高效液相凝胶过滤色谱法测定沙蚕金属蛋白酶的纯度_邓志会

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超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法筛查测定饲料中1

0.1%甲酸）水溶液为流动相进行梯度洗脱。静电场轨道阱全扫描得到 16 种硝基咪唑类药物的一级精确质量数与理论精确质
量数对比，质量偏差在 0.04975~0.93988mDa；同时建立了二级质谱数据库，实现对 16 种硝基咪唑类药物的定性筛查及同步定
量。16 种硝基咪唑类药物在 0.1~200μg/L 浓度范围内线性关系良好 r>0.9990，方法检测限在 25μg/Kg~100μg/Kg，回收率在
49.47%~105.4%。
关键词：硝基咪唑；饲料；超高效液相色谱 - 四级杆 - 静电场轨道阱高分辨质谱
[中图分类号]S816.17
[文献标识码] A
[文章编号]1005-8613（2019）05-0041-06
硝基咪唑类药物具有抗菌作用，尤其是具有很强的抗厌氧菌作用，同时还具有抗结核、抗病毒、抗病毒肿瘤和抗原虫活性等作用。添加硝基咪唑类药物于饲料中，可预防螺旋体引起的猪下痢，亦可用于防治禽类的组织滴虫病及六鞭虫病，此外还有增重作用。但是硝基咪唑类药物在动物产品中的残留不仅危害到消费者的身体健康，对人体产生诸如具有致突变性和潜在的致癌性等毒副作用，引起细菌耐药性的增加，而且同时影响我国畜禽产品的出口贸易。为了保护人
民的身体健康，从源头进行控制的有效手段，因此研究饲料中硝基咪唑类药物的检测方法具有重要的意义。
针对饲料中的硝基咪唑类药物的检测手段比较单一，仪器法居多。目前有关饲料中常见的 16 种硝基咪唑类药物同步测定的 UPLC-Q-Exactive Orbitrap 方法还未见报道。本实验利用超高效液相色谱 - 四级杆 - 静电场轨道阱高分辨质谱联用，建立了 16 种硝基咪唑类药的饲料样品前处理方法和色谱与质谱特征数据库，采用 Full MS/dd-MS2

分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定植物饮料中的8种磺酰脲类除草剂

分析检测分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定植物饮料中的8种磺酰脲类除草剂杜柏豪，陈超明，谭宇鹏，冯绮华（康正检测服务股份有限公司，广东广州 510530）摘要：目的：建立同时测定植物饮料中8种磺酰脲类除草剂的超高效液相色谱-串联质谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）。

方法：样品经乙腈提取，盐析分层，高速离心后，乙腈相使用C18和Al-N固相萃取剂进行联合净化，最后经Poroshell120 EC-C18（150 mm×3.0 mm，2.7 μm）色谱柱洗脱分离，在电喷雾电离源正离子模式下进行离子化，采用多反应监测模式进行测定。

结果：8种磺酰脲类除草剂的基质曲线在10～500 μg·L-1呈现良好线性关系，相关系数r2均大于0.997。

在添加浓度为10 µg·kg-1、20 µg·kg-1、50 µg·kg-1的条件下，8种磺酰脲类除草剂在乌龙茶和凉茶中的平均回收率为73.5%～88.8%，相对标准偏差为2.69%～8.66%。

方法检出限为3.0 µg·kg-1，方法定量限为10.0 µg·kg-1。

结论：该方法回收率高，重现性好，且操作简单，可满足植物饮料中的8种磺酰脲类除草剂残留量的测定。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱法；植物饮料；磺酰脲类除草剂；同时测定Simultaneous Determination of Eight Sulfonylurea Herbicides in Plant Beverages by Dispersive Solid Phase Extraction Coupled with Ultra Performance Liquid ChromatographyTandem Mass SpectrometryDU Baihao, CHEN Chaoming, TAN Yupeng, FENG Qihua(Kangzheng Analysis Services Co., Ltd., Guangzhou 510530, China)Abstract: Object: An ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was established for the simultaneous determination of eight sulfonylurea herbicides in plant beverages. Method: Samples were extracted with acetonitrile and then salted out and layered. After high-speed centrifugation, acetonitrile phase was jointly purified with using C18 and Al-N solid-phase extraction agents. Finally, through Poroshell120 EC-C18 (150 mm×3.0 mm, 2.7 μm) chromatographic column elution separation, then ionized in positive ion mode of electric spray ionization source and determined in multiple reaction monitoring mode. Result: The matrix curves of 8 sulfonylurea herbicides ranged from 10～500 μg·L-1 showed good linear relationships with the correlation coefficient r2 were both greater than 0.997. Under the conditions of spiked concentrations of 10 µg·kg-1, 20 µg·kg-1, and 50 µg·kg-1, the average recovery rates of 8 sulfonylurea herbicides in oolong tea and herbal tea were 73.5%～88.8%, while the relative standard deviations were 2.69%～8.66%. Moreover, the limit of detection of the method were both 3.0 µg·kg-1 and the limit of quantification of the method were both 10.0 µg·kg-1. Conclusion: The method had high recovery rate, good reproducibility and simple operation, which could satisfied the determination of 8 sulfonylurea herbicide residues in plant beverages.Keywords: ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; plant beverages; sulfonylurea herbicide; simultaneous determination作者简介：杜柏豪（1989—），男，广东中山人，本科，工程师。

