微生物菌群的选择及培养(含总结)
微生物培养方法
微生物培养方法
微生物培养是一种用于研究微生物生理生化特性、生长繁殖规律及其与环境条件的关系等的重要技术手段。以下是一些常见的微生物培养方法：
1、固体培养基培养法
固体培养基是在培养液中加入凝固剂，使培养基成为凝固状态的培养基。这种培养基具有良好的稳定性，可以防止培养液中的微生物在培养过程中流失，同时也可以使微生物在固体表面生长繁殖，方便观察和检测。固体培养基一般用于细菌、放线菌、酵母菌等微生物的培养。
2、液体培养基培养法
液体培养基是一种不添加凝固剂的培养基，使培养基呈液体状态。液体培养基中，微生物在培养液中自由悬浮生长繁殖，可以充分接触培养液中的营养物质，有利于微生物的生长繁殖。液体培养基一般用于工业生产中的微生物培养，如发酵工业中制备各种发酵产品。
3、半固体培养基培养法
半固体培养基是在液体培养基中加入少量凝固剂，使培养基成为半凝
固状态的培养基。这种培养基可以固定培养液中的微生物，同时也可以使微生物在半固体表面生长繁殖。半固体培养基一般用于观察微生物的运动和生长情况。
4、厌氧培养法
有些微生物需要在无氧或低氧分压条件下生长繁殖，因此需要采用厌氧培养法。厌氧培养法一般采用密闭容器或厌氧手套箱中进行，可以提供无氧或低氧环境。在厌氧培养法中，需要使用专门的厌氧培养基和厌氧菌株，以保证微生物的生长繁殖。
5、富集培养法
富集培养法是一种常用的分离高浓度微生物的方法。该方法是通过在培养基中添加一些特殊成分，如高浓度营养物质、抑制剂等，以抑制其他微生物的生长繁殖，从而增加目标微生物的数量和浓度。富集培养法一般用于从自然界或工业生产中分离特定种类的微生物。
微生物的利用-微生物的选择培养和计数
计数方法的优缺点和应用范围
显微镜直接计数法适用于少量微生物 的快速计数，如水样、食品中微生物 的初步检测。
间接计数法适用于大量微生物的快速 、准确计数，如污水处理、发酵工业 等领域。
04
CATALOGUE
微生物的利用前景和挑战
微生物在工业、农业、医药等领域的应用前景
工业领域
农业领域
微生物可用于生物防治、生物肥料、生物农药等方 面，提高作物产量和品质，降低环境污染。
微生物的利用历史和现状
微生物的利用历史悠久，早在古代人们就利用微生物进行酿酒、制酱、发酵面包等。随着科学技术的 发展，人们对微生物的认识越来越深入，利用微生物的范围也越来越广泛。
在现代工业中，微生物被广泛应用于发酵工程、酶工程、基因工程等领域。通过基因工程等技术手段 ，人们可以改良微生物的性状，提高其生产效率，为人类的生产和生活提供更多更好的产品和服务。
选择培养的原理和方法
原理
通过选择合适的培养基和环境条件， 使目标微生物获得更好的生长优势， 从而从混合菌群中分离出来。
方法
将待分离的菌液涂布或划线接种在选 择培养基上，根据菌落的形态、颜色 、大小等特征进行筛选和分离。
选择培养的应用和实例
实例1
在食品工业中，选择培养基常用于发酵食品的微生物筛选和发酵过 程优化，如酸奶、面包等产品的生产。
微生物的特点和重要性
第三章 微生物菌种选育
3、平板划线分离法
先将培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，制成平板，用 接种环沾取少许待分离的材料，在培养基表面划线（平行、 扇形或其他形式）。微生物将随着划线次数的增加而分散， 经保温培养形成菌落，划线开始的部分细菌分散度小，形 成的菌落往往连在一起；由于连续划线，微生物逐渐减少， 划到最后，常可形成单个孤立的菌落，这种单个菌落可能 由一个细胞繁殖而来，故可获得纯培养。
中国病毒资源与信息中心:从事普通病毒保藏与分 中国病毒资源与信息中心 从事普通病毒保藏与分 类鉴定与研究的专业机构。。 类鉴定与研究的专业机构。。http://www.virus.csdb.cn 。。 中国林业微生物菌种保藏管理中心：保藏微生物菌株 中国林业微生物菌种保藏管理中心 保藏微生物菌株10700余 保藏微生物菌株 余 株，苏云金杆菌模式菌株等细菌、食用菌等大型真菌、林 苏云金杆菌模式菌株等细菌、食用菌等大型真菌、 木病原菌、菌根菌、病虫生防菌、木腐菌、 木病原菌、菌根菌、病虫生防菌、木腐菌、病毒和植原体 类等。http://www.cfcc-caf.org.cn 类等。 中国工业微生物菌种保藏管理中心:保藏各种工业微生物菌种 中国工业微生物菌种保藏管理中心 保藏各种工业微生物菌种 资源包括：细菌、放线菌、酵母菌、 资源包括：细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌和大型真菌 。http://www.china-cicc.org/ 中国医学细菌保藏管理中心:http://www.cmccb.org.cn 中国医学细菌保藏管理中心 兽医微生物菌种保藏管理中心:http://www.cvcc.org.cn 兽医微生物菌种保藏管理中心
