实验九-动物组织中核酸的提取和鉴定

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动物组织和细胞中核酸的提取和测定_

实验九动物组织和细胞中核酸的提取和测定

第一部分动物组织和细胞中DNA和RNA的提取

【实验目的】

学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法

【实验原理】

1.从动物组织和细胞中提取DNA

DNA存在于细胞核中。提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。

2.从动物组织和细胞中提取RNA

RNA存在于细胞质及核中，是一种极易降解的核酸分子。为了快速从细胞中分离完整的RNA，许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA 酶失活，使释放出的RNA不被降解。细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，核DNA，蛋白质和细胞残片，通过酚，氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA最终与其它细胞组分分离开来。

【实验材料】

1.实验器材

研钵和研棒，匀浆机，橡胶刮棒，低温冷冻离心机，恒温水浴，宽口移液管，锤子，塑料袋，涡旋。

2.实验试剂

(1)裂解缓冲液：10mmol/L Tris-Cl(PH8.0)，0.1mol/L EDTA(PH8.0)，0.5%(m/V)SDS，20µg/mg无Dnase 的胰RNase，裂解缓冲液的前三种成分可预先混合并于室温保存。RNase在用前适量加入。

实验九DNA的粗提取与鉴定

【实验九】DNA的粗提取与鉴定

陈小珺（江西省赣州市第三中学341000）

1 教学建议

在本实验的教学中，教师应注意以下几点。

1.1 实验材料必须准备充足。本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。（每100ml鸡血加入3g柠檬酸钠）

1.2 盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。

1.3 获取较纯净的DNA的关键步骤。

1.3.1 充分搅拌鸡血细胞液：将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。

1.3.2沉淀DNA时必须用冷酒精：体积分数为95%的酒精在冰箱中至少存放24 h。

1.3.3正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA 分子。进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动5 min。

2 实验原理的补充介绍

2.1 DNA的释放本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。一是因为鸡血细胞核的DNA 含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。同时,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),于是释放出DNA,当然也有RNA。但是,释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起。

肝组织中核酸的分离与鉴定

动物组织中核酸的提取与组分的鉴定

[适用对象]药学、药物制剂、中药学、中药学（国际交流方向）、制药工程、中药学（知识产权保护方向）、生物工程专业

[实验学时] 4学时

一、实验目的

掌握核酸分离的方法及各成分的鉴定，熟悉台式离心机的使用，并学会小鼠的处死。

二、实验原理

组织细胞中的核酸大部分与蛋白质结合而形成核蛋白。核蛋白被三氯醋酸沉淀后，用10%NaCl溶液提取核酸的钠盐，再加入乙醇可使核酸钠沉淀析出。

核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸（DNA）均可被硫酸水解产生磷酸、碱基（嘌呤和嘧啶）和戊糖（RNA含核糖，DNA含脱氧核糖）。此三类化合物可用下述方法鉴定之。

1、磷酸与钼酸铵作用产生磷钼酸，后者在还原剂氨萘酚磺酸作用下形成蓝色的钼蓝。

2、嘌呤与硝酸银产生灰褐色的嘌呤银化合物。

3、核糖经浓盐酸或浓硫酸作用生成糖醛，后者和3，5-二羟甲苯缩合而成绿色化合物。

4、脱氧核糖在浓酸中生成ω-羟（基）-γ-酮（基）戊醛，它与二苯胺作用生成蓝色化合物。

三、仪器设备

台式离心机

四、相关知识点

核酸组成知识；化学呈色反应知识；离心技术知识。

五、实验步骤

（一）制备匀浆将小白鼠1只，拉断脊椎致死，剖腹取出全部肚组织；用清水冲净血污后，用滤纸吸干，用剪刀剪碎，再加0.9%NaCl 溶液2ml于研钵中制成匀浆。

（二）分离提取取全部匀浆于离心管（或小试管）内，加2%三氯醋酸2ml，用玻璃顶替搅匀，静置3分钟，3000转/分离心3分钟。3000转/分离心3分钟。弃上清液，于沉淀中加入10%NaCl2ml，充分混匀；置沸水浴中加热8分钟，用玻璃顶替边加热边搅拌（防止玻管底破裂），使之充分生成核酸钠化合物。取出放冷，3000转/分离心3分钟。将上清液倒入另一试管内，逐滴加入95%冷乙醇2ml，边加边搅拌，待析出白色沉淀。静止5分钟后，再3000转/分离心5分钟，倾去上清液后沉淀备用。

