线粒体膜电位(MMP)检测的具体步骤及方法

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线粒体膜电位测量

线粒体功能状态和不少疾病的密切相关，线粒体膜电位（MMP）则是反映细胞内线粒体功能状态的重要参数之一。本人整理一下线粒体膜电位测量方法，包括主要测量仪器和常用荧光探针，欢迎补充讨论。

常用测量仪器：（1）普通荧光显微镜；（2）激光扫描共聚焦显微镜；（3）流式细胞仪。

常用荧光探针：JC-1，DioC6，mitocapture，罗丹明123，TMRM等。

JC-1（也称CBIC2(3)）是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体(monomer)，可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。JC-1单体可采用488或514nm激光激发，发出绿色荧光波长为529nm左右；JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，发出红色波长为590nm。

罗丹明123（Rhodamine 123, Rh123）是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质，荧光强度减弱或消失。在细胞凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃，Rh123 重新释放出线粒体，从而发出强黄绿色荧光，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。

疏血通注射液腹腔注射对慢性肾功能衰竭大鼠肾损伤的改善作用及其机制

陈静1，陈宽2，吴欣蕾2，刘春菊2

1 江西中医药大学中医学院，南昌330004；

2 江西中医药大学附属医院检验科

摘要：目的　观察疏血通注射液腹腔注射对慢性肾功能衰竭（CRF ）大鼠肾损伤的改善作用，并探讨其机制。方法　SPF 级SD 大鼠30只随机分为假手术组、模型组、疏血通注射液组，每组10只。模型组、疏血通注射液组大鼠采用分阶段5/6肾切除法制备大鼠CRF 模型。CRF 大鼠模型建立成功后，疏血通注射液组按10 mL /（kg•d ）的剂量腹腔注射疏血通注射液，假手术组、模型组注射同剂量的生理盐水，连续8周后，收集腹主动脉血清、摘取肾脏备用。采用HE 染色法观察各组大鼠肾脏组织病理学变化。使用全自动生化仪及相应试剂盒检测尿素氮（BUN ）、肌酐（Scr ）、晚期蛋白质氧化产物（AOPPs ）、活性氧（ROS ）、丙二醛（MDA ）、超氧化物歧化酶（SOD ）等肾功能标志物和氧化应激标志物。采用JC -1荧光探针法检测线粒体膜电位（MTP ），使用ATP 活性试剂盒检测ATP 含量。。采用Western Blotting 法检测大鼠肾组织沉默信息调节因子1（SIRT1）、叉头框转录因子O1（FoxO1）蛋白。结果　模型组大鼠肾小管变形、扩张、萎缩，肾间质可见较多炎症细胞浸润及上皮细胞坏死，伴有腺嘌呤沉积；疏血通给药组大鼠肾间质的炎性细胞浸润减少，肾小管状态改善，腺嘌呤结晶有所减少，病理损伤相对较轻。与假手术组相比，模型组、疏血通注射液组大鼠BUN 、Scr 、ROS 、MDA 、AOPPs 水平均升高（P 均<0.05），SOD 活性、ATP 酶含量、MTP 均降低（P 均<0.05）；与模型组相比，疏血通注射液组大鼠BUN 、Scr 、ROS 、MDA 、AOPPs 水平均降低（P 均<0.05），SOD 活性、ATP 酶含量、MTP 均升高（P 均<0.05）。与假手术组相比，模型组、疏血通注射液组大鼠肾组织SIRT1蛋白相对表达量均降低（P 均<0.05），模型组大鼠肾组织FoxO1蛋白相对表达量升高（P <0.05）；与模型组相比，疏血通注射液组大鼠肾组织SIRT1蛋白相对表达量升高（P <0.05），FoxO1蛋白相对表达量降低（P <0.05）。结论　疏血通注射液腹腔注射对CRF 大鼠的肾损伤具有改善作用，其作用机制可能与抑制肾脏氧化应激水平、改善线粒体功能、调节SIRT1/FoxO1

