射灭菌等。
• 无菌操作技术：无菌室的消毒、材料的消 毒、接种等
三、 植物组织培养的步骤：
组织培养流程图
第三章 植物离体快速无性繁殖
和无病毒植株的培养
一、植物离体快速无性繁殖
（一）快速繁殖的概念
植物的快速繁殖又称微繁，指
将来自优良植株的茎尖，腋芽，叶片， 鳞片等器官、组织和细胞进行离体培 养，在短期内获得大量的遗传性一致 的个体的方法。
2. 快速繁殖的优越性：
（1）快速繁殖、短期满足大量需求 • 组织培养的最大优点在于短期内能用较少的材料 繁殖大量优质种苗，具有用材少、周期短、速度 快等特点。由于可人为控制培养条件，根据不同 植物不同离体部位的不同要求而提供不同的培养 条件，因此生长快，往往10—40天即为一生长周 期。所以，虽然植物组织培养需一定的设备及能 源消耗，但由于植物材料能按几何级数大量繁殖 生产，故还是成本低廉，利于工厂化生产，能及 时提供规格整齐一致的优质、无病菌的植物种苗。
植物组培高效快繁技术ppt
2、消毒杀菌管理 苗床基质消毒：在没有植物的基质上消 毒，可以使用高浓度消毒剂，如1%的高锰酸 钾等常规消毒药物。每批苗木出圃之后都要 进行一次比较细致的消毒，尽可能减少上一 批育苗时残留的有害微生物。
3、光照管理 棚内育苗可以适当遮荫，一般植物使用 遮荫率30%左右的遮荫网即可，不要过分遮 荫。 全光照育苗则无须遮荫，但要设置育苗仪的 间隔时间更短以防止日灼烧苗。 4、营养管理 每隔五天喷一次低浓度营养液，生根前 喷0.2%的磷酸二氢钾（同时，每20公斤水中 加入1克JH强力生根剂）；生根后每隔3-5天 喷一次0.2%的营养液（尿素50%、磷酸二氢 钾40%、复合微量元素10%）。
细胞工程
Cell engineering
Technique of Efficient & Rapid Non-test tube Plant Cloning
植物非试管高效快繁技术
技术简介
植物非试管高效 快繁技术的特点 植物非试管快速 繁殖的流程 植物非试管高效快 繁技术产业化市场 前景
谢谢指导！
Байду номын сангаас景
• 近40年来，真正面对大多数生产上急需、量大、价 格低廉的无性繁殖(vegetative propagation)种苗， 由于植物组培(tissue culture)存在一次性投资大， 成本高，技术步骤繁杂，技术易传性差，农民在生 产上不能直接利用，植物试管克隆苗成活率低，推 广难度大等缺点，该试管克隆技术在实际快繁苗木 生产中所形成的生产力还相当有限，真正形成大规 模产业化的植物品种在世界范围内不超过上百个。 至今实验室成果很多，绝大部分快繁品种的生产技 术还主要掌握在科学家手中，真正实现产业化目标 的项目寥寥无几。
目录
第五章第1节《植物快速繁殖技术》ppt-中图版选修1课件
①―脱―分→化 ②―再―分→化 ③―→④
A．植物组织培养所依据的生物学原理为细胞 的全能性 B．③→④过程指植物的生殖生长阶段
C．将①经脱分化培养成的②包裹上人工种 皮即可获得人工种子 D．②→③的再分化过程中，诱导②生根的 激素为细胞分裂素
解析：选A。①②③④依次代表离体的植物 组织或细胞、愈伤组织、根或芽、植株。愈 伤组织生根还是发芽取决于激素的种类和浓 度比例。当生长素与细胞分裂素比值较高时, 有利于生根；反之，有利于生芽。要获得人 工种子，应选③外包上人工种皮。
3.植物激素 启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激 素是生长素和细胞分裂素。两者的浓度、使 用的先后顺序以及用量的比例等，都会影响 实验结果。 4.其他因素 进行月季组织培养，一般将pH控制在5.7左 右，温度控制在18～22 ℃，并且每日用日 光灯照射12 h。
2.无菌条件：培养基灭__菌____要彻底、外植 体消_毒_____要充分、接种时无菌操作要严格。 3.其他条件：酸碱度、温度、光照等外界条 件。