极大螺旋藻多糖的分离纯化及化学结构分析_邓时锋

第36卷第5期2000年9月南京大学学报(自然科学)JOURNAL OF NANJING UNIVERSIT Y(NATU RAL SCIENCES)Vol.36,No.5Sept.,2000文章编号:0469-5097(2000)05-0579-06极大螺旋藻多糖的分离纯化及化学结构分析*邓时锋,刘志礼,李兆兰,喻利(南京大学生物科学与技术系,江苏南京210093)摘要:极大螺旋藻干粉经热水提取、醇析、Sevag法脱蛋白得粗多糖,经Sephadex G-100凝胶柱层析得白色粉末状多糖纯品(P olysaccharide of Spirulina max ima,PSM).纸层析、凝胶柱层析、高效液相色谱分析表明为均一组分.硫酸-咔唑法、硅胶薄层层析和气相色谱分析表明PSM是一种由L-鼠李糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖、D-甘露糖和葡萄糖醛酸组成的酸性杂多糖,其摩尔比为1.947B0.905:1B1.182B0.338B0.347B1.330.高碘酸氧化和Smith降解表明该多糖中主要含有1y3位和1y6位键合的糖苷键,其主链由L-鼠李糖以1y3位键合的糖苷键组成.红外光谱分析和核磁共振氢谱分析表明其糖苷键键型为A型.Sephadex G-200凝胶柱层析表明其分子量约为2.95万.关键词:螺旋藻多糖;分离纯化;结构测定中图分类号:Q946.3文献标识码:A极大螺旋藻(Sp ir ulina max ima Setch.et Gacdn)是一种多细胞丝状蓝藻,属蓝藻门、颤藻目、螺旋藻属,是一种重要的营养和药物资源.近年来,随着糖科学和糖技术的发展,藻类多糖与其它多糖一样,在作为医药产品方面已日益为人们所重视.如钝顶螺旋藻多糖能够提高机体免疫功能[1],能够增强小鼠骨髓细胞增殖能力,减轻小鼠细胞的辐射遗传损伤[2],并能明显抑制体内移植性癌细胞的增殖[3];极大螺旋藻多糖能明显抑制人血癌细胞的生长[4].本文从工业生产的极大螺旋藻干粉中提取、分离、纯化获得PSM纯品,并对其单糖组成、连接方式、糖苷键键型以及分子量等作了较深入的分析.1材料与方法标准多糖Dex tran T-10、40、70、100、2000(蓝色葡聚糖)均为Sigma公司产品,其余试剂均为国产分析纯试剂.极大螺旋藻粉由江苏常熟生物制品厂提供.1.1提取螺旋藻粉经ZK高速自控组织捣碎机破壁处理,镜检无螺旋状藻体存在.加入10倍体积的蒸馏水,70e保温提取24h,离心,上清液浓缩后加入3倍体积95%乙醇醇析.1.2分离纯化1.2.1小分子杂质及蛋白质的去除粗多糖溶于水中,Sevag法脱蛋白,考马斯亮兰检测为阴性.流水透析2d,蒸馏水透析过夜,浓缩至小体积,加入3倍体积95%乙醇醇析.1.2.2Sephadex G-100凝胶柱层析凝胶柱为70cm@2.6cm,0.1mol/L NaCl洗脱,每管4m L,硫酸-苯酚法检测.*收稿日期:1999-06-18作者简介:邓时锋,男,1976年生,南京大学生物系98级硕士研究生.1.3 纯度鉴定[5]1.3.1 纸层析(PC) 新华中速滤纸(3.5cm @30cm),点样,饱和2h,室温展层6h,展层剂为正丁醇:浓氨水:水(40:50:5),0.5%甲苯氨蓝乙醇液染色,95%乙醇漂洗至背景褪色.1.3.2 凝胶柱层析 Sephadex G -200柱层析(35cm @2.6cm),流速7.5mL/h,0.1mol/L NaCl 洗脱,每管2.5mL 硫酸-苯酚法检测.1.3.3 高效液相色谱分析(H PLC) Waters 600E 高效液相色谱仪,TSK3000GW 层析柱(7.5mm @300mm ),洗脱液为H 2O,流速为0.7m L/m in,示差折射仪检测.1.4 紫外光谱分析(UV) PSM 溶液(2m g/mL)经日立U -3000紫外分光光度计于200nm ~400nm 扫描.1.5 糖苷键键型分析[5]1.5.1 红外光谱分析 PSM 经KBr 压片,经NICOLET 170SFT 型红外光谱仪分析,扫描范围为4000~650cm -1.1.5.2 核磁共振氢谱分析 PSM 在BRUKER AM -500MH z 核磁共振仪上进行分析,溶剂为重水(D 2O),参考标准为四甲基硅烷(TM S).1.6 单糖组成分析[5,6,7]1.6.1 硅胶薄层层析 0.5%CMC 溶液和0.1mol/L NaH 2PO 4的溶液调制硅胶H 薄板,105e 活化30min.取PSM 10mg ,加入3m L 2mol/L 的H 2SO 4封管100e 水解6h,碳酸钡中和,浓缩点样,展层剂为正丁醇:冰醋酸:水(4:1:5),苯胺-邻苯二甲酸试剂显色,与相应的标准品对照.1.6.2 硫酸-咔唑反应采用Dische 法测定.图1 PSM 的高效液相色谱图Fig.1 C hrom atography of HPLC of PSM1.6.3 气相色谱分析取PSM 10mg,加入3mL 2mol/L 的三氟乙酸,封管100e 水解6h,减压抽干,加入3mL 甲醇,减压抽干(共3次),加入10mg 盐酸羟胺,0.5m L 吡啶,90e 水浴反应30min,取出冷至室温,加入0.5mL 乙酸酐,90e 继续反应30min,产物直接进行气相色谱分析,标准单糖经同样处理作为对照.HP6890型气相色谱仪,HP -5融熔石英柱(30m @0.25m m),检测器(FID)温度300e ,载气N 2,流速1.4mL/min.1.7 相邻单糖基连接方式的分析[5]1.7.1 高碘酸氧化取PSM 30mg 溶于55mL 15mmol/L 的NaIO 4溶液,放置暗处(4e ),间或振荡,间隔24h 取样,稀释250倍于223nm 处测定吸光值.1.7.2 Smith 降解经高碘酸氧化后的多糖液约40mL,加入2mL 乙二醇,搅拌30m in,流水透析48h,蒸馏水透析过夜,浓缩至30mL,加入60#580#南京大学学报(自然科学)第36卷mg NaBH 4,室温暗处搅拌还原24h,用0.1mol/L 的乙酸调节pH 至5.5,对流水透析2d,蒸馏水透析过夜,冷冻干燥得多糖醇,加入3mL 2mol/L 三氟乙酸,封管100e 水解6h,减压蒸干,加入3mL 甲醇,减压蒸干(共3次),加入20mg 盐酸羟胺,1mL 吡啶,90e 振荡反应30min,取出冷至室温,加入1mL 乙酸酐,90e 继续反应30m in,产物直接进行气相色谱分析,气相色谱条件同前.图2 PSM 的红外光谱图Fig.2 IR of PSM1.8 分子量测定凝胶柱层析法(Sephadex G -200,35cm @2.6cm)测定其分子量.标准多糖分别上样,上样量为3mg ,流速0.2mL/min,每管2ml,0.1mol/L NaCl 洗脱,苯酚-硫酸法检测,分别求得洗脱体积(V e).蓝色葡聚糖在相同条件下上样,测定其洗脱体积(V o),以分子量对数(lg M )为横坐标,V e/V o 为纵坐标,绘制标准曲线.PSM 在相同条件下上柱,测定其洗脱体积.2 结果2.1 分离纯化极大螺旋藻粉100g 提取粗多糖,经脱蛋白、透析、凝胶柱层析,收集单一洗脱峰,透析,冷冻干燥得白色粉末状PSM 纯品840mg,纯多糖得率为0.84%.2.2 纯度鉴定纸层析结果为单一海蓝色斑点,图3 PSM 的氢谱图Fig.31H -NMR of PSM凝胶柱层析和高效液相色谱分析(图1),结果均为单一对称洗脱峰,表明组分均一.2.3 紫外光谱分析结果显示在260nm 和280nm 处无明显吸收峰,表明PSM 中不含核酸和蛋白质等杂质成分.2.4 糖苷键键型分析 2.4.1 红外光谱分析结果表明,PSM 在3400cm -1附近有O -H 伸缩振动的强吸收峰,2900cm -1有C -H 的伸缩振动,1400~1200cm -1有C -H 的变角振动吸收峰,839.9cm -1处有吸收,表明PSM 为A 型糖苷键(图2).2.4.2 核磁共振氢谱分析结果表明,Cl 位氢主要峰的化学位移大于5.0,无明显裂分,说明PSM 为A 型糖苷键(图3).2.5 单糖组成分析2.5.1 硅胶薄层层析结果表明PSM 由L -鼠李糖、D -木糖、D -半乳糖、D -葡萄#581# 第5期邓时锋,等:极大螺旋藻多糖的分离纯化及化学结构分析糖、D -甘露糖、葡萄糖醛酸组成,其RF 值分别为0.61、0.58、0.38、0.41、0.50、0.12.2.5.2 硫酸-咔唑反应结果为阳性,表明PSM 单糖组成中有己糖醛酸.根据T LC 结果,以葡萄糖醛酸配制标准溶液,得回归方程y =0.00765x +0.01625,r =0.99944(n =5).图4 硫酸-咔唑比色法标准曲线Fig.4 Standard curve of sulfuricacid -carbazole method测得葡萄糖醛酸含量为18.873%(图4).2.5.3 气相色谱分析结果表明(见图5,表1),PSM 由L -鼠李糖、D -木糖、D -半乳糖、D -葡萄糖、D -甘露糖和D -阿拉伯糖组成.表1 PSM 的气相色谱分析结果Table 1 GC analysis of PSMR etT ime/min A rea/%L-鼠李糖17.28834.0430D-阿拉伯糖19.126 5.91814D-木糖19.37815.81754D-甘露糖28.911 6.07201D-葡萄糖29.07017.48596D-半乳糖29.37720.66611综上所述,PSM 由L -鼠李糖、D -木糖、D -葡萄糖、D -半乳糖、D -阿拉伯糖、D -甘露糖和葡萄1.L -rhamnose17.487;2.D -fuctose;3.D -arabinose;4.D -x ylose;5.D -mannose;6.D -g lucose;7.D -galax tose图5 PSM 的气相色谱图Fig.5 GC analysis of PSM糖醛酸组成的酸性杂多糖,其摩尔比为1.947:0.905:1:1.182:0.338:0.347:1.330.2.6 相邻单糖基连接方式分析[5] 2.6.1 高碘酸氧化 10d 后OD 值稳定,根据NaIO 4标准曲线:y =23.681x -0.0323,r =0.9996(n =10),计算高碘酸钠消耗量.吸取10mL 溶液,加入1mL 乙二醇,用NaOH 溶液(0.01mol/L 的邻苯二甲酸氢钾溶液标定)滴定甲酸生成量,其关系为多糖:高碘酸钠消耗量:甲酸生成量=1:0.3891:0.1629,根据高碘酸氧化规则可知,1y 6位键合的糖基占16.29%,1y 3位键合的糖基占77.38%.2.6.2 Smith 降解气相色谱分析结果表明(见图6),降解产物中L -鼠李糖的含量为53%,表明PSM 的主链由L -鼠李糖以1y 3位键合的糖苷键组成.同时极少量的甘油、赤藓醇表明PSM 中含有少量的1y 2位或1y 4位糖苷键.#582#南京大学学报(自然科学)第36卷1.glycerol;2.erythritol;3.L -r hamnose;4.D -arabinose;5.D -x ylose;6.D -mannose;7.D -gluctose;8.D -g alaxtose图6 Smith 降解的气相色谱图Fig.6 GC analysis of Smith degradation2.7 分子量测定经Sephadex G -200凝胶柱层析测得其外水体积为52mL,PSM 的洗脱体积为102mL,根据标准多糖的回归方程y =7.112- 1.157x ,测得其分子量约为2.95万.3 讨论极大螺旋藻多糖成份复杂,分离纯化难度较大,由于其单糖组分较多,因此PSM 精细结构难以测定.实验中对几种脱蛋白的方法进行了比较,发现T CA 沉淀法和H Cl 等电点法效果较好,脱蛋白效率很高,但多糖损失率达38%和34%,为避免多糖降解和损失,因此还是选择较温和的Sevag 法(用氯仿:正丁醇=4:1,混合振荡),纯多糖经紫外光谱扫描表明脱蛋白质、核酸等大分子效果很理想.纸层析、凝胶柱层析和高效液相色谱分析表明纯多糖组分均一,其中高效液相色谱图不是十分好,这可能主要是由于色谱仪稳定性和检测器灵敏度较差的缘故.气相色谱采用糖腈乙酸酯衍生法进行,每种单糖(酮糖除外)均能得到单一的色谱峰,故可根据其峰面积推断单糖的摩尔比.TLC 比GC 少检出一个阿拉伯糖,主要是因为阿拉伯糖含量较低,而TLC 的灵敏度较差所致,GC 未检出葡萄糖醛酸,主要是因为葡萄糖醛酸还原乙酰化产物仍含有羧基,极性大,在此条件下不易气化出峰.多糖具有广泛的生物学活性,是一种天然来源的免疫调节剂,其最大的优点是毒副作用小,来源广.作为抗肿瘤药物,它可以克服肿瘤病人化疗和放疗过程中在杀死肿瘤细胞的同时造成的对机体正常细胞的损伤.因此极大螺旋藻多糖的研究具有广阔的应用前景,其药理药效方面的工作有待于进一步的深入.#583# 第5期邓时锋,等:极大螺旋藻多糖的分离纯化及化学结构分析[参考文献][1] 刘力生,郭宝江,阮继红,等:螺旋藻多糖对机体免疫功能的提高作用及其机理研究[J].海洋科学,1991;(6):44~49.[2] 郭宝江,庞启深,阮继红,等:螺旋藻多糖对植物细胞辐射遗传损伤的防护效应[J].植物学报,1992;34(10):809~812.[3] 刘力生,郭宝江,阮继红,等:螺旋藻多糖对移植性癌细胞的抑制作用及其机理的研究[J].海洋科学,1991;(5):33~37.[4] 刘宇峰,张成武,沈海燕,等:极大螺旋藻胞内多糖对人血癌细胞生长的影响[J].中草药,1999,30(2):115~118.[5] 张惟杰.糖复合物生化研究技术[M ].第3版.浙江大学出版社,1994.202~206.[6] 张惟杰.复合多糖生化研究技术[M ].上海科学技术出版社,1987.294~296.[7] Staub A N.M ethods in Carbohydr [J].Chemistr y,1965,5:5.ISOLATION,PURIFIC ATION AND CHEMICAL STRUCTURE ANALYSIS OF POLYSACCHARIDE FRO MSPIR ULINA MAXIMADENG Shi -f eng,LI U Zhi -li,L I Zhao -lan,Y U li(Department of Biological Science and T echnology,Nanjing U niversity,Nanjing,210093,China)Abstract: Polysaccharide o f Sp ir ulina max ima (PSM )w as isolated and purified from Sp ir ulina max ima by hot water extr action,alcohol precipitation,Sevag method and gel filtr atio n(Sephadex G -100).Its homog eneity w as ex amined by paper chromatography,Sephadex G -200g el column chromatography and HPL C.T he av erag e molecular weight of PSM is 29500.Infr ar ed analysis and t he 1H spectrum of nuclear magnetic resonance analysis show ed that PSM has A -glycoside linkage.I ts mono -saccharide compositio n was identified by thin -layer chromatography and GC.PSM consists of L -rhamnose,D -arabinose,D -x ylose,D -mannose,D -glucose,D -g alactose and glucuronic acid in the ratio of 1.947:0.338:0.905:1:0.347:1.182:1.330.T he results of periodate oxidation and Smith degradation showed that the major linkage of PSM is (1y 3)L -rhamnose.Key words: polysaccharide of sp ir ulina max ima ;isolation and purification;chemical str ucture analysis#584#南京大学学报(自然科学)第36卷。

