乳制品中三聚氰胺检测方法的改进

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高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺

高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。

三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。

本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。

1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含UV1600紫外-可见检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。

1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。

根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。

1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。

取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC 测定溶液。

1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min波长：240nm温度：40℃进样量：20μl2 实验结果2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。

牛奶中三聚氰胺的检测方法

牛奶中三聚氰胺的检测方法
牛奶是人们日常生活中常见的饮品，而三聚氰胺是一种有毒的化学物质，如果存在于牛奶中，将对人体健康产生严重的危害。

因此，对牛奶中三聚氰胺的检测方法进行研究具有重要的意义。

首先，常见的检测方法之一是高效液相色谱-质谱联用技术。

通过该技术，可以对牛奶中的三聚氰胺进行快速、准确的检测。

该方法操作简便，检测速度快，且具有较高的灵敏度和准确性，因此在实际应用中得到了广泛的应用。

其次，还可以利用免疫学检测方法来检测牛奶中的三聚氰胺。

这种方法利用抗体与三聚氰胺结合产生免疫反应，通过测定反应产物的含量来确定样品中三聚氰胺的含量。

这种方法操作简便，不需要昂贵的仪器设备，因此在一些简易的检测场合也得到了广泛的应用。

另外，还可以利用质谱技术对牛奶中的三聚氰胺进行检测。

质谱技术具有高分辨率和高灵敏度的优点，可以对样品中的化合物进行准确的鉴定和定量分析。

因此，该技术在牛奶中三聚氰胺的检测中也具有重要的应用价值。

除了以上提到的几种常见的检测方法外，还有一些其他新型的检测方法也在不断的发展和完善中。

例如，近年来，一些研究人员提出了基于纳米材料的检测方法，利用纳米材料对三聚氰胺进行富集和检测，具有操作简便、检测灵敏度高等优点。

总的来说，牛奶中三聚氰胺的检测方法有多种多样，每种方法都有其独特的优势和适用范围。

在实际应用中，可以根据具体的需求和条件选择合适的检测方法。

随着科学技术的不断进步，相信对牛奶中三聚氰胺的检测方法也会不断地得到改进和完善，为保障牛奶质量和人们的健康提供更加可靠的技术支持。

乳中三聚氰胺的测定

乳中三聚氰胺的测定概述三聚氰胺是一种有机化合物，常用于工业生产中的胶粘剂和树脂制造等。

然而，由于其毒性和致癌性，三聚氰胺被禁止在食品和饲料中使用。

因此，对于乳制品中三聚氰胺的测定显得尤为重要。

本文将介绍乳中三聚氰胺的测定方法及其应用。

一、乳中三聚氰胺的来源和危害乳制品是人们日常生活中常见的食品之一，而乳中三聚氰胺是一种常见的污染物。

三聚氰胺通常来自于牲畜饲料中的添加剂，当牲畜摄入三聚氰胺过多时，其代谢产物会通过牛奶等分泌物进入乳制品中。

三聚氰胺对人体健康有严重危害，可能导致泌尿系统疾病、肾结石甚至导致肾衰竭。

二、乳中三聚氰胺的测定方法1. 红外光谱法红外光谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。

该方法基于三聚氰胺在特定红外光波长下吸收的特性，通过测量样品中红外光的吸收强度来确定三聚氰胺的含量。

红外光谱法具有快速、准确的优点，但需要专业的仪器设备和操作技术。

2. 气相色谱法气相色谱法也是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。

该方法通过将样品中的三聚氰胺蒸发并分离，然后通过气相色谱仪进行定量分析。

气相色谱法具有灵敏度高、分离效果好的优点，但需要较长的操作时间和较高的设备要求。

3. 液相色谱法液相色谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。

该方法通过将样品中的三聚氰胺溶解并分离，然后通过液相色谱仪进行定量分析。

液相色谱法具有准确度高、操作简便的优点，但需要一定的样品前处理步骤。

三、乳中三聚氰胺的应用1. 食品安全检测乳中三聚氰胺的测定在食品安全检测中具有重要意义。

通过对乳制品中三聚氰胺的测定，可以保障消费者的健康和权益，防止不合格产品上市和流入市场。

2. 生产控制与质量保障乳制品生产过程中对三聚氰胺的测定也非常重要。

通过对原料和成品中三聚氰胺的监测，可以及时发现和控制潜在的污染源，确保产品质量和生产工艺的稳定性。

3. 法律监管与标准制定乳中三聚氰胺的测定在法律监管和标准制定中起着重要的作用。

通过对乳制品中三聚氰胺含量的限制和监测，可以制定相应的法律法规和标准，保障乳制品行业的健康发展。

乳品中三聚氰胺快速检测解决方案

28 食品安全导刊 2010年11月刊ANAlySIS & TEST 自2008年三聚氰胺事件爆发以来，乳品安全一直备受关注。

为了加大对乳品行业的监管力度，使中国乳品行业迅速恢复元气，相关职能部门出台了多项措施：在质量控制方面，要求对奶源做到严格把关，有效提高乳品质量安全系数。

因此，在奶站收奶环节，企业对原料奶的检测把关显得尤为重要，同时为保证牛奶不发生腐败变质的现象，必须在最短的时间内对其进行检测并立即入罐冷藏，这些都对乳品的检测技术提出了挑战。

