菌种的保藏
菌种保藏方法
菌种保藏方法
菌种保藏方法，如下：
1、传代保藏，传代保藏菌种是微生物保存中最常用的方法之一。
很多微生物在低温或者干燥处理时，会很快死亡，为了保存菌种的活性，就要定期不断的进行菌种转接、培养后再保存。
2、斜面低温保藏，将待保藏的菌种接种在合适的斜面培养基上，在相应的条件下培养至得到充足的菌体或者孢子，随后密封试管置于4℃左右保存，具体保存温度按照保存菌种设定。
保藏时间依微生物的种类从1个月到4个月不等。
3、冷冻干燥保藏，冷冻干燥保藏法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，这种方法适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年。
我国大多数生物制品菌种都是采用该法保藏。
4、半固体穿刺保藏，配制半固体培养基，高压湿热灭菌后倒于无菌试管中至约1/3，待培养基凝固，用接种环从平面培养基上挑取单菌落，穿入培养基若干次。
在合适的条件下进行培养至菌体旺盛生长，之后密封试管，根据菌种特点在4 ℃左右或者凉爽干燥处保存。
保存时间至少可以达到
1 年，对于有些菌种甚至能达到20 年之久。
5、液氮超低温保藏，液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。
液超低温保藏法是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓶瓶内，将该安瓶瓶放人液氮（-196℃）中保藏。
几种食用菌菌种保藏方法
几种食用菌菌种保藏方法食用菌菌种是指用于食用或驯化培养的真菌种类。
在保藏食用菌菌种时，主要有以下几种方法：1.冷冻保藏：将菌种置于-80℃的低温环境中。
首先，将菌种种植在琼脂平板上的单独菌落。
然后，将单独的菌落切下并置于含有30%甘油的琼脂平板上。
最后将含有菌落的琼脂平板置于-80℃的低温冷冻库中进行保存。
这种方法适合于长时间保存，但对设备和电力有一定需求。
2.雪贮法：将菌种置于冷藏室的冷湿源物质上。
首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。
然后，将菌落保留在琼脂平板上并将其置于冷藏室中。
这种方法适用于一般食用菌的保存，在适宜的湿度和温度下，可以保存数月至一年。
3.干燥保藏：将菌种置于干燥环境中。
首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。
然后将菌落切下并置于无菌的滤纸或多孔塑料袋中。
最后将菌种放置于干燥通风良好的地方，等待其自然干燥。
这种方法适用于一些干货类食用菌种，如香菇、平菇等。
4.培养罐保藏：将菌种保藏于培养罐中。
首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。
然后将菌落切下并置于无菌培养罐中，加入适宜的培养基，并密封培养罐。
最后将培养罐保存在适宜的温度和湿度下。
这种方法适用于菌种的短期保藏。
5.低温干燥保藏：将菌种保藏于低温干燥器中。
首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。
然后将菌落切下并置于低温干燥器中，通过低温干燥将其保存起来。
这种方法适用于一些低温耐受性较强的食用菌。
总结起来，以上是几种食用菌菌种保藏的方法。
选择合适的方法可根据菌种的特性、用途和预期保藏时间来确定。
在进行菌种保藏时，要注意无菌操作，避免菌种的污染或变异，并在适宜的环境条件下保存。
这将有助于保持菌种的营养价值和生物特性，以及保证其在后续使用中的质量。
常用的菌种保藏方法及其优缺点
常用的菌种保藏方法及其优缺点菌种保藏是微生物学研究中的重要环节，其目的是长期保存各类菌种以便于日后的使用和研究。
常用的菌种保藏方法有冷冻保存、制备淡防冻溶液、干燥保存、液氮冷冻保存、冷冻干燥保存等。
下面是这些方法的优缺点。
1.冷冻保存：冷冻保存是通过将菌种保存在低温下，在液氮冷冻罐中或冷冻干燥保存，常见的保存温度为-80°C或液氮温度。
其优点是保存方便，菌种保存时间相对较长；缺点是保存设备和条件要求较高，保存过程中会有一定的细胞破坏。
2.制备淡防冻溶液：制备淡防冻溶液是指制备一种富含保护物质的冻存液，然后将菌种悬浮于其中，并在-20°C或-80°C保存。
其优点是相对简单，易于操作以及相对较长的保存时间；缺点是需要特定的冻存液配方和保存温度。
3.干燥保存：干燥保存是将菌种培养物在低温和低气压下干燥，然后保存于干燥剂中。
其优点是较为简单，设备要求低，保存时间较长；缺点是保存后重新复苏的成功率较低，保存过程中可能会有一定的细胞破坏。
4.液氮冷冻保存：液氮冷冻保存是将菌种保存在极低温的液氮中，常见的保存方法是将菌种培养物按一定比例混合液氮与甘油，然后使用液氮保存。
其优点是保存时间极长，细胞破坏较小；缺点是保存设备和条件要求较高。
5.冷冻干燥保存：冷冻干燥保存是将菌种首先冷冻，然后通过真空干燥的方法去除水分，最后保存在干燥剂中。