高效液相色谱法测定耳聋左慈丸中毛蕊花糖苷含量

高效液相色谱法测定耳聋左慈丸中毛蕊花糖苷含量姜雪敏;杨立志【摘要】Objective To establish an HPLC methods for the content determination of acteoside in Erlongzuoci Pills. Methods The method was achieved on an Agilent Extend-C18 column using acetonitrile-0. 1% phosphoric acid ( 17:83 ) as mobile phase at a flow rate of 1. 0 mL/min,and the detection wavelength was 334 nm. The column temperature was30 ℃. Results Quercetin showed good linear relationship in the range of 0. 054 6-1. 365 0 μg, r=1. 000 0 ( n=6 ) , and the average recovery w as 96. 86% with RSD was 0. 81%( n=6 ) . Conclusion The method is accurate , simple , reliable and can be applied for the quality control of Erlongzuoci Pills.%目的：建立测定耳聋左慈丸中毛蕊花糖苷含量的高效液相色谱法。

方法采用Agilent Extend-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm )，以乙腈-0.1%磷酸溶液（17：83）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为334 nm，柱温为30℃。

结果毛蕊花糖苷进样量在0.0546~1.3650μg内与峰面积积分值线性关系良好，r=1.0000（ n=6），平均回收率为96.86%，RSD为0.81%（ n=6）。

高效液相色谱法测定茶条械悬浮细胞中没食子酸含量

高效液相色谱法测定茶条械悬浮细胞中没食子酸含量
齐凤慧;詹亚光;董杰
【期刊名称】《天然产物研究与开发》
【年(卷),期】2010(22)B08
【摘要】茶条槭悬浮培养细胞经过10％浓硫酸．甲醇提取后，用HPLC法测定其没食子酸含量。

色谱条件为：流动相为甲醇／水（4／6），流速0．5mL／min，Waters C18 MS柱，检测波长为270nm。

实验测得的线性范围为20．0—
100μg·mL4（R=0．9996，n=5）。

平均加样回收率为99．86％，RSD为0．09％。

样品稳定性、实验的精密度及重复性三者的RSD均小于1．5％。

表明本法是一种测定茶条械悬浮细胞中没食子酸含量的好方法。

【总页数】3页(P87-89)
【作者】齐凤慧;詹亚光;董杰
【作者单位】东北林业大学生命科学院,哈尔滨150040
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
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高效液相色谱法测定八正胶囊剂中栀子苷含量

高效液相色谱法测定八正胶囊剂中栀子苷含量
王志朝;覃贝
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2008(17)15
【摘要】目的建立用高效液相色谱(HPLC)法测定八正胶囊剂中栀子苷含量的方法.方法色谱柱为Aiehrombond-1C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水(14:86),流速为1.0 mL/min,检测波长为238 nm,柱温为25℃,进样量为10 μL.结果栀子苷质量浓度在2.0-80.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为100.36%,RSD为0.67%(n=6).结论 HPLC法简便,结果准确,回收率好,可用于八正胶囊剂的含量测定.
【总页数】2页(P32-33)
【作者】王志朝;覃贝
【作者单位】广州军区武汉总医院药剂科,湖北,武汉,430070;广州军区武汉总医院药剂科,湖北,武汉,430070
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
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一种用高效液相色谱法测定比拉斯汀中间体有关物质的方法[发明专利]

专利名称：一种用高效液相色谱法测定比拉斯汀中间体有关物质的方法
专利类型：发明专利
发明人：周慧芳,方灿良,刘秋叶
申请号：CN201410006327.X
申请日：20140107
公开号：CN103760260A
公开日：
20140430
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于药物分析领域，公开了一种用高效液相色谱法测定比拉斯汀中间体有关物质的方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱250mm×4.6mm，5μm，以一定比例的无机盐缓冲液体系－有机相为流动相，用于分离分析比拉斯汀中间体的有关物质。

申请人：江苏万特制药有限公司
地址：225300 江苏省泰州市药城大道1号G06
国籍：CN
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凝胶的研究方法.

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激光光散射仪通过对蛋白质等高分子化合物产生的散射光进行统计分析,进而推测蛋白质颗粒大小及粒径分布。同时,色谱技术可以研究分子量分布状况,两者结合可用于大豆蛋白凝胶形成过程中分子聚集/解离机理的探索。
利用DSC来研究大豆蛋白凝胶中水的状态ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ进行DSC测试时,准确称取5～10mg水凝胶样品,小心置于铝试样皿,密封,在氮气气氛保护下试样皿置于Q10差示扫描量热仪中,从- 60℃开始,此温度说明冰的冻结达到平衡,以5℃/ min升温至50℃, 氮气流速40ml/ min,得到大豆蛋白凝胶的DSC谱图假设凝胶中水的热焓值ΔH与纯水ΔH0 相同,从 DSC图上0℃附近热焓可计算出可冻结水(Wfro) (即自由水+中间水以Wf 和Win表示)的含量: Wfro = Wf +Win = (ΔH / ΔH0) ×100% 非冻结水由总水含量减去可冻结水 Wnf = EWC- Wfro = EWC-ΔH / ΔH0×100% ΔH为凝胶中由DSC测出的吸热峰面积算出的单位质量的焓变,J/ g;ΔH0 为纯水单位质量的焓变J/ g
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高效液相色谱(HPLC)2质谱(MS)也应用到凝胶蛋白质结构的分析中来,Christian 等应用此技术测定ε-赖氨酸的交联和游离氨基酸的缺失判断蛋白质交联对凝胶性能的影响。圆二色谱仪(CD)的应用,使得蛋白凝胶在二级结构研究得到进一步的发展,通过此技术可以较精确地得到大豆蛋白各种二级结构(α2螺旋、β2折叠、β转角及无规则卷曲）的占有率。
扫描电子显微镜（SEM）
原子力显微镜（AFM）
可以观察凝胶的网状结构，可以观察非导体物质的高分辨表面形貌，更加清楚的反应蛋白质粒子和聚集体的形状、大小。

利用快速蛋白质液相色谱测定木瓜蛋白酶纯度的方法[发明专利]

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101565739A [43]公开日2009年10月28日[21]申请号200910052722.0[22]申请日2009.06.09[21]申请号200910052722.0[71]申请人东华大学地址201620上海市松江区松江新城区人民北路2999号[72]发明人朱利民苏赛男聂华丽 [74]专利代理机构上海泰能知识产权代理事务所代理人黄志达谢文凯[51]Int.CI.C12Q 1/37 (2006.01)G01N 30/02 (2006.01)权利要求书 1 页说明书 4 页附图 2 页[54]发明名称利用快速蛋白质液相色谱测定木瓜蛋白酶纯度的方法[57]摘要本发明涉及一种利用快速蛋白质液相色谱测定木瓜蛋白酶纯度的方法，包括：配制流动相A溶液：乙酸－乙酸钠缓冲溶液和流动相B溶液：乙酸－乙酸钠－氯化钠缓冲溶液；分别将精制的木瓜蛋白酶和粗制的木瓜蛋白酶置入50ml容量瓶内，加入流动相A溶液至50ml刻度线定容，摇匀，至木瓜蛋白酶充分溶解；最后利用快速蛋白质液相色谱FPLC的离子交换色谱柱进行层析分离，通过计算峰面积比值的公式来计算木瓜蛋白酶的纯度。