微生物基本知识：大肠菌群的分类！
微⽣物基本知识：⼤肠菌群的分类！
微⽣物基本知识：⼤肠菌群的分类！
1、⼤肠菌群
GB 4789.3：⼀群能发酵乳糖、产酸产⽓、需氧和兼性厌氧的⾰兰⽒阴性⽆芽孢杆菌。该菌主要来源于⼈畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价⾷品的卫⽣质量，推断⾷品中有否污染肠道致病菌的可能。
2、粪⼤肠菌群
GB/T4789.39-2008 ⼀群在44.5°C培养24-48h能发酵乳糖、产酸产⽓、需氧和兼性厌氧的⾰兰⽒阴性⽆芽孢杆菌。该菌群来⾃⼈和温⾎动物的粪便，作为粪便污染指标评价⾷品的卫⽣状况，推断⾷品中肠道致病菌污染的可能性。
AOAC、FDA⼀般使⽤“粪⼤肠菌群”概念，GB4789的“粪⼤肠菌群”概念为等同采⽤AOAC⽅法，故⽽使⽤粪⼤肠菌群概念；⽽欧洲使⽤“耐热⼤肠菌群”概念，较少使⽤“粪⼤肠菌群”。⼀般欧洲学者认为，“粪⼤肠菌群”的提法不太科学，耐热⼤肠菌群的范围⽐粪⼤肠菌群范围⼤。
3、⼤肠埃希⽒菌
GB4789.38-2012 ⼴泛存在于⼈和温⾎动物的肠道中，能够在44.5°C发酵乳糖、产酸产⽓，IMViC(靛基质、甲基红、VP试验、柠檬酸盐）⽣化试验为++--或-+--的⾰兰⽒阴性杆菌。以此作为粪便污染指标来评价⾷品的卫⽣状况，推断⾷品中肠道致病菌污染的可能性。
⼤肠埃希⽒菌的不同菌株间DNA相关性为80% ，⽽与同科的志贺⽒菌属除鲍⽒志贺⽒菌外的DNA相关性可达80-87%。
⼤肠埃希⽒菌为⼈和动物肠道中的常居菌，⼀般多不致病，在⼀定条件下可引起肠道外感染。
4、致泻⼤肠埃希⽒菌
⼤肠埃希⽒菌为⼈和动物肠道中的常居菌，⼀般多不致病，在⼀定条件下可引起肠道外感染。
菌种选育与培养(最新整理)
和产物分子结构来进行设计和采用一些筛选方法，以打破微生物原有的代谢调控机制，获得
能大量形成产物的高产突变株。）。
第三节 生产菌种的改良
采用合适的筛选方法，诱变育种可以获得高产菌株，但不能达到定向育种的目的。随着现代 生物技术的发展，杂交育种、原生质体融合、DNA 重组可达到改良菌种的目的。 一、常规的杂交育种 定义：指两个不同基因型的菌株通过接合或原生质体融合使遗传物质重新组合，再从中分离 和筛选出具有新性状的菌株，具有定向育种的性质。真菌、放线菌和细菌均可进行杂交育种。 优点：杂交后的杂种不仅能克服原有菌种生活力衰退的趋势，而且杂交使得遗传物质重新组 合，动摇了菌种的遗传基础，使得菌种对诱变剂更为敏感，因此，杂交育种可以消除某一菌 种经长期诱变处理后所出现的产量上升缓慢的现象；通过杂交可以改变产品质量和产量，甚 至形成新的品种。 二、原生质体融合 1、标记菌株的筛选 供融合用的两个亲株要求性能稳定并带有遗传标记，以利于融合子的选择。 采用的遗传标记一般以营养缺陷型和抗药性等遗传性状为标记。 通过采用多种抗生素及其他药物，以梯度平板法进行粗选，再用具有抗性的抗性生物制备不 同浓度的平板，进行较细的筛选。 2、原生质体的制备 在高渗透压溶液中，用适当的脱壁酶（细菌或放线菌可用溶菌酶或青霉素处理，酵母菌和霉 菌可用蜗牛酶或其他相应的脱壁酶）去除细胞壁，剩下的是由细胞膜包裹的原生质体。 影响原生质体制备的因素：菌体的预处理（用 EDTA、甘氨酸、青霉素或 D-环丝氨酸等处 理细菌，使菌体细胞壁对酶的敏感性增强）；菌体的培养时间（一般选择对数生长后期的菌体， 这时细胞正在生长、代谢旺盛，细胞壁对酶解最为敏感）；酶浓度；酶解温度（一般控制在 20～ 40℃）；酶解时间（充足的酶解时间）；渗透压稳定剂（对于细菌或放线菌一般采用蔗糖、丁 二酸钠；对于酵母菌则采用山梨醇、甘露醇等；对于霉菌则采用 KCl 和 NaCl 等。一定浓度 的 Ca2+、Mg2+等二价阳离子可增加原生质膜的稳定性）。 3、原生质体的融合和再生 融合：是把两个亲株的原生质体混合在一起，在融合剂 PEG 和 Ca2+作用下，发生原生质体 的融合。 再生：原生质体融合后的重组子要成为一个无性繁殖系，首先必须再生，即能重建细胞壁， 恢复完整细胞并生长、分裂。 