判一判 (1)花粉可以作为植物快速繁殖的外植体。(×) (2)细胞分裂素与生长素比值高时，有利于根 的生长，配制的培养基可称为生根培养基。 (×) (3)愈伤组织的细胞是排列疏松而无规则的高 度液泡化的薄壁细胞。(√) (4)月季的组织培养实验中，应选择未开花植 株的茎上部新萌生的侧枝。(√)
第五章 植物的组织培养技术
第五章 植物的组织培养技术
第1节 植物快速繁殖技术
学习导航 1.了解植物组织培养的基本原理。 2.掌握植物组织培养的基本技术，进行月季 或其他植物的组织培养。[重、难点]
新知初探思维启动
一、植物组织培养的基本过程
_离__体__的植物器官或 组织片段（外植体）
A．植物组织培养所依据的生物学原理为细胞 的全能性 B．③→④过程指植物的生殖生长阶段
C．将①经脱分化培养成的②包裹上人工种 皮即可获得人工种子 D．②→③的再分化过程中，诱导②生根的 激素为细胞分裂素
解析：选A。①②③④依次代表离体的植物 组织或细胞、愈伤组织、根或芽、植株。愈 伤组织生根还是发芽取决于激素的种类和浓 度比例。当生长素与细胞分裂素比值较高时, 有利于生根；反之，有利于生芽。要获得人 工种子，应选③外包上人工种皮。
3.植物激素 启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激 素是生长素和细胞分裂素。两者的浓度、使 用的先后顺序以及用量的比例等，都会影响 实验结果。 4.其他因素 进行月季组织培养，一般将pH控制在5.7左 右，温度控制在18～22 ℃，并且每日用日 光灯照射12 h。
2.无菌条件：培养基灭__菌____要彻底、外植 体消_毒_____要充分、接种时无菌操作要严格。 3.其他条件：酸碱度、温度、光照等外界条 件。
判一判 (1)花粉可以作为植物快速繁殖的外植体。(×) (2)细胞分裂素与生长素比值高时，有利于根 的生长，配制的培养基可称为生根培养基。 (×) (3)愈伤组织的细胞是排列疏松而无规则的高 度液泡化的薄壁细胞。(√) (4)月季的组织培养实验中，应选择未开花植 株的茎上部新萌生的侧枝。(√)
第五章 植物的组织培养技术
第五章 植物的组织培养技术
第1节 植物快速繁殖技术
学习导航 1.了解植物组织培养的基本原理。 2.掌握植物组织培养的基本技术，进行月季 或其他植物的组织培养。[重、难点]
新知初探思维启动
一、植物组织培养的基本过程
_离__体__的植物器官或 组织片段（外植体）
植物组织培养与快繁技术课件
（2）成熟胚培养：成熟胚培养是指将子叶期以后的胚进行离体培养。成熟胚已储备了能满足自身萌发和生长的养分，培养技术较为容易。
①材料的消毒与接种
健壮优良的个体自交种或杂交种子，常规消毒灭菌，剥离胚。
② 培养基与培养条件
培养基 大量元素和微量的无机盐为基本成分
谷氨酰胺作为氮源，可以促进胚生长 植物天然浸提物（YE）促进胚生长 硫氨素促进胚根的伸长 生长素低浓度促进胚的发育（胚根） 赤霉素促进有后熟作用的种子萌发
生长调节物质的影响 传粉子房：加入生长调节剂通常可以促进子房生长。 未传粉子房：必须加入生长调节剂。不同植物所要求的激素种类和配比各不相同。 单倍体的来源和发育途径 单倍体植株的来源和发育途径在不同的植株中各有不同。 大孢子和胚囊中的卵细胞、助细胞和反足细胞通过形成胚状体或愈伤组织两种途径产生单倍体植株。
附加成分
培养条件：光照：12h／d光照 温度：通常25－30℃
影响胚培养的因素
（1）胚龄 胚龄越大，成功率越高；胚龄越小，成功率越低。小于0.5mm的幼胚很难进行培养。心形胚时期以前，属异养期。 幼胚的培养的初期，处于异养阶段，需要提供完全的培养基。除通常需要的大量和微量无机盐外，还需要添加维生素、氨基酸和植物激素等，胚龄越小，培养基的成分就越复杂。 随着胚龄的增加,离体胚对外源营养的要求渐趋简单，自养期的胚能在基本的无机盐和蔗糖培养基上生长。
（2）培养基
无机盐 幼胚培养的培养基主要有MS(1962)、B5、Nitsch(1954)、Rijven(1952)、White(1963)、Rangaswang(1961)、Monnier(1978)等。 成熟胚培养Tukey(1934)、Cox(1943)、 White(1963)等。 碳水化合物 碳源，调节培养基渗透压，防止幼胚早熟萌发。 胚龄越小，要求的糖浓度越高。 成熟胚：2％蔗糖 幼胚培养：一般为6％－12％，可高到18％。在培养过程中，随培养时间增加，培养基的渗透压必须逐步降低。
