大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定

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猪大肠杆菌猪沙门氏菌

猪大肠杆菌‎&猪沙门氏菌‎猪大肠杆菌‎：猪大肠杆菌‎病是由大肠‎杆菌引起的‎肠道传染性‎疾病，主要侵害仔‎猪和断奶后‎的小猪，常引起严重‎腹泻、脑水肿、生长缓慢和‎死亡。

由于病原菌‎的类型不同‎以及猪的日‎龄、个体差异、发病率和症‎状不同该病‎主要分为三‎种：即仔猪黄痢‎、白痢和猪水‎肿病。

1仔猪黄痢‎1.1流行病学‎该病常发生‎于一周龄以‎内仔猪，以1-3日龄的仔‎猪多发。

带菌母猪是‎主要传染源‎，由粪便排出‎病原体，仔猪由于吸‎乳和到处乱‎舔，经消化道感‎染。

该病的发生‎无季节性，死亡率可达‎90%以上。

1.2临床症状‎仔猪出生后‎12小时内‎突然有1-2头出现衰‎弱、昏迷症状，并很快死亡‎。

接着有的仔‎猪排黄色稀‎粪，很快变成水‎样，具腥臭味。

每小时排粪‎数次，严重时肛门‎松弛，排粪失禁，清瘦，脱水，眼球下陷，昏迷死亡。

1.3病理变化‎皮肤苍白，肠道黏膜充‎血、出血，以十二指肠‎显著。

1.4诊断与防‎治⑴诊断根据发病以‎3日龄以内‎初生仔猪为‎主，排出黄色水‎样稀便，明显脱水，消瘦，发病率和死‎亡率都很高‎，可诊断为该‎病。

⑵防治①科学免疫：临产前用大‎肠杆菌疫苗‎注射母猪，15天、30天各免‎疫1次。

仔猪出生后‎及早让其吃‎上初乳，仔猪可通过‎吸食母乳获‎得母源抗体‎得到保护。

②产房严格消‎毒，保持干燥、洁净、温暖、通风良好，防止有害气‎体产生。

③一旦有病猪‎出现，应立即全窝‎给予庆大霉‎素、痢特灵、黄连素、磺胺脒等药‎物治疗。

2仔猪白痢‎2.1流行病学‎常发生于1‎0-30日龄的‎仔猪，以20日龄‎以内仔猪多‎见，日龄越小死‎亡率越高。

该病的发病‎与外界环境‎相关，如气候突变‎、多雨潮湿、饲料变质或‎突然变换饲‎料，以及母乳缺‎乏或过浓，都可促进该‎病的发生。

2.2临床症状‎仔猪排乳白‎色或灰白色‎稀粪，呈糨糊状，具腥臭味。

病情加重则‎表现结膜和‎皮肤苍白，机体脱水消‎瘦，最后衰竭而‎死亡。

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。

在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。

三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。

生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。

MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。

半固体中沿穿刺线向四周生长。

2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。

在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。

能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。

实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。

（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。

（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。

三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。

挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。

（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。

四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案

实验原理：1、大肠杆菌的性质:大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。

在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。

三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。

生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。

MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用xx酸盐。

半固体中沿穿刺线向四周生长。

2、沙门氏杆菌的性质：-沙门氏杆菌是G直杆菌。

在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。

能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。

实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：(1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。

(2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。

(3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。

三、细菌分离培养：(1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。

挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。

(2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。

四、细菌的鉴定纯化：(1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。

禽源大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性检测

禽源大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性检测
李淑芳，曹慧，黄燕霞，陈冬杰，邹海鹏，迟明飞，陈伟垣，谢文斌（广东海洋大学动物医学系，广东湛江５２４０８８）
摘要：为了解湛江市禽源致病菌大肠杆菌和沙门氏菌对禽肉产品的污染程度及其耐药性，采集市售禽肉中的肝脏样
３５Ｅ．ｃｏｌｉｓｔｒａｉｎｓ，７ＥＨＥＣＯ１５７：Ｈ７ｓｔｒａｉｎｓａｎｄｌ１Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄｂｙｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｔｅｓｔ．ＴｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＥ．ｃｏｌｉｗａｓ４３．２１％，ｔｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＥＨＥＣ０ｌ５７：Ｈ７ｗａｓ８．６４％，ａｎｄｔｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｗａｓ１３．５８％．Ａｔｏａｌｔｏｆ２ｌＥ．ｃｏｌｉｓｔｒａｉｎｓａｎｄｌ１Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｉｎ
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｉｏｔｎａｎｄＤｒｕｇ — ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉａｎｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａｆｒｏｍＰｏｕｌｔｒｙ