影响原生质体融合的因素：菌体的前处理；菌体的培养时间；融合剂的浓度；融合剂作用的 时间；阳离子的浓度；融合的温度；融合体系的 pH 值等。 影响原生质体再生的因素：菌种自身的再生性能；原生质体制备的条件；再生培养基成分； 再生培养条件等。 4、融合子的选择 融合子的选择主要依靠两个亲株的选择性遗传标记。 在选择性培养基上，通过两个亲株的遗传标记互补而挑选出融合子。 在融合体再生后，进行几代自然分离、选择，才能确定真正融合子。 5、灭活原生质体融合技术在育种中的应用（该方法可以不用遗传标记） 灭活原生质体融合技术是指采用热、紫外线、电离辐射以及某些生化试剂、抗生素等作为灭 活剂处理单一亲株或双亲株的原生质体，使之失去再生能力，经细胞融合后，由于损伤部位 的互补可以形成能再生的融合体。 三、DNA 重组技术 体外重组 DNA 技术或称基因工程、遗传工程，是以分子遗传学的理论为基础，综合分子生 物学和微生物遗传学的最新技术而发展起来的一门新兴技术。它是现代生物技术的一个重要
微生物学重点总结(3篇)
微生物学重点总结
微生物学
第一章绪论
1、微生物学。一般定义为研究肉眼难以看见的称之为微生物的生命活动的科学。
2、微生物的发现。
第一个看见并描述微生物的人是荷兰商人安东列文虎克。
3、微生物学发展的奠基者及其贡献
法国的巴斯德。1>彻底否定了“自生说”；2>免疫学—预防接种；3>证实发酵是由微生物引起；4>创立巴斯德消毒法。
德国的科赫。1>证实了____病菌是____病的病原菌；2>发现肺炎结核病的病原菌；3>提出证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则—科赫原则。
4、微生物的特点：个体小、结构简、胃口大、食谱广、繁殖快、易培养、数量大、分布广、
种类多、变异易、抗性强。
第二章微生物的纯培养和显微技术
1、无菌技术。在分离、转接、及培养纯培养物时防止被其他微生物污染，其自身也不污染操作环境的技术。
2、菌落。分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。
3、选择培养。选择平板培养、富集培养。
4、古生菌。是一个在进化途径上很早就与真细胞和真核生物相互独立的生物类群。主要包括一些独特的生态类型的原核生物。
5、真菌。霉菌（菌体由分枝或不分枝的菌丝构成）、酵母菌（一群单细胞真核微生物）。
6、用固体培养基获得微生物纯培养方法：1>涂布平板法：（菌落通常只在平板表面生长）
将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在已倒好的平板表面，再用无菌涂布棒涂布均匀，经培养后挑取单个菌落。特点：使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀。2>稀释倒平板法：（细菌菌落出现在平板表面及内部）
第33讲 微生物的培养技术及应用-2023年高考生物一轮复习课件
所有的生物，包括最耐热的某些 微生物的休眠体。基本保持培养基 的营养成分不被破坏。 ③对象：培养基等。
注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。
3.防止杂菌污染的方法 （2）灭菌 Ⅱ.干热灭菌法
干热灭菌箱内160~170 ℃下加热2~3h。
二、培养基的配制
4.类型
固体 有无琼脂 液体
培养基
培养基
分离、计数、 鉴定等
扩大培养、 工业生产
①加入培养基中的凝固剂（如琼脂），一般不能被微生物利用，
只起到凝固作用。
②微生物在固体培养基 表面生长，可以形成 肉眼可见的菌落。
一个细胞繁殖而 来的肉眼可见的 子细胞群体
培养基的类型及用途
划分标准 培养基种类
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次 划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次 从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的 增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
4.平板划线时最后一次划线为何不能与第一次划线相连？ 最后一次划线已经将酵母菌稀释成单个细胞，如果与第一次