其优点是保存效果稳定，保存时间长；缺点是设备要求较高，操控难度大。
总的来说，不同的菌种保藏方法有各自的优点和缺点。
选择合适的方法应根据菌种的特性、实验室的设备和条件、保藏期限以及实验目的等因素综合考虑。
同时，在进行菌种保藏时，应严格控制一系列的操作步骤，包括消毒、菌种的培养与保存温度的选择、保存条件的监测等，以确保菌种的质量和纯度，以及保存结果的可靠性。
菌种的保藏方法
菌种的保藏方法菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。
菌种保藏的目的是保存菌种的遗传信息、保持菌种的稳定性和纯度，为后续的研究提供保障。
本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。
1. 冻干法冻干法是一种常用的菌种保藏方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻干管吸取菌液。
将冻干管放入液氮中，冷冻至-80℃，待冻干后，将管子密封，保存在-80℃的冰箱中。
冻干菌株可以保存多年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
2. 静态液氮法静态液氮法是一种高效、长期保存菌株的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入液氮中，冷冻至-196℃，保存在液氮罐中。
静态液氮保存的菌株可以保存数十年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
3. 冷藏法冷藏法是一种简单、易行的菌株保存方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将冻存管放入4℃的冰箱中保存。
冷藏法保存的菌株可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
4. 活体保存法活体保存法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。
活体保存法可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
5. 长期培养法长期培养法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。
每隔一段时间，将菌株转移到新的培养基上进行培养，以保持菌株的纯度和稳定性。
总之，菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。
简述菌种保藏的几种方法及条件。
简述菌种保藏的几种方法及条件。
菌种保藏是重要的生物资源的保护和利用过程，其主要方法有：
一、冷冻法。
冰冻法是最常用的保藏菌株的方法，也是目前最理想的保藏方法之一，其主要原理是将活菌体放入冰冻室，温度由常温降至-80℃，使得菌种活动受到抑制，在-80℃的状态下可以长期保存。
二、液氮法。
液氮法是一种依靠低温和高压技术保存菌种的方法，主要是将活菌体置入液氮容器中，使其处于-195℃的极低温状态。
三、干燥法。
干燥法是将活菌体及高浓度营养培养基同时干燥，使其中的水份完全蒸发而获得半干燥的状态，这种状态下可以防止菌种的增殖。
四、水银法。
水银法是一种利用活菌体对水银的耐受性，将活的菌体悬浮在7%的水银中的保存方法。
保藏菌种的条件：
1、环境温度应该控制在0~4℃，并保持温度稳定。
2、控制保藏过程中的湿度，干燥法中的湿度应在10%～15%之间，而冷冻、液氮保藏则要求保证容器中有足够多的液氮，避免菌种因温度过高而复苏。
3、控制光照，避免菌株遭受接触紫外线的伤害、褪色、衰退和增强其致病性等。
4、控制空气中的致病因子；
5、定期检测样品的质量，确保其始终处于较好的保藏状态。
- 1 -。
菌种安全保藏方法
菌种安全保藏方法菌种安全保藏方法点击：23食用菌由于生产投入少，经济效益高，近年来在农村兴起了食用菌生产热潮。
生产中食用菌菌丝繁殖快，容易老化，菌种保藏更难。
下面介绍七种简单易行的菌种保藏方法供广大农户参考：蒸馏水法适用于平菇、金针菇、香菇的苗种。
1、保藏平菇、金针菇菌种先将八成熟待保藏试管菌种移入接种箱内灭菌后，用注射器从试管栓内注入蒸馏水，将培养基面全部淹没至管口2厘米为止。
管口用矿蜡封闭，常温下置于阴凉处立放可以保藏1～1.5年。
2、保藏香菇、木耳菌种，用150×15毫米的指型管将培养至7成熟的固体或半固体试管种在接种箱内无菌操作下，放人25×200毫米的大试管内，向大试管内注入蒸馏水至管口1厘米处，封口用橡皮栓包好，并用矿蜡加固密封，置于阴凉处。
木耳可保藏7～8个月，香菇可保藏9～12个月。
此法在自然温度下也可以保藏其他菌种。
尿素暂存法在避光、干燥通风良好的地方放置袋装尿素，将试管菌种主体埋在尿素颗粒中，试管口露在外面，可保藏菌种活力30天之多。
此法在恒定低温环境下即可进行。
液体石蜡保藏法选用化学液体石蜡，高压灭菌后放入40℃恒温箱中数小时或干燥器中数日，用无菌吸管或注射器吸取液体石蜡注入菌种试管。