常规的三聚氰胺残留量检测方法主要有液相色谱/质谱法（LC-MS）、高效液相色谱（H PLC）、液相色谱串联质谱（LC-M S-M S）等，这些方法因为存在仪器设备昂贵、检测过程繁琐、检测时间太长和对检验人员的技能要求高等局限，所以不适合现场监控和大量样品的筛查，在鲜奶收购环节使用不现实。

鉴于此，如何选择一种快速、低成本的检测方法，构建从奶□ 张德红扶胜杜祥乐北京望尔生物技术有限公司站、企业到政府监管的安全检测网络已成为当前迫切需要解决的问题。

目前，快速筛查技术主要有两大类：生物分析技术和化学分析技术。

生物分析技术又包含免疫学方法，该方法具有检出限低、准确性好、灵敏度高、重现性好等特点，是现在和未来快速筛查技术发展的主流技术，非常适合对原料乳的快速检测。

依托此项技术，北京望尔生物技术有限公司（以下简称北京望尔）开发出三聚氰胺酶联免疫试剂盒和胶体金试纸卡等检测产品，为广大乳品企业及相关机构提供了有效的三聚氰胺快速检测方案。

三聚氰胺酶联免疫试剂盒检测方案检测原理三聚氰胺试剂盒采用间接竞争E L I SA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的三聚氰胺将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗三聚氰胺抗体，在加入酶标二抗后，用T M B底物显色，样本吸光值与残留物三聚氰胺的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。

乳制品中三聚氰胺检测方法的改进

２８４
新疆医科大学学报
ＪＵＲＮＩＪＡＮＧＭＥＩＡＬＵＮＶＥＳＴ２１ｒ，３３ＯＡＬＯＦＸＮＩＤＣＩＲＩＹ００Ｍａ．３（）
乳制品中三聚氰胺检测方法的改进
王新娣，李莉一，田兰，李新霞，阿布力孜・阿卜扎依尔杜
（ａｍｔＰｈｒｃｌｅｅｏｎｎｄｃｌＵｎｖｒｉｙ，Ｕｒｍｑ３０，Ｃｈｎ）ｉｕｉ８０１１ｉａ
Ａｓａｔ：ｊｃｉＴｄｆｈＬｔｏｆ／２８－２０ｈｔｅｅｍｉｅｈｌｍｉｅｉｂｔｃ０ｂｅｔｅｏｍｏｉｔｅＨＰＣｍｅｈｄｏＴ２３８０８ｔａｔｒｎｄｔｅｍｅｒｖｙＧＢｄａｎｎ
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（疆医科大学药学院，新疆新乌鲁木齐８０１）３０１
摘要：的对国家标准Ｇ／２３８２０目ＢＴ２８－０８中高效液相色谱法（Ｌ）乳制品中三聚氰胺的检测方法进ＨＰＣ对

三聚氰胺污染乳品事件的思考及对策

三聚氰胺污染乳品事件的思考及对策2008-11-17 11:57:09 【大中小】【您是本文第位读者】改革开放以来，我国的乳制品行业与国内其他行业一样，挣脱了计划经济的束搏之后，以市场化的商业模式保持了较快的发展势头，尤其是近十年来乳业经济每年以 20%的递增速度，远远超过了世界乳业同期1.5%的增长水平。

2007年全国奶类总产量达到3680多万吨，全国城镇居民人均乳制品消费量达到 29.69公斤，奶农实现买奶收入1000亿元，同时拉动6000亿元的养殖、饲料、运输、包装、乳制品加工及产品销售等链条产业的经济发展。

应该肯定乳业在丰富人们“菜篮子”、促进农民增收致富、推动国民经济发展建设中发挥了重要作用。

但是，由于大家注重于追求乳业经济发展速度，而忽略了行业上的规范管理，因此在发展过程中必然要出现，类似三聚氰胺污染事件等问题。

这次三聚氰胺污染乳品事件对全国的乳行业，形成了一场巨大的震荡和冲击，无论是近期乃至今后一段时间内，对国内的乳品、奶牛养殖、相关的链条产业以及我们在国际上的食品安全形象利益，必将付出怵目惊心的巨大代价。