肠道微生物的分离与鉴定方法

一、有益菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，柔嫩梭菌，丁酸梭菌，芽抱杆菌（枯草、地衣）。

5种有害菌：大肠杆菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌，空肠弯曲杆菌。

4种二、厌氧菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，产气荚膜梭菌，丁酸梭菌，柔嫩梭菌。

5种需氧菌：芽抱杆菌。

1种兼性厌氧菌：大肠杆菌，沙门氏菌。

2种注：空肠弯曲杆菌：微需氧菌,在含2.5-5%氧和10%C02的环境中生长最好。

最适温度为37〜42C。

在正常大气或无氧环境中均不能生长。

肠道正常菌群中95%以上为专性厌氧菌，兼性厌氧菌和需氧菌在正常菌群中所占比例较少。

三、一般检测菌株包括厌氧菌中的双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌、消化性球菌、乳杆菌及梭菌。

需氧菌中的肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌，及酵母菌等。

四、无氧环境的简易操作：1、方法来自文献《健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定》采用干燥器培养空间用焦性没食子酸Wg、10%氢氧化钠溶液100mL,按比例取10%的氢氧化钠液置于干燥器皿底部，然后放置2到3个略高于液面的青霉素小瓶，再按比例称取焦性没食子酸用纸美蓝指示剂一管。

盖上缸盖并用石蜡封闭。

再轻轻摇动干燥器，使焦性没食子酸掉人氢氧化钠液中，反应后，干燥器内无氧，美蓝指示剂由蓝变白。

置于温箱37c培养24 — 48h观察结果。

2、方法来自文献《健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析》后者先拧紧瓶盖，放入密封性较好的玻璃罐（用凡士林封口），通过蜡烛燃烧法制作简易厌氧装置。

五、CO 2培养箱不可代替无氧培养箱厌氧箱一般是组合气体90%氮气+5%氢气+5%二氧化碳，厌氧箱里面培养的微生物都是厌氧微生物；而二氧化碳培养箱里面是5%二氧化碳+95%空气，里面是有一部分氧气的。

一般的研究认为严格厌氧菌的培养环境中02的浓度必须小于WOOPpm （千分之一），更严格的环境是小于300Ppm （万分之三），本实验室C02培养箱C02浓度范围为280-2000ppm,所以CO2培养箱是不能用来培养严格厌氧菌。

实验五大肠杆菌与沙门氏菌

0.02g 60mL 40mL
• V-P试剂
甲液：α萘酚酒精溶液（α萘酚5g无水乙醇100mL）
乙液：KOH溶液（KOH 40g，水100ml）
将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。
五、结果观察
1. 大肠杆菌的生长表现
普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约2~3mm；
• 在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。
② V-P试验：某些细菌能发酵
粉
碱
红
+ 二乙酰色
葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 2,3-丁二烯醇
+
化合
胨中的胍基化合物物
注意：通常M.R和V-P试验是密切相关：如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。
• M.R试剂
甲基红 95％酒精蒸馏水
3. 生化管接种培养
① 糖发酵试验：
葡乳麦甘蔗
② H2S试验； ③ 尿素酶试验； ④ 枸橼酸盐利用试验。
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
大肠杆菌
沙门氏菌
大肠杆菌沙门氏菌置 37℃培养
4. 吲哚试验
① 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中，置37℃培养3-5d；
＋(－) ；＋(－)
3. 细菌的染色、镜检
大肠杆菌
沙门氏菌
G－直杆菌，大小0.4-0.7×2-3μm，无芽胞，两端钝圆，散在或成对。
4. 生化管接种培养
大肠杆菌
沙门氏菌
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕/- －－－
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
⊕－ ⊕ ⊕ －＋－＋

雪豹大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的分离及鉴定

雪豹大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的分离及鉴定何顺福【期刊名称】《中国畜牧兽医文摘》【年(卷),期】2016(032)002【总页数】1页(P66)【作者】何顺福【作者单位】西宁野生动物园,青海西宁810000【正文语种】中文2014年8月，西宁野生动物园繁育的2只3月龄雪豹出现腹泻，经过抗生素药物对症治疗数天后效果不佳，随后青海大学农牧学院动物医学系传染病实验室对患病雪豹的腹泻粪便进行了采集，采取常规的病原分离及药敏试验技术进行微生物学诊断，最后，确诊为大肠杆菌与沙门氏菌混合感染，药敏试验结果显示此次分离的病菌对左氧氟沙星、头孢曲松、依诺沙星敏感。