注入量应高出斜面尖端1厘米左右，管口塞上棉塞并用石蜡封好。
直立保藏在清洁、干燥、凉爽的低温处可以保藏5年。
麸皮保藏法取一定麸皮加水或营养液后拌匀即可备用。
将水麸皮装入试管经高压灭菌后拌入菌种，放在适温下培养，待菌丝体发育好后将试管放入室温下进行干燥。
然后在20℃以下干燥处保藏，可保藏3～5年。
生理盐水保藏法将菌种接入马铃薯培养液中，每250毫升三角瓶装60毫升养液，振动培养液或每天摇动5～10次，培养5～7天，然后将形成的菌丝球吸入装有5毫升无菌生理盐水的试管中，每管约移入4～5个菌丝球，塞上棉塞，用蜡封好管口。
低温可保藏1年。
麦粒保藏法取优质小麦淘洗后浸入20℃水中泡5小时，稍晾干后装管。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。
恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。
本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。
其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。
该方法具有诸多显著优点。
低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。
低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。
操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。
在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。
常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。
制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。
将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。
在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。
低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。
然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。
二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。
常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。
沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。
该方法具有操作简便、成本低廉的特点。
在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。
菌种保藏储存方法大全
菌种保藏储存方法大全菌种保藏储存方法大全食用菌由于营养价值高，生产成本低，经济效益高，近几年在农村兴起了生产热潮，但是，生产中食用菌菌丝繁殖快，容易老化。
本文根据实际情况介绍了7种简单易行的菌种贮藏方法供广大农户参考。
1.麦粒贮藏法取优质小麦淘洗后浸入20℃水中泡5小时，稍晾干后装管。
装入量以管长的l/4~1/3为宜。
将装有麦粒的试管灭菌后趁热摇散，冷却后接入菌丝体，在适温下培养至大多数麦粒上出现稀疏菌丝时，终止培养。
菌种可置于20℃以下干燥处保藏1～2年。
2.冰箱贮藏法将已经长好的试管菌种放于冰箱内储存，置于保鲜层保藏，能保证7个月菌种不退化。
3.生理盐水贮藏法将菌种接入马铃薯培养液中，每250ml三角瓶装60ml培养液，振动培养液或每天摇动5～10次，培养5～7天，然后将形成的菌丝球吸入装有5ml无菌生理盐水的试管中，每管约移入4～5个菌丝球，塞上棉塞，用蜡封好管口。
低温可保藏1年。
4.尿素暂存法在避光、干燥、通风良好的地方放置袋装尿素，将试管菌种主体埋在尿素颗粒中，试管口露在外面，可贮藏菌种活力30天之多。
此法在恒定低温环境下即可进行。
5.液体石蜡贮藏法选用化学液体石蜡，高压灭菌后放入40℃恒温箱中数小时或干燥器中数日，用无菌吸管或注射器吸取液体石蜡注入菌种试管。
注入量应高出斜面尖端1cm，管口塞上棉塞并用石蜡封好。
直立贮藏在清洁、干燥、凉爽的低温处，可以贮藏5年。
6.蒸馏水法 //农村致富经网 //适用于平菇、金针菇、香菇的菌种。
在自然温度下也可以贮藏其他菌种。
6.1贮藏平菇、金针菇菌种先将8成熟待贮藏试管菌种移入接种箱内后，用注射器从试管栓内注入蒸馏水，将培养基面全部淹没至管口2cm为止。
管口用矿蜡封闭，常温下置于阴凉处立放，可以贮藏1～1.5年。
6.2贮藏香菇、木耳菌种用15015mm的指型管将培养至7成熟的固体或半固体试管种在接种箱内无菌操作下，放人25200mm的大试管内，向大试管内注入蒸馏水至管口1cm处，封口用橡皮栓包好，并用矿蜡加固密封，置于阴凉处。