石蒜碱对人乳腺癌细胞MCF-7存活率及线粒体膜电位的影响

石蒜碱对人乳腺癌细胞MCF-7存活率及线粒体膜电位的影响石碧炜

【摘要】目的探讨石蒜碱对线粒体膜电位(MMP)和体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞存活率的影响,并探讨其可能的作用机制.方法不同浓度石蒜碱处理MCF-7细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,并采用流式细胞仪检测MMP的变化.结果石蒜碱处理乳腺癌MCF-7细胞后,细胞存活率大幅下降,并呈明显的剂量效应关系,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);同时,细胞MMP明显下降,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05).结论石蒜碱可降低人乳腺癌细胞MCF-7的存活率,其机制可能为触发了线粒体凋亡途径.

【期刊名称】《医学综述》

【年(卷),期】2010(016)016

【总页数】2页(P2524-2525)

【关键词】石蒜碱;细胞存活率;线粒体跨膜电位;乳腺癌细胞

【作者】石碧炜

【作者单位】浙江大学医学院附属妇产科医院生殖内分泌科,杭州,310006

【正文语种】中文

【中图分类】R737.9;R285.5

乳腺癌是严重危害女性健康的恶性疾病，早期乳腺癌患者的无病生存期和总生存期已经有了明显的提高，经合理治疗，90%以上可获长期生存［1］。系统的治疗对

晚期转移性乳腺癌患者收效甚微，目前，化疗药物仍是治疗晚期转移性乳腺癌的主要策略。天然药物由于资源丰富，药理作用机制多样，成为发现抗肿瘤新药的主要源泉。石蒜碱是从我国广泛分布的多年生草本植物石蒜鳞茎中分离出的一种化学单体，属于异喹啉类植物碱，它是石蒜科植物抗肿瘤生物碱主要成分之一。现对石蒜碱降低人乳腺癌细胞MCF-7存活率及其机制进行了初步探讨。

线粒体膜电位标准_概述及解释说明

线粒体膜电位标准概述及解释说明

1. 引言

1.1 概述

线粒体膜电位是指线粒体内外质间存在的一种电压差。在细胞呼吸过程中，通过线粒体内外质间的质子转运，维持产生和维持着该电位。线粒体膜电位不仅是维持细胞能量代谢所必需的，也与许多生理病理状态密切相关。

1.2 文章结构

本文将首先对线粒体膜电位进行解释说明，包括其定义、作用以及测量方法。随后将进行线粒体膜电位标准概述，探讨其重要性和意义，常见的标准值及其影响因素，并介绍相关研究进展，探索线粒体膜电位变化与生理病理状态之间的关系。最后得出结论点。

1.3 目的

本文旨在全面了解和阐述线粒体膜电位标准及其相关内容，从而增加对该领域的认识和理解。同时，通过对相关研究进展的概述和分析，为今后深入研究提供思路和启示。

注意：以上内容仅为示例，请根据实际情况进行修改和适当补充。

2. 线粒体膜电位标准解释说明：

2.1 线粒体膜电位的定义和作用：

线粒体是细胞内的一个重要器官，它在维持细胞正常功能和生存中起着至关重要的作用。线粒体膜电位（Mitochondrial Membrane Potential, MMP）指的是线粒体内外两侧膜的电势差。具体来说，线粒体内侧带有负电荷，而线粒体外侧则带有正电荷，在这种情况下形成了一个负向电位。

MMP的主要作用之一是为ATP合成提供动力。通过氧化磷酸化过程中所产生的负载（如NADH、FADH2），线粒体通过细胞呼吸链将这些负载传递给高效能合成ATP所需的蛋白质复合物。这个过程需要由MMP提供能量驱动。

除了ATP合成外，MMP还参与调节许多其他的线粒体功能，如离子平衡、物质转运、抗氧化反应等。此外，MMP也与细胞凋亡密切相关，高水平的MMP 可能导致细胞程序性死亡。