该测定方法快速、操作简单，耗时少，结果可信，重复性高，为精确测定木瓜蛋白酶的纯度提供依据，具有重要的学术价值和实际应用意义。

200910052722.0权利要求书第1/1页 1.一种利用快速蛋白质液相色谱测定木瓜蛋白酶纯度的方法，包括： (1)配制流动相流动相A溶液：0.02～0.1mol/L pH4.5的乙酸-乙酸钠缓冲溶液；流动相B溶液：含1.0～2.0mol/L氯化钠的0.02～0.1mol/LpH4.5的乙酸-乙酸钠缓冲溶液；(2)制备对照品溶液将木瓜蛋白酶置入50ml容量瓶内，加入流动相A溶液至50ml刻度线定容，摇匀，至木瓜蛋白酶充分溶解，制得木瓜蛋白酶对照品溶液；(3)制备供试样品溶液将粗制木瓜粉置于50ml容量瓶中，加入流动相A溶液至50ml刻度线定容，摇匀，经滤纸过滤，备用；(4)利用快速蛋白质液相色谱FPLC的离子交换色谱柱进行层析分离，通过计算峰面积比值的公式来计算木瓜蛋白酶的纯度。

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱快速鉴定板蓝根的化学成分

第３４卷第４期化㊀学㊀研㊀究Ｖｏｌ．３４㊀Ｎｏ．４２０２３年７月ＣＨＥＭＩＣＡＬ㊀ＲＥＳＥＡＲＣＨＪｕｌ．２０２３采用超高效液相色谱⁃四极杆⁃静电场轨道阱高分辨质谱快速鉴定板蓝根的化学成分崔维恒，邓晓兰∗，王思琴（中南大学湘雅医学院附属海口医院（海口市人民医院）药学部，海南海口５７０２０８）收稿日期：２０２２⁃０４⁃１９基金项目：海南省自然科学基金（２０Ａ２００３９）作者简介：崔维恒（１９８９－），女，主管药师，研究方向：医院临床药学㊂∗通信作者，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｄｘｌ１２２０＠１６３．ｃｏｍ摘㊀要：采用超高效液相色谱⁃四极杆⁃静电场轨道阱高分辨质谱（ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃ｏｒｂｉｔｒａｐＭＳ）对板蓝根７０％乙醇提取物中的化学成分进行快速鉴定㊂色谱柱：ＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤａＱ色谱柱（１００ｍｍˑ２．１ｍｍ，１．９μｍ）㊂流动相：含０．１％甲酸的水溶液（Ａ液）和含０．１％甲酸的乙腈（Ｂ液）㊂采用以下梯度进行洗脱：０２ｍｉｎ５％Ｂ液；２２２ｍｉｎ５％９５％Ｂ液；２２２７ｍｉｎ９５％Ｂ液；２７３０ｍｉｎ５％Ｂ液㊂流速为０．３ｍＬ／ｍｉｎ，柱温４０ħ，进样量为５μＬ㊂结果显示从板蓝根中鉴定１１１个化合物，包括１２个氨基酸类㊁１２个苯丙素类㊁２个酚类㊁６个核苷类㊁５个黄酮类㊁１１个生物碱类㊁４个糖类㊁４个萜类㊁７个酰胺类㊁４个香豆素类㊁３３个有机酸类㊁１个甾体类和１０个其他类㊂本研究对板蓝根的化学成分进行了快速鉴定，为进一步研究板蓝根的药效物质基础和资源利用提供参考㊂关键词：板蓝根；化学成分；高分辨质谱中图分类号：Ｏ６５６文献标志码：Ａ文章编号：１００８－１０１１（２０２３）０４－０３１３－０６ＲａｐｉｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘｂａｓｅｄｏｎＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃ＯｒｂｉｔｒａｐＭＳＣＵＩＷｅｉｈｅｎｇＤＥＮＧＸｉａｏｌａｎ∗ ＷＡＮＧＳｉｑｉｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙＴｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨａｉｋｏｕＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｉａｎｇｙａＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＨａｉｋｏｕＰｅｏｐｌｅｓＨｏｓｐｉｔａｌＨａｉｋｏｕ５７０２０８ＨａｉｎａｎＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔＵｌｔｒａ⁃ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔａｎｄｅｍｈｙｂｒｉｄｑｕａｄｒｕｐｏｌｅｏｒｂｉｔｒａｐｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃ｏｒｂｉｔｒａｐＭＳ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｒａｐｉｄｌｙｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎ７０％ｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘ．ＴｈｅｔｙｐｅｏｆｃｏｌｕｍｎｗａｓＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤａＱｃｏｌｕｍｎ（１００ｍｍˑ２．１ｍｍ，１．９μｍ）．Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｓｗｅｒｅ０．１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ⁃ｗａｔｅｒ（ｌｉｑｕｉｄＡ）ａｎｄ０．１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ⁃ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（ｌｉｑｕｉｄＢ）ｗｉｔｈｔｈｅｅｌｕｔｉｏｎｇｒａｄｉｅｎｔｏｆ０－２ｍｉｎ５％Ｂ；２－２２ｍｉｎ５％－９５％Ｂ；２２－２７ｍｉｎ９５％Ｂ；２７－３０ｍｉｎ５％Ｂ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ０．３ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ４０ħ，ａｎｄｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｖｏｌｕｍｅｗａｓ５μＬ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔ１１１ｃｏｍｐｏｕｎｄｓａｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｆｒｏｍＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ１２ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，１２ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｓ，２ｐｈｅｎｏｌｓ，６ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，５ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ，１１ａｌｋａｌｏｉｄｓ，４ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ，４ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ，７ａｍｉｄｅｓ，４ｃｏｕｍａｒｉｎｓ，３３ｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｓ，１ｓｔｅｒｏｉｄａｎｄ１０ｏｔｈｅｒｓ．ＴｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．ＩｔｐｒｏｖｉｄｅｓａｂａｓｉｓｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｕｂｓｔａｎｃｅｂａｓｉｓａｎｄｒｅｓｏｕｒｃｅｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘ；ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；ｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ㊀㊀板蓝根（ＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘ）为十字花科植物菘蓝ＩｓａｔｉｓｉｎｄｉｇｏｔｉｃａＦｏｒｔ．的干燥根㊂菘蓝原产我国，全国各地均有栽培［１］㊂板蓝根为临床常用中药，味苦㊁性寒㊁归心㊁胃经，具有清热解毒，凉血利咽的功效，用于温疫时毒㊁发热咽痛㊁温毒发斑㊁痄腮㊁烂喉丹痧㊁大头瘟疫㊁丹毒㊁痈肿［２］㊂化学成分研究表明，板蓝根主要化学成分有生物碱类㊁有机酸类㊁黄酮类㊁木脂素类㊁蒽醌类㊁甾体类㊁三萜类㊁芥子苷类化合物㊁含硫类化合物㊁氨基酸类等［３－５］㊂现代药理学研究表明，板蓝根具有抗内毒素［６］㊁抗病毒［７］㊁抗肿瘤［８］㊁免疫调节［９］㊁抗炎［１０－１１］和抗氧化［１２］等作用㊂ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃ｏｒｂｉｔｒａｐＭＳ是近几年发展起３１４㊀化㊀学㊀研㊀究２０２３年来的一种新型液相色谱⁃质谱技术，具有分辨率高㊁质量精度好㊁定性㊁定量能力强等特点，也是代谢组学中常用的技术之一，可用于中药原料的定性分析，可实现多种成分的快速鉴定［１３］㊂目前对板蓝根的化学成分研究主要是采用传统的提取分离鉴定方法，耗时比较长，对板蓝根化学成分快速鉴定的研究较少㊂因此，采用ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃ｏｒｂｉ⁃ｔｒａｐＭＳ技术对板蓝根的化学成分进行快速鉴定，为进一步研究板蓝根的药效物质基础和资源利用提供参考㊂１㊀材料和方法１．