菌种保藏方法
一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。
保藏温度要求在-4～4℃下。
液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。
具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。
二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。
其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。
将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。
取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。
-20℃保存时间较短。
或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。
2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。
甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。
三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。
冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。
为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
菌种保藏的三大原理
菌种保藏的三大原理
菌种保藏的三大原理包括：冻存、干燥保藏和液氮保藏。
1. 冻存：将菌种培养物在低温条件下迅速冷冻保存。
冻存一般使用液氮或深冷冰箱等低温设备进行，通过快速降温减少细胞内冻结结晶的形成，以减少冻结对细胞的损伤。
冻存适用于大多数细菌和真菌。
2. 干燥保藏：将菌种培养物在无水或低湿度条件下进行干燥保存。
干燥保藏可以通过直接晾干或使用干燥剂等方法实现。
干燥保藏可以有效地抑制微生物生长和代谢，并减缓其老化速度。
干燥保藏适用于许多细菌、真菌和酵母等微生物。
3. 液氮保藏：将菌种培养物在低温液氮中进行保存。
液氮保藏是最常用的长期菌种保藏方法之一，可以将菌种长期保存数十年甚至更久。
液氮保藏利用液氮的低温和绝缘性质，有效防止细胞内的代谢反应和酶活性，并减缓噬菌体感染、遗传变异和突变等现象。
液氮保藏适用于许多微生物，包括细菌、真菌、酵母等。
这三种保藏方法可以根据具体菌种的特点和需求选择使用，以确保菌种的长期保存和使用。
微生物的菌种保藏
培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培
养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，
垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。
— 1—
• 菌种保藏方法
微 生
3.砂土管保藏法
物
将砂与土分别洗净、烘干、过筛，
的 菌 种
装于小试管中，砂土的高度约1cm， 121℃蒸汽灭菌1～1.5h，间歇灭菌3
保 藏
次。50℃烘干后经检查无误后备用。 将待保藏的菌株制成菌悬液或孢子
— 1—
斜面低温保藏法操作步骤
1.斜面低温保藏法 2.固体穿刺保藏法 3.液体石蜡保藏法 4.沙土管保藏法 5.甘油保藏法
— 2—
• 菌种保藏方法操作步骤
微
生
1.斜面低温保藏法
物 的 菌
（1）贴标签 将注有菌株名称和日期的标签贴于试管斜面的正下方。 （2）接种 将待保藏的菌种用斜面接种法移接至注明菌名的试管
悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也
可直接刮下孢子与载体混匀，而后置
于干燥器中抽真空约2～4h，用火焰
熔封管口(或用石蜡封口)，置于干燥
器中，在室温或4℃冰箱内保藏。
— 1—
• 菌种保藏方法
微
生 物 的
4.甘油悬液保藏法 此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏，本
菌 种 保
法较简便，但需置备低温冰箱。保藏温度若采用－20℃， 保藏期约为0.5～1年，而采用－70℃，保藏期可达10年。
— 2—
• 菌种保藏方法
微
生 物 的
1.斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长
菌 种 保
完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定 时间再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保
菌种保存方法-