09 生物化学实验--分别提取动物组织中的DNA和RNA

分别提取动物组织中的 DNA 和 RNA

【目的】

1 ．掌握分别提取动物组织中 DNA 和 RNA 的方法。

2 ．熟悉分别提取动物组织中 DNA 和 RNA 的原理。

【原理】

动物组织细胞中的核糖核酸（ RNA ）与脱氧核糖核酸（ DNA ）大部分与蛋白质结合，以脱氧核糖核蛋白（ DNP ）和核糖核蛋白（ RNP ）的形式存在。根据核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白在不同浓度电解质中溶解度有明显差别而进行分离。例如在 0.14M 氯化钠溶液中 RNP 溶解度相当大，而 DNP 溶解度极小，仅为在水中溶解度的 1% ；在 1M 氯化钠溶液中， DNP 的溶解度比在水中的溶解度大两倍。因此，常用 0.14M 氯化钠溶液提取 RNP ，此时 DNP 溶解度极小，而与 RNP 分离。加入蛋白质变性沉淀剂氯仿—异丙醇（十二烷基硫酸钠、热酚等），可除去蛋白质。此时经离心，溶液分为上中下三层，氯仿比重大在下层，中层为变性蛋白质凝胶，上层为核酸溶液。再利用核酸不溶于乙醇等有机溶剂的性质，使核酸从溶液中析出。

动物组织细胞中含有核酸酶，在一定温度下可被 Mg 2+ 、 Fe 2+ 、 Ca 2+ 等离子激活，为避免该酶对核酸的水解，可在核酸提取液中加入适量螯合剂（如EDTA 、柠檬酸），以除去这些离子，降低核酸酶的活性。同时注意，整个分离提取过程应在低温下进行。

【器材】

1 ．新鲜肝组织

2 ．研钵

3 ．离心机与离心管

4 ．吸量管与滴管

5 ．玻棒

【试剂】

1 ． 0.14M NaCl-0.01MEDTA （或 0.1M NaCl -0.05M 柠檬酸钠溶液， PH=6.8 ）

实验九动物肝脏DNA提取和鉴定

（1）操作简单、制备容易快速、凝胶机械性能好、电泳速度快、分离DNA片段范围广、样品不需事先处理就可以进行电泳。（2）凝胶结构均匀，对样品吸附小，电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。（3）琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光检测及定量测定。（4）电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。
细胞破碎方法—机械物理法
• 反复冻融法：将待破碎的细胞冷至－15℃到－ 20℃，然后放于室温(或40℃)迅速融化，由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。
• 超声波处理法：借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。使用时注意降温，防止过热。
• 冷热交替法：在90℃左右维持数分钟，立即放入冰浴中使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以被破碎。
（3）不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳
分离。
琼脂糖浓度/%
0.3
0.6
0.7
0.9 1.2 1.5
2.0
线状DNA大小/kb 60-5 20-1 10-0.8 7-0.5 6-0.4 3-0.2 2-
0.1
注：DNA片段在5-500bp之间时，一般用聚丙烯酰胺凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳具有以下优点：
• 11. 观察
关闭电源，取出胶床，在紫外检测仪下观察凝胶中的 DNA（红橙色荧光）。

实验九动物组织中核酸的提取和鉴定

实验七

动物组织中核酸的提取和鉴定

【原

理】

动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)⼤部分与蛋⽩质结合形成核蛋⽩。核蛋⽩可被三氯醋酸沉淀，再⽤95％⼄醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后⽤10％NaCl 溶液提取出核酸的钠盐，加⼊醇可使核酸钠沉淀析出。

先⽤⽔由动物肝中提出核蛋⽩，再籍酚将核酸与蛋⽩质之间的结合键断裂，并⽤⼄醚抽提去蛋⽩质及其它杂质，最后⽤⼄醇将核酸沉淀。

核酸(RNA、DNA)可被硫酸⽔解产⽣磷酸。有机碱（嘌岭、嘧啶）和戊糖（核糖、脱氧核糖）。此三类化合物可⽤下列⽅法鉴定之。

1、磷酸：能与钼酸试剂作⽤⽣成磷钼酸，后者在还原剂的作⽤下。还原成兰⾊的钼兰。常⽤的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维⽣素C 等。