《组培应用》PPT课件
植物固有的优良性状。 脱毒苗再通过克隆繁殖可以获得大量脱毒的优良种，
供生产上使用。
23
精选PPT
脱毒技术1
热处理脱毒 利用病毒和寄主植物对高温的忍耐程度差异，使植物 的生长速度超过病毒的扩散速度，得到一小部分不含 病毒的分生组织，进行无毒个体培养。 热处理脱毒的原理： 将植物置于高于正常温度环境中，组织内部病毒部分 或全部钝化，但寄主植物细胞很少或不受到伤害。
6
精选PPT
选用接种外植体时，应采摘具有本品种特征，且生长 健壮的植株幼嫩部位，比较好的是茎尖。 茎尖形态已基本形成，生长速度快，遗传性状稳定， 但是茎尖往往受到材料来源的限制； 带顶芽或腋芽的幼嫩茎段或枝条也可以作为外植体。
7
精选PPT
取材时应该考虑的问题
a，外植体大小 外植体的大小通常由培养的目的决定。 快繁：带腋芽的茎段或枝条，0.5cm左右，过小易死 亡，过大不容易诱导分化出芽而且易污染； 脱毒：需要使用顶端分生组织，外植体越小感染病毒 机会越小，但培养难度加大，反之亦然。
51
精选PPT
影响超低温保存的因素
1 植物材料的特性 冷冻前植物材料基因型的差异以及植物组织、细胞的 生理状态是决定冷冻细胞活力的重要因素。 一般来说，高细胞质、无液泡、薄壁的分生细胞存活 率高于含大量液泡的大细胞； 悬浮培养细胞处于指数生长期的细胞能得到最高的存 活率，这时多数细胞处在比较理想的状态。
细胞分裂素/生长素
高 有利于芽生长；
细胞分裂素/生长素
低 有利于根生长；
14
精选PPT
驯化、移栽
a，保持水分； b，选择合适的种植介质：疏松通气、保水，容易灭菌
，如蛭石、沙子、谷壳、锯末等。 c，防止菌类滋生：使用杀菌剂 d，光照温度：试管苗从异养到自养，光照不能太弱
供生产上使用。
23
精选PPT
脱毒技术1
热处理脱毒 利用病毒和寄主植物对高温的忍耐程度差异，使植物 的生长速度超过病毒的扩散速度，得到一小部分不含 病毒的分生组织，进行无毒个体培养。 热处理脱毒的原理： 将植物置于高于正常温度环境中，组织内部病毒部分 或全部钝化，但寄主植物细胞很少或不受到伤害。
6
精选PPT
选用接种外植体时，应采摘具有本品种特征，且生长 健壮的植株幼嫩部位，比较好的是茎尖。 茎尖形态已基本形成，生长速度快，遗传性状稳定， 但是茎尖往往受到材料来源的限制； 带顶芽或腋芽的幼嫩茎段或枝条也可以作为外植体。
7
精选PPT
取材时应该考虑的问题
a，外植体大小 外植体的大小通常由培养的目的决定。 快繁：带腋芽的茎段或枝条，0.5cm左右，过小易死 亡，过大不容易诱导分化出芽而且易污染； 脱毒：需要使用顶端分生组织，外植体越小感染病毒 机会越小，但培养难度加大，反之亦然。
51
精选PPT
影响超低温保存的因素
1 植物材料的特性 冷冻前植物材料基因型的差异以及植物组织、细胞的 生理状态是决定冷冻细胞活力的重要因素。 一般来说，高细胞质、无液泡、薄壁的分生细胞存活 率高于含大量液泡的大细胞； 悬浮培养细胞处于指数生长期的细胞能得到最高的存 活率，这时多数细胞处在比较理想的状态。
细胞分裂素/生长素
高 有利于芽生长；
细胞分裂素/生长素
低 有利于根生长；
14
精选PPT
驯化、移栽
a，保持水分； b，选择合适的种植介质：疏松通气、保水，容易灭菌
，如蛭石、沙子、谷壳、锯末等。 c，防止菌类滋生：使用杀菌剂 d，光照温度：试管苗从异养到自养，光照不能太弱
6-2植物快繁ppt课件
20段 60d后
新茎芽长到3cm高
10-14d
3-4月后， 由一个茎 尖可产生 8000个植 株，且都 为二倍体
精选课件ppt
65
增强腋芽生枝能力增殖的植物
草莓 实质为在不存在顶芽的情况下，腋芽具
有取代主茎功能的能力，从而生枝（一 级枝条），枝条上再长现腋芽，再发育 成为枝条（二级枝条），这样重复，使 枝条的繁殖显著提高。