１㊀仪器㊀㊀旋转蒸发仪（Ｎ⁃１３００，ＥＹＥＬＡ）；电子天平（ＭＥ１０４，ＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥＤＯ）；超高效液相（Ｗａｔｅｒｓ２ＤＵＰＬＣ，Ｗａｔｅｒｓ，ＵＳＡ）；高分辨质谱（ＱＥｘａｃｔｉｖｅ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）；色谱柱：ＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤａＱ色谱柱（１００ｍｍˑ２．１ｍｍ，１．９μｍ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）；低温高速离心机（Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ５４３０，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）；涡旋仪（ＱＬ⁃９０１，其林贝尔仪器制造有限公司）；纯水仪（Ｍｉｌｌｉ⁃ＱＩｎｔｅｇｒａｌＭｉｌｌｉｐｏｒｅＣｏｒ⁃ｐｏｒａｔｉｏｎＵＳＡ）㊂１．２㊀试剂内标：ｄ３⁃Ｌｅｕｃｉｎｅ，１３Ｃ９⁃Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ，ｄ５⁃Ｔｒｙｐ⁃ｔｏｐｈａｎ，１３Ｃ３⁃Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ；甲醇（Ａ４５４⁃４）㊁乙腈（Ａ９９６⁃４）均为ＬＣＭＳ级别（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＵＳＡ）；甲酸（５０１４４⁃５０ｍｌＤＩＭＫＡＵＳＡ）；９５％乙醇（２０１９０３２０，天津市富宇精细化工有限公司）；水由纯水仪提供㊂１．３㊀植物来源板蓝根于２０２２年１２月１８号购买于禹州中药材专业市场㊂１．４㊀样品的制备干燥的板蓝根，粉碎㊂精确称取１００ｇ，加入８００ｍＬ７０％乙醇，回流提取２ｈ，过滤，滤渣加８００ｍＬ７０％乙醇回流提取１ｈ，过滤，合并滤液，浓缩冻干，共得到提取物３０．４ｇ，提取率为３０．４％㊂称取５０ｍｇ提取物，置于１．５ｍＬ离心管中，加入８００μＬ提取液（甲醇ʒ水＝７ʒ３，体积比）和２０μＬ内标，超声３０ｍｉｎ，１４０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ㊂离心后取６００μＬ上清，过０．２２μｍ滤膜后，将过滤后的样本置于上样瓶中等待ＬＣ⁃ＭＳ分析㊂１．５㊀色谱条件所使用的色谱柱为ＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤａＱ色谱柱（１００ｍｍˑ２．１ｍｍ，１．９μｍ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）㊂流动相为含０．１％甲酸的水溶液（Ａ液）和含０．１％甲酸的乙腈（Ｂ液）㊂采用以下梯度进行洗脱：０２ｍｉｎ５％Ｂ液；２２２ｍｉｎ５％９５％Ｂ液；２２２７ｍｉｎ９５％Ｂ液；２７３０ｍｉｎ５％Ｂ液㊂流速为０．３ｍＬ／ｍｉｎ，柱温４０ħ，进样量为５μＬ㊂１．６㊀质谱条件利用ＱＥｘａｃｔｉｖｅ质谱仪（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆ⁃ｉｃ，ＵＳＡ）进行一级㊁二级质谱数据采集㊂质谱扫描质荷比范围为１５０１５００，一级分辨率为７００００，ＡＧＣ为１ｅ６，最大注入时间（ＩＴ，ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｔｉｍｅ）为１００ｍｓ㊂按照母离子强度，选择Ｔｏｐ３进行碎裂，采集二级信息，二级分辨率为３５０００，ＡＧＣ为２ｅ５，最大注入时间（ＩＴ，ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｔｉｍｅ）为５０ｍｓ，碎裂能量（ｓｔｅｐｐｅｄｎｃｅ）设置为：２０㊁４０和６０ｅＶ㊂离子源（ＥＳＩ）参数设置：鞘气流速（Ｓｈｅａｔｈｇａｓｆｌｏｗｒａｔｅ）为４０，辅助气流速（Ａｕｘｇａｓｆｌｏｗｒａｔｅ）为１０，喷雾电压（Ｓｐｒａｙｖｏｌｔａｇｅ（｜ＫＶ｜）），正离子模式为３．８０，负离子模式为３．２０，离子传输管温度（Ｃａｐｉｌｌａｒｙｔｅｍｐ）为３２０ħ，辅助气加热温度（Ａｕｘｇａｓｈｅａｔｅｒｔｅｍｐ）为３５０ħ㊂１．７㊀数据处理采用ＬＣ⁃ＭＳ／ＭＳ技术对板蓝根进行系统的化学成分分析，将ＬＣ⁃ＭＳ／ＭＳ采集的质谱原始数据导入ＣｏｍｐｏｕｎｄＤｉｓｃｏｖｅｒｅｒ３．３（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉ⁃ｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）进行数据处理，主要包括：峰提取㊁组内及组间的保留时间校正㊁加合离子合并㊁缺失值填充㊁背景峰标记以及代谢物鉴定，最后导出化合物分子量㊁保留时间和鉴定结果等信息㊂化学成分的鉴定结合了ＢＧＩＬｉｂｒａｒｙ（华大自建标准品库）㊁ｍｚＣｌｏｕｄ数据库㊂２㊀结果２．１㊀化学成分鉴定结果㊀㊀采用ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃ｏｒｂｉｔｒａｐＭＳ技术对板蓝根化学成分进行快速鉴定，根据正（ｐｏｓ）负（ｎｅｇ）离子模式下板蓝根样品总离子流图（图１），比对ＢＧＩＬｉｂｒａｒｙ数据库中的保留时间㊁母离子㊁二级碎片离子和ｍｚ⁃Ｃｌｏｕｄ数据库中的母离子㊁二级碎片离子确定化合物㊂从板蓝根中鉴定１１１个化合物，包括１２个氨基酸类㊁１２个苯丙素类㊁２个酚类㊁６个核苷类㊁５个黄酮类㊁１１个生物碱类㊁４个糖类㊁４个萜类㊁７个酰胺类㊁４个香豆素类㊁３３个有机酸类㊁１个甾体类和１０个其他类㊂表１列出了３０种成分的鉴定结果㊂第４期崔维恒等：采用超高效液相色谱⁃四极杆⁃静电场轨道阱高分辨质谱快速鉴定板蓝根的化学成分３１５㊀图１㊀正（ｐｏｓ）负（ｎｅｇ）离子模式下板蓝根样品总离子流图Ｆｉｇ．１㊀ＴｏｔａｌｉｏｎｃｕｒｒｅｎｔｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘｉｎｐｏｓｉｔｉｖｅｉｏｎｍｏｄｅ（ｐｏｓ）ａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅｉｏｎｍｏｄｅ（ｎｅｇ）表１㊀板蓝根样品的部分化学成分鉴定结果Ｔａｂｌｅ１㊀ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐａｒｔｉａｌｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘ序号离子模式保留时间实测值理论值分子式误差／１０－６化合物名称化合物类型１ＰＯＳ０．７３２１７４．１１１９６１７４．１１１６８Ｃ６Ｈ１４Ｎ４Ｏ２１．６３ＤＬ⁃精氨酸氨基酸类２ＰＯＳ１．１５５１８１．０７４２６１８１．０７３８９Ｃ９Ｈ１１ＮＯ３２．０２Ｌ⁃酪氨酸氨基酸类３ＰＯＳ１．３８１３１．０９４８５１３１．０９４６３Ｃ６Ｈ１３ＮＯ２１．６９Ｌ⁃亮氨酸氨基酸类４ＮＥＧ５．２９３５２２．２０９６１５２２．２１０１１Ｃ２６Ｈ３４Ｏ１１－０．９６落叶松树脂醇４－Ｏ葡萄糖苷苯丙素类５ＮＥＧ６．５５８１９４．０５８１９４．０５７９１Ｃ１０Ｈ１０Ｏ４０．４５阿魏酸苯丙素类６ＰＯＳ５．８４１１５２．０４７７１５２．０４７３４Ｃ８Ｈ８Ｏ３２．３５香草醛酚类７ＰＯＳ６．２１９１８２．０５８４４１８２．０５７９１Ｃ９Ｈ１０Ｏ４２．９３３，５⁃二甲氧基⁃４⁃羟基苯甲醛酚类８ＰＯＳ０．８５４２４３．０８５５１２４３．０８５５２Ｃ９Ｈ１３Ｎ３Ｏ５－０．０５胞嘧啶核苷核苷类９ＰＯＳ１．１２６１３５．０５４７５１３５．０５４４９Ｃ５Ｈ５Ｎ５１．８９腺嘌呤核苷类１０ＰＯＳ１．１５６２６７．０９６８８２６７．０９６７５Ｃ１０Ｈ１３Ｎ５Ｏ４０．４７腺苷核苷类１１ＰＯＳ１．１７９２８３．０９１６６２８３．０９１６７Ｃ１０Ｈ１３Ｎ５Ｏ５－０．０４鸟苷核苷类１２ＮＥＧ５．０７８５９４．１５８５８５９４．１５８４７Ｃ２７Ｈ３０Ｏ１５０．１９葡萄糖基芹菜素黄酮类１３ＰＯＳ１０．７２８２６８．０７３５９２６８．０７３５５Ｃ１６Ｈ１２Ｏ４０．１３芒柄花黄素黄酮类１４ＰＯＳ３．００４１２９．０２５２６１２９．０２４８４Ｃ５Ｈ７ＮＯＳ３．２６（Ｒ，Ｓ）⁃告依春生物碱类１５ＰＯＳ６．８６４１６１．０４７５５１６１．０４７６８Ｃ９Ｈ７ＮＯ２－０．８２３⁃吲哚甲酸生物碱类１６ＮＥＧ０．５９１１８０．０６３５３１８０．０６３３９Ｃ６Ｈ１２Ｏ６０．７６Ｌ⁃山梨糖糖类１７ＰＯＳ１．０５７５０４．１７００１５０４．１６９０３Ｃ１８Ｈ３２Ｏ１６１．９４松三糖糖类１８ＮＥＧ４．５１７３５６．１１０７６３５６．１１０７３Ｃ１６Ｈ２０Ｏ９０．０７龙胆苦苷萜类１９ＰＯＳ１８．８８４４５６．３６０８５４５６．３６０３４Ｃ３０Ｈ４８Ｏ３１．１１熊果酸萜类２０ＰＯＳ１２．６１１１７１．１６２５１１７１．１６２３１Ｃ１０Ｈ２１ＮＯ１．１５癸酰胺酰胺类２１ＰＯＳ２２．３７９３３９．３４９８７３３９．３５０１１Ｃ２２Ｈ４５ＮＯ－０．７２二十二酰胺酰胺类２２ＰＯＳ１３．９４５３００．０９９６１３００．０９９７８Ｃ１７Ｈ１６Ｏ５－０．５６珊瑚菜内脂香豆素类２３ＰＯＳ１４．７０６２４４．１０９８２４４．１０９９４Ｃ１５Ｈ１６Ｏ３－０．５７软木花椒素香豆素类２４ＮＥＧ０．８３２１３４．０２１５６１３４．０２１５２Ｃ４Ｈ６Ｏ５０．２７ＤＬ⁃苹果酸有机酸类２５ＮＥＧ１０．７４５２３０．１５１５６２３０．１５１８Ｃ１２Ｈ２２Ｏ４－１．０６十二烷二酸有机酸类２６ＮＥＧ７．４２４１８８．１０５１８８．１０４８６Ｃ９Ｈ１６Ｏ４０．７６壬二酸有机酸类２７ＰＯＳ１０．７２２７２．１７７６３２７２．１７７６３Ｃ１８Ｈ２４Ｏ２０．０２１９⁃去甲⁃４⁃雄烯二酮甾体类２８ＰＯＳ１４．４５５３５６．２９２２５３５６．２９２６６Ｃ２１Ｈ４０Ｏ４－１．１５油酸单甘油酯其他类２９ＰＯＳ１．０３７１２６．０３１８９１２６．０３１７Ｃ６Ｈ６Ｏ３１．５２５⁃羟甲基⁃２⁃呋喃醛其他类３０ＰＯＳ１６．５９７２９９．２８２２１２９９．２８２４３Ｃ１８Ｈ３７ＮＯ２－０．７２Ｄ⁃鞘氨醇其他类２．２㊀部分化合物质谱裂解规律分析２．２．