H 3PO 4＋12H 2MoO 4→H 3PO 4·12MoO 3+12H 2O H 3PO 4·12MoO 3

H 3PO 4·6MoO 3·3Mo 2O 5

2、嘌呤碱：能与苦味酸作⽤形成针状结晶

3、戊糖：

(1)核糖：经与强酸(盐酸与硫酸)共热⽣成糠醛，后者可与3;5⼆羟甲基苯缩合成绿⾊化合物。

(2)脱氧核糖：在强酸中加热，可⽣成ω—羟基γ—酮基戊醛，后者再与⼆苯胺作⽤⽣成⼀蓝⾊化合物。上述⼆反应如下

【操

作】(⼀)核酸提取l、⽤酚提取法：（1）取⼩⽩⿏⼀只，断头处死，剖腹取肝，置于研钵中，加⼊玻璃少许，研磨⾄糊状后，加⼊蒸馏⽔3ml，继续研磨约三分钟。

（2）于该研钵中再加酚液5ml，研磨约⼗分钟后，倒⼊—-圆底离⼼管中，离⼼5分钟（约2000转/分钟）。

动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定

离心技术
离心机根据应用目的分为制备和分析两种用途。
制备用离心机是应用最广泛的离心机，根据其性能可分为低速离心机、高速离心机和超速离心机。
离心机和离心法
一种通过使样品绕离心转轴的中心旋转而在其上产生一个远大于地球重力的仪器。
不同大小、不同形状、不同密度的颗粒在同一离心力场内会以不同的速度沉降而分离。
3、超速离心机
一类速度非常高的离心机，最大转速可超过30 000r/min，最大RCF可达600 000g ，用于沉淀核糖体、膜泡等小的细胞器和生物大分子。具有精密的制冷、真空装置 4、微。量离心机
台式,能迅速加速到12 000r/min,10 000g 用于短时间(0.5 ~1.5min)对大颗粒沉淀、小体积溶液(小于1.5ml)的沉降，尤其用于从液体培养基中快速分离细胞。
分
肝
离
匀离心提
浆
取
制
核
备
酸
水解鉴核定酸
【实验原理和操作】
1.制备肝匀浆猪肝 + 生理盐水
肝匀浆
匀浆器
【实验原理和操作】
2.分离提取核酸
肝匀浆倒入刻度离心管(4ml)
加2%三氯醋酸4ml,搅匀
静置3min，3000转离心5min
倾去上清液，沉淀中加95%乙醇4ml，搅
匀
沸水中加热至沸

分别提取动物组织中的DNA和RNA及核酸的定性分析-经典PPT课件

分别提取动物组织中的DNA和RNA及核酸
的定性分析
目录
实验目的 1．掌握分别提取动物组织中DNA和RNA及测
定核酸的组成从而定性分析DNA或 RNA的方法。 2．熟悉分别提取动物组织中DNA和RNA及核酸的组成从而定性分析DNA或RNA的原理。
目录
实验原理
（一）核酸的提取
1. DNP和RNP的分离
目录
实验原理（二）核酸的鉴定 2. 成分的鉴定（1）嘌呤碱的鉴定原理
嘌呤碱在弱碱性环境中能与硝酸银作用形成嘌呤银化合物。初为乳白色，稍放久为浅灰褐色絮状物。
目录
2. 成分的鉴定
实验原理
（2）核糖的鉴定原理
CHO
CHOH 浓HCl
CHOH
CHOH CH2OH
3H2O
CHO O
糠醛
FeCl3
在不同浓度电解质中溶解度有明显差别
0.14M
2. 核酸与蛋白质的分离 DN
氯仿-异丙醇
P
极小
1M 大两倍
3. 核酸的沉淀
RN P
相当大变化不大
目录
实验原理（二）核酸的鉴定 1. 核酸的水解
RNA和DNA均可被硫酸水解生成含氮碱（嘌呤碱与嘧啶碱）、戊糖（RNA中的核糖与DNA中的脱氧核糖）和磷酸。
目录
2．核酸的鉴定
实验操作