Banana field from vitroplantlets
精选课件ppt
21
Coffee mi精c选ro课c件uptpttings
22
Coffee somatic embryos
精选课件ppt
23
Stages in production of clonal plants from embryogenic tissue
精选课件ppt
3
1个茎芽 2个月 3-5个原球茎
小植株
切块 4-6块 1个月
由一个不到1mm 长的茎尖开始，在 一年中可以产生几 百万个植株
3-5个原球茎
精选课件ppt
4
精选课件ppt
5
精选课件ppt
6
快繁的应用
（1）良种快繁：新育成的、新引进的、新发现 的稀缺良种的快繁
（2）少量脱毒良种苗的快繁和无病毒苗大量繁 殖
精选课件ppt
60
培养物的建立
外植体的选择 消毒
精选课件ppt
61
茎芽增殖
兰花的原球茎增殖 通过愈伤组织增殖 通过不定芽增殖 通过增强腋芽生枝能力增殖 单节茎段扦插增殖
精选课件ppt
62
通过愈伤组织增殖的植物
柑橘、咖啡、小苍兰、棕榈 不足之外在于可能造成后代在遗传上的
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• 植物非试管高效快繁技术(Technique of Efficient & Rapid Non-test tube Plant Cloning)是由被国内外媒介誉为“复制绿色的
巨匠”——李长潇 研究员在国内外首创发
明的高新技术。他在国内外首次提出“快繁是 一个先导产业和高效益产业”的理念，并是倡 导和亲自实践“快繁产业”的著名科技实业家。
4、营养管理
每隔五天喷一次低浓度营养液，生根前 喷0.2%的磷酸二氢钾（同时，每20公斤水中 加入1克JH强力生根剂）；生根后每隔3-5天 喷一次0.2%的营养液（尿素50%、磷酸二氢 钾40%、复合微量元素10%）。
植物非试管快速繁殖的流程
（五）采穗母株的特殊处理方法
许多生根困难的树种或品种，在采条之前事先对枝条进行必 要的技术处理可以提高插穗生根能力。 ➢黄化处理 ➢环剥处理 ➢缚缢处理 ➢建立幼龄采穗圃 ➢培育幼龄枝条 ➢培育萌蘖枝条 ➢去掉花芽 ➢打顶 ➢以苗繁苗
这种苗床的优点是：1、由于与土壤隔离，土壤 中的微生物不会浸染2、透水透气性很好，；3、因为 以无机物为主，微生物难以藏身，消毒容易彻底；4、 苗床可以反复使用，每年能在同一张苗床上育苗5-8批 。
2、免移栽薄基质苗床
直接在土壤上面铺上4公分左右的粗沙，插穗插入 粗沙之中，在粗沙透气的环境中生根后向下面的土层 中深扎。 3、容器式育苗
原理和方法
• 非试管微组织快繁技术是将外植体放置在普通沙质 培养基上进行培养的方法。由于非试管快繁所取组 织相对较大，培养又采用沙质无机物，故不容易被 微生物感染，操作环节少，操作要求低。
• 植物非试管高效快繁技术植物非试管高效快繁技术 是介于扦插和组培技术之间的一种植物快繁技术。
原理和方法
传统扦插：
由于生产所需条件简单， 不能对环境做较大改变，受环 境条件限制大，具有明显的季 节性，不能进行周年繁苗。
组培：
密封的试管或三角瓶作为培 养场所, 这是组培存在弊端的 根源所在, 也是形成严格消毒 杀菌等繁琐技术体系的必要所 在。透气差,再加上不透气的琼 脂培养基, 使根系缺氧造成根 量少而弱; 这些局限因子的存 在导致玻璃化苗的产生, 炼苗 成活率低, 移栽困难与感染病 菌造成死苗的现象。
2、消毒杀菌管理
苗床基质消毒：在没有植物的基质上消 毒，可以使用高浓度消毒剂，如1%的高锰酸 钾等常规消毒药物。每批苗木出圃之后都要 进行一次比较细致的消毒，尽可能减少上一 批育苗时残留的有害微生物。
3、光照管理
棚内育苗可以适当遮荫，一般植物使用 遮荫率30%左右的遮荫网即可，不要过分遮 荫。
全光照育苗则无须遮荫，但要设置育苗仪的 间隔时间更短以防止日灼烧苗。
二、植物非试管高效快繁技术的特点
植物非试管高效快繁技术与植物组培试管快繁和传统育苗 技术相比，具有以下先进性：