我们作为从事乳业及原奶生产管理的工作者，是经历这场灾难的当事人，大家在流泪的同时要认真反思、客观评价我国的乳业发展，深刻检讨我们在发展中犯过的错误以及存在的问题，透过三聚氰胺事件的表面，认真剖析我国乳业在发展中存在问题的根源，研究总结出科学的措施来应对这黎明前的挑战。

1 酿成三聚氰胺污染乳品事件的五个主要原因1.1 乳制品企业失去了掌控奶站的实质性权利，让不法奶站业主(奶贩子)非法谋取私利有机可乘。

在计划经济时期，奶站是乳制品企业的一个直属单位，由企业投资建设奶站并派出专业人员负责牛奶的收购管理，企业直接掌握和控制奶站的人、财、物。

而当今的奶站在所有制性质上发生了根本变化，应该肯定奶站发挥了企业与奶农的纽带、提高奶源质量、促进我国奶业发展中的重要作用。

目前全国大约有奶站30000个，其中只有少部分是乳制品企业直属牧场奶站，绝大多数奶站是由个体业主投资兴建并自主管理。

乳制品中三聚氰胺检测方法及其改进

乳制品中三聚氰胺检测方法及其改进作者：王丹朱小梅来源：《食品安全导刊·下旬刊》2019年第04期摘要：2008年三鹿奶粉中查出含有三聚氰胺，导致数千名患儿出现肾结石问题，还有多名儿童死亡。

奶粉安全问题的代价是沉重的，该事件曝光之后一度引起了社会的恐慌和消费者对于国产奶粉极度的不信任，为此，国家各部门马上对该事件进行调查，并对我国乳制品行业进行了严格规定，对于乳制品中的三聚氰胺检测也出台了一系列法律法规。

本文对乳制品中三聚氰胺的检测方法进行分析，并闡述如何改进其检测方法。

关键词：乳制品;三聚氰胺;食品安全;奶粉三聚氰胺是一种化工原料，如果添加到食品中会严重威胁人们的身体健康，其分子式是C3H6N6，该物质很难被人体代谢，一旦进入人体或动物体内很容易诱发肾结石和肾衰竭，严重的会导致死亡。

蛋白质是人体所需的重要营养物质，也是乳制品的主要组成部分，蛋白质的含氮量只有不到20%，而三聚氰胺的含氮量高达66.6%，有些根据氮含量测定蛋白质的研究方法不能区别三聚氰胺与蛋白质中的氮，所以三聚氰胺又称“伪蛋白”，一些利欲熏心的不法商家不顾的消费者身心健康，将三聚氰胺添加到食品当中，对消费者的身体造成巨大伤害。

所以需要找到一种快速鉴别这种“伪蛋白”的方法，还消费者一个安全健康的食品消费环境。

1 免疫测定法免疫测定法中一个很重要的方法是酶联免疫吸附法，这种方法的基础是免疫酶技术，通过酶与样品中的抗原或抗体相结合，从而反映出样品中是否含有三聚氰胺。

具体做法是在实验过程中加入相关试剂，根据试剂颜色来对这种酶是否有免疫反应进行判断。

试剂和样品反应之后，发现样品中对应的抗原和抗体含量与颜色成正比。

所以，只要观察底物的颜色和深浅就能得出结论。

免疫测定法操作比较方便，检测设备简单，检测手段方便，是当今比较广泛使用的检测方法之一。

2 现代仪器分析方法2.1 气相色谱-质谱联用法该种检测方法是利用溶液提取样品中的三聚氰胺，提取之后的提取液经离心后，再经过混合型阳离子交换固相萃取柱净化，然后再进行衍生，其衍生物利用质谱扫描仪进行检测，通过观测衍生物的质谱碎片来进行定性、定量分析。

改进乳制品中三聚氰胺液相色谱检验方法论文

改进乳制品中三聚氰胺液相色谱检验方法的研究分析摘要：三聚氰胺所引发的食品安全问题是有目共睹的，在对其进行检测的过程中，根据国标规定可以采用液相色谱的检定方法。

但是规定中的检测方法尤其局限性，因此本文从改进流动相的角度对规范方法进行了改进，并获得了较好的效果。

关键词：三聚氰胺液相检测改进实验一、三聚氰胺及其检测方法简介三聚氰胺是一种化学物质，其真正的学名为三胺三嗪，也可称之为密胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，是一种无色无味的粉末，具体分子为单斜晶体，分子式为c3n6h6，核心的结构为氮环，是一种重要的氮杂环形式的有机化工原料。