②巴氏消毒法：62-65℃下煮30min 或 80-90℃下煮30s-1min。
③化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。
微生物的培养及应用
微生物的培养及应用
微生物的培养及应用是现代生物技术和微生物学研究领域中的重要内容。通过培养微生物，可以利用其在生物学、医学、环境保护和工业领域等各个方面的应用。
关于微生物的培养方面，可以从以下几个方面介绍：
一、微生物的培养方法
微生物的培养方法主要包括液体培养和固体培养两种方式。液体培养是将微生物培养在液体培养基中，通常是在培养皿或培养瓶中进行。液体培养适合于需大量培养的微生物，可以通过离心等方法将微生物与培养基分离。固体培养则是将微生物培养在固体培养基上，通常是在琼脂培养基上进行。固体培养可以利用菌落形态和菌落特性进行鉴定和分离。
二、微生物的培养技术
微生物的培养技术主要包括纯化培养、分离培养和维持培养。纯化培养是将微生物从混合培养中分离出来，通常通过稀释液体培养基、分层分离等方法进行。分离培养是将微生物从单一菌落中分离出来，通常是通过挑取菌落、划线法等方法进行。维持培养则是将微生物保持在培养基中，并确保其存活和生长。
三、微生物的应用领域
微生物在生物技术、医学、环境保护和工业领域等各个方面都有广泛应用。在生物技术领域，微生物被广泛应用于基因工程、发酵工程、酶工程等方面，如利用
大肠杆菌进行基因克隆和表达、利用酵母菌进行蛋白质表达等。在医学领域，微生物被用于分离和鉴定病原微生物、制备抗生素等。在环境保护领域，微生物被用于生物修复、生物气氛污染物降解等。在工业领域，微生物被用于食品加工、饲料生产、废弃物处理等。
四、微生物的培养和利用中存在的问题和挑战
微生物的培养和利用中存在一系列问题和挑战，主要包括以下几个方面：首先，微生物的培养条件需要精确控制，包括培养基的配方、温度、氧气、pH值等。其次，微生物的培养过程中可能出现感染、菌株变异等问题，需要进行严密的监控和检测。此外，微生物的应用也面临着法规、道德和安全等方面的限制和考虑。
微生物的选择培养和计数
验证假设一：其他同学用与A同学相同土样进行实验 如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基污染。
验证假设二：将A同学配制的培养基，在不加土样的情况下进行 培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
通过这个实验案例可以看出，实验结果要有说服力， 对照的设置是必不可少的。
显微镜直接计数法 5、微生物的数量测定
活菌计数法 （1）显微镜直接计数法 不能区分死菌与活菌（数值偏大）
小方格
计数室 中方格
16 x 25
25 x 16
计数室体积：1mm X 1mm X 0.1mm = 0.1mm3 酵母菌种群密度（个/ml）
=每个中方格中酵母菌数量的平均值 X 中方格的个数 X 104
种微生物？ 3、测定微生物数量的常用方法有哪些？
探究·实践
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、提出问题： 土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？ 每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？
二、基础知识： 1、尿素的利用
尿素[CO(NH2)2]是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的某些细菌将尿素分解成NH3，NH3再转化为 NO3-、NH4+等被植物吸收。
设置对照： 主要目的是排除实验组中非测试因素（无关变量）对
实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 ①判断培养基中是否有杂菌污染：
微生物-大肠菌群
3、乳糖发酵管（带黑帽或棉塞，有刻度试管，内带
小倒管） 15支
4、250mL量筒
1支
5、1mL移液管
2支
6、10mL移液管
2支
7、平皿
6套
食品安全检验技术（微生物部分） 大肠菌群检验
第二个半天 样品处理及初发酵
1、样品处理 2、检样稀释与乳糖胆盐发酵试验 3、培养18—26小时，于35—37摄氏度
食品安全检验技术（微生物部分） 大肠菌群检验