菌种保存⽅法-菌种保存⽅法：⼀.菌种保藏⽅法⼤致可分为以下⼏种：1．传代培养保藏法⼜有斜⾯培养、穿刺培养、疱⾁培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌⽤），培养后于4—6℃冰箱内保存。
2．液体⽯蜡覆盖保藏法是传代培养的变相⽅法，能够适当延长保藏时间，它是在斜⾯培养物和穿刺培养物上⾯覆盖灭菌的液体⽯蜡，⼀⽅⾯可防⽌因培养基⽔分蒸发⽽引起菌种死亡，另⼀⽅⾯可阻⽌氧⽓进⼊，以减弱代谢作⽤。
3．载体保藏法是将微⽣物吸附在适当的载体，如⼟壤、沙⼦、硅胶、滤纸上，⽽后进⾏⼲燥的保藏法，例如沙⼟保藏法和滤纸保藏法应⽤相当⼴泛。
4．寄主保藏法⽤于⽬前尚不能在⼈⼯培养基上⽣长的微⽣物，如病毒、⽴克次⽒体、螺旋体等，它们必须在⽣活的动物、昆⾍、鸡胚内感染并传代，此法相当于⼀般微⽣物的传代培养保藏法。
病毒等微⽣物亦可⽤其他⽅法如液氮保藏法与冷冻⼲燥保藏法进⾏保藏。
5．冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、⼲冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
常⽤的有⽢油菌保存：取灭过菌的1.5ml EP管，按照60%—80%⽢油的加⼊量，保存零下80度。
例：取37°培养过夜的菌液2-4ml⽢油6-8ml，充分混匀后分装于1.5ml EP管中，置于-80°冰箱即可。
6．冷冻⼲燥保藏法先使微⽣物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利⽤升华现象除去⽔分（真空⼲燥）。
有些⽅法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻⼲燥保藏法等均需使⽤保护剂来制备细胞悬液，以防⽌因冷冻或⽔分不断升华对细胞的损害。
保护性溶质可通过氢和离⼦键对⽔和细胞所产⽣的亲和⼒来稳定细胞成分的构型。
保护剂有⽜乳、⾎清、糖类、⽢油、⼆甲亚砜等。
⼆.常⽤的器材所要保存的微⽣物；⾁膏蛋⽩胨斜⾯培养基，灭菌脱脂⽜乳，灭菌⽔，化学纯的液体⽯蜡，⽢油，五氧化⼆磷，河沙，瘦黄⼟或红⼟，冰块、⾷盐，⼲冰，95％酒精，10％盐酸，⽆⽔氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养⽫，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40⽬与100⽬筛⼦，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），⼲燥器，真空泵，真空压⼒表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。
这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。
冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。
在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。
这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。
常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。
干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。
在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。
这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。
这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。
液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。
这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。
不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。
在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。
八种菌种保藏方法的优缺点
八种菌种保藏方法的优缺点
保藏菌种是微生物学研究中非常重要的一部分。
以下是八种常见的菌种保藏方法及其优缺点：
1. 冷冻保藏：
优点：简单易行，保藏时间长，适用于大多数微生物。
缺点：需要低温设备，可能会导致部分菌株失活。
2. 干燥保藏：
优点：操作简便，无需低温设备，适用于多种菌株。
缺点：某些菌株可能无法在干燥条件下存活。
3. 液氮冷冻保藏：
优点：温度极低，可长期保存。
缺点：设备昂贵，需要特殊处理。
4. 石蜡包埋：
优点：能够保存非常脆弱的菌株。