三聚氰胺中的氮元素含量较高，可以达到三分之二，每增加1%的三聚氰胺在采用凯氏定氮法进行检测的时候，折算出来的蛋白质含量就会虚涨4%，而且其生产成本低廉。

基于此种性质，一些生产的厂家将其利用在食品生产中，对蛋白粉、液态奶、奶粉、饲料等进行违法的添加，以此形成蛋白质增高的情况，获得虚假的产品质量信息，从中获得不法利益。

在美国就曾经发生过因为三聚氰胺超标的小麦蛋白粉、大米蛋白粉所生产的宠物饲料在使用过程中造成动物死亡的情况。

而在2008年我国也应为三聚氰胺的违法添加而出现了奶粉危机，其原因就是婴儿使用了三聚氰胺的奶粉而造成了不良的后果。

在随后的检测中，累计检测出因为问题奶粉而导致泌尿系统出现异常的患病儿童多达近三十万。

鉴于上面所罗列的三聚氰胺的危害，我国已经出台并制定了一些列对三聚氰胺的检测和管理的规定，以控制在食品中添加三聚氰胺的行为，在《原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法》这一国家标准中，进一步规定了高效率液相色谱法、气相色-质谱连用的方法、液相色谱与质谱/质谱的三种检测方法为国家认可的乳品中三聚氰胺的检测手段，检测和定量的标准分别为2mg/kg、0.5mg/kg、0.01mg/kg。

对食品中所含的三聚氰胺的检测也参考上诉三种方法。

在实际中通常是按照国标的基本操作来进行试验和确定检测的结果。

浅析乳制品中三聚氰胺检测能力验证

浅析乳制品中三聚氰胺检测能力验证浅析乳制品中三聚氰胺检测能力验证摘要：本文要以国家认监委组织的三聚氰胺能力验证为契机。

以岛津液相LC-10A配紫外检测器为例,以离子对试剂缓冲液/乙腈水溶液为流动相,通过改变流动相的配比, 从而调节该物质的最正确别离度，优化仪器条件，来提高工作效率。

并对乳制品样品的前处理方法进行探讨和改良.关键词：乳制品三聚氰胺检测高效液相色谱离子对试剂加标回收率探讨引言：三鹿奶粉事件发生以来，三聚氰胺检测工作量急剧增加，检测要求越来越高。

为了验证检测实验室的检测技术能力，强化检测实验室监督管理，国家认证认可监督管理委员会于2021年10月中旬开展了这次能力验证活动。

在此次能力验证活动中，阿克苏地区质量与计量检测所的“乳品中三聚氰胺检测〞能力验证工程获得“满意〞结果，说明该所三聚氰胺的检测能力符合国家有关要求，能够完全满足三聚氰胺检测的需要。

就本次能力验证采用高效液相色谱法做一些实验探讨。

三聚氰胺〔化学式：C3H6N6〕呈弱碱性，能溶于甲醛、乙酸等，微溶于水和醇，不可用于食品加工或食品添加物。

三聚氰胺可用于生产食品包装材料、农药和化肥，可能从环境、食品包装材料等途径进入到食品中，在产品中检出微量属于正常。

三聚氰胺的含氮量为66％左右，常被不法商人添加到食品中，以提升检测中蛋白质的含量指标。

一：原理试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。

仪器与试剂仪器岛津高效液相色谱仪LC-10A、电子分析天平〔感量为0.0001g〕、电子天平〔感量为0.01g〕、离心机、超声波清洗器、旋涡混合器、固相萃取装置、氮吹仪、真空泵、50 mL具塞塑料离心管等。

试剂与材料试验用水均符合GB/T 6682-2021?分析实验室用水规格和试验方法?一级水；甲醇、乙腈〔色谱纯〕；氨水、柠檬酸〔优级纯〕；辛烷磺酸钠：纯度大于98.0%；50％甲醇水溶液；1％三氯乙酸溶液；5％氨化甲醇溶液；离子对试剂缓冲液：准确称取2.10 g 柠檬酸和2.16 g 辛烷磺酸钠，参加约980 mL 水溶解，调节pH 至3.0 后，定容至1L 备用；三聚氰胺标准品：纯度大于99.0%；1 mg/mL的三聚氰胺标准储藏液〔用1+1甲醇-水溶液溶解定容〕；阳离子交换固相萃取柱：临用前依次用3 mL甲醇和5 mL 水活化；微孔滤膜：0.2μm，有机相；氮气：纯度大于99.999%等。

