栀子西红花苷及醇提物DPPH抗氧化试验及稳定性研究

栀子西红花苷及醇提物DPPH抗氧化试验及稳定性研究专业：药学学生：赵璨指导教师：张浩教授摘要：本课题根据研究栀子果实中主成分之一的西红花苷对二苯代苦味肼基自由基（DPPH）的清除作用，评价了中药栀子果实醇提物及其单体的抗氧化活性，结果表明，不同产地、不同采集时间的栀子果实醇提物及其单体均具有一定程度的抗氧化活性，且其活性随样品溶液浓度上升而增加。

不同产地栀子样品中以广西鹿寨和湖南邵东产样品的抗氧化活性最高，抑制率达48.3% 。

本课题另外还研究了在PH3.0条件下栀子黄色素中单体西红花苷1、3及栀子果实60%乙醇提取部位的稳定性。

通过测定在不同时间处西红花苷及栀子果实60%乙醇提取部位供试品溶液的吸光度值，根据其浓度随时间下降的情况，发现在PH3.0时样品的稳定性不好，因此建议在生产过程中应积极采取措施避免这一不利影响。

关键词：栀子西红花苷抗氧化自由基清除稳定性Studies on Antioxidative Activity and steadiness of Compounds from Gardenia jasminoides EllisMajor:PharmacyStudent:Zhao Can Tutor:Pro.ZhangAbstract: To evaluate the antioxidative activity of the main compounds from dry fractus of Gardenia jasminoides Ellis, we do the study on the effect of clean the anti-free radical of compounds from which. The results show, crocin and 50% EtOH extraction all have the antioxidative activity on some range, and there is prominent difference among all samples. There is respectable resource of Gardenia jasminoides Ellis in the world, we can use it as the material to extract the compounds with antioxidative activity. This experiment have done the further study on pharmacologic function of crocin.Key words:Gardenia jasminoides Ellis， crocin， antioxidative， anti-free radical，steadiness前言栀子是茜草科植物山栀Gardenia jasminoides Ellis.的干燥成熟果实，主产于浙江、福建、江西、湖南、广东。

味微酸而苦。

栀子属植物中含有许多的化学成分，主要有环烯醚萜苷类：京尼平苷(栀子苷geniposide),含量可达6%，并含羟异栀子苷(gardenoside)、山栀子苷(shazhiziside)、京尼平-1-β-龙胆双糖苷(genipin-1-β-gentiobioside)、鸡屎藤苷甲酯(scandoside methylester)、栀子新苷(gardoside)、京尼平苷酸(geniposide)等；色素类成分：黄酮类栀子素(gardenin)，三萜类藏红花素(crocin)和藏红花酸(crocetin)等。

尚含绿原酸、熊果酸。

性寒，味苦。

泻火除烦，清热利湿，凉血散瘀。

用于热病心烦，急性黄疸型肝炎，膀胱炎，目赤肿痛，上消化道出血及局部出血；外治扭挫伤疼。

用量6~9g。

栀子提取物对正常大鼠可增加肝脏二磷酸尿苷-葡萄糖脱氢酶的活力，减轻四氯化碳引起的肝损伤。

京尼平苷、藏红花苷及藏红花酸有利胆作用，此外尚有促进胰腺分泌、抗菌、抗炎等药理作用。

栀子分山栀和水栀，一般认为水栀是山栀的一个变种，杨阳认为水栀的清热利胆、抗炎功效与栀子相当，水栀可作为栀子的生药来源加以利用[1]。

1 化学成分及其药理作用的研究栀子含有三类主要有效成分：环烯醚萜苷、有机酸以及色素,主要为藏红花素等[2]。

栀子苷具有抗炎、解热、利胆和轻泻作用,其京尼平苷是抗炎和治疗软组织损伤的主要成分。

绿原酸为栀子中主要有机酸酯类成分,具有显著的抗炎活性。

熊果酸具有明显的安定和降温作用以及可以降低血清中转氨酶的活性,其突出作用为抗肿瘤,对多种致癌、促癌物均有抵抗作用,表现为对多种恶性肿瘤细胞有明显细胞毒作用及诱导其分化的作用,并可增强机体的免疫功能,抵抗放射后不良反应。

藏红花素是西红花、栀子中共有的色素类成分,广泛用于食品添加剂,又具有去黄疸、利胆及明显的降血脂作用。

近些年对栀子及其有效成分的研究表明,其在消化系统、心脑血管系统、中枢神经系统,以及抗肿瘤方面等具有广泛的药理作用[3]。

1．1 栀子苷类栀子中含有大量的栀子苷，其具有抗炎、解热、利胆和轻泻作用。

Inouye等从栀子中得到栀子苷即京尼平苷(genipoide)、羟异栀子苷(gardenoside)、山栀子苷(shazhiside)、栀子酮苷(gardosede)等多种化合物[4]。

1988年日本的Nishizawa M等人从大花栀子的果实里分离出6，-香豆酰京尼平龙胆双糖苷(genipin-1-β-gentiobioside)。

栀子作为一种具有保肝利胆作用的中药广泛运用于急性黄疸型肝炎等肝胆疾病的治疗。

研究表明，其中起保肝利胆作用的主要是京尼平苷和京尼平。

京尼平苷及京尼平可通过多种途径发挥保肝作用。

研究发现，其可能具有抗炎、抗脂质过氧化、提高还原型谷胱甘肽含量、增强谷胱甘肽过氧化物活性的作用。

京尼平还可能具有抑制由钙离子内流诱导的肝细胞线粒体膜渗透性增高，影响Fas信号表达有关。

京尼平苷对药物代谢和抗氧化系统也具有调节作用，但也有报道表明，过量京尼平有肝毒性。

京尼平苷是通过京尼平发挥其利胆作用的，京尼平可通过增加多药耐药相关蛋白[5]在胆小管膜表达，增加胆汁中的GSH，从而使GSH分泌引起的肝细胞非胆汁酸依赖性部分分泌增加，发挥利胆作用。