缺点：操作复杂，需要特殊设备。
5. 非常规保藏：
例如使用特殊培养基或添加保护剂等方法。
优点：针对特定菌株的保护效果更好。
缺点：需要特殊处理，不适用于所有菌株。
6. 液体保藏：
将菌株保存在培养基中。
优点：适用于快速生长的菌株，易于操作。
缺点：需要定期转移菌株以维持活性。
7. 冷冻干燥：
将菌株冷冻后进行干燥处理。
优点：保藏时间长，易于保存和转运。
缺点：某些菌株可能无法在冷冻干燥条件下存活。
8. 长期传代：
通过连续传代培养菌株。
优点：保持菌株活力，适用于快速生长的菌株。
缺点：需要定期进行传代，较为耗时。
这些方法各有优缺点，具体选择哪种方法取决于菌株的特性、实验条件和保存期望等因素。
菌种科学保藏常用方法
1）生理盐水保藏法；2）蒸馏水保藏法： 瓶口加棉塞，灭菌后备用。
放在盛有无水氯化钙或变色硅胶的大试管内，加橡皮塞，放置4～6℃冰箱中贮藏。 1、斜面低温保藏 （定期移植法）
6、冷冻真空干燥保藏法 每管分装约毫升，注意不要溅污上部管壁，防止杂菌污染和熔封时引起碳化。
❖ 我国常采用的菌种保藏法： 国内、国际常用的菌种保藏法
保护剂的作用是使细胞在冻干过程中免受损伤及减少在保藏过程中的死亡。 2、用单核细胞和单菌落移种传代 然后置于160℃烘箱中处理1～2小时；
斜面低温保藏 、液体石蜡保藏 、冷冻干燥法、 斜面低温保藏 、液体石蜡保藏 、冷冻干燥法、液氮超低温法。
六）、冷冻真空干燥保藏法
❖ 1、基因突变 ❖ 2、连续传代 ❖ 3、不良培养条件及不良保藏条件
பைடு நூலகம்
菌种退化的防止
❖ 1、减少传代次数 ❖ 2、用单核细胞和单菌落移种传代 ❖ 3、菌种纯化 ❖ 4、采用良好培养基和培养条件 ❖ 5、科学的保藏
一、菌种保藏的目的
❖ 菌种保藏的目的是：使菌种长期保藏之后， 仍然保持着原有的生命力、优良生产性能、 形态特征，以及不污染杂菌和不发生虫害。
斜面低温保藏(定期移植法)
这是一种常用最简便的保藏方法。
为了减少培养基水分散发，延长保藏时间，在配制时 琼脂用量加到％，再加入％磷酸氢二钾、磷酸二氢 钾及碳酸钙等缓冲剂，以中和保藏过程中产生的有 机酸。可以用无菌胶塞代替棉塞，既能防止污染， 又可隔绝氧气，避免斜面干燥
细菌：1个月，酵母菌3个月，放线菌、霉菌半 年。
液氮超低温法。 分装应在1小时内完成，装后棉花塞好管口。
这是保存斜面菌种和孢子最简单的方法，有效期可达1年以上。 5)拌匀，装量为试管体积2/5，湿热灭菌后经冷却，接入新鲜培养的菌种，适温培养至孢子长成。
菌种保藏的要点
菌种保藏的要点
菌种保藏的要点包括以下几点：
1. 菌种的分离与培养：选择合适的方法将所需菌种从样品中分离出来，并进行适当的培养，确保纯净度和菌株的健康状态。
2. 菌种的保存介质：选择适合菌种保存的介质，常见的包括琼脂、液体培养基、冰冻保存液等。
保存介质要符合菌株生长的需求，并具备较长的保存时间。
3. 冷冻保存：将菌种培养物经过适当处理后保存在低温环境中，常见的冷冻方式包括冷冻干燥、液氮冷冻等。
冷冻保存可以有效地延长菌株的保存时间。
4. 恒温保存：将菌种培养物保存在稳定恒温环境中，如恒温培养箱或恒温冰箱。
保存温度要根据菌株的生长特性进行调整，通常为4-8摄氏度。
5. 定期传代：定期传代菌株，避免菌株在长期保存过程中发生遗传变异或失活。
6. 保存记录：建立并及时更新菌株的详细保存记录，包括菌株的来源、保存时间、保存方式、特性描述等信息，以便于菌株的溯源和使用。
7. 双重保存：对于重要的菌种，可以考虑进行双重保存，即同时进行冷冻保存和恒温保存，以增加保存的安全性。
8. 定期检测：定期检测保存的菌株，包括菌株的纯度、生长状况和遗传特性等，确保保存的菌株依然具有所需的特性和活力。
以上是常见的菌种保藏要点，可以根据具体的实验需求和菌种特点进行调整和优化。
同时，注意进行合理的菌种管理和使用，以减少菌株的失活和遗传变异，保证科研的可靠性和稳定性。
主要的菌种保藏方法
主要的菌种保藏方法有：
斜面低温保藏法：将菌种保藏于低温环境中，使菌种处于休眠状态，保持其生命力。
液体石蜡保藏法：将菌种浸泡在液体石蜡中，然后保存在低温环境中，使菌种与氧气隔绝，降低其代谢强度，维持其生命力。
滤纸保藏法：将菌种悬液滴加在灭菌的滤纸上，干燥后保存在低温环境中，使菌种与氧气隔绝，降低其代谢强度，维持其生命力。
真空冷冻干燥保藏法：将菌种在低温下进行真空冷冻干燥处理，使菌种处于休眠状态，保持其生命力。
液态氮超低温保藏法：将菌种保藏于液态氮中，使菌种处于极低温度下，与氧气隔绝，降低其代谢强度，维持其生命力。
这些方法都是为了终止菌种的繁殖，降低其代谢强度，使之处于休眠状态，从而保持其生命力。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
保藏期
3~6月 6~12月
评 价
简便 简便
石蜡油封藏法*
沙土保藏法
低温、缺氧
干燥、无营养
各大类**
产孢子微生物
1~2年
1~10年
简便
简便 有效
冷冻干燥法
干燥、无氧、低
温、有保护剂
各大类
5~15年
以上
简便
有效
几种菌种（附图）
4.1菌菌种保藏注意事项及专业机构
