1简述亲和色谱分离技术的基本原理

1简述亲和色谱分离技术的基本原理？

答：亲和色谱是利用亲和吸附作用分离纯化生物物质的液相色谱法。亲和色谱的固定相是键和亲和配基的亲和吸附介质。由于目标产物基于生物亲和作用吸附在固定相上，具有高度选择性，因此，亲和色谱操作与一般的固定床吸附操作方式相似，多采用断通式前端方法。

一般亲和色谱分离操作过程分： 1进料 2杂志清洗 3目标产物脱洗 4色谱柱再生。

2、举例简述亲和色谱分离蛋白的流程？

因为：三嗪类色素配基的特点是化学稳定性高，价格便宜，适应性广，亲和力适中，蛋白质结合容量大，因此，色素亲和色谱的操作成本低廉，有很高的实用价值。

答：以色素亲和色谱纯化脱氢酶为例：

1 加入3L菌体细胞抽提液；

2 用低溶度盐溶液A清洗，除去未被吸附的杂蛋白；

3 逐次到溶度盐溶液B和辅酶I溶液C洗脱，分别获得了羟基酪酸脱氢酶（3-HDH）和苹果酸脱氢酶（MHM）活性峰；

4 收集的3-HDH活性部分超滤浓缩至200ml后透析脱盐；

5 加入到另一个色素亲和柱，继续进行纯化；

6 经过两步色素亲和色谱纯化，3-HDH比活提高213倍（第一步34.4倍，第二部6.2倍）最终收率为78%。

A---10mmol/L磷酸盐缓冲液，PH=7.5(5L)

B----A液+1.0mmol/LKCl，PH=7.5(5L)

C----B液+2mmol/L NADH, PH=7.5(3L)