１、用一叶一芽植物外植体为繁殖单位材料，直接接种在 大田沙床或营养袋中，一次成苗直至供应生产，不需任何 移动，成活率高。
２、无论南方北方，不同纬度不同土壤，不同气候,一年 四季都可用此法连续快繁，从第二代起多数品种均可达６ ~１２代。一年中365天任何时间都可用此快繁技术启动 生产，拓展了技术应用的时间和空间。
水分管理。室外育苗，使用电子自控育苗仪控制的喷雾系统， 根据天气情况调整有关参数，使植物叶片干干湿湿，既不萎蔫又不 因长期水分过量而腐烂。
补充营养和消毒管理。生根前每隔5-7天喷一次0.2%的磷酸二氢 甲水溶液，同时在该溶液中加入JH-3通用强力生根剂(每20千克上 述溶液中加入1克)和多菌灵等杀菌剂（多菌灵每20千克溶液中加入 25克）；生根后每隔5-7天喷一次0.2%的尿素+0.1%的磷酸二氢钾 水溶液。
技术简介
• 植物非试管高效快繁技术(TERNPC)用许多植物类似 组培试管茎段、茎尖培养的 3毫米~1厘米长的微型 繁殖材料单位（包括一叶一芽），直接接种在辅助 有简易条件的大田沙床上，使大多数经济植物离体 材料在第二代后4-11天获得再生完整植株，并且成 活率高达85%至100%。每15-60天繁殖一代，可按 几何级数高效快繁。繁殖系数达到2-15以上，比许 多植物在试管内快繁系数还高。在完全离开植物组 织培养各种复杂设备条件下，实现了多种植物在试 管条件下才可能达到的高效快繁。植物非试管高效 快繁技术(TERNPC)经过在全国各地各种气候带、各 种土壤连续二十二年的研发、生产、推广，已形成 一个完整的技术体系，是一项十分成熟的技术。
剪取的材料要注意保湿，尽量放在封闭的塑料袋 或桶中，并避免强光照射。如果远距离运输，要防 止材料发热或风干失水。
尽量在早上取材，此时叶片内的水分充足，并且 早上的光照弱，空气湿度大，叶片不容易失水。
尽量进行继代培养，即在已经培育出来的无性世 代后代上进行取材，许多品种开始很难繁殖，但随 着无性世代的延续，成功率越来越高。
9、此法培养的成熟种苗，纯度高、无病虫、根系发达完 整、上山定植一般成活率高达95%以上。
三、植物非试管快速繁殖的流程
（一）植物快繁的苗床类型和制作方
1、全基质型苗床（无 土苗床） 2、免移栽薄基质苗床 3、容器式育苗
1、全基质型苗床（无土苗床）
全基质型苗床又称无土苗床，底层用水泥制作或 用塑料薄膜与土壤隔开，其上先铺厚度10-15厘米的碎 石（或石子），石子上再铺一层10-15厘米厚的粗沙 （或珍珠岩与粗沙各半，或珍珠岩、粗沙、草泥炭各 1/3）。为了便于操作，苗床宽度一般为100-130厘米， 长度根据具体田块而定。
３、技术操作快已推广。经过一段时间培训合格的普通劳 动力每天（８小时）可接种3000~5000个单位材料。
植物非试管高效快繁技术的特点
4、经过有计划培训一段的普通人员即能参加快繁操作 工作，接种速度极快。
5、经技术发明人或发明人技术助理指导每个经过一段 培训合格的技术工人每月可生产管理2－10万株苗木， 每个骨干加上一定数量的辅助工人每半年至少可生产30 万株幼苗，创经济效益极高。
（如西红柿，4天开始生根，20天开花结果，枸杞当年在 苗圃地就开花结果，脱毒薯一叶一芽材料从接种至40天 就能分化出小薯,当年栽培可直接在大地收获大脱毒薯。 脱毒薯幼苗当年大田栽培产量可达3至4吨，不仅给农民 每亩地可节省300斤种薯,而且可是农民每年都能种上原 种种薯。切花月季不需移栽从接种一片叶起70天就开花 ，花大而艳，开花周期比其它方法培育要长。）
谢谢指导！
四、产业化市场前景
• 种苗生产供需矛盾在今后相当长的时期内都将十分
突出。因此，推进植物非试管高效快繁技术产业化
工程在全国各地的合理布点、尽快实施，将有力地
缓解种苗供需矛盾，为加速我国生态环境建设、生
态城市建设、提高森林覆盖率、西部大开发、农业 产业结构调整做出贡献。
•
此外,随着人民生活水平和质量的不断提高,需求
背景