有关乳制品中三聚氰胺检测方法的改进与探讨

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１
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在试验中还发现，使用乙腈作为蛋白沉降剂时，
１，３，１试验方法
沉降效果很差，使用离心机４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后，
按，Ｂ，￣ＧＢ／Ｔ２２３８８—２００８第一法，称取２ｇ（精确至试样依然混浊，过滤缓慢。经查证，乙酸铅也可作为０．０１ｇ）试样于５０ｍＬ具塞塑料离心管中，加入１５ｍＬ１％蛋白沉降剂，试验设置乙酸铅为蛋白沉降剂，检验其三氯乙酸溶液和５ｍＬ乙腈，超声振荡提取后，以沉降效果。
ＤＯＩ：１０．１９３０５／ｊ．ｃｎｋｉ．１１－３００９／ｓ．２０１８．０６．０１２摘要：通过试验对ＧＢ／Ｔ２２３８８—２ｏＯ８《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》第一法— — 高效液相色谱法
中的流动相ｐＨ、流动相的比例、蛋白沉降剂三个方面进行了改进和优化．．试验结果表明：改进和优化后的方法灵敏度高、稳定性好，回收率达到９７￣／，，以一Ｌ，相比原方法具有明显的优势，值得推广应用关键词：三聚氰胺；乳制品；检测方法；改进与探讨
【质安量全中圈娇冲２０１８·６
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有关乳制品中三聚氰胺检测方法的改进与探讨
贺习文（陕西秦云农产品检验检测有限公司，渭南７１４０００）中图分类号：ＴＳ２５２。１文献标识码：Ａ文章编号：１００４—４２６４（２０１８）０６—００４２—０４

高效液相色谱法测定奶制品中的三聚氰胺

1.3.2 色谱条件检测波长 240nm；DBS-C8 色谱柱(150mm × 4.6mm，
5μm)；流动相为乙腈 - 缓冲液(7.5:92.5)；流速 1.0ml/ min；柱温 2 0 ℃；进样量 20μl；流动相和试样液使用前过 0.45μm 滤膜。
1.3.3 试样液提取、净化称取 5g(称准至 0.1mg)样品于 50ml 具塞比色管中，
2.4 样品中三聚氰胺的提取与净化三聚氰胺呈弱碱性，可溶于甲醇和乙腈，三氯乙
酸能使其转化成盐。用三氯乙酸 - 乙腈为提取剂，通过超声和离心，制得的提取液较浑浊，因为样品基质复杂。本研究用三聚氰胺含量较高的三鹿奶粉为提取样品，以加 2ml 醋酸铅溶液作沉淀剂和不加醋酸铅溶液作对比实验，发现加醋酸铅沉淀剂，所得提取液清亮，但测定结果偏低 22.92%，说明加沉淀剂尽管能使提取液
9.96
0.034
三
0.032
聚
0.030
氰
0.028
胺
0.026
0.024
0.022
0.020
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 时间(min)
图４三聚氰胺标样色谱图(1μg/ml) Fig.4 HPLC chromatogram of melamine standard (1 μg/ml)
ion exchange column, followed by HPLC determination. Melamine was separated by a DBS-C8 column (4.6 × 150 mm, 5μm,
Thermo) using acetonitrile–cushion solution (1-pentan esulfonic acid sodium salt – citric acid monohydrate) as mobile phase

原料乳与乳制品中三聚氰胺测定前处理方法的改进研究

原料乳与乳制品中三聚氰胺测定前处理方法的改进研究摘要：本文的主要研究内容是对国标GB/T22388-2008三聚氰胺检验方法样品处理进行改进。

新的处理方法中分别采用在“超声提取20min”、“用三氯乙酸溶液定容至25mL，摇匀，过滤”、“直接移取3mL滤液做待净化液”等过程代替国标中“超声提取10min，再振荡提取10min”、“以不低于4000r/min离心10min。

上清液经三氯乙酸润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL”、“移取5mL 滤液，加入5mL水混匀后做待净化液”的方法来检测乳制品中三聚氰胺的含量。

研究表明，新方法超声提取效果比振荡提取好，三聚氰胺的回收率得到显著提高。

新方法具有良好的重现性，检出限为1mg/kg，回收率均在90%以上。

通过使用该方法，样品检测的灵敏度和准确度明显得到提高，并缩短了检测时间。

关键词：样品处理高效液相色谱乳制品三聚氰胺三聚氰胺是一种白色晶体，其分子中含氮量非常高（达66.7%）[1]。

由于用“凯氏定氮法”测饲料和食品中的粗蛋白质的含量，其实只是测氮的含量，再根据蛋白质的含氮量（15%～17%）折算成蛋白质[2]。

因此通常情况下不能区分这种“伪蛋白氮”。

近年来，许多不法商在生产乳制品等高蛋白食品时，为了降低成本，添加三聚氰胺来提高食品中的含氮量。

众所周知，三聚氰胺的食物被人或动物食用后，可以使动物发生肾衰竭并导致死亡[3]。

自“三鹿奶粉”曝光后，三聚氰胺就成为了在我国一个重点监控的不可用于食品的添加物。

因此，如何准确地检测出食品中三聚氰胺的含量，对我国乳制品的健康发展起到非常关键的作用。

目前，用于乳制品中三聚氰胺的检验方法主要是GB/T 22388-2008[4]“原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法”及GB/T 22400-2008[5]“原料乳中三聚氰胺快速检测方法”。