１㊀氨基酸类化合物质谱裂解规律分析㊀㊀氨基酸类化合物裂解一般容易得到ＮＨ３㊁ＨＣＯＯＨ㊁Ｈ２Ｏ㊁ＣＯ２和ＣＯ等基团的碎片［１４－１５］㊂以化合物１（ＤＬ⁃精氨酸）为例，在正离子模式下响应，质子化得到准分子离子ｍ／ｚ１７５［Ｍ＋Ｈ］＋，然后失去一分子ＮＨ３得到离子碎片ｍ／ｚ１５８［Ｍ＋Ｈ－ＮＨ３］＋，进一步失去ＣＯ基团得到离子碎片ｍ／ｚ１３０［Ｍ＋Ｈ－ＮＨ３－ＣＯ］＋㊂同时，准分子３１６㊀化㊀学㊀研㊀究２０２３年离子也可以失去ＣＨ５Ｎ３和Ｃ５Ｈ９ＮＯ２基团分别得到ｍ／ｚ１１６［Ｍ＋Ｈ－ＣＨ５Ｎ３］＋和ｍ／ｚ６０［Ｍ＋Ｈ－Ｃ５Ｈ９ＮＯ２］＋两个离子碎片㊂离子碎片ｍ／ｚ１１６［Ｍ＋Ｈ－ＣＨ５Ｎ３］＋进一步失去ＨＣＯＯＨ得到碎片ｍ／ｚ７０［Ｍ＋Ｈ－ＣＨ５Ｎ３－ＨＣＯＯＨ］＋㊂ＤＬ⁃精氨酸可能的裂解途径见图２㊂图２㊀ＤＬ⁃精氨酸可能的裂解途径Ｆｉｇ．２㊀ＰｏｓｓｉｂｌｅｃｌｅａｖａｇｅｐａｔｈｗａｙｏｆＤＬ⁃ａｒｇｉｎｉｎｅ２．２．２㊀苯丙素类化合物裂解规律分析以化合物５为例，在负离子模式下响应去质子化得到准分子离子ｍ／ｚ１９３［Ｍ－Ｈ］－，然后失去ＣＨ３基团得到碎片离子ｍ／ｚ１７８［Ｍ－Ｈ－ＣＨ３］－，进一步失去ＣＯ２基团得到碎片离子ｍ／ｚ１３４［Ｍ－Ｈ－ＣＨ３－ＣＯ２］－㊂结合文献报道［１６］推测化合物５可能为阿魏酸㊂可能的裂解途径见图３㊂图３㊀阿魏酸可能的裂解途径Ｆｉｇ．３㊀Ｐｏｓｓｉｂｌｅｃｌｅａｖａｇｅｐａｔｈｗａｙｓｏｆｆｅｒｕｌｉｃａｃｉｄ２．２．３㊀核苷类化合物裂解规律分析核苷类化合物由一分子碱和一分子核糖组成，一般容易在正离子模式下响应得到准分子离子［Ｍ＋Ｈ］＋，然后得到失去一分子核糖的碎片离子［１５］㊂以化合物１０为例，在正离子模式下得到准分子离子ｍ／ｚ２６８［Ｍ＋Ｈ］＋，然后失去一分子核糖得到碎片离子ｍ／ｚ１３６［Ｍ＋Ｈ－Ｃ５Ｈ８Ｏ４］＋㊂推测化合物１０可能为腺苷，可能的裂解途径见图４㊂图４㊀腺苷可能的裂解途径Ｆｉｇ．４㊀Ｐｏｓｓｉｂｌｅｐａｔｈｗａｙｓｆｏｒａｄｅｎｏｓｉｎｅｃｌｅａｖａｇｅ２．２．４㊀生物碱类化合物裂解规律分析以化合物１４为例，在正离子模式下响应，质子化得到准分子离子ｍ／ｚ１３０［Ｍ＋Ｈ］＋，然后失去ＣＯＳ基团，得到二级碎片离子ｍ／ｚ７０［Ｍ＋Ｈ－ＣＯＳ］＋，推测化合物１４可能为（Ｒ，Ｓ）⁃告依春，可能的裂解途径见图５㊂图５㊀（Ｒ，Ｓ）⁃告依春可能的裂解途径Ｆｉｇ．５㊀Ｐｏｓｓｉｂｌｅｃｌｅａｖａｇｅｐａｔｈｗａｙｓｏｆ（Ｒ，Ｓ）⁃ｓｐｒｉｎｇ２．２．５㊀有机酸类化合物裂解规律分析有机酸类化合物一般在负离子模式下响应，容易得到失去Ｈ２Ｏ㊁ＣＯ㊁ＣＯ２等基团的碎片离子［１５］㊂第４期崔维恒等：采用超高效液相色谱⁃四极杆⁃静电场轨道阱高分辨质谱快速鉴定板蓝根的化学成分３１７㊀以化合物２６为例，在负离子模式下响应得到准分子离子ｍ／ｚ１８７［Ｍ－Ｈ］－，然后失去一分子Ｈ２Ｏ，得到碎片离子ｍ／ｚ１６９［Ｍ－Ｈ－Ｈ２Ｏ］－，进一步失去ＣＯ２基团得到碎片离子ｍ／ｚ１２５［Ｍ－Ｈ－Ｈ２Ｏ］－，结合文献报道［１７］推测化合物２６可能为壬二酸㊂３㊀讨论采用ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃ｏｒｂｉｔｒａｐＭＳ技术对板蓝根的化学成分进行快速鉴定，板蓝根化学成分主要包括氨基酸类㊁苯丙素类㊁核苷类㊁黄酮类㊁生物碱类㊁香豆素类和有机酸类等㊂文献研究表明生物碱类㊁有机酸类㊁苯丙素类㊁多肽类㊁多糖类等为板蓝根的主要抗病毒活性成分［１８－１９］㊂其中生物碱类成分是板蓝根的标志性成分，主要类型有吲哚类㊁喹唑啉酮类㊁喹啉和异喹啉类㊁其他杂环类㊁苯胺类㊁酰胺类等，以吲哚类生物碱为主，代表性成分有靛蓝和靛玉红［４，２０］，现行药典‘中国药典“２０２０年版一部规定含硫类生物碱（Ｒ，Ｓ）⁃告依春作为质量控制成分，规定含量不得低于０．０２０％［２］㊂也有文献将木脂素类化合物和核苷类化合物作为板蓝根的质控成分［２１］㊂上述几类成分在本研究中均检测到㊂采用ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃ｏｒｂｉｔｒａｐＭＳ技术快速地从板蓝根中共鉴定１１１个化合物，从成分含量的角度分析发现，核苷类的腺嘌呤㊁香豆素类的软木花椒素㊁氨基酸类的ＤＬ⁃精氨酸㊁Ｌ⁃亮氨酸以及有机酸类ＤＬ⁃苹果酸和对氨基苯甲酸含量最多，为板蓝根的主要含量元素；除此之外，一些常量元素如核苷类的腺苷和胞嘧啶核苷以及生物碱类的（Ｒ，Ｓ）⁃告依春也较多地存在，还包含一些微量元素如生物碱类的３⁃吲哚甲酸和有机酸类的十二烷二酸等㊂这些发现为板蓝根成分含量提供了数据支撑，也为板蓝根的质量研究提供了参考㊂以上多数化学成分均有报道从板蓝根中分离鉴定过㊂相比传统提取分离方法，该方法较为高效㊁准确㊂本研究为板蓝根在体内的物质基础分析，尤其是微量成分的体内代谢研究提供了方法借鉴㊂４㊀结论本研究利用ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃ｏｒｂｉｔｒａｐＭＳ技术的分辨率高㊁灵敏度高等特点鉴定了板蓝根中１１１个化合物，包括１２个氨基酸类㊁１２个苯丙素类㊁２个酚类㊁６个核苷类㊁５个黄酮类㊁１１个生物碱类㊁４个糖类㊁４个萜类㊁７个酰胺类㊁４个香豆素类㊁３３个有机酸类㊁１个甾体类和１０个其他类㊂对部分化合物质谱裂解规律分析；同时进一步对其常量元素㊁少量元素和微量元素展开初步讨论分析，为进一步研究板蓝根的药效物质基础和资源利用提供参考与借鉴㊂参考文献：［１］中国科学院‘中国植物志“编委会．中国植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８７，３３：６５．ＥｄｉｔｏｒｉａｌＢｏａｒｄｏｆＦｌｏｒａｏｆＣｈｉｎａ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ．ＦｌｏｒａｏｆＣｈｉｎａ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｎｇ：ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，１９８７，３３：６５．［２］国家药典委员会．中华人民共和国药典－一部［Ｍ］．北京：中国医药科技出版社，２０２０：２１４⁃２１５．ＮａｔｉｏｎａｌＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ．ＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａｏｆｔｈｅＰｅｏｐｌｅｓＲｅｐｕｂｌｉｃｏｆＣｈｉｎａＰａｒｔ１［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＰｒｅｓｓ，２０２０：２１４⁃２１５．［３］彭少平，顾振纶．板蓝根化学成分㊁药理作用研究进展［Ｊ］．中国野生植物资源，２００５，２４（５）：４⁃７．ＰＥＮＧＳＰ，ＧＵＺＧ．ＲｅｃｅｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｓｔｕｄｉｅｓｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｎＲｏｏｔｓｏｆＩｓａｔｉｓｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＷｉｌｄＰｌａｎｔＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，２００５，２４（５）：４⁃７．［４］武佳，解云霞．板蓝根化学成分及质量控制研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（１０）：２０６７⁃２０６８．ＷＵＪ，ＸＩＥＹＸ．ＴｈｅｓｔｕｄｉｅｓｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｍｅｔｈｏｄｓｏｎｔｈｅＲｏｏｔｓｏｆｉｓａｔｉｓｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ［Ｊ］．ＬｉｓｈｉｚｈｅｎＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａＲｅｓｅａｒｃｈ，２００６，１７（１０）：２０６７⁃２０６８．［５］施霞，倪华，刘云海．板蓝根化学成分及其药理活性研究进展［Ｊ］．中国医院药学杂志，２００６，２６（１１）：１３９７⁃１３９９．ＳＨＩＸ，ＮＩＨ，ＬＩＵＹＨ．ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｏｓｐｉｔａｌＰｈａｒｍａｃｙ，２００６，２６（１１）：１３９７⁃１３９９．［６］刘云海，林爱华，丁水平，等．板蓝根对内毒素致炎性因子的影响［Ｊ］．中国药科大学学报，２００１，３２（２）：１４９⁃１５１．ＬＩＵＹＨ，ＬＩＮＡＨ，ＤＩＮＧＳＰ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓｏｎｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＴＮＦαａｎｄＩＬ⁃６ｉｎｍａｃｒｏｐｈａｇｅｆｒｏｍｍｉｃｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｅｎｄｏｔｏｘｉｎ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００１，３２（２）：１４９⁃１５１．［７］徐丽华，黄芳，陈婷，等．板蓝根中的抗病毒活性成分［Ｊ］．中国天然药物，２００５，３（６）：３５９⁃３６０．ＸＵＬＨ，ＨＵＡＮＧＦ，ＣＨＥＮＴ，ｅｔａｌ．ＡｎｔｉｖｉｒｕｓＣｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆＲａｄｉｘｏｆＩｓａｔｉｓｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，２００５，３（６）：３５９⁃３６０．［８］侯华新，黎丹戎，秦箐，等．板蓝根高级不饱和脂肪组酸体内抗肿瘤实验研究［Ｊ］．中国新药与临床药理，３１８㊀化㊀学㊀研㊀究２０２３年２００２，１３（３）：１５６⁃１５７．ＨＯＵＨＸ，ＬＩＤＲ，ＱＩＮＱ，ｅｔａｌ．ＡｎＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎｉｎ⁃ｖｉｖｏａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈｅｒｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓｆｏｒｍＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓ［Ｊ］．ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＤｒｕｇＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００２，１３（３）：１５６⁃１５７．［９］ＴＡＯＷ，ＦＵＴ，ＨＥＺＪ，ｅｔａｌ．ＩｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆＲａｄｉｘｉｓａｔｉｄｉｓｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｄＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０２１，２２（６）：１４０５．［１０］ＲＥＮＬＴ，ＬＩＱ，ＬＩＨ，ｅｔａｌ．ＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘｉｎｈｉｂｉｔｓｍｕｌｔｉｐｌｅｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄａｌｌｅｖｉａｔｅｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．ＰｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙＲｅｓｅａｒｃｈ，２０２２，３６（８）：３２９５⁃３３１２．［１１］马毅敏，李娜，刘承伟，等．板蓝根不同提取部位抗炎镇痛活性比较研究［Ｊ］．中草药，２０１４，４５（１７）：２５１７⁃２５２１．ＭＡＹＭ，ＬＩＮ，ＬＩＵＣＷ，ｅｔａｌ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｉｅｓｏｎａｎｔｉ⁃ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｎｄａｎａｌｇｅｓｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒａｃｔｉｏｎｓｆｒｏｍＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＨｅｒｂａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，２０１４，４５（１７）：２５１７⁃２５２１．［１２］闫峻，赵春芳，李伯平，等．板蓝根化学成分及抗氧化活性的研究［Ｊ］．质谱学报，２０１７，３８（２）：２４８⁃２５５．ＹＡＮＪ，ＺＨＡＯＣＦ，ＬＩＢＰ，ｅｔａｌ．ＣｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙＳｏｃｉｅｔｙ，２０１７，３８（２）：２４８⁃２５５．［１３］曾彬，刘红梅，刘晓梅，等．ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃ＥｘａｃｔｉｖｅＯｒｂｉｔｒａｐＭＳ技术在中药分析中的应用［Ｊ］．中药材，２０２０，４３（９）：２３１３⁃２３１９．ＺＥＮＧＢ，ＬＩＵＨＭ，ＬＩＵＸＭ，ｅｔａｌ．ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃ＥｘａｃｔｉｖｅＯｒｂｉｔｒａｐＭＳｔｅｃｈｎｉｑｕｅｉｎｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＭａｔｅｒｉａｌｓ，２０２０，４３（９）：２３１３⁃２３１９．［１４］蒋希羽，庄楷，张雅净，等．基于ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃Ｏｒｂｉｔｒａｐ⁃ＭＳ的桂枝茯苓丸化学成分分析［Ｊ］．中药材，２０２１，４４（８）：１８８９⁃１８９４．ＪＩＡＮＧＸＹ，ＺＨＵＡＮＧＫ，ＺＨＡＮＧＹＪ，ｅｔａｌ．ＣｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆＧｕｉｚｈｉＰｏｒｉａＰｉｌｌｓｂａｓｅｄｏｎＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ⁃Ｏｒｂｉｔｒａｐ⁃ＭＳ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＭａｔｅｒｉａｌｓ，２０２１，４４（８）：１８８９⁃１８９４．［１５］ＣＵＩＬＬ，ＬＩＵＹＨ，ＬＩＵＭ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｆｒｏｍＬｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓａｎｄａｕｒｉｃｕｌａｒｉａａｕｒｉｃｕｌａｗｉｔｈＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃ｅｘａｃｔｉｖｅｏｒｂｉｔｒａｐＭＳ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｕｔｕｒｅＦｏｏｄｓ，２０２２，２（３）：２５３⁃２６０．［１６］崔小敏，万兆新，任慧，等．基于ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃ＯｒｂｉｔｒａｐＨＲＭＳ技术的白毛银露梅化学成分研究［Ｊ］．中药材，２０２０，４３（８）：１９０１⁃１９０６．ＣＵＩＸＭ，ＷＡＮＺＸ，ＲＥＮＨ，ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆｐｏｔｅｎｔｉｌｌａｇｌａｂｒａｖａｒ．ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａｂａｓｅｄｏｎＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃ＯｒｂｉｔｒａｐＨＲＭＳ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＭａｔｅｒｉａｌｓ，２０２０，４３（８）：１９０１⁃１９０６．［１７］安太勇，陈晓虎，张梅，等．ＵＰＬＣ⁃Ｑ⁃Ｅｘａｃｔｉｖｅ四极杆⁃静电场轨道阱高分辨质谱联用快速分析川党参的化学成分［Ｊ］．中草药，２０１８，４９（７）：１５３３⁃１５４２．ＡＮＴＹ，ＣＨＥＮＸＨ，ＺＨＡＮＧＭ，ｅｔａｌ．ＲａｐｉｄａｎａｌｙｓｉｓｏｎｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｒｏｏｔｓｏｆｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓｔａｎｇｓｈｅｎｂｙＵＰＬＣｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈＱ⁃ｅｘａｃｔｉｖｅｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ⁃ｏｒｂｉｔｒａｐｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｄＨｅｒｂａｌＤｒｕｇｓ，２０１８，４９（７）：１５３３⁃１５４２．［１８］邓九零，陶玉龙，何玉琼，等．板蓝根抗流感病毒活性成分及其作用机制研究进展［Ｊ］．中国中药杂志，２０２１，４６（８）：２０２９⁃２０３６．ＤＥＮＧＪＬ，ＴＡＯＹＬ，ＨＥＹＱ，ｅｔａｌ．ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘｆｏｒｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，２０２１，４６（８）：２０２９⁃２０３６．［１９］杨建昕，李峰，李娜，等．板蓝根抗病毒活性成分研究进展［Ｊ］．辽宁中医药大学学报，２０１６，１８（７）：１４１⁃１４３．ＹＡＮＧＪＸ，ＬＩＦ，ＬＩＮ，ｅｔａｌ．ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆａｎｔｉｖｉｒａｌａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｏｆＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＬｉａｏｎｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１６，１８（７）：１４１⁃１４３．［２０］聂黎行，王馨平，黄烈岩，等．板蓝根化学成分信息库的构建［Ｊ］．中国药学杂志，２０２２，５７（６）：４２８⁃４５２．ＮＩＥＬＨ，ＷＡＮＧＸＰ，ＨＵＡＮＧＬＹ，ｅｔａｌ．ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｂａｎｋｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＩｓａｔｉｄｉｓＲａｄｉｘ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ，２０２２，５７（６）：４２８⁃４５２．［２１］黄远，董福越，李楚源，等．一测多评法测定板蓝根中６种化学成分的含量［Ｊ］．中草药，２０２１，５２（３）：８４５⁃８５１．ＨＵＡＮＧＹ，ＤＯＮＧＦＹ，ＬＩＣＹ，ｅｔａｌ．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ１０ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓｂｙＱＡＭＳｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＨｅｒｂａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，２０２１，５２（３）：８４５⁃８５１．［责任编辑：郭续更］。