动物组织中核酸的提取与鉴定实验方案

动物组织中核酸的提取与鉴定
实验原理
本实验运用盐溶液法用动物肝脏分离制备DNA 核酸在细胞内都与蛋白质结合成核蛋白，要分离核
酸必须使核酸与蛋白质分离并除去蛋白质。已知在0.14mol/LNaCl溶液中核糖核蛋白溶解度最
大，而脱氧核糖核蛋白溶解度最小，在1mol/LNaCl 溶液中脱氧核糖核蛋白溶解度增大，核糖核蛋白的溶解度则明显下降，根据这种特异性即可把这两种核蛋白分开
实验步骤
加2倍体积预冷乙醇，如用滴管滴加，边加边慢慢顺一个方向在烧杯中搅动，有粘稠维丝物缠在玻璃棒上，直至再无丝状物缠上为止
将玻璃棒上的DNA取下，依次用75%乙醇、 95%无水乙醇洗一次，放入干净量瓶中至于干燥器中抽干
十二烷基硫酸钠（SDS）
组织捣碎机
离心机
50g/L 十二烷基硫酸钠（SDS）溶液氯仿—异戊醇混合液（氯仿：异戊醇=24：1）氯化钠溶液（75%乙醇、95%乙醇）
试验器材
材料：动物猪肝（猪羊兔）组织捣碎机、离心机、量筒、烧杯、锥形瓶、
玻璃棒、离心管、称量瓶、滴管等
实验步骤
取动物肝脏浸入预先在冷水浴中冷却的0.14mol/L NaCl-0.01mol/L EDTA溶液，反复洗涤几次，直至组织无血为止
将洗净的组织剪成碎块，称取10g，加入20ml 0.14mol/L NaCl-0.01mol/L EDTA溶液，在组织捣碎机中匀浆，4℃ 4000r/min离心15分钟后弃上清液，在沉淀中加入4倍体积的低温0.14mol/L NaCl0.01mol/L EDTA溶液,搅匀后离心，弃上清液，如此反复2-3次，保留沉淀

核酸的提取与鉴定

3．戊糖
(1)核糖：用硫酸使之生成糠醛，糠醛与3,5-二羟甲苯缩合而成为一绿色化合物：
(2)脱氧核糖在硫酸作用下生成β,ω-羟基-γ-酮基戊糖，后者与二苯胺作用生成蓝色化合物：
实验试剂
1．钼酸铵试剂：钼酸铵2.5g溶于20mI蒸馏水中，再加入5mol/L硫酸 30ml，用蒸馏水稀释1OOml。
（四）DNA与RNA成分的鉴定
1．磷酸的鉴定取试管2支，按表操作
管号
测定对照
水解液
5%硫酸
钼酸铵试剂
氨基奈酚磺酸
10滴
—
5滴
20滴
Biblioteka Baidu
—
10滴
5滴
20滴
2．嘌呤碱的鉴定:取试管2艾，按表操作
管号
测定对照
水解液
20滴 —
5%硫酸
— 20滴
浓氨水
数滴使呈碱性数滴使呈碱性
5%AgNO3
10滴 10滴
3．倾去上层乙醇。将离心管倒置于滤纸上，使乙醇倒干。沉淀中加入 10%氯化钠溶液4ml，置沸水浴中加热8 min ，并用玻棒搅拌。取出待冷却以2500r/min离心l0min 。
4．将上层清液量取体积后倾人一小烧杯内。若不清亮可重复离心一次。
5．取等量在冰浴中冷却的95%乙醇（在冰箱中），逐滴加入小烧杯内。即可看见白色沉淀析出。静置l0min后，转人离心管 3000/min，离心10min，即可得核酸的白色钠盐沉淀。

动物组织核酸的分离、鉴定和含量测定

实验报告要求
• 实验结果以研究论文形式提交电子版本 • 包括摘要、前言、实验材料和实验方法、实验结果和分析、讨论和参考文献
DNA标准曲线的制作和样品测定
管试剂（ml） 0 0.0 2.0 4.0 1 0.4 1.6 4.0 2 0.8 1.2 4.0 3 1.2 0.8 4.0 号 4 1.6 0.4 4.0 5 2.0 0 4.0 样品1 2.0 0 4.0 样品2 2.0 0 4.0
DNA标准溶液（200 µg/ml） H2O 二苯胺试剂
DNA和RNA的结构
基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交 (包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子 DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。
实验步骤
1.2g
挤干乙醇后加 1mlSC液溶解