1.1 材料1.1.1 病料采集发病雪豹的粪便，待检。

1.1.2 培养基伊红亚甲蓝平板、SS平板、TSA平板和TSB肉汤培养基。

1.1.3 试验动物健康小白鼠10只。

1.1.4 药敏纸片 14种药敏纸片。

1.2 方法1.2.1 病料的采集采集西宁野生动物园发病雪豹粪便无菌种到TSB肉汤中37℃培养18～24h。

1.2.2 病菌的分离、纯化分别划线种于伊红亚甲蓝平板、SS平板和TSA平板进行分离、纯化。

1.2.3 生化试验将纯化后的分离株种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、鼠李糖、棉子糖、阿拉伯糖、木糖、卫矛醇、肌醇、山梨醇、水杨苷、MR、V-P、明胶、鸟氨酸脱羧酶肉汤、硫化氢、西蒙氏枸橼酸钠、硝酸盐、半固体和尿素等各种生化培养基中进行生化鉴定。

1.2.4 动物致病性试验将纯化后的分离株种到鲜血琼脂斜面培养基上，37℃培养18～24h制成菌悬液，并与麦氏浊管进行比浊，选取浓度为3.0×109个/ml的菌悬液分别腹腔注射6只小白鼠，0.2ml每只作为实验组。

同时应用0.22μm细菌滤器分别对上述菌悬液过滤，各取滤液腹腔注射4只小白鼠，0.2ml每只，作为对照组。

对注射后的小白鼠隔离饲养，观察发病及死亡情况，对死亡白鼠立即进行剖检，观察病理学变化，无菌采取肝脏、脾脏组织涂片、染色。

家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验

家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验方法鸡大肠杆菌病主要依靠药物防治，但药物的大量使用带来了大肠杆菌多重耐药性和药物残留等诸多问题。

目前世界许多地方开展了调查研究试验材料1.病料来源。

养殖户送检样本有典型大肠杆菌和沙门氏菌病变的病死鸡，孵化后期死亡鸡胚（没有出壳鸡苗）作病料。

毛蛋没有出壳小鸡小鸡卵黄囊青年鸡病料2.细菌分离用的培养基：麦康凯培养基、普通培养基、SS培养基、亚硫酸铋培养基等二、试验方法1.大肠杆菌的分离培养。

无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊（没有出壳鸡苗）在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，在麦康凯培养基上生长出边缘整齐稍凸起、表面光滑湿润、直径1～2毫米的红色圆形菌落，革兰氏阴性，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出粉红菌落。

亚硫酸铋琼脂大肠杆菌不生长。

2.沙门氏菌分离培养。

无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊在在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，然后挑取麦康凯琼脂平板上淡黄色半透明单个菌落，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出黄色半透明或黑色菌落。

亚硫酸铋琼脂沙门氏菌生长绿色单个菌落。

如图：SS培养基沙门氏亚硫酸铋琼脂沙门氏菌麦康凯培养基大肠杆菌SS培养基大肠杆菌和沙门氏菌普通培养基大肠杆菌和沙门氏菌三．药敏试验分离到的大肠杆菌和沙门氏菌混合在一起，涂匀营养培养基，选用的药敏片做好标号，平整贴在培养基上37℃培养12~24小时，观察细菌抑菌圈大小，选抑菌圈越大药物敏感度越高，使用疗效越好。

同时考虑某些药物肠道不吸收问题。

四．药敏分析及预防：该地区的大肠杆菌和沙门氏菌对粘杆菌素、痢菌净、氟苯尼考、硫酸阿米卡星、头孢噻呋、硫酸新霉素较敏感。

合理搭配抗生素使用减少细菌耐药性的产生，临床上长期大量使用不规范抗菌药物，致使大肠杆菌沙门氏菌耐药菌株不断产生，敏感的药物越来越少，也可以据本场的大肠杆菌和沙门氏菌血清型做疫苗预防。

这提示我们每隔一定时间要对本地区的大肠杆菌耐药性进行检测，以便更好地选择敏感有效的药物，以控制该病的流行。

API 20E 鉴定系统等两种检测方法应用于食品中沙门氏菌的检测结果比较

Iustry科技文苑行业40 食品安全导刊 2021年5月API 20E 鉴定系统等两种检测方法应用于食品中沙门氏菌的检测结果比较□ 韩志双胡凤自贡检验检测院摘要：本实验采用AP I 20E 鉴定系统和国标生化鉴定方法，分别对2020年四川省市场监督管理局能力验证计划提供的样品中分离得到的沙门氏菌可疑菌落进行鉴定。