• 近40年来，真正面对大多数生产上急需、量大、价 格低廉的无性繁殖(vegetative propagation)种苗， 由于植物组培(tissue culture)存在一次性投资大， 成本高，技术步骤繁杂，技术易传性差，农民在生 产上不能直接利用，植物试管克隆苗成活率低，推 广难度大等缺点，该试管克隆技术在实际快繁苗木 生产中所形成的生产力还相当有限，真正形成大规 模产业化的植物品种在世界范围内不超过上百个。 至今实验室成果很多，绝大部分快繁品种的生产技 术还主要掌握在科学家手中，真正实现产业化目标 的项目寥寥无几。
植物非试管快速繁殖的流程
（四）育苗材料的 培育管理 1、水分管理 2、消毒杀菌管理 3、光照管理 4、温度管理 5、营养管理
1、水分管理
水分管理是快繁技术的核心，成败往往就 在于水分的管理。喷雾提高叶面的湿度。
2、消毒杀菌管理
苗床基质消毒：在没有植物的基质上消毒 ，可以使用高浓度消毒剂，如1%的高锰酸钾等 常规消毒药物。每批苗木出圃之后都要进行一 次比较细致的消毒，尽可能减少上一批育苗时 残留的有害微生物。
6、多数植物利用植物非试管高效快繁技术培养到第2代 以后，4~11天即可获得完整再生植株，再生植株率达 90%以上，真正实现了高效快繁。
有些科属植物生根繁殖情况特殊，如鸡毛松、云杉、红豆杉、油 樟、岩桂、中国兰草、牡丹等生根持续时间较长。但仍然比试管 快繁和常育苗要快，综合快繁效率要高。
7、技术步骤少，所用时间短，极大地节约了综合生产成 本和提高了人员的生产效率。从微型材料开始繁殖，可 直接培育出在自然条件下生长的植株，不需任何移栽， 对多数植物仅需要15－60天的培育即可用于生产栽培， 而且植株均表现开花结果早，丰产性好。
细胞工程
Cell engineering
植物非试管高效快繁技术
Technique of Efficient & Rapid Non-test tube Plant Cloning
目录
技术简介
植物非试管高效 快繁技术的特点
植物非试管快速 繁殖的流程
植物非试管高效快 繁技术产业化市场 前景
一、技术简介
也急剧的增长，人们对名优花卉、天然植物保健品
等的需求也积聚的增长,这也是一个十分广阔的市场。
预算
• 按每半年一个周期投资150-200万元，生产 供应1000万株种苗计算，利润总额可达 800多万元。按每个周期投资750-1000万 元，生产供应种苗5000万株，企业年利润 总额可以达到8000多万元。按每个周期投 资1500-2000万元，生产供应种苗10000 万株计算，企业全年利润可达16000万元。 这种经济效益是一般生产企业所不可比拟 的。
采用穴盘或育苗杯，在其中放入基质（一般珍珠 岩、蛭石、泥炭各1/3），插穗直接插入基质，待生 根后进行无土栽培，成苗后连容器销售。
植物非试管快速繁殖的流程
（二）育苗材料（外植体）及其准备
非试管克隆一般取植物 1-4 厘米长的茎段，其上带有 一个腋芽和一个叶片，取材原则如下：
巨匠”——李长潇 研究员在国内外首创发
明的高新技术。他在国内外首次提出“快繁是 一个先导产业和高效益产业”的理念，并是倡 导和亲自实践“快繁产业”的著名科技实业家。
4、营养管理
每隔五天喷一次低浓度营养液，生根前 喷0.2%的磷酸二氢钾（同时，每20公斤水中 加入1克JH强力生根剂）；生根后每隔3-5天 喷一次0.2%的营养液（尿素50%、磷酸二氢 钾40%、复合微量元素10%）。
植物非试管快速繁殖的流程
（五）采穗母株的特殊处理方法
许多生根困难的树种或品种，在采条之前事先对枝条进行必 要的技术处理可以提高插穗生根能力。 ➢黄化处理 ➢环剥处理 ➢缚缢处理 ➢建立幼龄采穗圃 ➢培育幼龄枝条 ➢培育萌蘖枝条 ➢去掉花芽 ➢打顶 ➢以苗繁苗
这种苗床的优点是：1、由于与土壤隔离，土壤 中的微生物不会浸染2、透水透气性很好，；3、因为 以无机物为主，微生物难以藏身，消毒容易彻底；4、 苗床可以反复使用，每年能在同一张苗床上育苗5-8批 。
2、免移栽薄基质苗床
直接在土壤上面铺上4公分左右的粗沙，插穗插入 粗沙之中，在粗沙透气的环境中生根后向下面的土层 中深扎。 3、容器式育苗
原理和方法
• 非试管微组织快繁技术是将外植体放置在普通沙质 培养基上进行培养的方法。由于非试管快繁所取组 织相对较大，培养又采用沙质无机物，故不容易被 微生物感染，操作环节少，操作要求低。