线粒体膜电位(MMP)检测的具体步骤及方法

线粒体膜电位(MMP)检测的具体步骤及方

法

线粒体膜电位（MMP）是细胞凋亡过程中最早发生的事

件之一，因此MMP的检测对于研究细胞凋亡具有重要意义。JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料，可以作为检测线

粒体跨膜电位的指示剂。当MMP水平较高时，JC-1形成聚合物，发出红色的荧光；而当MMP水平低时，JC-1主要以单体形式存在，呈绿色荧光。因此，根据JC-1的荧光特征可以检

测线粒体膜电位的变化。

实验流程包括以下步骤：

1.细胞培养。

2.用适当的方法诱导细胞凋亡，并设立阴性和阳性对照组，收集细胞。

3.用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×10的细胞。

4.取100μL 10×___加900μL灭菌去离子水稀释成1×n Buffer，混匀并预热至37℃。

5.吸取500μL 1×n Buffer，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液。

6.取500μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15~20min。

7.室温离心（2000rpm。5min）收集细胞，用1×___洗两次。

8.吸取500μL 10×___重新悬浮细胞。

9.使用流式细胞仪检测并分析。

通过以上步骤，可以得到线粒体膜电位的变化情况，从而研究细胞凋亡的机制。

XBP1调控胶质瘤细胞氧化应激的实验研究

M1
0 200 400 600 FL2-A
AT-H2O2.018 62% M1
0 200 400 600 FL2-A
0 200 400 600 FL2-A
Catalase特异性抑制剂AT预处理的影响
实验结果五
XBP1可增强Catalase转录活性
U251 XBP1过表达 mock XBP1
Catalase
实验结果三
抑制XBP1细胞内活性氧（ROS）明显增高
H2O2
Random
SiXBP1
C 1h 2h 3h 4h C 1h 2h 3h 4h
P-JNK
JNK-1
P-P38 P38
PTL
Random
C 1h 2h 4h 6h
SiXBP1
C 1h 2h 4h 6h
P-P38
P38
实验结果四
XBP1与细胞抗氧化分子的表达
Random C 1h 2h 3h
SiXBP1 C 1h 2h 3h
Catalase
SOD1
TRX1
GAPDH
Random C 3h 6h 9h
SiXBP1 C 3h 6h 9h
Catalase 14-3-3
H2O2 处理细胞后未见 Catalase 、 SOD1 和 TRX1表达变化
实验结果四
SOD1 b-actin XBP1

利用酶标仪测量细胞代谢的

将酶标仪的潜力发挥到极致

了解 Agilent MitoXpress Xtra 耗氧量分析、Agilent pH Xtra 糖酵解分析和 Agilent MitoXpress Intra 细胞内氧含量分析可以如何帮助您：

–测量活细胞中的线粒体活性和糖酵解

–不再局限于间接的终点式细胞分析，通过“混合-检测”直接进行线粒体功能、糖酵解活性和细胞氧化代谢评估，并获得丰富的信息

–配合其他相关分析实现多重分析

–不再局限于单层细胞，还能测定悬浮细胞、微生物和特定的 3D 培养物

–通过在标准微孔板中进行简单的“混合-检测”代谢分析提高通量

–以高通量的形式方便地测量分离的线粒体

–探究氧含量与细胞代谢变化之间的联系

测量细胞耗氧量

耗氧量测量结果是细胞代谢功能，更具体而言是线粒体功能的关键性指标。通过这类测量来探究活细胞代谢，可为细胞功能以及代谢变化在疾病进展中的作用提供机理研究。

MitoXpress Xtra 耗氧量分析是研究代谢的有用工具。它提供了一种简单的有氧代谢动力学测量方法，可以使用荧光酶标仪在标准微孔板上进行测量。随着呼吸作用的进行，样品中的氧气浓度降低，导致 MitoXpress Xtra 分析的信号增加，从而实现对耗氧量的测定。