现行国家公告中婴儿配方食品中三聚氰胺的限量值为1mg/kg，其他食品中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg。

高效液相色谱法测定牛奶制品中三聚氰胺的方法改进

高效液相色谱法测定牛奶制品中三聚氰胺的方法改进摘要】目的对高效液相色谱法测定牛奶制品中三聚氰胺的国标方法改进和探讨。

方法通过对能力验证的考核样多次试验，从样品前处理、净化、流动相、仪器条件4个方面，对国标中不够完善、欠缺的地方作了改进和探讨。

结果用改进方法测试了3份奶粉考核样，测定结果及回馈Z值均为满意。

结论改进后的方法有效，可行。

【关键词】高效液相色谱牛奶三聚氰胺原料乳与乳制品中三聚氰胺的高效液相检测两种标准方法，分别是国家国家质检总局和国家标准委员会于2008 年发布《GB/T22400-2008原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》, 《GB/T22388-2008原料乳及乳制品中三聚氰胺检测液相色谱法》中的第一法。

按照国标法检测三聚氰胺的过程中发现了国标方法里一些不够完善、欠缺的地方，因此对实验过程中出现的一些问题进行了改进和探讨，为进一步完善三聚氰胺的检测方法提供参考；通过对考核样品的检测分析，结果令人满意。

1 材料与方法1.1 仪器与设备瓦里安Prostar-240高效液相色谱仪配240二极管阵列检测器，电子天平：感量为0.01g和0.1mg，超声波清洗器，漩涡混匀器，固相萃取装置，转速大于4000r/min离心机，2ml具塞PVC离心管，混合型阳离子交换固相萃取小柱60mg、3ml ，0.22μm混合系微孔滤膜。

1.2试剂除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为一级蒸馏水。

乙腈：色谱纯。

0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液。

三氯乙酸溶液(5%)。

离子对试剂缓冲液：准确称取2.10g柠檬酸和2.16g 辛烷磺酸钠，加入约980mL水溶解，调节pH至3.0后，定容至1L。

三聚氰胺标准溶液：称取三聚氰胺标准品1021.0mg，用甲醇溶解并定容至1000ml，配成含量为1.021mg/ml的标准储备液。

将标准储备液稀释成浓度为0.0102、0.0255、0.0510、0.1021mg /ml标准系列溶液。

乳制品中三聚氰胺检测方法的改进

乳制品中三聚氰胺检测方法的改进王新娣;李莉;田兰;李新霞;阿布力孜·阿卜杜扎依尔【摘要】目的对国家标准GB/T22388-2008 中高效液相色谱法(HPLC)对乳制品中三聚氰胺的检测方法进行改进,并对两种检测方法进行比较.方法采用20%甲醇、10%三氯乙酸、6 g/L磺基水杨酸、0.1 mol/LHCl对乳制品样品进行超声提取、离心处理,取代原有的固相萃取净化,用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm)分离,柠檬酸与辛烷磺酸钠组成的离子对试剂(pH 3.0)和乙腈作为流动相(90∶10),HPLC定量测定.结果改进方法的定量限为0.2 mg/kg,线性范围2～50 mg/L,平均回收率90%～110%,精密度RSD<7%(n=5),符合国家标准要求(RSD<15%).结论改进后的方法缩短了样品前处理时间,节约样品检测成本,可应用到乳及乳制品中三聚氰胺的快速检测.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2010(033)003【总页数】3页(P248-249,252)【关键词】三聚氰胺;高效液相色谱法;定量分析【作者】王新娣;李莉;田兰;李新霞;阿布力孜·阿卜杜扎依尔【作者单位】新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R927.11三聚氰胺(Melamine)是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要有机化工原料，具有肾毒性。

2008年9月发生的毒奶粉事件后，不断有三聚氰胺在乳制品中被检测出的相关报道，三聚氰胺因能导致人体肾结石，甚至肾衰竭而被强制限量。

2008年10月7日，国家质检总局、国家标准委员会发布了GB/T22388-2008 国家标准[1]，对三聚氰胺的检测有高效液相色谱法(HPLC)，液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)和气相色谱-质谱联用法(GC-MS)。