大肠菌群是指一群在37℃培养24小时能分 解乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴 性无芽孢杆菌。
作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义。
食品安全检验技术（微生物部分） 大肠菌群检验
食品安全检验技术（微生物部分） 大肠菌群检验
食品安全检验技术（微生物部分）
1、检样稀释
大肠菌群检验
MPN：表示食品中大肠菌群数是以每100mL或克检样内 大肠菌群最近似值，一般采用9管法。
一般样品25mL（克）+225mL生理盐水=1：10，从 此10-1取样10mL，则其中含样品为1mL（克）。接种到3 管双料乳糖发酵管中。从此10-1取样1mL，则其中含样品 为0.1mL（克）。接种到3管单料乳糖发酵管中。表142— 143。从10-1取样1mL+9mL生理盐水=1：100，从10-2取样 1mL，则其中含样品为0.01mL（克）。接种到3管单料乳 糖发酵管中。
微生物的培养方法
微生物的培养方法
微生物的培养是微生物学研究中的基础实验技术之一。通过培养，我们可以获得大量的微生物细胞进行研究、分析和应用。微生物的培养方法可以根据不同的需求和目的采用不同的方式，下面将介绍常见的微生物培养方法。
1. 培养基的选择
培养基是微生物培养中的重要组成部分。根据微生物的需求，培养基可以分为无菌培养基、常规培养基、选择性培养基和富集培养基等。其中，常规培养基包括营养琼脂培养基、肉汤培养基、液体培养基和固体培养基等。选择性培养基则是通过添加抑制菌生长的抗生素、染色剂或物理因素等来选育特定菌株。富集培养基则可利用微生物对特定营养物质的利用来富集目标微生物。
2. 纯化菌落的扩散法
菌落是可见的微生物单个细胞的集合体，纯化菌落是为了获得纯种菌株而将菌落中细胞的杂交菌分离出来。纯化菌落法包括扩散法和悬滴法等。扩散法是将含有微生物菌落的固体培养基涂布在琼脂平板上，然后利用铁环或微量移液器挑取菌落，接种到新的琼脂培养基上进行单菌落的培养。这种方法可以实现微生物的纯化，适用于培养不同的微生物菌株。
3. 液体培养法
液体培养法是将微生物接种在液体培养基中进行大量培养。该方法可以提供丰富的养分和大量的微生物细胞，适用于许多微生物种类的培养。液体培养法通常使
用培养瓶或培养皿，将液体培养基倒入容器中，然后接种微生物菌株。在培养过程中，可以采用摇床或旋转培养器等设备，提供适当的温度、养分和氧气等条件，促进微生物的生长和繁殖。
4. 固体培养法
固体培养法是将微生物接种在固体培养基（如琼脂）上进行培养。它可以提供微生物在固体表面的菌落形态和特性，适用于微生物的纯化、鉴定和保存等。固体培养法通常使用琼脂培养基，将培养基熔化后倒入培养皿中，然后将微生物接种到表面。在培养过程中，可以调节温度、时间和培养基的成分等条件，促进微生物的生长和菌落形成。
细菌和真菌的培养方法
细菌和真菌的培养方法
1. 细菌的培养方法
（1）液体培养法：将细菌接种在适当的液体培养基中，可使细菌在含有适当营养的液体中生长。常用的液体培养基有肉汤、营养液、大肠杆菌悬浮液等。
（2）固体培养法：将细菌接种在含有适当营养的固体培养基上，可使细菌在表面和深层生长。常用的固体培养基有营养琼脂、血琼脂、马铃薯蔗糖琼脂等。
（3）混合培养法：将两种或多种不同细菌接种在同一培养基上，通过它们之间的相互作用，观察细菌之间的关系及生长状况。
2. 真菌的培养方法
（1）液体培养法：将真菌接种在含有适当营养的液体培养基中，可使真菌在含有适当营养的液体中生长。常用的液体培养基有马铃薯葡萄糖液、麦芽琼脂液等。
（2）固体培养法：将真菌接种在含有适当营养的固体培养基上，可使真菌在表面和深层生长。常用的固体培养基有马铃薯葡萄糖琼脂、米曲等。
（3）混合培养法：将两种或多种不同真菌接种在同一培养基上，通过它们之间的相互作用，观察真菌之间的关系及生长状况。
微生物的培养与应用知识点总结
微生物的培养与应用是微生物学的重要内容，涉及到微生物的生长、繁殖、控制以及在各个领域的应用。以下是一些微生物培养与应用的知识点总结：
1. 培养基：微生物培养的基础是培养基，它提供了微生物生长所需的营养物质和环境条件。培养基可以分为固体培养基（琼脂糖培养基）和液体培养基（肉汤培养基）。
2. 培养技术：常用的微生物培养技术包括平板法、液体培养法、摇瓶培养法等。平板法适用于菌落计数和纯培养，液体培养法适用于大规模培养和代谢产物的提取，摇瓶培养法适用于微生物生长动力学研究。