此外，其还具有抗高血压，保护神经细胞，抗炎，抗肿瘤，抗血栓的药理作用[5]。

朱江等采用建立Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠类风湿性关节炎模型的方法，观察京尼平苷对实验性大鼠足肿胀的抑制作用;检测血清IL1β和TNFα的水平，结果表明京尼平苷在类风湿性关节炎大鼠中可以下调致炎因子IL1β和TNFα的水平,提示这可能与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关[6]。

朱振家等为了观察京尼平苷预防给药对地鼠胆固醇结石形成的影响，采用高脂肪高蛋白致石饲料造成地鼠胆固醇结石模型，阳性对照药物熊去氧胆酸80mg/kg和京尼平苷50，100mg/kg ig，每天预防给药，给药30d后作胆囊内容物涂片检查观察地鼠的成石率，检测胆汁脂类成分计算胆汁成石指数，结果发现京尼平苷对地鼠胆固醇结石的形成可能具有抑制作用[7]。

赵维民等研究发现传统中药山栀子中的环烯醚萜成分京尼平苷(genipin)与甘氨酸反应可形成兰色色素,初步药理实验显示,该兰色色素对小鼠具有抗炎和镇痛作用。

推测栀子兰色素可能为民间将栀子粉末外用抗炎消肿时的活性物质[8]。

1．2有机酸酯类20世纪90年代，国内外学者先后从栀子中分离出绿原酸(chlorgenic)、3，4-二咖啡酰-5(3-羟基-3-甲基戊二酰)奎尼酸、3，4-二氧-咖啡酰奎尼酸、酯环酸苦藏红花酸、3氧-咖啡酰-4-氧-介子酰奎尼酸及双分子奎尼内酯等[9]。

绿原酸具有广泛的生物活性,现代科学对绿原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域。

绿原酸是一种有效的酚型抗氧化剂,其抗氧化能力要强于咖啡酸、对羟苯酸、阿魏酸、丁香酸、丁基羟基茵香醚(BHA)和生育酚。

绿原酸可通过抑制活化酶来抑制致癌物黄曲霉毒素B1和苯并[a]芘的变异原性；绿原酸还可通过降低致癌物的利用率及其在肝脏中的运输来达到防癌、抗癌的效果。

此外，绿原酸对于创伤的治愈、皮肤健康湿润、润滑关节、防止炎症以及体内血糖的平衡调控等都有一定的疗效。

绿原酸对多种致病菌和病毒还有较强的抑制和杀灭作用[10]。

胡宗福等采用化学发光法，研究了不同浓度的绿原酸溶液对3种活性氧(ReactiveOxygenSpecies)O2·、·OH和H2O2的清除和抗脂质过氧化能力。

研究表明，绿原酸对三种活性氧均有清除作用，其清除能力与浓度呈剂量关系，还与所清除的自由基种类有关系。

绿原酸溶液浓度较大时，对三种活性氧的清除效果均明显而且稳定，而浓度较低时，对O2·和·OH清除效果则不理想，甚至产生一定的促氧化作用。

同样，绿原酸对脂质过氧化也有明显的抑制作用，抑制效果也与浓度呈剂量关系[11]。

詹晓如等分离提取得到金银花活性有效成分绿原酸，将其用于医院常用几种制剂防腐实验，方法以尼泊金乙酯为对照。

结果实验表明0.02%绿原酸具有0.03%尼泊金乙酯相同防腐作用。

得出结论氯原酸可以用于制剂防腐，以消除化学防腐剂毒副作用[12]。

张泽生也研究发现绿原酸具有较强的抑菌效果，对自由基有较强的清除能力，对Fe3+有较强的还原能力[13]。

日本一大学研究组发现咖啡中的绿原酸可以防止癌细胞的扩散。

该组进行的试管实验表明含有普通浓度绿原酸的咖啡可以抑制老鼠身上培养肝癌细胞的扩散。

1．3萜类化合物栀子果实中含有藏红花素(crocin)、藏红花酸(crocetin)等链状化合物。

其中藏红花素为栀子色素成分一种。

1997年一个日本工作组报道从栀子中提取分离出单萜类成分，提取分离方法如下：采用甲醇提取，溶解于水，分别用氯仿，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取，萃取成分分别采用硅胶，反相硅胶，HPLC制备色谱，Sephadex LH-20分离，得到单萜类化合物纯品[14]。

另外，高怡生等从栀子花中分离得到了Cycloartane性心儿萜酸一栀子酸(gardenicacid)。

2006年西班牙的Carmona, Manuel等人从西红花柱头和栀子果实中分离鉴定出了15种西红花酸酯类和西红花苦苷类化合物，其中5种初步确定为新化合物。

1996年瑞士的Pfister, S等人从栀子果实中分离鉴定出了数种β-类胡萝卜素类成分，用UV/vis, cochromatog., and LC-MS法鉴定西红花酸的结构，西红花酸和西红花苷的糖基部分也经由光谱法测定得，13位顺式西红花苷也同样被测定。