注意事项:
1）经长期保藏后菌种存活健在。 2）保证高产突变株不改变现型和基因型， 特别是不可改变初级代谢和次级产物 生产的高产能力。 3、保藏方法经济简便。
4、冷冻真空干燥保藏法
首先把加一定保护剂的菌悬液冷冻，然后在冷冻 状态下予以真空干燥，使微生物细胞处于半永久 的休眠状态，从而达到长久保藏的状态。
冷冻真空干燥操作流程
配制保护剂 菌种 培养 灭菌 制备菌悬液 洗净烘干 装标签
分装安培瓶
预冻 真空干燥 测定水分 熔封管口
加棉塞
检查真空度
包藏
5、液氮冷冻保藏技术
5）医学微生物菌种保臧管理中心（CMCC）； 中国医学科学院皮肤病研究所，南京（ID）∶真菌。 卫生部药品生物制品检定所，北京：细菌。 中国医学科学院病毒研究所，北京：病毒。 6）抗生素菌种保藏管理中心（CACC）； 中圈医学科学院抗生素研究所，北京和四川抗生素工业研究所， 成都：新抗生素菌种。 华北药厂抗生素研究所，石家庄：生产用抗生素菌种 7）兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）； 农业部兽医药品监察所，北京。
2.1菌种保藏的目的及意义
• 目的
把微生物菌种资源在一定条件下保存， 使其存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发 生变异，保持菌株原有培养特性和生理活性。
菌种是国家的一种重要资源，保持优良 菌种的优良性能，可保证高产稳产；在基础研究 中，菌种保藏可保证研究结果获得良好的重复性
• 意义
2.2法律规定
• 2006年3月中华人民共和国农业部发布的《食用 菌菌种管理办法》规定：“农业部主管全国菌种 工作。县级以上地方人民政府农业（食用菌，下 同）行政主管部门负责本行政区域内的菌种管理 工作。”“县级以上地方人民政府农业行政主管 部门应当加强食用菌种质资源保护和良种选育、 生产、更新、推广工作，鼓励选育、生产、经营 相结合。”
冻结保藏法 冷冻干燥保藏法
干燥保藏法 液氮保藏法
大多数细菌
3.4放线菌菌种的保藏
放线菌菌种的长期保藏以保藏放线菌的分生孢 子为主要方式。 保藏方法主要有： 沙土管法、冷冻干燥法、液氮冷冻法
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固体）
主要措施
低温 低温
适宜菌种
各大类 细菌、酵母菌
The end,thank you!
谢谢观赏
4.2 保藏机构
• 国际重要菌种保藏机构
缩写 ATCC 名称 美国标准菌种保藏所，马里兰州，罗克维尔 市
CBS
NCTC
真菌中心收藏所，荷兰，巴尔恩市
国立标准菌种保藏所，英国，伦敦
CCGMC 中科院微生物所普通微生物菌种保藏管理中 心 CCTCC 武汉大学中国典型培养物保藏中心
ARS
美国农业部农业研究服务部
菌种的保藏
生产中常用菌种的保藏
目录
什么是菌种？
菌种保藏意义、基本原理及策略
菌种保藏方法（常见菌种举例）
菌种保藏注意事项及专业机构
1.1菌种简介
• 用于发酵过程作为活 细胞催化剂的微生物， 包括细菌、放线菌、 酵母菌和霉菌四大类。 来源于自然界大量的 微生物，从中经分离 并筛选出有用菌种， 再加以改良，贮存待 用于生产。
优点：方法简单、存活率高，具有一定的保藏效果。 缺点：菌种仍有一定的强度的代谢活动条件，保存时间不长，传代多，菌种 容易变异。 适用菌种：细菌、酵母、防线菌、霉菌
斜面传代保藏法(附图)
2、矿油（液体石蜡）保藏法
1938年发明。 基本方法和原理：是在斜面培养或穿刺培养上
加一层液体石蜡，液体石蜡可以防止失水干燥，
1.2菌种制备
也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经 过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生 产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一 步扩大菌体量及合成产物之用。
种子制备包括孢子制备和菌丝体制备（见上图） ，其中(1)～(4)为孢 子制备过程。保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取 少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天 (或较长时间)。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获 得更多孢子，对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然 培养基。将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基 上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水 分降至10％以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生 产上延续使用半年左右。