结果表明，两种方法的检测结果均为沙门氏菌阳性，故可用于对食品中肠杆菌科致病菌的鉴定，且A P I 20E 鉴定系统更优于传统生化鉴定方法。

关键词：API 20E 沙门氏菌鉴定沙门氏菌是一种食源性致病菌，且大多数食品在生产过程中易接触到此类污染物，这也是食品被沙门氏菌污染的重要途径。

其中，畜禽肉类、蛋类、乳制品等食品最易受到该菌的污染，尤其是生鲜[1]类食品。

由于沙门氏菌对人类的健康威胁较大，故世界各国普遍规定食品中不得检出该菌。

我国国标方法GB 4789.4-2016[2]中规定了食品中沙门氏菌的检验方法，如传统的生化鉴定方法，但该方法所需时间较长且工作量较大。

目前，由于微生物自动化检测系统与常规鉴定方法相比具有准确、快速地发现和鉴定病原体的特点，因此被越来越多地应用于临床检验、疾病控制等领域[3]。

API 20E 是梅里埃公司根据酶促反应及代谢产物检测而研制的肠杆菌生化鉴定试剂条，API 20E 细菌鉴定系统则为国际公认的标准鉴定系统，也是肠杆菌科和弧菌的标准鉴定系统。

本研究将API 20E 鉴定系统运用于食品中沙门氏菌的检验，并同国标中的生化鉴定方法结果相比较。

1 材料与方法1.1 仪器设备及试剂1.1.1 国标生化鉴定方法生化试剂盒、阳性对照乙型副伤寒沙门氏菌，由广东环凯微生物科技有限公司制造提供。

1.1.2 A P I 20E 法API 20E 试剂盒、API LAB软件，法国生物梅里埃公司制造提供。

1.1.3 供试品来源奶粉样品由四川省食品药品检验检测院提供。

1.2 试验方法1.2.1 国标生化鉴定方法样品按G B 4789.4-2016经过选择性琼脂平板增菌，经T S I 、赖氨酸脱羧酶初步生化确定为疑似沙门氏菌后，将菌落纯化，配制成菌悬液，具体按厂家提供的试剂盒使用说明书执行。

鹌鹑大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的病原分离与鉴定

美兰（ＥＭＢ琼脂、康凯（ｃＯｋｙ琼脂、）麦ＭａＣｎｅ）Ｓ—Ｓ琼脂、绿肉汤增菌液、白胨水、萄糖煌蛋葡
蛋白胨水、橼酸盐琼脂、发酵管．．枸糖ＭＲ试剂、 —Ｐ试剂、哚试剂、酸盐还原试剂．Ｖ吲硝
０前言
大肠杆菌病（ｏｉａｉｏｉ和沙门氏菌病（ａｎｌｓ）别是由致病性大肠杆菌和沙Ｃｌｃｌｓ）ｂｌｓＳｌｅｏｉ分ｍｏｌｓ
门氏菌属的细菌引起的消化道传染病，行广，病率和死亡率较高，年来，着鹌鹑养殖流发近随业的发展，关鹌鹑疾病的报道也陆续增多，国内对鹌鹑的细菌性疾病，其是混合感染有但尤
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第２４卷第２期２００２年６月
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ＶＯ．４ＮＯ．１２２
ＪｕｎｌｆＡｇｉｕｔｒｌＳｉｎｅＹａｂａｉｅｓｔｏｒａｏｒｃｌａｃｅｃｎｉｎＵｎｖｒｉｙｕ
收稿日期：２００２—０４—２０
作者简介：张宗植（９０）男（鲜族）吉林龙井人，吉市动物卫生监督所助理兽医师１７一，朝，延
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第２期
张宗植，：鹑大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的病原分离与鉴定等鹌

鸭大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的分离鉴定及药敏试验

鸭大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的分离鉴定及药敏试验
李迎晓;安辉;焦凤超;陈宏智
【期刊名称】《江苏农业科学》
【年(卷),期】2015(43)4
【摘要】利用细菌分离、生化鉴定及药敏试验方法，从河南省信阳市鸭场病死鸭脑、脾脏中分离出鸭大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌各1株。

药敏试验结果显示，分离菌对头孢曲松、黏杆菌素、左旋氧氟沙星、恩诺沙星、新霉素高度敏感；对磺胺甲基异恶唑、洁霉素、强力霉素耐药。

【总页数】2页(P224-225)
【作者】李迎晓;安辉;焦凤超;陈宏智
【作者单位】信阳农林学院动物科学系，河南信阳464000;河南省信阳市畜牧工作站，河南信阳464000;信阳农林学院动物科学系，河南信阳464000;信阳农林学院动物科学系，河南信阳464000
【正文语种】中文
【中图分类】S858.32
【相关文献】
1.鸭肠炎沙门氏菌分离鉴定与药敏试验
2.鹌鹑致病性大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的病原分离鉴定与药敏试验
3.商品肉鸭沙门氏菌分离鉴定及药敏试验
4.鸡大肠杆菌和沙门氏菌混合感染的分离鉴定及药敏试验研究
5.鸭源大肠杆菌和沙门菌混合感染的分离鉴定及药敏试验
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大肠杆菌与沙门氏菌鉴定