图 1 显示了利用 MitoXpress Xtra 分析研究人 iPSC 衍生心肌细胞 (Cor.4U, NCardia) 的耗氧量。在用解偶联剂 FCCP 处理的细胞中，由于呼吸作用增加，信号变化率也随之增加。而用线粒体呼吸抑制剂抗霉素 A 处理则产生了相反的效果。由于耗氧量减少，信号变化率也降低。这些测定可以在多种培养基配方中进行，有助于灵活的实验分析设计。

JC-1 线粒体跨膜电位检测

JC-1线粒体跨膜电位检测

MCE JC-1 Kit 资料

规格：1T, 1 mL (100 万细胞)

用途：早期细胞凋亡

检测设备：荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计或流式细胞仪

通道：FITC 通道看绿色，PI 通道看红色

指示：红绿荧光比例变化

Phosphate-buffered saline (PBS) (1× )的配制

a.将PBS (10×)温浴，直至完全融化。

b.按1:10 的比例，用dH2O 稀释PBS (10×)至PBS (1×)。

■细胞染色

1) 悬浮细胞：

a.以6 孔板为例，每孔用1 mL 培养基重悬100 万细胞，其他培养器皿以此类推。

b.阳性对照的设置：取适量CCCP (50 mM) 恢复至室温，阳性对照孔培养基中加入1 μL，其终浓度为50 μM，细胞培养箱37℃孵育5 分钟。

c.取适量JC-1 (200 μM) 恢复至室温，每孔培养基中加入10 μL JC-1 (200

μM)，其终浓度为2 μM，细胞培养箱37℃孵育15-20 分钟。

d.37℃孵育结束后，400 g 4℃离心3-4 分钟，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。

e.用PBS (1×) 洗涤2 次：加入2 mL PBS (1×) 重悬细胞，400g 4℃离心3-4 分钟，沉淀细胞，弃上清。重复洗1 次。

f.再用500 μL 的PBS (1×) 重悬细胞，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计或流式细胞仪分析(绿色荧光：Ex/Em=510/527 nm；红色荧光：Ex/Em=585/590 nm)。

X盒结合蛋白1调控胶质瘤细胞氧化应激的研究

收稿日期：2010-01-16修回日期：2010-01-30

通讯作者：赵世光

Correspondence to:Shi -guang Zhao

Tel:86-451-53629254E -mail:guangsz@

此文为第六届中国肿瘤学术大会优秀论文

X 盒结合蛋白1调控胶质瘤细胞氧化应激的研究

刘耀华,杨

光,张

旭,陈晓丰,于洪伟,郑天虎,汪立刚,赵世光

（哈尔滨医科大学附属第一医院神经外科，黑龙江哈尔滨

150001）

【摘要】背景与目的：活性氧（ROS ）可以通过诱导细胞氧化应激而诱导凋亡，肿瘤包括胶质瘤在体内的生长均处于高活性氧的状态，提高胶质瘤细胞对活性氧-氧化应激的敏感性可抑制肿瘤在体内的生长侵袭，而且还可以增强一些诱导活性氧的化疗药物的疗效。本研究通过干预XBP1基因的表达，观察XBP1是否可调控胶质瘤细胞对氧化应激的敏感性，并探讨其机制。方法：用siRNA 转染技术抑制U251MG 细胞XBP1基因的表达后对比细胞对H 2O 2诱导的细胞死亡、线粒体膜电位下降、活性氧堆积、以及P38磷酸化，以此来反映细胞内氧化应激的水平；并比较细胞内抗氧化分子的表达情况；将XBP1基因过表达后观察能否起到相反的效果；最后应用启动子突变技术分析XBP1对Catalase 表达的影响。结果：U251MG 细胞XBP1表达抑制后可以显著提高H 2O 2诱导的细胞死亡、线粒体膜电位下降、活性氧堆积以及延长P38的磷酸化，并降低细胞内一些抗氧化分子包括过氧化氢酶表达，XBP1过表达可以增强Catalase 表达并且降低ROS 堆积；启动子序列突变分析结果显示XBP1增强