• 植物非试管高效快繁技术植物非试管高效快繁技术 是介于扦插和组培技术之间的一种植物快繁技术。
原理和方法
传统扦插：
由于生产所需条件简单， 不能对环境做较大改变，受环 境条件限制大，具有明显的季 节性，不能进行周年繁苗。
组培：
密封的试管或三角瓶作为培 养场所, 这是组培存在弊端的 根源所在, 也是形成严格消毒 杀菌等繁琐技术体系的必要所 在。透气差,再加上不透气的琼 脂培养基, 使根系缺氧造成根 量少而弱; 这些局限因子的存 在导致玻璃化苗的产生, 炼苗 成活率低, 移栽困难与感染病 菌造成死苗的现象。
2、消毒杀菌管理
苗床基质消毒：在没有植物的基质上消 毒，可以使用高浓度消毒剂，如1%的高锰酸 钾等常规消毒药物。每批苗木出圃之后都要 进行一次比较细致的消毒，尽可能减少上一 批育苗时残留的有害微生物。
3、光照管理
棚内育苗可以适当遮荫，一般植物使用 遮荫率30%左右的遮荫网即可，不要过分遮 荫。
全光照育苗则无须遮荫，但要设置育苗仪的 间隔时间更短以防止日灼烧苗。
二、植物非试管高效快繁技术的特点
植物非试管高效快繁技术与植物组培试管快繁和传统育苗 技术相比，具有以下先进性：
１、用一叶一芽植物外植体为繁殖单位材料，直接接种在 大田沙床或营养袋中，一次成苗直至供应生产，不需任何 移动，成活率高。
２、无论南方北方，不同纬度不同土壤，不同气候,一年 四季都可用此法连续快繁，从第二代起多数品种均可达６ ~１２代。一年中365天任何时间都可用此快繁技术启动 生产，拓展了技术应用的时间和空间。
水分管理。室外育苗，使用电子自控育苗仪控制的喷雾系统， 根据天气情况调整有关参数，使植物叶片干干湿湿，既不萎蔫又不 因长期水分过量而腐烂。
补充营养和消毒管理。生根前每隔5-7天喷一次0.2%的磷酸二氢 甲水溶液，同时在该溶液中加入JH-3通用强力生根剂(每20千克上 述溶液中加入1克)和多菌灵等杀菌剂（多菌灵每20千克溶液中加入 25克）；生根后每隔5-7天喷一次0.2%的尿素+0.1%的磷酸二氢钾 水溶液。
技术简介
• 植物非试管高效快繁技术(TERNPC)用许多植物类似 组培试管茎段、茎尖培养的 3毫米~1厘米长的微型 繁殖材料单位（包括一叶一芽），直接接种在辅助 有简易条件的大田沙床上，使大多数经济植物离体 材料在第二代后4-11天获得再生完整植株，并且成 活率高达85%至100%。每15-60天繁殖一代，可按 几何级数高效快繁。繁殖系数达到2-15以上，比许 多植物在试管内快繁系数还高。在完全离开植物组 织培养各种复杂设备条件下，实现了多种植物在试 管条件下才可能达到的高效快繁。植物非试管高效 快繁技术(TERNPC)经过在全国各地各种气候带、各 种土壤连续二十二年的研发、生产、推广，已形成 一个完整的技术体系，是一项十分成熟的技术。
剪取的材料要注意保湿，尽量放在封闭的塑料袋 或桶中，并避免强光照射。如果远距离运输，要防 止材料发热或风干失水。
尽量在早上取材，此时叶片内的水分充足，并且 早上的光照弱，空气湿度大，叶片不容易失水。
尽量进行继代培养，即在已经培育出来的无性世 代后代上进行取材，许多品种开始很难繁殖，但随 着无性世代的延续，成功率越来越高。
9、此法培养的成熟种苗，纯度高、无病虫、根系发达完 整、上山定植一般成活率高达95%以上。
三、植物非试管快速繁殖的流程
（一）植物快繁的苗床类型和制作方
1、全基质型苗床（无 土苗床） 2、免移栽薄基质苗床 3、容器式育苗
1、全基质型苗床（无土苗床）
全基质型苗床又称无土苗床，底层用水泥制作或 用塑料薄膜与土壤隔开，其上先铺厚度10-15厘米的碎 石（或石子），石子上再铺一层10-15厘米厚的粗沙 （或珍珠岩与粗沙各半，或珍珠岩、粗沙、草泥炭各 1/3）。为了便于操作，苗床宽度一般为100-130厘米， 长度根据具体田块而定。
３、技术操作快已推广。经过一段时间培训合格的普通劳 动力每天（８小时）可接种3000~5000个单位材料。
植物非试管高效快繁技术的特点