大肠杆菌与沙门氏菌的鉴定08动检1班：魏静翟阿官李盼盼尚延丽田方方崔亚婷一、实验目的与要求1、通过本实验了解大肠杆菌及沙门氏菌的主要生化特性与培养特性2、掌握大肠杆菌与沙门氏菌的鉴别方法二、实验器材及试剂温箱、显微镜、载玻片、营养琼脂、接种环、灭菌平皿、麦康凯培养基、无菌试管、伊红美兰培养基、三糖铁培养基、革兰氏染色剂、棉签、火柴等三、实验内容1、直接镜检法：1）操作步骤：a）用棉签沾取适量样液直接涂在载玻片上b）用革兰氏染色剂染色c）显微镜下观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：大肠杆菌为革兰氏阴性菌，中等大小，两端略圆的短粗杆菌，成单个存在，也有成双排列；周身鞭毛，能运动，有时两端着色较浓，要注意与巴氏杆菌区分开来。

b）沙门氏菌：沙门氏菌也为革兰氏阴性菌，无芽孢，大小通常为0.7~1.5um*2.0~5.0um，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。

2、分离培养法：将样液分别划线接种在麦康凯培养基、伊红美兰培养基上，温箱培养24h后观察生长情况，根据菌落的形态、颜色、大小等方面的差异来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。

1）麦康凯培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润；b）沙门氏菌：无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。

2）伊红美兰培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：紫黑色菌落，有的有金属光泽b）沙门氏菌：形态特征与在麦康凯培养基上的相似2、三糖铁培养基穿刺试验1）操作方法：将待检样液穿刺接种于三糖铁培养基中，培养18~24h后，取出观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：穿刺后不变黑，表面呈黄色b）沙门氏菌：穿刺底部有气体，穿刺后变黑，中间为黄色表面为红色3、乳糖发酵试验1）操作方法：将待检样液接种于乳糖发酵管内放于温箱内培养18h后，观察结果2) 预期实验结果：a）大肠杆菌：产酸产气b）沙门氏菌：不产酸产气。

犊牛腹泻病中细菌的分离鉴定与药敏试验 - 牛病防治

犊牛腹泻病中细菌的分离鉴定与药敏试验-牛病防治犊牛腹泻是一种常见的犊牛病症、引起犊牛腹泻得病因有多方面，有管理因素（喂初乳过晚，喂犊牛的奶温过低，喂奶不经稀释直接喂牛犊，喂奶没有定量，环境以及气温突变）。

根据对洛阳地区牛场的调查，在排除其它病因后，对腹泻犊牛进行细菌的分离与鉴定，并做了药敏试验，以便挑出敏感药物，进行针对性治疗。

菌株分别取自白马寺、升升乳业、洛宁王村、偃师、伊川高山等地养殖场犊经过病原菌的分离鉴定，发现有一头牛是大肠杆菌和沙门氏菌的混合感染，其它七头为大肠杆菌感染，有两头为非细菌性感染。

分析的原因有两点：一，由于养殖户的知识有限，他们不能科学合理的使用抗生素；二，由于细菌本身发生了变化，特别是它们能够获取其它耐药菌株的耐药基因。

一、大肠杆菌的生物学特性大肠杆菌是肠杆菌科中一组革兰氏阴性，无芽胞，除少数例外为周身鞭毛，能运动，兼性厌氧，发酵葡萄糖，分解乳糖的细菌。

本菌是一切温血动物肠道后段常在菌。

肉食兽与杂食兽肠道中携带本菌的数量，远比草食动物多。

部分菌株具有致病性和条件致病性，引起肠道疾病或肠道外感染。

大肠埃希氏菌大小为1.1-1.5×2.0-6.0，两端钝圆，有的近似球杆状，不行成芽孢，有鞭毛，运动或不运动，多数菌株有荚膜或微荚膜。

一些菌株的菌体表面有一层具有黏附性的纤毛，黏附性纤毛是一种毒力因子。

1.犊牛腹泻病近年来，随着奶牛业的快速发展，犊牛腹泻病已经成为关系到奶牛业兴衰的一种疾病，犊牛腹泻指的是正在吃奶的小牛出现腹泻的一种病症，一般在出生一个月内发病最高，多侵害出生后两周内的犊牛，一年四季均可发生，本病是造成犊牛生长发育不良和死亡的主要疾病之一，是新生犊牛的杀手，约占犊牛发病率的80%[1]。

2.犊牛腹泻病的危害洛阳地区的牛厂为洛阳市民和周边人民提供优质的牛肉和牛奶，犊牛的健康率和成活率直接影响着人民的健康和农民的增收，这段时间犊牛的腹泻发生率明显上升，给养殖户带来了很大的经济损失，本文旨在确定发病原因，测定分离细菌对药物的敏感性，筛选出敏感的抗菌药物，从而为洛阳地区的犊牛腹泻病的有效防治提供科学的依据。