实用流式细胞技术及其样品处理

最大特点：单细胞水平的分析
单细胞液流柱的形成
Detector Blocking capillary
Sheath fluid Injector Tip
Sheath fluid
利用流式细胞术可以获得哪些信息
细胞的相对计数、绝对计数
细胞成分的相对定量、绝对定量
单参数或多参数
细胞表面、细胞内成分
可溶性成分
从 Naive 向 Memory 细胞转化过程中， CD11a 表达增加、
CD62L（L-selectin）表达丢失。
Th1/Th2 lymphocyte
T细胞根据其分泌的细胞因子分为两型。 Th1类细胞分泌IL-2 , IFN-γ和TNF-α，参与细胞免疫，对抗胞内病原体，如病毒； Th2类细胞分泌IL-4、IL-5、IL-10与IL-13, 参与体液免疫，对抗胞外感染，如寄生虫。
每种微球大小一致，分别包被有适合于特定分析的特异性抗体。
所有分析只需一组标准曲线，检测的线性范围宽（0--5000 pg/ml）
R1
Scatter gate on singlets
Index Beads in FL3 - Read sig百度文库als in FL2
IL2 IL4 IL5 IL10 TNFα IFNγ
# Events
Normal G0/G1 cells

TRPV1离子通道对精子线粒体膜电位的影响

ｄｕｓＴｅｓｅｖａｉｔａｄｍｏｉｎｐｒｍｅｅｓｒｄｔｍｉｅｙｃｍｐｔｒｉｄｓｍｅｎｌｓ（ＡＳ，ｈｈｎｅｏｅｍｔｒｇ．ｈｐｒｉｌｙｎｔａａｔｅｅｒｎｄｂｏｕｅ— ｄｍｂｉｏｒｗｅｅａｅｅｎａａｙｉＣＡ）ｔｅａｇｓｆｐｒｍｉｓｃｓｏ
ｈｄｓｔｔａｉｎｆａｃｏｐｒｄｗｉｅｃｎｒｌｇｏｐ（＜．１．ｈｒｓｓａｉｔａｉｉｃｎｅｂｔｅｉｅｅｔｄｓｇｆｔｅａｔｉｉｌｇｉｃｎｅｃｍａｅｔｔｏｔｏｕＰ００）Ｔｅｅｗａｔｔｉｌｓｇｆａｃｅｗｅｎｄｆｒｎｏａｅｏｈａｓｃｓｉｈｈｒｓｃｎｉ
【关键词】瞬时感受器电位Ｖ１；线粒体；膜电位；精子型
中图分类号：Ｒ９６８文献标识码：Ａｄｉ０３６／ｉｎ１７－６９２１．．１ｌｏ：．９．ｓ．４４５．１８１６１９ｊｓ６０Ｏ
ＴｈｅＥｆｅｃｆｔｏｆＴＲＰＶ１ｏｎＨｕａＳｐｅｍｉｏｃｍｎｒＭｔｈｏｎｄｒａｅｂｒｅＰｏｅｉＬＩＳｈｉｎ１ｉｌＭｍａｎｔｎｔａｌｌ．ＷＡＮＧｕｉｎ２ｉＨａｐｅｇＣＡ１Ｗｅｉｈａｓｎｌ

JC-1单染法检测CCCP对内皮细胞线粒体膜电位的影响

官福新;周露露;张宸豪;李妍

【摘要】目的：分析碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）对人脐静脉内皮细胞ECV304线粒体的影响。方法体外培养ECV304细胞，不同浓度CCCP处理细胞20 min 后，装载荧光探针JC-1或Rh123，流式细胞术检测JC-1单体的发射绿色荧光。