3. 培养条件：微生物的生长需要适宜的温度、pH值、氧气和营养物质等条件。不同微生物具有不同的生长条件要求，例如，人体共生菌一般在37摄氏度下生长，而一些嗜热微生物则需要较高的温度。
4. 培养纯化：为了获得纯种微生物，常常需要进行培养纯化。常用的方法包括单菌分离、传代培养和鉴定技术等。传代培养是通过连续传代使微生物形成纯种，鉴定技术可以通过形态学、生理生化特性和分子生物学方法确定微生物的种属。
5. 微生物应用：微生物在各个领域具有广泛的应用，包括食品工业、制药工业、环境保护、农业等。例如，乳酸菌可以用于酸奶和乳酸发酵食品的生产，放线菌可以产生抗生素，生物修复可以利用微生物降解污染物。
6. 发酵技术：发酵是微生物应用的重要手段之一，通过微生物的代谢活动产生有用的产物。发酵技术在酿酒、酱油、乳制品和抗生素等行业得到广泛应用。
这些是微生物培养与应用的一些基础知识点，还有很多深入的内容和应用领域可以继续学习和探索。
项目四：微生物培养技术
特点。
填空题
1．细菌的营养物质有 、 、 、 和 。
2．根据细菌利用碳元素的形式不同，将细菌分为 和 两大类营类型，病原菌多属于 。
3．细菌生长繁殖需要的气体主要有 和
据细菌对 的需要不同而将细菌分
代表菌 蓝细菌 红螺细菌 硫杆菌 大肠杆菌
(四)细菌摄取营养物质的方式
1、被动扩散：营养物质自高浓度向低浓度扩散，不耗能。 水、某些气体或一 些无机盐。
2、促进扩散：营养物质自高浓度向低浓度扩散，不耗 能， 需 专一的载体蛋白。
3、主动运输：逆着营养物质的浓度差转动营养物质，需 能量，细菌生长繁殖过程中所需的各种
三、细菌在培养基上的生长状况
• 菌落 ：细菌在固体培养基上生长，由单个菌细胞固定 一点大量繁殖，形成肉眼可见的堆集物。
• 菌苔 ：许多菌落融成一片形成菌苔。 • 纯培养：挑出一个菌落，移种到另一培养基中，长出
的细菌为纯种，又称为纯培养。
1、固体培养基上细菌特长状况的观 察：
• 主要看菌落的大小、形状、色泽与透明度、隆 起度、硬度、湿润度、表面光滑或粗糙、溶血 性等。
（二）根据培养基的用途分：
1、基础培养基 ：如牛肉膏蛋白胨琼脂 这种培养基可供培养一般细菌使用。
微生物总结（全）
微⽣物总结（全）
微⽣物学总结（1）
第⼀章：概论
1．柯赫法则：（1）病原菌是在患传染病的个体中存在，在健康者则不存在。（2）病原菌能被分离⽽得纯培养。（3）纯培养接种易感染动物，应引发相同疾病。（4）该病原菌可从患病实验动物中从新分离出来，并可在实验室再次培养并于原始病原菌相同。
2．(1)特殊疾病同⼀病原体(2)分离出纯培养(3)接种易感动物引起相同疾病(4)从易感动物再分离出原病原体
第⼆章：细菌的形态与结构
1．按细菌的基本形态分为：1.球形细菌2.杆状细菌3.弯曲形细菌
分类基本结构特殊结构
表层结构细胞壁，细胞膜夹膜
内部结构细胞质，核糖体，核质芽胞
外部结构——菌⽑，鞭⽑
3．⾰兰染⾊：呈紫⾊为阳性菌，红⾊为阴性菌
⽅法：涂⽚→结晶紫染⾊→碘液脱⾊→酒精脱⾊→复红复染
4．（1）.⾰兰阳性菌的胞壁:
肽聚糖(peptidoglycan): 层数多,含量⾼,占细胞壁⼲重的50-80% 且质地致密。
磷壁酸(teichoic acid)
（2）. ⾰兰阴性菌胞壁:
肽聚糖:含量只1-3层,占胞壁⼲重的10-20%左右,侧链之间以肽键直接交联, 形成较疏松的结构。（*肽聚糖的结构请结合书本插图认真掌握。）
脂蛋⽩
外膜：脂多糖(lipopolysaccharides,LPS), 内毒素、热原
O-多糖侧链、核⼼寡聚糖、脂质A(lipid A)
外膜蛋⽩：孔蛋⽩(Porins)、外膜A蛋⽩(Omp A)
周浆间隙（periplasmic space）
5．细菌L型：是指细菌细胞壁缺陷型
原⽣质体(proplast):⾰兰阳性菌胞壁缺失
肠道常见有益、有害微生物的培养基选择及使用方法总结
大肠菌群作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。菌龄对革兰氏阴性菌的染色结果的影响较之阳性菌大。脱色时间延长只对革兰氏阳性菌的染色结果有影响,对革兰氏阴性菌无影响;而脱色时间缩短只对革兰氏阴性菌的染色结果有影响,对革兰氏阳性菌无影响。
1、大肠杆菌显色培养基(HB7001)：放置36±1℃需氧培养18-24小时。挑取3 个或以上的单个菌落移种营养琼脂平板，36℃±1℃24h进行革兰氏染色。
