01植物组织培养校本教材

植物组织培养目录

一.植物组织培养综述

1.1概念

1.2 研究历史

1.3技术原理

1.4培养特点

二. 实验实施预先准备

2.1培养基贮备液配制

2.2各种植物激素配制

2.3各种培养基配制和灭菌

三、植物组织培养过程

3.1接种过程

3.2试管苗的培养

3.2.1丛生芽诱导培养

3.2.2继代增殖培养

3.2.3生根诱导培养

3.2.4 移栽定植

植物组织培养

一.植物组织培养综述

1.1概念

植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义组织培养是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

1.2 研究历史

如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活；1902年，德国植

的预言。近几十年来植物组织培养技术已经发展成为一项新兴无性繁殖技术。

1.3技术原理

植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。

1.4培养特点

1.4.1培养条件可以人为控制

组培采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。

1.4.2生长周期短，繁殖率高

组培是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然组培需要一定

设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。

1.4.3管理方便，利于工厂化生产和自动化控制

植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。

二.实验实施预先准备

2.1培养基贮备液配制

2.1.1培养基简述

培养基是植物组织培养中离体植物材料赖以生存的“土壤”。不同组织培养类型、外植体需要的培养基配方不同，组织培养是否成功，培养基的选择具有重要作用。目前常用的培养基有MS、B5、White等。无论何种培养基，都由矿物营养、维生素、碳源、植物激素、有机附加物等无类物质组成。在植物组织培养中应该培养植物的种类和部位，选择最适的培养基，才能获得植物组织培养的成功。本实验以MS为基本培养基。

2.1.2 仪器试剂

仪器和用具

分析天平、恒温水浴锅、电炉、量筒、移液管、烧杯、容量瓶、试剂瓶等

试剂

MS培养基、植物激素BA、植物激素NAA

2.1.3步骤

1）根据扩大倍数和配制母液量计算每种化合物称取量；

2）称取大量元素化合物，分别溶解后顺次逐个加入并混合，加水定容止所需体积；

3）称取微量元素化合物，分别溶解后顺次逐个加入并混合，加水定容止所需体积；

4）称取FeSo4 .7H2O和Na2—EDTA，分别溶解后混合，加水定容止所需体积；

5）称取各种维生素和氨基酸，分别溶解后混合，加水定容止所需体积；

6)称取25mgBA先溶解于1mol/L HCL中，再加水定容至25ml（1mg/ml）；

7）称取25mgNAA，用NaOH溶解后再加水定容至25ml（1mg/ml）。

附表：MS培养基母液配制表

2.1.4注意事项

1)注意大量元素母液配制的程序：除钙盐外，其他大量元素分别称量并按顺序融于蒸馏水中，钙盐单独配置，组合混合后，用蒸馏水定容；

2)微量元素母液配制的小窍门：因其用量小，为称量方便及精确起见常配置成100或1000倍母液；

3)注意不同母液的储存方法：激素母液装入棕色试剂瓶中，铁盐，有机母液，激素母液放于4度冰箱中，大量元素和微量元素母液常温下保存于柜子中，NaOH瓶子的瓶塞上应缠一圈纸。

2.2各种植物激素配制

2.2.1植物激素配制方法总结

原则植物激素：每种激素必须单独配制成母液，浓度为0.1mg/ml，0.5mg/ml，1.0mg/ml，激素浓度的表示方法多种，ppm（mg/L）、mol/L、mg/ml，用时根据需要取用。

●可高压灭菌: IBA，NAA ，6-BA，2,4-D;、KT

●不可高压灭菌:ZT、2-IP 、IAA，GA3

●配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙

醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。

●细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐

酸溶解，再用蒸馏水定容。

●配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。