三聚氰胺分析的完美解决方案

三聚氰胺分析的完美解决方案下载液相色谱柱：HiSep OTS三聚氰胺分析柱150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0946150）固相萃取柱：HiCapt Melamine(三聚氰胺专用柱)（60mg/3mL，订货号：24-00603 ）应用维泰克科技（武汉）有限公司成功研发的疏水与强阳离子交换混合模式色谱柱HiSep OTS三聚氰胺分析柱，建立了乳制品中三聚氰胺的快速检测方法。

该方法具有以下特点：∙操作简单：不需要离子对试剂，即能分析三聚氰胺∙成本低廉：全新技术，使柱平衡时间缩短1/2，试剂成本减少1/2∙应用广泛：适用于三聚氰胺等极性小分子的分离分析，也可用于LC/MS分析三聚氰胺∙技术先进：出色的分离能力，即使样品不做净化，也能实现三聚氰胺与杂质的完全分离1 色谱条件色谱柱：HiSep OTS三聚氰胺专用柱;流动相：甲醇/5mM乙酸铵（乙酸调pH3.5）=20/80(注：5mM醋酸铵的配制方法：称取乙酸铵0.1927g，加水500mL，用乙酸调pH至3.5，混匀，备用。

) 流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL检测器：UV/PDA 检测波长：240nm2 标准线性取三聚氰胺标准品，用流动相稀释成浓度为0.8μg/mL、2.0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL 的标准工作液，分别进样，得到校准曲线(见图1)，结果表明线性良好，相关系数为R2= 0.9999。

3 样品处理及结果3.1 国标法（参照GB/T 22388-2008）3.1.1样品前处理（需SPE净化）样品提取：称取2.0 g试样，加入20mL三氯乙酸溶液(1%水溶液)和5mL乙腈，涡混，超声提取15min，5000 r/min 离心10 min。

取上清液5mL，加入5mL水混匀后作待净化液。

SPE净化：采用HiCapt Melamine(三聚氰胺专用SPE固相萃取柱)（订货号：24-00603），先待净化液转移至固相萃取柱中。

高效液相色谱法测定乳粉中三聚氰胺的方法优化

高效腋相色谱法测定乳粉中三聚氟服的方法优化■文丨卢竹阳沈蕾陈丹莹柏宁江苏省南通市产品质量监督检验所二聚気胺含氮量高，俗称“伪蛋白”，几乎无味，微二^溶于水，可溶于甲醇、乙酸、甲醛等，经常被用作化工原料，对健康有害，我国明确规定三聚氟胺不是食品原料，也不是食品添加剂，禁止人为添加。

“三鹿奶粉”事件影响恶劣，也给食品检验机构敲响警钟，三聚氧胺参数在乳品检测中成了必检指标，研究其检测方法尤为重要。

GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氧胺检测方法》明确规定，测定三聚気胺有三种方法，即液相色谱-质谱/质谱法、气相色谱-质谱联用法和高效液相色谱法前两种方法涉及的仪器高端精密，费用昂贵，后续维护保养较为繁琐，不具备普遍性，本文对高效液相色谱法检测乳粉中三聚氧胺的前处理和色谱条件进行了优化。

一、材料和方法1.仪器。

Agilent-1200高效液相色谱仪（VWD）,多功能氮吹仪，高速冷冻离心机，数控超声波清洗器，电子天平（I级），固相萃取联用仪，SPE小柱：Poly-Sery MCX,60mg/3mL o2.试剂。

三聚氟胺标样（1.0mg/mL）,甲醇、乙睛、正己烷均为色谱纯，柠檬酸、辛烷磺酸钠、氨水、三氯乙酸均为分析纯。

3.样品前处理。

（1）提取"准确称取lg乳粉置于50ml具塞离心管中，加入8ml三氯乙酸溶液（1%）和2ml乙睛,超声提取约lOmin,涡旋提取约lOmin,9500r/min离心8min,取上清液于50ml离心管中；残渣重复提取一次，合并两次提取液，加入10ml三氯乙酸溶液和饱和的正己烷溶液，涡旋振荡lmin,9500r/min离心6min,取下层清液，待净化.（2）净化"依次用3ml甲醇和5m冰对SPE小柱进行活化和平衡，抽至近干；将待净化的清液转至SPE小柱中，用3ml水和3ml甲醇进行淋洗，抽至近干；用6mL氨化甲醇溶液（5%）洗脱，洗脱液于5（TC氮气吹干，残留物用lml 流动相定容，涡旋混合lmin,过0.22|xm微孔水相滤膜后，供测定。

乳与乳制品三聚氰胺检测方法的探讨

乳与乳制品三聚氰胺检测方法的探讨____梁宝爱（山西省食品质量监督检验中心）三聚氰胺(cyanuramide)，分子式C3H6N6，又称蜜胺，2，4，6一三氩基一1，3，5一三嚎，白色单斜棱晶。