放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆 浸出液、牛肉膏及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶 孢子培养基中,于28～37℃培养5～14天。所获得的大量孢子可直接作 为种子罐 (6)的种子。如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌 或产孢子不多的,则可采用摇瓶（5）液体培养制得菌丝体，作种子罐 的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、 繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如 葡萄糖）和氮源（如玉米浆等）,及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐 (7)的种子应是生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。 接种量一般在10％～20％。
连续在培养基上（内）移种
菌 菌 种 种 保 保 藏 藏 方 方 法 法
生活态
传代培养保藏法
连续在活宿主上（内）移种
固体斜面 湿法 半固体琼脂柱 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 休眠态 藏在玻璃管内 干法 吸附在合适的载体上
3.2常见几种菌种保藏方法
• 1、斜面传代保藏法
把菌种接种到所需要的斜面培养基上，最适温度 下培养，长出丰满的菌体细胞或孢子后，置于4℃ 的冰箱或冷库中保藏。然后每隔一定时间重新移 接一次，传代保藏。移种时间因菌种不同而异， 几周到几个月不等。
3.1保藏方法
• 暂时保藏法
斜面传代法 穿刺法 液体石蜡法
注意：由于微生物的 多样性，不同的微生 物往往对不同的保藏
甘油管法
砂管保藏法
方法有不同的适应性，
因此，在具体选择保 藏方法时必须对被保 藏菌株的特性、保藏 物的使用特点及现有 条件等进行综合考虑。
• 长期保藏法
砂土管保藏法
滤纸片保藏法
冷冻干燥保藏法 液氮冷冻法
• 麦粒保藏法：麦粒灭菌后接入菌液，培养有菌丝 或孢子时，置通风、避光、干燥处保藏。适用于 一些放线菌、芽孢杆菌、酵母的保藏。 • 无水硅胶保藏法：将细胞悬浮液和等体积的脱脂 灭菌牛奶混匀，加入装有无水硅胶的试管中，然 后将试管放于干燥器内，室温或4 ℃保藏。对于 细菌和真菌效果都较好。
3.3细菌的保藏
保藏方法 定期移植保藏法 液体石蜡保藏法 适合菌种 固氮菌属 芽孢杆菌属 棒状杆菌属 欧文氏菌属 黄杆菌属 微 球菌属 分枝杆菌属 假单孢杆菌属 根瘤菌属 埃希氏杆菌属 无色细菌属 气单孢菌属 芽孢杆菌属 纤维单孢菌属 色杆菌属 埃希氏杆菌属 克雷伯氏菌属 微球菌属 丙酸杆菌属 链球菌 属 变形杆菌属 根瘤菌属 弧菌属 醋酸杆菌属 无色细菌属 色杆菌属 纤维粘菌属 芽孢杆菌属 链球菌菌属 发光杆菌属 变形杆菌属 假单孢杆菌属 醋酸杆菌属 节杆菌属 短杆菌属 芽孢杆菌属 链球菌菌属 棒 状杆菌属 柄细菌属 乳杆菌属 分枝杆菌属 变形杆菌属 假 单孢杆菌属 欧文氏菌属 纤维单孢菌属 产芽孢细属
中国一般保藏机构
l）普通微生物菌种保臧管理中心（CCGMC）； 中国科学院微生物研究所，北京（AS）：真菌，细菌。 中国科学院武汉病毒研究所，武汉（AL－IV）：病毒。 2）农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）； 中国农业科学院土壤肥料研究所， 3）工业微生物菌种保臧管理中心（CICC）； 轻工业部食品发酵工业科学研究所，北京。 4）医学微生物菌种保臧管理中心（CMCC）； 中国医学科学院皮肤病研究所，南京（ID）∶真菌。 卫生部药品生物制品检定所，北京：细菌。 中国医学科学院病毒研究所，北京：病毒。
隔绝空气，降低菌种细胞代谢速率。此法适用 于各类微生物，尤其是不形成芽孢或孢子的真 菌，保藏期限2-10年。 操作方法：矿油灭菌； 菌种培养； 灌
注矿物油 ；低温（5 ℃左右）保藏
3、砂管保藏法
把微生物附着在沙质载体上，置干燥处进行保藏， 适合于保藏放线菌、芽孢细菌和某些真菌。保藏 时间可达几年到几十年。 制备砂管 ： 河砂60目过筛—去杂质漂洗—烘干 分装—灭菌—烘干。 准备菌种：在合适培养基上培养获得孢子。 接种：干法接种，直接将放线菌、真菌孢子接 种于沙管中。湿法接种，先将斜面培养物制成菌 悬液，吸取菌悬液于沙管中（每管约10滴）。 干燥保藏：将含菌沙管放在含干燥剂的干燥器 中吸水干燥。低温或室温下干燥处保藏。
• 其他保藏方法
• 冷冻法：分低温冷冻（－20 ℃）与超低温 冷冻（－196 ℃）两种。适用于细菌、真菌、 病毒等的保藏 • 液态真空干燥法：菌体在恒温液态条件下 进行真空干燥。适用于包括细菌、病毒， 特别适用于冷冻干燥保藏效果不佳的菌种。 • 琼脂穿刺封口保藏法：适用于不产孢子细 菌的保藏