动物组织中的核酸提取与鉴定

动物组织中核酸的提取与鉴定

一、原理

根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离，然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白，使核酸释放出来，再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出，达到分离提纯的目的。

二、试剂

1.地衣酚（orcinol）试剂：

称取100mg地衣酚溶于100ml 浓盐酸中，再加入100mgFeCl3·6H2O，该溶液应在使用前新鲜配制。

2.二苯胺试剂：

称取1g二苯胺（经重结晶）溶入100ml冰醋酸中，再加入2.75ml浓H2SO4摇匀，冰箱内保存备用。

3. 0.14mol/L氯化钠溶液（内含0.01mol/L柠檬酸），250ml；

4. 1mol/L氯化钠溶液，250ml；

5. 95%乙醇（冷）；

6. 氯仿；

7. 异戊醇

三、器材

a)冷冻离心机（3000rpm）

b)组织捣碎机或组织匀浆器

c)不锈钢剪刀

d)冰浴

e)试管、试管夹

f)量筒、吸管

g)带塞比色管、带塞离心管

h)玻棒、烧杯

i)电炉等

三、方法

1. 制匀浆

将新鲜肝脏或冷冻肝脏称重后用冷的0.14mol/L氯化钠溶液（内含0.01mol/L柠檬酸）洗去血水，用不锈钢剪刀将肝脏剪成碎块，放入组织捣碎机中加入2倍体积的0.14mol/LNaCl 溶液（内含0.01mol/L柠檬酸）制备匀浆。

将匀浆置离心机中离心20min（3000rpm）。上层液倾出留待抽提RNA ，下层用二倍体积冷的1mol/LNaCl溶液抽提1h，待分离DNA核蛋白。

2. 核酸的抽提

2.1RNA的提取

0.14mol/L的NaCl抽提液（内含RNA核蛋白）加入等体积的氯仿和1/40体积的异戊醇，置带塞离心管中，振摇30min，此时提取液为乳白色混悬液，以3000rpm离心15min，离心物呈三层。

实验九动物组织中DNA的提取与鉴定PPT课件

未来可以通过优化实验流程，缩短提取时间，提高DNA提取效
率。
引入先进技术
02
考虑引入更先进的DNA提取与鉴定技术，提高实验的准确性和
可靠性。
拓展实验应用范围
03
可以将本实验的方法应用到其他动物组织或生物样本中，拓展
其实用价值。
感谢您的观看
THANKS
DNA的理化性质决定了其在生物体内的稳定性和功能，了解这些性质有助于更好地理解基因的表达和调控。
在动物组织中提取高质量的DNA是实验成功的关键，需要选择合适的破碎细胞方法和洗涤条件。
DNA的鉴定是实验过程中的重要环节，可以验证提取的DNA质量和纯度，为后续的分子生物学实验提供保障。
02
实验收获与体会
理论知识应用
通过实验，我们将理论知识与实践相结合，加深了对DNA提取与鉴定的理解。
团队协作能力提升
在实验过程中，小组成员之间互相协作，提高了团队协作能力。
实验态度与精神
实验培养了我们严谨的实验态度和勇于探索的精神，为今后的科研工作打下了坚实的基础。
实验改进与展望
优化实验流程
01
电泳技术的局限性
琼脂糖凝胶电泳技术虽然能够较好地分离DNA条带，但对于较长片段和大分子量DNA的分辨率有限，未来可考虑采用其他电泳技术或优化现有技术。
纯度分析的注意事项

动物肝脏中DNA的提取和鉴定

一、实验目的

1.学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。

2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。

3.学习核酸染色的方法。

二、实验原理

为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。由于DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。动植物中小牛胸腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物中，谷氨酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。

从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。对于低等生物，如从病毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。细菌DNA相对分子质量较大，一般达2×109Da。因此易被机械张力剪短。细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等。

1.DNA的基本功能

生物遗传信息复制的模板和基因转入的模板，是生命遗传繁殖的物质基础，也是个体生命活动的基础；作为DNA分子中的某一区段，有复制、转录和翻译等主要功能称为基因。

2.核酸的结构与功能

核酸（nucleic acid)是以核苷酸为基本组成的生物大分子。天然存在的核酸有两类，一类为脱氧核苷酸（deoxyribonucleic acid,DNA)，另一类为核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)。DNA存在于细胞核和线粒体中，携带遗传信息。RNA存在于细胞质和细胞核内，参与细胞内DNA遗传信息的表达。