三聚氰胺作为一种化工原料，在塑料，涂料，粘合剂等行业广泛应用，三聚氰胺是某些农药和化肥的原料和代谢产物，也是食品包装材料的原料。

根据世界卫生组织专家估计和我国已有检测结果，采用三聚氰胺—甲醛树脂制作的食品餐具在与食品接触时会有微量的三聚氰胺迁移出来，因此，三聚氰胺在环境中存在。

以上这些因素均可导致食品中可能含有微量三聚氰胺。

三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加剂，严禁人为添加到食品中。

人为在食品中添加三聚氰胺是一种违法行为。

鹿牌婴幼儿奶粉事件"的发生就是不法分子在原料乳中掺水，以增加重量牟取非法利益的后果。

奶掺水后会造成原料乳中蛋白质含量下降，为掩盖非法行为，虚增牛奶中蛋白质检出量，不法分子人为在原料乳中加入三聚氰胺。

临床调查发现，三聚氰胺对人体的影响是有可能在泌尿系统形成泥沙样结晶或结石。

如果摄入的三聚氰胺量大，时间长。

可能会在泌尿系统如膀胱和肾脏形成泥沙样结晶或结石。

由于婴幼儿生理结构和饮食结构与成人明显不同，含三聚氰胺的奶粉对不同人群健康的影响也不同。

婴幼儿比较容易引起泌尿系统结石，而成人摄入三聚氰胺引起泌尿系统结石的可能性很小。

2008年10月7日，卫生部等5部门联合发布公告，确定了乳与乳制品中三聚氰胺临时管理限量值，即婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值为1 mg/kg，液态奶(包括原料乳)，奶粉，其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5 mg/kg。

目前，我国对三聚氰胺检测规定了3种方法，分别是高效液相色谱法(HPLC)，气相色谱一质谱法(GC—MS) 和液相色谱一质谱/质谱法(LC—MS/MS)，其定量限(精确度)分别为2 mg/kg，0.05 mg/kg，0.01 mg/kg。

只要检验样品中三聚氰胺真实含量在检测方法定量限以上，检测方法就能准确检出。

如何在乳制品三聚氰胺检测时进行前处理优化

最近，小编在用不同的奶粉基质按照国标方法《GBT22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法第二法液相色谱-质谱/质谱法》做三聚氰胺实验时，发现回收率不好且过SPE小柱之前的待上样液较浑浊，因此小编依据国标方法对实验过程进行了一些优化。

首先，按照国标方法小编进行了一次实验，实验方法如下图所示。

在实验过程中，小编发现过滤之前的提取液悬浮物较多，且有明显的脂肪漂浮在上层，因此可以判断实验所用奶粉基质脂肪含量较高。

在过滤之后，提取液依然较浑浊，在SPE上样过程中，小柱有堵塞现象且有泡沫从小柱中流出，小编判断应该是蛋白质没有沉淀完全。

最后，小编做出来的回收率较差。

按照第一次实验的结果，小编进行了一些优化，为了提取更充分，将震荡提取10min改为涡旋提取10min，为了让蛋白质沉淀更充分，在离心之前，将样品放在-20℃沉淀30min，并且将离心的条件改为在4℃条件下，10000r/min离心10min。

因为此次基质奶粉的脂肪含量较高，因此离心之后小编取上清液，按照国标备注要求加入10ml三氯乙酸溶液饱和的正己烷。

参考国标备注要求如下图所示：上清液涡旋1min，并在4℃条件下，10000r/min离心5min，取下清液，发现溶液较澄清，另外为了减少目标物的损失，同时，小编省去了过滤的步骤，SPE过程非常顺利且没有再出现小柱堵塞的情况。

最后三聚氰胺的回收率在80%左右，依然不是非常理想，需要再次优化。

根据第二次实验结果，小编怀疑奶粉基质中可能有部分目标物没有提取出来或者在上样、淋洗过程中有损失，因此小编进行了二次提取，并进行了分布收集，二次洗脱，最后小编发现上样、淋洗以及二次洗脱中都没有目标物，奶粉的回收率已经达到了95%-105%，满足了此基质下检测的要求。

最终优化后的实验步骤和谱图如下：1、提取称取1g（精确至0.01g）试样于50ml具塞塑料离心管中，加标（10ppm，100ul；10ppm，200ul），加入8ml三氯乙酸溶液和2ml乙腈，超声提取10min，涡旋提取10min，10000r/min 离心10min，取上清液于另一50ml离心管，残渣重复上述步骤再提取一次，合并两次提取液，加入10ml三氯乙酸溶液饱和的正己烷溶液，涡旋1min，10000r/min离心5min，取下层清液，待净化。