4、经过有计划培训一段的普通人员即能参加快繁操作 工作，接种速度极快。
5、经技术发明人或发明人技术助理指导每个经过一段 培训合格的技术工人每月可生产管理2－10万株苗木， 每个骨干加上一定数量的辅助工人每半年至少可生产30 万株幼苗，创经济效益极高。
（如西红柿，4天开始生根，20天开花结果，枸杞当年在 苗圃地就开花结果，脱毒薯一叶一芽材料从接种至40天 就能分化出小薯,当年栽培可直接在大地收获大脱毒薯。 脱毒薯幼苗当年大田栽培产量可达3至4吨，不仅给农民 每亩地可节省300斤种薯,而且可是农民每年都能种上原 种种薯。切花月季不需移栽从接种一片叶起70天就开花 ，花大而艳，开花周期比其它方法培育要长。）
谢谢指导！
四、产业化市场前景
• 种苗生产供需矛盾在今后相当长的时期内都将十分
突出。因此，推进植物非试管高效快繁技术产业化
工程在全国各地的合理布点、尽快实施，将有力地
缓解种苗供需矛盾，为加速我国生态环境建设、生
态城市建设、提高森林覆盖率、西部大开发、农业 产业结构调整做出贡献。
•
此外,随着人民生活水平和质量的不断提高,需求
背景
• 近40年来，真正面对大多数生产上急需、量大、价 格低廉的无性繁殖(vegetative propagation)种苗， 由于植物组培(tissue culture)存在一次性投资大， 成本高，技术步骤繁杂，技术易传性差，农民在生 产上不能直接利用，植物试管克隆苗成活率低，推 广难度大等缺点，该试管克隆技术在实际快繁苗木 生产中所形成的生产力还相当有限，真正形成大规 模产业化的植物品种在世界范围内不超过上百个。 至今实验室成果很多，绝大部分快繁品种的生产技 术还主要掌握在科学家手中，真正实现产业化目标 的项目寥寥无几。
植物非试管快速繁殖的流程
（四）育苗材料的 培育管理 1、水分管理 2、消毒杀菌管理 3、光照管理 4、温度管理 5、营养管理
1、水分管理
水分管理是快繁技术的核心，成败往往就 在于水分的管理。喷雾提高叶面的湿度。
2、消毒杀菌管理
苗床基质消毒：在没有植物的基质上消毒 ，可以使用高浓度消毒剂，如1%的高锰酸钾等 常规消毒药物。每批苗木出圃之后都要进行一 次比较细致的消毒，尽可能减少上一批育苗时 残留的有害微生物。
6、多数植物利用植物非试管高效快繁技术培养到第2代 以后，4~11天即可获得完整再生植株，再生植株率达 90%以上，真正实现了高效快繁。
有些科属植物生根繁殖情况特殊，如鸡毛松、云杉、红豆杉、油 樟、岩桂、中国兰草、牡丹等生根持续时间较长。但仍然比试管 快繁和常育苗要快，综合快繁效率要高。
7、技术步骤少，所用时间短，极大地节约了综合生产成 本和提高了人员的生产效率。从微型材料开始繁殖，可 直接培育出在自然条件下生长的植株，不需任何移栽， 对多数植物仅需要15－60天的培育即可用于生产栽培， 而且植株均表现开花结果早，丰产性好。
细胞工程
Cell engineering
植物非试管高效快繁技术
Technique of Efficient & Rapid Non-test tube Plant Cloning
目录
技术简介
植物非试管高效 快繁技术的特点
植物非试管快速 繁殖的流程
植物非试管高效快 繁技术产业化市场 前景
一、技术简介
也急剧的增长，人们对名优花卉、天然植物保健品
等的需求也积聚的增长,这也是一个十分广阔的市场。
预算
• 按每半年一个周期投资150-200万元，生产 供应1000万株种苗计算，利润总额可达 800多万元。按每个周期投资750-1000万 元，生产供应种苗5000万株，企业年利润 总额可以达到8000多万元。按每个周期投 资1500-2000万元，生产供应种苗10000 万株计算，企业全年利润可达16000万元。 这种经济效益是一般生产企业所不可比拟 的。
采用穴盘或育苗杯，在其中放入基质（一般珍珠 岩、蛭石、泥炭各1/3），插穗直接插入基质，待生 根后进行无土栽培，成苗后连容器销售。
植物非试管快速繁殖的流程
（二）育苗材料（外植体）及其准备
非试管克隆一般取植物 1-4 厘米长的茎段，其上带有 一个腋芽和一个叶片，取材原则如下：