结果伴随线粒体毒性剂CCCP浓度增加，代表JC-1单体含量的绿色荧光强度增加。结论流式细胞术检测JC-1单体的绿色荧光可反应线粒体膜电位的变

化。%Objective Analyze the influence of carbonyl cyano-to-chlorobenzene hydrazone ( CCCP ) on human um-bilical vein endothelial cells ECV-304 mitochondria .Methods ECV-304 cell was cultured in vitro and treated with different concentrations of CCCP for 20 minutes .After straining by fluorescent probes Rh 123 or JC-1 ,cells were meas-ured by flow cytometry .Results The intensity of green fluorescence emitted by JC-1 monomer increased with the in-creasing of CCCP

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析近年来，研究表明细胞凋亡是一种正常的细胞生理过程，参与细胞正常的生长、分化和凋亡循环。细胞凋亡的研究对于理解细胞生物学、病理生理学以及癌症发生机制等都十分重要。研究发现细胞凋亡过程中伴随着细胞能量代谢的变化。其中，线粒体膜电位(MMP)是一项重要的细胞能量生物化学参数，可用于表征细胞凋亡程度，因此，流式细胞术分析凋亡细胞线粒体膜电位变化已成为一种重要的细胞

凋亡检测方法。

细胞凋亡流式细胞术分析仪在检测细胞凋亡过程中MMP变化方

面具有重要意义，它不仅可以快速准确地检测目标细胞的凋亡，而且可以快速精确地测量凋亡细胞的线粒体膜电位。根据细胞能量代谢的特征，流式细胞术分析仪可以检测细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化，进而准确定量测定凋亡细胞的MMP。

流式细胞术分析仪的原理是通过检测凋亡细胞线粒体膜电位的

变化来辨别凋亡细胞状态，特别是熵值的变化。熵值是指凋亡细胞线粒体膜电位变化的幅度，其值越高，表明凋亡细胞状态越严重，因此可以用来准确表征凋亡细胞的程度。在流式细胞术中，熵值的变化可以通过曲线图的形式显示，来准确体现凋亡的程度。此外，通过计算熵值变化率，也可以获得凋亡细胞线粒体膜电位变化的时间轴，从而更好地解释凋亡细胞状态。

因此，流式细胞术分析仪可以快速、准确地检测凋亡细胞线粒体膜电位的变化，为细胞凋亡研究提供了可靠、客观的依据。流式细胞

术可以准确了解凋亡细胞状态，从而预测细胞凋亡过程，为细胞凋亡研究提供重要的实验数据。此外，该技术还可以解决许多其他的细胞生物学问题，如肿瘤细胞的去分化以及蛋白质组学分析等。

线粒体功能与心血管疾病

于军;常快乐;吕安林

【摘要】线粒体是细胞进行呼吸、氧化磷酸化、电子传递以及三羧酸循环,产生能量ATP的重要场所,心肌线粒体是为不断运动的心脏提供能源的细胞器.机体病理生理状态变化,线粒体数量和功能也可发生变化.在心血管疾病的病理生理条件下,线粒体的形态、功能、数量等也可发生改变.

【期刊名称】《甘肃医药》

【年(卷),期】2013(032)003

【总页数】4页(P202-205)

【关键词】线粒体;功能;心血管疾病

【作者】于军;常快乐;吕安林

【作者单位】710032,陕西西安,第四军医大学西京医院

【正文语种】中文

线粒体由两层膜包被，外膜有多套运输蛋白，可使小分子蛋白质通过，内膜含有多种可溶性酶，包括细胞色素C氧化酶以及单胺氧化酶等，机体95%以上的能量是线粒体提供的，线粒体是细胞凋亡调控和活性氧产生的重要部位。与临床许多疾病的发生、发展具有密切关系。本文针对在心血管疾病方面，线立体数量、结构和功能等方面的改变做一综述。

1 氧化应激与线粒体DNA突变

线粒体是氧化应激，产生活性氧（reactive oxygen species，ROS）的主要细胞器。氧化应激是ROS与抗氧化因子的产生不平衡，导致脂质、蛋白质和DNA的