2、枯草芽孢杆菌营养琼脂(HB0109)：放置36±1℃需氧培养24小时。挑取3 个或以上的单个菌落划线转接培养于营养琼脂平板上，放置36±1℃需氧培养14-16小时进行革兰氏染色。
3、沙门氏菌显色培养基（HB7007-1）：放置36±1℃需氧培养22-24小时。挑取3 个或以上的单个菌落直接接种营养琼脂平板，于36 ℃±1 ℃培养18h~24h ，必要时可延长至48h进行革兰氏染色。
4、乳酸杆菌MRS培养基（HB0384-5）：放置36±1℃需氧培养48±2小时。挑取单个菌落，挑取3 个或以上的单个菌落接种于MRS 琼脂平板，置36℃±1℃培养48h进行革兰氏染色。
5、空肠弯曲菌改良CCD琼脂（HB0274-1）：放置42±1℃微需氧培养24-48小时。挑取3 个或以上的单个菌落接种到MCCD平板上，微需氧条件下42 ℃±1 ℃培养24 h～48 h进行革兰氏染色。
6、双歧杆菌莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS培养基（HB0384-11）：放置36±1℃厌氧培养48±2小时。挑取 3 个或以上的单个菌落接种于MRS 琼脂平板。36 ℃±1℃厌氧培养48h±2h ,可延长至72h±2h进行革兰氏染色。注：每种菌培养时间不同，革兰氏染色应在细菌生长对数期进行。
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微生物菌群的选择与培养
针对所学的关于水污染治理的有关理念，加之对环境微生物这门课程的理解，此次环境微生物这门课程的设计我选用的微生物菌群是对保健、水产、养殖、种植甚至环保等方面都有益的菌群。
一、有益微生物的概念（“EM”菌群）
“EM”是英语Effective和microorganisms的缩写，意为有益微生物群，是日本琉球大学的比嘉夫教授于1983年研制成功的微生物工程技术中综合性最强的新创造。有益微生物群由整个生态系统都存在的五大类微生物（光合细菌、乳酸菌、放线菌、酵母菌、发酵型丝状菌）中的多种有益微生物组成。
这些微生物组合在一个统一体中互相促进，共同组成一个复杂而稳定的具有多元功能的微生物生态系统，在水族箱使用后，可抑制有害微生物，特别是病原菌和腐败菌的活动，从而改善水质，并改善鱼类消化道细菌群落，促进鱼类健康快速生长。其功能要超过硝化细菌和光合细菌。
二、有益微生物群的主要成分
1、光合菌群（好氧型和厌氧型）如光合细菌和蓝藻类。属于独立营养微生物，菌体本身含60％以上的蛋白质，且富含多种维生素，还含有辅酶Ｑ10、抗病毒物质和促生长因子；它以土壤接受的光和热为能源，将土壤中的硫氢和碳氢化合物中的氢分离出来，变有害物质为无害物质，并以植物根部的分泌物、土壤中的有机物、有害气体（硫化氢等）及二氧化碳、氮等为基质，合成糖类、氨基酸类、维生素类、氮素化合物、抗病毒物质和生理活性物质等，是肥沃土壤和促进动植物生长的主要力量。光合菌群的代谢物质可以被植物直接吸收，还可以成为其它微生物繁殖的养分。
2、乳酸菌群（厌氧型）以嗜酸乳杆菌为主导。它靠摄取光合细菌、酵母菌产生的糖类形成乳酸。乳酸具有很强的杀菌能力，能有效抑制有害微生物的活动和有机物的急剧腐败分解。乳酸菌能够分解在常态下不易分解的木质素和纤维素，并使有机物发酵分解。乳酸菌还能够抑制连作障碍产生的致病菌增殖。
3、酵母菌群（好氧型）它利用植物根部产生的分泌物、光合菌合成的氨基酸、糖类及其它有机物质产生发酵力，合成促进根系生长及细胞分裂的活性化物质。酵母菌在有益微生物群中对于促进其它有效微生物（如乳酸菌、放线菌）增殖所需要的基质（食物）提供重要的给养保障。此外，酵母菌产生的单细胞蛋白是动物不可缺少的养分。
4、革兰氏阳性放线菌群（好氧型）它从光合细菌中获取氨基酸、氮素等作为基质，产生出各种抗生物质、维生素及酶，可以直接抑制病原菌。它提前获取有害霉菌和细菌增殖所需要的基质，从而抑制它们的增殖，并创造出其它有益微生物增殖的生存环境。放线菌和光合细菌混合后的净菌作用比放线菌单兵作战的杀伤力要大得多。它对难分解的物质，如木质素、纤维素、甲壳素等具有降解作用，并容易被动植物吸收，增强动植物对各种病害的抵抗力和免疫力。放线菌也会促进固氮菌和VA菌根菌增殖。
5、发酵系的丝状菌群（厌氧型）以发酵酒精时使用的曲霉菌属为主体，它能和其他微生物共存，尤其对土壤中酯的生成有良好效果。因为酒精生成力强，能防止蛆和其他害虫的发生，并可以消除恶臭。
三、“EM”菌群的培育
1、配方
配方一：100公斤干净的水、EM菌种5公斤、红糖5公斤、尿素0.6公斤、磷酸二氢钾200克、维生素C50克；