粪便标本中肠道致病菌的分离与鉴定程序

粪便标本中肠道致病菌的分离与鉴定程序哎呀，今天我们来聊聊一个有点“特别”的话题，关于粪便标本中那些神秘的小家伙，肠道致病菌的分离与鉴定。

乍一听，大家可能会觉得有点不太美好，毕竟谁愿意和粪便扯上关系呢？但了解这些菌菌的背后故事可有趣多了，绝对让你大开眼界！咱们得知道，肠道里的细菌就像是一个大家庭，里面有些是好朋友，像肠道益生菌，帮我们消化，维护健康；但有些就不那么友好了，它们就是那些臭名昭著的致病菌。

一旦这些坏家伙在我们的肚子里扎下根，嘿，后果可就不堪设想了。

肚子疼、拉肚子、发烧，这些都可能是它们在搞鬼。

为了搞清楚这些“坏蛋”到底是谁，我们就得用到粪便标本，别担心，这个过程其实比想象中简单有趣得多。

说到采样，首先要准备一个干净的小容器，最好是一次性那种，听说卫生很重要。

采样的时候要记得，尽量避免尿液或其他杂质的混入，毕竟咱们要的是纯正的“货”。

然后，就把这些标本送到实验室，等着实验室的小伙伴们来“审问”这些细菌。

在实验室里，首先会用培养基来培育这些粪便里的细菌。

培养基就像是细菌的“自助餐”，只要你给它们提供了舒适的环境，它们就会茁壮成长。

像是加上一些营养成分，调节一下温度，再给点时间，这些小家伙就会在培养皿里成群结队地出现，真是热闹非凡。

就是细菌的分离与鉴定。

这一步就像在“找朋友”，实验室的小伙伴们会用一些小工具，把那些长得像“群星闪耀”的细菌分别挑出来。

用专业的技术手段，比如涂布法、分离培养法，慢慢地将它们一个个找出来。

这可不是简单的事情哦，得眼明手快，毕竟有时候它们还真是狡猾。

一旦分离成功，接下来就是鉴定了。

这里会用到一些生化试验，像是培养、染色，甚至是基因测序。

这些方法就像是给细菌做“身份证”，一一验证它们的身份。

有的细菌可能会告诉你，它们叫“大肠杆菌”，有的则可能是“沙门氏菌”，每个名字背后都藏着不同的故事和特性。

当所有的结果都出来后，咱们就能知道肠道里到底发生了什么。

可能会有个别的致病菌跳出来，让人吓一跳，但有时候也可能只是普通的肠道菌群，没什么大问题。

鹌鹑致病性大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的病原分离鉴定与药敏试验

畜牧与饲料科学
ＡｎｍａｉｌＨｂａｙａｄＦｅｃｅｃｌｒｎｅｄＳｉｎｅ
２０，１１）１６５０１３（：５一ｌ８
鹌鹑致病性大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的病原分离鉴定与药敏试验
王红琳，杨峻，邵华斌，玲，罗艾地云，罗青平，国元，蓉蓉，温张张琳
培养、生化试验、小鼠致病性试验和药敏试验。结果：经过实验室诊断确诊为大肠杆菌和沙门氏菌混合感染：ｌ用３种常用抗菌药物对分离菌株进行了药敏试验。果表明，肠杆菌对庆大霉素、达欣、霉素等药物高度敏感：门氏菌对结大复新沙复达欣、霉素、新氟哌酸等药物高度敏感。结论：药敏试验结果为规模化鹌鹑养殖场临床合理用药提供了科学依据。
Ｔｅｐｔｏｅｉａｔｒｅｅｉｏａｅｒｍｈｉｅｎｅｒｏｉｅｓｄｑａｌａｄｉｃｂｔｄｗｉｈｅｅｔｅｍｅｉｍ，ｈｎｔｅｈａｈｇｎｃｂｃｅｉｗｒｓｌｔｄｆａｏｔｅｌｒａｄｈａｔｆｓａｅｕｉｎｎｕａｅｔｔｅｓｌｃｉｄｕｔｅｈｖｄｓｈｖ
ＤｒｇＳｎｉｉｉｙＴｅｔｕｅｓｔｖｔｓ
ＷＡＧＨｎ－ｉ，ＡＮｎＳＡｕ－ｉ，ＵｉｇＡｉｙｎＬＯＱｎ－ｉ，ＮＧｏｙａ，ＨＮＮｏｇｌＹＧＪ，ＨＯＨａｂｎＬＯＬｎ，Ｉ－ｕ，ＵｉｇｐｎＷＥｕ－ｕｎＺＡＧｎｕＤｇ