动物组织中核酸的提取与鉴定实验报告

1. 引言

核酸（DNA和RNA）是生物体内存储遗传信息和调控基因表达的重要分子。对于研究生物的遗传特征和进化过程，核酸的提取与鉴定是必不可少的实验步骤。本实验旨在通过提取动物组织中的核酸，使用常用的鉴定方法分析核酸的质量和纯度。

2. 实验原理

核酸提取与鉴定的基本原理是将动物组织中的核酸从其他

的细胞组分（如蛋白质、唾液等）中分离出来，并通过吸光度测定和凝胶电泳等方法进行核酸的定性和定量。

2.1 核酸提取

核酸提取的步骤包括细胞破碎、蛋白质的去除和核酸的沉淀。常用的核酸提取方法包括酚-氯仿法、柱式提取法和商业

试剂盒法等。

2.2 核酸定性和定量

核酸的定性主要通过凝胶电泳进行，通过核酸带的迁移速度和分子量，可以初步判断核酸的纯度和是否受到降解。核酸的定量则是通过吸光度测定，利用核酸特征的吸收峰波长（260 nm）测定核酸的浓度。

3. 实验材料与方法

3.1 实验材料

•动物组织样品

•细胞破碎缓冲液

•蛋白酶

•酚-氯仿提取液

•乙醇

•TE缓冲液

•焦亚硫酸铵

•乙酸

•0.8%琼脂糖凝胶

3.2 实验步骤

1.将动物组织样品切碎并加入细胞破碎缓冲液，用超声波破碎细胞壁。

2.加入蛋白酶进行蛋白质的消化。

3.加入酚-氯仿提取液，离心分离上层的核酸。

4.将上层的核酸转移到新离心管中，加入等体积的冷乙醇沉淀核酸。

5.离心沉淀的核酸，去除上层的乙醇并用TE缓冲液重悬核酸。

6.使用吸光度计测定核酸的纯度和浓度。

7.进行凝胶电泳，观察核酸的迁移带和分子量。

4. 结果与分析

4.1 核酸提取结果

猪肝中核酸的提取与鉴定[1]

1．将匀浆5m1置于离心管内，立即加入20%三氯醋酸5ml，用玻棒搅匀，静3min后，以3000r/min离心l0min。 2．倾去上清液，沉淀中加入95%乙醇5m1，用玻棒搅匀。用一个装有长玻璃管的木塞塞紧离心管口，在沸水浴中加热至沸，回馏 2min。注意乙醇沸腾后将火关小，以免乙醇蒸气燃烧。冷却后2500r/min 离心l0min。（脱脂） 3．倾去上层乙醇。将离心管倒置于滤纸上，使乙醇倒干。沉淀中加入 10%氯化钠溶液4ml，置沸水浴中加热8 min ，并用玻棒搅拌。取出待冷却以2500r/min离心l0min 。 4．将上层清液量取体积后倾人一小烧杯内。若不清亮可重复离心一次。 5．取等量在冰浴中冷却的95%乙醇（在冰箱中），逐滴加入小烧杯内。即可看见白色沉淀析出。静置l0min后，转人离心管 3000/min，离心10min，即可得核酸的白色钠盐沉淀。
实验试剂
1．钼酸铵试剂：钼酸铵2.5g溶于20mI蒸馏水中，再加入5mol/L硫酸 30ml，用蒸馏水稀释1OOml。 2．氨基奈酚磺酸：商品氨基奈酚磺酸(1，2，4-Amino- naphthol Sulfonic Acid)为暗灰色。用下法提纯后使用:在100ml 蒸馏水中(90℃)溶解15g亚硫酸氢钠及1g亚硫酸钠，加入1.5g商品氨基奈酚磺酸，搅拌使大部分溶解(仅少量杂质不溶解)，趁热过滤，再迅速使滤液冷却。加入lml浓盐酸，则有白色氨基奈酚磺酸沉淀析出。过滤并洗涤固体数次。再用乙醇洗涤直到纯白色为止。最后用乙醚洗涤，并将固体放在暗处，使乙醚挥发。将此提纯的氨基奈酚磺酸保存于棕色瓶中备用。