配方二：100公斤干净的水、EM菌种3公斤、光合细菌2公斤、红糖4公斤、尿素0.4公斤、磷酸二氢钾150克、维生素C50克（此配方不需要长期使用，3个月使用一次即可，平常建议采用配方一）。
2、材料选择
a、塑料桶：选择容量在20公斤以上的塑料桶（卫生条件要求塑料桶能容装饮用水的标准）；
b、红糖：商品名叫赤砂糖，也可用糖蜜代替；
c、EM菌种：如果你现在想采用新方法培育，建议从实验场引进新菌种，如果你是引进的新菌种，半年内可不需要添加光合细菌；
d、光合细菌：耐低酸度的光合菌，一般光合细菌适合生存在PH值5-8的范围；
e、磷酸二氢钾：纯度在90%以上的，不可用肥料用的磷酸二氢钾代替；
f、D-异抗坏血酸：为抗氧化剂，也叫维生素C，是一种食品添加剂，不可用药品的维生素C代替，它能延长EM的保质期、提高动植物的抗疾病能力等作用；
g、尿素：化肥用的即可；
h、水：干净的水，能够饮用的水，自来水需要放置2天以上才能使用，冷开水或纯净水最好。
3、培育方法
把水放入塑料桶中加入红糖→加入EM菌种和光合细菌→尿素和磷酸二氢钾分别溶化后加入→摇均→密封→光照下培育，温度保持在25-35度→每天摇动两次，每次透气半小时→第三天加入D-异抗坏血酸，摇均→第四天停止光照，检测PH值，达到3.8以下培育完成，未达到继续培育→开盖透气，三天后完成培育，密封保存或使用。如果温度偏低、光照不足，培育时间肯定会延长，还有可能造成失败，使用效果也有影响。是否培育完成凭PH测试纸测试PH值在3.8
以上即合格。培育中是否有悬浮物产生都是正常情况，一般温度高悬浮物容易产生。如果培育温度偏低，培育的EM气体将减少。培育中有异味是很正常的，PH 合格后再透气两天如果异味还很严重，就有可能培育失败了。冬季温度偏低小批量培育可做一个较大点的纸箱或木箱，把培育桶放在箱中，几个桶的中间吊一个60W的灯泡，封好箱盖，即可保证光和温度了，但要注意防火安全。
附录：有益微生物群在环保业的具体用法
一、机理与作用
利用微生物治理污水和城市生活垃圾是今后环保产业的主攻方向。作用机理是以光合菌群和酵母菌群为主导，协同其它有益微生物共同作用，产生抗氧化物质，通过氧化还原发酵等途径，分解氧化有机物，把有害有毒转化为无害无毒，变有害为有用。在厕所去臭、生活垃圾利用、生活和工业废水治理等环保领域，应用前景广阔且成本低廉。
二、处理方法
目前常用有益微生物群治理环境的方法是用有益微生物群稀释液喷布及有益微生物群发酵料的撒放，采取三级净化槽法、生物膜法、水面喷施法、垃圾发酵法等。
1．三级净化槽法
循环处理反应系统一般是设置净化槽。净化槽由三个大槽组成，排出的污水先贮入第一槽，由有益微生物群微生物进行分解，第二个槽污水中的有机物分解成水和ＣＯ2 （二氧化碳），第三个槽将处理过的水再送回最前面的处理槽，如此循环，可增加有益微生物的密度，提高水的抗氧化力。投放比例：第一净化槽按污水接受量的千分之一投入，第二及第三个槽均按水量的万分之一投入（可依据水质调整倍率）。每周投入一次。
2．生物膜法
为使有益微生物群微生物在水底滞留繁殖，可用多孔砖石、木炭、竹炭、沸石等在10-50倍有益微生物群稀释液中浸泡2 － 4 天后，抛入污水和放置于出水口。10天换一次。净化有一定流速的水域时，如河床没有淤泥，应投置不会冲走的特制水泥块作为生物膜。
3．水面喷施法
按总水量100000∶1 的比例取有益微生物群（加等量红糖），配制100 倍有益微生物群稀释液，密封发酵12小时后，泼洒水面。河流湖泊净化时，水能保持流动状态更好。
4．有益微生物群处理垃圾
（1）有益微生物群提高垃圾处理能力
在垃圾堆埋过程中，如以有益微生物群喷洒处理，可以有效地解决上述的问题，方式包括在垃圾收集时喷或当垃圾运输到垃圾场时喷，两者兼用效果更佳，有益微生物群对垃圾的主要作用有以下几方面：
a.加速垃圾的发酵分解，在短时间内减少堆积垃圾的体积，变相增加总垃圾堆埋量的数目。
b.抑制腐败细菌的生长，改善有机物的分解途径，减少氨和琉化氢的释放量和氨类物质的产生，同时亦减少沼气量。
c.由于有效微生物作用会消耗水份，从而减少污水产生的数量，也改善了污水的水质，减低污染成份，方便将来污水的处理。
d.抑制蚊蝇的蛹、蛆孵化，达到减少蚊蝇孳生的长远效果，减少疾病。
e.抑制病原性微生物的繁殖，防止病害的产生。
f.促进堆填区土壤化和再生的过程。
（2）有益微生物群垃圾处理技术
在开始处理的前3个月，按每天进场200吨垃圾计算，每天向垃圾喷洒1吨的