上海地区猪源大肠杆菌和沙门氏菌的耐药性及耐药基因的研究的开题报告

上海地区猪源大肠杆菌和沙门氏菌的耐药性及耐药
基因的研究的开题报告
一、课题背景和研究意义：
近年来，疾病的发病率和死亡率不断地上升，猪源大肠杆菌和沙门
氏菌等细菌感染已成为危害人类健康和生产的重要原因。

这些细菌的抗
生素耐药性已成为研究的热点，对于临床用药和动物饲养管理等方面具
有重要的指导意义。

因此，本文将研究上海地区猪源大肠杆菌和沙门氏
菌的耐药性及耐药基因，从而更好地预防和治疗相关的疾病。

二、研究内容和方法：
（1）猪源大肠杆菌和沙门氏菌的分离与鉴定。

从上海地区的养猪场、市场和屠宰场等采集猪肠道和粪便样品，并通过标准鉴定方法进行分离
和鉴定。

（2）耐药性的检测。

利用药敏实验对分离的大肠杆菌和沙门氏菌进行药敏试验，并采用文盘扩散法、细胞培养法等方法对耐药性进行分析。

（3）耐药基因的检测。

采用聚合酶链式反应法（PCR）对耐药基因的存在进行检测，并采用DNA序列分析的方法对PCR产物进行验证和鉴定。

三、预期成果和意义：
通过对上海地区猪源大肠杆菌和沙门氏菌的耐药性及耐药基因的研究，预期可以得到以下几点成果：
（1）了解上海地区猪源大肠杆菌和沙门氏菌耐药性和耐药基因的分布情况。

（2）探讨上海地区猪源大肠杆菌和沙门氏菌的耐药机制，并为相关疾病的预防和治疗提供科学依据。

（3）为上海地区动物饲养管理提供参考，促进养殖业的健康发展。

综上所述，本研究拟从大肠杆菌和沙门氏菌耐药性和耐药基因方面开展研究，具有一定的学术和实践意义，值得深入进行探索。

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青岛农业大学
兽医微生物学课程论文
题目：大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
姓名：
学院：动物科技学院
班级：马业科学1201班
学号： 2012
任课教师：温建新
二0一四年四月一日
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
马业科学1201
任课教师温建新
摘要：为了鉴别大肠杆菌和沙门氏菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴
别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。

关键词：大肠杆菌沙门氏菌三糖铁糖发酵麦康凯琼脂
引言：大肠杆菌是肠杆菌中埃希氏菌中的代表种。

根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌株分为不
同的血清型。

自然界中大肠杆菌的血清型可分为数万种，但致病性大肠杆菌的数量有限。

沙门氏菌属是有一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对任何动物均有致病性，可以欺人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒，对动物能致多
种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。

大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特征，如形态、染色特性等。

但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。

目录
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关键词...................................... 错误！未定义书签。

引言........................................ 错误！未定义书签。

1 材料 (1)
1.1 菌种 (1)
1.2 培养基 (1)
1.3 生化试剂 (1)
1.4 沙门氏菌诊断血清 (1)
1.5 器材 (1)
2 方法 (1)
2.1 增菌培养 (1)
2.2 直接分离培养 (1)
2.3 形态观察 (1)
2.4 培养特性观察 (1)
2.5 生化试验 (2)
2.5.1糖发酵管接种 (2)
2.5.2 蛋白胨水接种 (2)
2.5.3 葡萄糖蛋白胨水接种 (2)
2.5.4 尿素琼脂接种 (2)
2.5.5 枸橼酸盐琼脂接种 (2)
2.6 生化特性的观察 (2)
2.6.1 糖发酵实验 (2)
2.6.2 MR实验 (2)
2.6.3 VP实验 (2)
2.6.4 吲哚实验 (3)
2.6.5 枸橼酸盐利用实验 (3)
2.6.6硫化氢实验 (3)
2.7 药物敏感试验-扩散法 (3)
3 结果观察 (3)
3.1 大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况错误！未定义书签。

3.2 细菌的染色、镜检 (4)
3.3 生化管的接种培养 (4)
3.4 吲哚、MR、V-P实验 ................ 错误！未定义书签。

3.5 药物敏感试验 (6)
4 结论 (7)
参考文献 (7)
1材料
1.1菌种
大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液
1.2 培养基
普通培养基: 肉汤、普通琼脂、半固体培养基。

鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。

生化鉴别基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。

1.3 生化试剂
MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原试剂等。

1.4 沙门氏菌诊断血清
A~E群多价O血清及单因子血清。

1.5 器材
革兰氏染液、显微镜、吸管等。

2 方法
2.1 增菌培养
用无菌刻度吸管吸取大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液2ml，分别加入已有亚砷酸盐量绿增菌液100ml的试管和四磺酸钠增菌液10ml的试管个1ml.接种后轻轻混匀，置37摄氏度温箱内培养18-24h。

