经典：第五章--植物离体快速繁殖

义比较大的种类、品种、类型。 第二，选择健壮的植株： 第三，选择合适的部位
茎尖：生长速度快，遗传稳定，无病毒分布。但材料来源有限，为此茎段也是重 要来源。
叶片：采用幼嫩的叶片较好。如：秋海棠、矮牵牛、菊花等。 花（花蕾）：据一些学者的观点，在花诱导之前细胞的脱分化容易发生，故外 植体常取发育早期阶段的花，即花蕾。 胚：大多数花卉都可用胚培养的方式进行快繁，如：百合、羽叶甘蓝、蝴蝶 兰、卡特兰等。
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外植体的选择
第四，取材季节合理： ①选取外植体的季节和时间，对培养材料的启动和培养至关重要。 ②一般在生长季—春夏。
第五，考虑器官的生理状态和发育年龄； 第六，选择大小合适的外植体；
外植体过大，不易灭菌，过小，不易成活。一般0.5-1cm；脱毒培养0.2-0.5cm。
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外植体的灭菌
无菌的外植体材料是植物组织培养成功的重要前提与可靠保证，而消毒
取1-2㎝顶梢
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茎尖培养时需要注意的问题
一般都采用稍大一些的茎尖来培养。之所以用茎尖培养，是为了脱 除病毒病的危害，因为只有茎尖未受病毒侵染。
如果是经过病毒鉴定的母株，或该种植物有无病毒并不在考虑之中， 当然最好是采用腋芽，或带腋芽的茎切段。过小的茎尖只有很低的 存活率，并且最初生长太慢。
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植物离体微繁的特点
1.繁殖系数高，繁殖周期短，繁殖速度快：它的高速度是以下三种因素构 成的：①有较高的增殖倍数;②较短的增殖周期；③周年生产。
2.应用广泛，是推广良种的重要手段：占用空间小，生产效率高，省时、 省工、节约土地。
3.繁殖材料用量少，不受季节限制，可实现工厂化生产； 4.能获得无毒苗木无性系 5.木本植物应用潜力大：繁殖各种珍稀、濒危、名贵、突变物种。
对基质中营养物质的吸收。
4. 在外植体污染严重时，应用流水漂洗1h以上或先种子培养得到无菌种苗，
然后用其各个部分建立组织培养。
5.Hgcl2效果最好，但较难从外植体去除，
对人的伤害也最大，用后要用水冲洗至少5次。
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外植体的接种和培养
外植体的接种—无菌操作 外植体表面灭菌—切取分离—无菌培养基
外植体的培养 光照、温度、湿度、培养基pH、气体调节
则是获得无菌外植体的有效方法。取来的外植体需要经过仔细的表面灭菌处
理，外植体灭菌常用消毒剂。
消毒注意事项：
1.正确选择消毒剂种类及浓度、消毒时间，减少组织的死亡.
2. 在用消毒剂对材料表面消毒后，必须用无菌水漂洗3次以上以除去残留杀
菌剂，但用酒精消毒时，则不必漂洗。
3. 与消毒剂接触过的切面在转移至无菌基质前需切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞
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1) 顶芽和腋芽的发育
顶芽和腋芽在离体培养中都可被诱导而发育。 从芽萌发出苗，即枝条，枝条向上延伸，新形成的芽将逐渐发育。 如果将新形成的芽切割下来，使之再萌发出新的枝条，在适当的条件下 使枝条生根，并种植到土壤中去，便完成了植物再生的全过程。 适宜这种再生繁殖的植物，在采样时只能采用顶芽，侧芽或带有芽 的茎切段，其它如种子，萌发后取枝条等也可以。
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1.1 植物离体微繁过程
第一阶段 稳定无菌培养体系的建立时期 第二阶段 稳定培养系的增殖、生长和增状时期 第三阶段 诱导茎芽生根形成小苗时期 第四阶段 生根小苗移栽和驯化时期 第五阶段 商品苗培育时期
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第一阶段：稳定无菌培养体系的建立时 期
任何植物细胞或组织培养体系的建立，都必须采制适宜的外植体。 外植体的选择有什么要求呢？ 第一，选择优良的种质：① 易于离体培养的种类、品种、类型；② 生产或研究上意
第五章 植物离体微繁
主要内容： 1. 植物离体微繁 2. 影响植物离体微繁成功的因素 3. 植物离体微繁过程中常见异常现象及对策
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思 考:
植物有哪些繁殖方法？
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分株繁殖 压条繁殖
播种繁殖
嫁接繁殖
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扦插繁殖 组织培养繁殖
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1.植物离体微繁
植物离体微繁(micropropagation)：是指利用植物组织培养技术进行的 一种营养繁殖方法，是常规营养繁殖方法的一种扩展和延伸。是在短期内 获得大量遗传性状一致的个体的方法。属离体无性繁殖(propagation in vitro) 。又称为快速繁殖（rapid cloneprogagation）。
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外植体接入培养基
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注意
无菌培养体系的建立需注意下面两个问题： 1.采样和表面灭菌； 2.首次接种污染率的估算与对策： 首次接种，小容器，多数量，尽 量分散，互相隔离，效果最好。
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第二阶段：稳定培养系的增殖、生长和增 状时期（诱导外植体生长与分化）
从植物组织培养积累的知识中，可将植物再生过程划分为四种方式： 1) 顶芽和腋芽的发育 2) 不定芽的发育 3) 体细胞胚状体的发生与发育 4) 原球茎的发育
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接种材料修整与冲洗
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材料表面灭菌
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外植体切割
1.叶片0.5cm×0.5cm 2.微茎尖0.2-0.5mm 3.带节茎段0.5-1.0cm 4.芽丛分离
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材料处理及消毒
① 顶梢切割成0.5－1.0cm的茎尖； （除叶,剥去休眠芽的鳞片)；
② 茎尖流水冲洗2－4h； ③ 75%酒精迅速漂洗30s； ④ 0.1%升汞或稀释20倍的次氯酸钠液消毒5－8min(取自老枝条上的可适 当延长时间)； ⑤ 无菌水冲洗3-5次。
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茎尖培养类型
根据培养目的和取材大小分为： 微茎尖培养 普通茎尖培养
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普通茎尖指几毫米到几十毫米的芽尖及侧芽
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微茎尖为0.3-0.5mm
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普通茎尖培养方法
材
料
取
处
接
材
理
及
种
消
毒
培
驯 化
养Βιβλιοθήκη Baidu
移 栽
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取材
①直接取材： 在生长旺盛、枝条健壮、无病的母株
上选生长不久、杂菌污染少的顶梢（1 －2cm）（取前可喷杀菌药），取顶芽 或侧芽。 ②从试管苗获取。
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幼嫩茎尖 营养芽
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茎尖培养
在顶芽的培养中，还有较为特殊的一种方式，即采用极其幼嫩的顶芽的 茎尖分生组织为材料，由它作为外植体。过去常被称为“分生组织培养”， 但目前多数学者认为以称作“茎尖培养”为宜。 真正的茎尖分生组织是被限制在一极小的范围内，那里的细胞几乎没有 分化，在活跃地进行细胞分裂，保持着强烈的再生分化能力，这个部分不 包括叶原基，处于茎的极顶尖处。