损伤，正常机体内，ROS产生与消除处于动态平衡，当这种平衡受损时，氧自由

基增多，导致线粒体DNA（mtDNA）发生突变。

1.1 mtDNA的突变mtDNA是机体基因组的重要组成部分，是含37个编码基因，13个蛋白质基因，全长16596bp，紧凑的环状的DNA双链结构特点。mtDNA

氧化应激的指标

氧化应激的指标有很多，以下列出了一些常见的指标：

1. ROS（Reactive Oxygen Species，活性氧）：活性氧是氧化应激的主要物质，可以通过荧光染料或自由基捕捉剂等方法检测。

2. MDA（Malondialdehyde，丙二醛）：MDA是膜脂过氧化反应的产物，是氧化应激的重要指标之一，可以通过比色法或荧光法检测。

3. SOD（Superoxide Dismutase，超氧化物歧化酶）：SOD是一种重要的抗氧化酶，可以检测SOD的活性或基因表达水平来评估氧化应激的程度。

4. CAT（Catalase，过氧化氢酶）：CAT也是一种重要的抗氧化酶，可以检测其活性或基因表达水平来评估氧化应激的程度。

5. GSH（Glutathione，谷胱甘肽）：GSH是一种重要的抗氧化剂，可以通过比色法或荧光法等方法检测。

6. 线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential，MMP）：MMP是线粒体功能的重要指标，氧化应激可改变MMP，可通过荧光染料检测。

7. DNA氧化损伤：DNA氧化损伤是氧化应激的重要标志之一，可以通过单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）或8-OHdG 等指标检测。

8. 炎症因子：氧化应激可引起炎症反应，相关炎症因子如TNF-α（Tumor Necrosis Factor-α）和IL-6（Interleukin-6）等可以作为氧化应激的指标之一。

流式检测细胞周期线粒体膜电位MMP-中国试剂网

流式检测细胞周期

线粒体膜电位（MMP）：

使用几种染料中的其中一种就可以检测到细胞在凋亡过程中MMP的降低，如双氰基-双己氧基羰基靛蓝，它能够隐藏在活细胞的线粒体内。当MMP体系崩溃时，细胞的荧光就会减少。

磷脂酰丝氨酸（PS）在细胞表面的分布情况：

PS一般分布在质膜的内侧上。在细胞凋亡过程中，PS残余物会曝露在细胞表面。这种变化可以通过复合蛋白钙依赖的磷脂结合蛋白V与PS结合来进行检测。所使用的细胞必须是未经修复的，因为钙低速的磷脂结合蛋白V不能到达完整细胞的内部。PI常被用来加到二次坏死细胞中来进行鉴别。

DNA消化：

在最新的细胞凋亡的一系列反应过程中，一种特异的内切核酸酶能够将染色体这间的连接点打断，形成大量的小片段，这些小的片段是一些低聚体，其大小约为180bp。可以通过以下两种方法对DNA链的断裂进行检测：观察DNA柱状图的sub-G1顶点；用脱氧核糖核苷末端转移酶对DNA链的断口进行标记（TUNEL 检测）。

Sub-G1点：

如果细胞在乙醇中固定，随后再水合时，一部分低分子量的DNA会被滤掉，以降低DNA的含量。这些细胞会在DNA柱状图中作为独立的峰被观察到。TUNEL检测：

DNA链的断裂末端可以通过酶标记作用进行标记。在70%乙醇中固定之前，细胞在1%多聚甲醛中固定以将小的DNA片段结合到细胞中去，然后和Tdt以及一种已标记的核苷一起进行培育。所用的这些核苷包括：地高辛－dUTP，用经FITC标记的抗地高辛配基进行检测；生物素－dUTP，用经FITC标记的抗生素蛋白进行检测；溴－dUTP，用抗BrdUrd的FITC进行检测。