2.2 直接分离培养
2.3 形态观察
以无菌接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板上新鲜培养的大肠杆菌和沙门
氏菌单个菌落，在在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色，
镜检。

观察两种细菌的形态，大小与排列方式并做比较。

这两种都是革兰氏阴性、两端钝
圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不显著。

2.4 培养特性观察
将大肠杆菌和沙门氏菌的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。

三糖铁琼脂接种时，先涂布斜面，后穿刺底层。

置37摄氏度温箱内培养24h 后，取出观察两种细菌的培养特性并比较。

2.5 生化试验
生化实验前，须对菌种进行纯度检查，以保证不被污染杂菌。

检查方法同一般培养物
的制片、染色、镜检。

镜检时要适当多看几个视野，每个视野中细菌形态也染色特性菌须
符合该种菌种的特性。

凡污染杂菌者，此菌种不可用。

2.5.1糖发酵管接种
每种菌纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、卫矛醇微量生化反
应管，每种唐一管，穿刺接种。

后置于37℃温箱培养2-3d。

2.5.2 蛋白胨水接种
每种菌纯培养物接种一管，培养后作吲哚实验。

后置于37℃温箱培养2-3d。

2.5.3 葡萄糖蛋白胨水接种
每种菌纯培养物接种两管，培养后一管作MR实验，另一管作VP实验。

后置于37℃温箱培养2-3d。

2.5.4 尿素琼脂接种
每种菌纯培养物接种一管，接种量要大。

后置于37℃温箱培养数小时。

2.5.5 枸橼酸盐琼脂接种
每种菌纯培养物接种一管，接种量要少。

后置于37℃温箱培养2-3d。

2.6 生化特性的观察
2.6.1 糖发酵实验
取经2-3d培养后的两种细菌的糖发酵管一一观察，凡培养基变为黄色的，表示该菌
发酵此糖产酸气；凡凡培养基不变色的，表示该菌不发酵此糖。

2.6.2 MR实验
取一支经2-3d培养后的葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入MR试剂数滴，凡液体呈红色者为阳性反应，呈黄色者为阴性反应，橙黄色者为可疑反应。

2.6.3 VP实验
取另一支葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入VP试剂3ml，再加入VP试剂乙液1ml，充分摇匀后静置与试管架上，在数分钟内出现红色者为阳性反应，不出现红色者应放在
37℃继续观察1-2h，仍然不变色者判为阴性。

2.6.4 吲哚实验
去蛋白胨水培养管先加乙醚少量，塞紧棉塞摇振试管，是一米与培养基充分混匀，静
置片刻，待乙醚浮于液面上层时，沿管壁加入吲哚试剂2-3滴。

凡在乙醚层内出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者位阴性反应。

2.6.5 枸橼酸盐利用实验
观察经2-3d培养的枸橼酸盐琼脂管是否有细菌生长，并观察其颜色变化。

凡有细菌
生长，培养基变为天蓝色为该菌利用枸橼酸盐，否则为阴性反应。

2.6.6 硫化氢实验
观察经2-3d培养的醋酸铅琼脂管，凡沿穿刺线或其周围出现黑色沉淀者，为硫化氢
反应阳性，无黑色者为反应阴性。

2.7 药物敏感试验-扩散法
曲松纳、红霉素、硫酸链霉素、磷霉素、多面环素对大肠杆菌或沙门氏菌生长的影响。

3 结果观察
3.1大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况
大肠杆菌
反应模式表示：
沙门氏菌
反应模式表示：
3.2细菌的染色、镜检
3.3生化管的接种培养
接种培养前：
接种培养后：
实图：
3.4 吲哚、MR、V-P实验
实验结果;
3.5药物敏感试验
4结论
大肠杆菌和沙门氏菌生化反应结果综合汇表
菌三糖铁糖发酵
甲
基
红
VP 吲
哚
硫
化
氢
尿
素
酶
枸
橼
酸
盐
利
用
运
动
力
种斜
面底
层
硫
化
氢
葡
萄
糖
乳
糖
甘
露
醇
蔗
糖卫矛
醇
A A A - ⊕⊕
/-
⊕ v + + - + - + - +
B K A +/- ⊕- ⊕- - - + - +/
-
- + +/-
注：⊕产酸产气、+ 阳性、- 阴性、+/- 大多数菌株阳性/少数阴性、v 种间有不同反应。

A：大肠杆菌
B：沙门氏菌
参考文献：
【1】李一经，兽医微生物学，2011年1月第一版。

【2】陆承平，兽医微生物学第四版。

【3】兽医微生物学(原书第2版）。