高效液相色谱中用于梯度洗脱的有机溶剂的纯度测试

!!!!!!!!!!!!!!!""""仪器装置与实验技术高效液相色谱中用于梯度洗脱的有机溶剂的纯度测试邓华刘满仓朱彭龄#（兰州大学化学系，兰州730000）摘要在反相高效液相色谱中，空白梯度基线的漂移和杂质峰，可能由含水溶剂和有机溶剂中杂质所引起的。

当含水溶剂通过预柱在线净化后，根据空白梯度色谱图可测试有机溶剂的纯度。

按照此法，对国产不同等级的乙腈和甲醇进行了测试，指明这些试剂用于梯度洗脱的可能性。

关键词高效液相色谱，梯度洗脱，有机溶剂，基线漂移，杂质峰!前言当进行反相高效液相色谱的空白梯度试验时，尤其是用低波长高灵敏度设置紫外检测时，在色谱图上可能出现一些杂质峰。

它们主要是由作为弱溶剂的水相中杂质所引起的。

杂质峰的存在可能给建立梯度洗脱方法造成困难〔1〕。

朱彭龄等曾提出预柱在线净化除去高压梯度洗脱时来自含水溶剂杂质的方法〔2〕。

反相色谱梯度洗脱中通常使用的强溶剂是甲醇或乙腈。

在市场上可以买到它们色谱纯级的商品。

从纯度上考虑，色谱纯的溶剂自然是作为梯度洗脱溶剂的理想选择；但由于价格上的原因，在我国分析工作者也经常以分析纯的溶剂代用。

本工作的目的是对几种国产有机溶剂进行测试和对比，说明这些试剂用于梯度洗脱的可能性，为色谱分析选择合适的溶剂提供依据。

高压梯度洗脱中含水溶剂的杂质通过预柱除去，根据空白梯度洗脱色谱图中杂质峰的情况，就能判断被测试的溶剂能否用于梯度洗脱。

"实验部分".!试剂和材料被测试的有机溶剂是乙腈（分析纯，天津化学试剂二厂，批号：960312），乙腈（高效液相色谱用溶剂，一级，山东禹王工业总公司化工厂，批号：980406），乙腈（高效液相色谱用溶剂，二级，山东禹王工业总公司化工厂，批号：980416），甲醇（分析纯，天津化学试剂二厂，批号：981208），甲醇（高效液相色谱用溶剂，山东禹王工业总公司化工厂，批号：970501）。

高效液相色谱法测定豆浆中人工合成色素

高效液相色谱法测定豆浆中人工合成色素湛珺雯【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)018【总页数】2页(P96-97)【作者】湛珺雯【作者单位】德阳市食品药品检验所【正文语种】中文高效液相色谱法（HPLC）测定豆浆中人工合成色素的含量。

样品中加入亚铁氰化钾和乙酸锌除去蛋白质，取上清液过活化后的聚酰胺柱，洗涤、解吸、纯化后测定。

采用Kromasil 100 C18（150 mm×4.6 mm×5 um）色谱柱，流动相为0.02 mol/L乙酸铵-甲醇，梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，检测波长254 nm，进样量为10 μL。

结果表明：柠檬黄在进样量4 ng～200 ng（Y=14.72x+0.038，r=1.000 0）范围内呈良好的线性、胭脂红在进样量4 ng～200 ng （Y=17.60x+0.007 1，r=1.000 0）范围内呈良好的线性、日落黄在进样量4 ng～200 ng（Y=10.72x+0.0038，r=1.000 0）范围内呈良好的线性，柠檬黄、日落黄、胭脂红平均加样回收率为88.2%、87.8%、87.9%。

试验用于食品中多种合成色素的检测，很好地满足食品检验机构。

目前，我国豆浆供应主要有豆奶粉、豆浆粉及小作坊或街边摊贩等形式，是从大豆中萃取出可溶性的营养成分。

着色剂是食品添加剂的重要组成部分，是以食品着色和改善食品色泽为目的的添加剂，目前，人们经常食用的有柠檬黄、胭脂红、日落黄等。

人工色素主要是从煤焦油中制取或以苯、甲苯、萘等芳香烃化合物为原料合成的有机色素，因种类多、成本低廉、着色力强等特性被广泛使用。

人工色素不仅本身有毒，而且还夹杂着重金属等剧毒物质，故对人体健康尤其是儿童健康有不同程度的损害，能引起儿童多动症的症状，比如：过度活跃、注意力不集中等，而这些有毒有害的物质在儿童食品中出现的频率及含量往往更高。

高效液相色谱法测水果罐头的四种合成着色剂

摘要：采用高效液相色谱法测水果罐头中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄 4 种合成着色剂。此法对 4 种合成着色剂的检出限依次为 1.80 μg·mL-1、1.48 μg·mL-1、1.36 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1，平均回收率为 91.9% ～ 101.8%，相对标准偏差为 0.59% ～ 4.62%。该方法操作简单，节省时间，重现性好，可用于大批量样品检测。
1.3.1 标液配制精准量取 0.5 mg·mL-1 混标 1 mL 于 10 mL 容量瓶
作者简介：张志辉（1979—），男，本科，工程师，研究方向为食品检测。
198 / 现代食品 XIANDAISHIPIN

Analysis and Testing 分析检测
中，用纯水定容，得 50 μg·mL-1 标准储备液，取 2.5 mL 于 25 mL 容量瓶定容得 5 μg·mL-1 混标。取 0.2 mL、
水果罐头：苹果、樱桃、梨、桃，4 个批次；标准溶液（中国计量研究院）：柠檬黄（批号：GBW（E） 100001a）、苋菜红（批号：GBW（E）100002a）、日落黄（批号：GBW（E）100003a）、胭脂红（批号： GBW（E）100004a），浓度为 0.5 mg·mL-1；分析纯类：无水乙醇、氨水、盐酸、乙酸铵；色谱纯类：甲醇；固相萃取柱。 1.3 试验方法
分析检测 Analysis and Testing
doi:10.16736/41-1434/ts.2021.09.055
高效液相色谱法测水果罐头的四种合成着色剂
Determination of Four Synthetic Colorants in Canned Fruits by HPLC

全自动固相萃取-高效液相色谱法测定食品中红曲色素

分析检测全自动固相萃取-高效液相色谱法测定食品中红曲色素王思媛，段鹏雪（庆阳市疾病预防控制中心，甘肃庆阳 745000）摘　要：目的：采用高效液相色谱法对食品中的3种红曲色素成分进行检测。

方法：被检测样品采取超声波法提取，全自动固相萃取净化处理，以甲醇和乙酸铵（pH=5）溶液为流动相完成梯度洗脱，C18色谱柱分离，流速为1.0 mL·min-1，红曲红素、红曲素检测时波长设定为390 nm，红曲红胺波长设定为264 nm，采用二极管阵列检测器完成检测。

结果：检出限（3S/N）分别为红曲素0.146 mg·kg-1、红曲红素5.770 mg·kg-1、红曲红胺1.880 mg·kg-1。

相关系数均在0.999以上，平均加标回收率为82.9%～106.0%，相对标准偏差（n=7）为0.52%～2.38%。

结论：此检测方法可用于对食品中红曲色素含量进行快速分析。

关键词：全自动固相萃取-高效液相色谱法；食品；红曲色素Determination of Monascus Pigment in Food by Automatic Solid Phase Extraction-High Performance LiquidChromatographyWANG Siyuan, DUAN Pengxue(Qingyang Municipal Center for Disease Control and Prevention, Qingyang 745000, China) Abstract: Objective: To establish a high performance liquid chromatography method for the determination of three monascus pigments in foods. Method: The tested sample was extracted by ultrasonic method, puriﬁed by fully automated solid phase extraction, and gradient elution was performed using methanol and ammonium acetate (pH=5) solution as the mobile phase. A C18 chromatographic column was used for separation, with a ﬂow rate of 1.0 mL·min-1. The wavelength for detection of monascus and monascus was set at 390 nm, and the wavelength for monascus amine was set at 264 nm. The detection was completed using a diode array detector. Result: The detection limit (3S/N) was 0.146 mg·kg-1 for monascus, 5.770 mg·kg-1 for monascus, and 1.880 mg·kg-1 for monascus red amine, respectively. The correlation coeﬃcients were all above 0.999, the average spiked recovery was 82.9%～106.0%, and the relative standard deviation (n=7) was 0.52%～2.38%. Conclusion: This method can be used for rapid analysis of the content of monascus pigment in foods.Keywords: automatic solid phase extraction-high performance liquid chromatography; food; monascus pigment红曲色素产生于红曲霉菌的代谢过程，是一类聚酮体化合物的混合物质，红曲色素在食品生产领域的应用相当广泛[1-2]。

高效液相色谱法测定鸡软骨_型胶原蛋白含量

药物分析杂志 Ch in J Pharm Ana l 2010, 30( 9)
# 1769 #
表 2∀ 样品中型胶原蛋白含量测定 Tab 2∀ Analysis of collagen from ch ick en cartilage
样品序号 ( sam ple No. )
5次峰面积平均值 ( average of
溶解胶原蛋白采用溶剂为 0 1 m o l L- 1醋酸, 静置缓慢溶解, 全溶时间为 24 h。具体方法如下:
型胶原蛋白样品溶液配制: 将型胶原蛋白样品剪成细长的一段段, 称取 50 0 m g, 置于洁净干燥的 25 mL 量瓶中, 先加入 0 1 m o l L- 1醋酸约 20 mL, 使其溶胀, 室温静置过夜, 完全溶解后, 再用 0 1 m o l L- 1醋酸定容。
图 1∀ 标准品 ( A ) 及样品 ( B ) 色谱图 F ig 1∀ C hrom atogram s of standard( A ) and sam p le( B) 1. 型胶原蛋白 ( co llagen ) ∀ 2. 醋酸钠 ( sod ium acetate)
性好。见表 1( 表 1中重复性的 RSD为同一天内连续 3次进样所得 )。
Abstract∀ Ob jective: T o establish an HPLC m ethod for the determ ination of collagen . M ethods: Co llagen
from ch icken cartilage w as se lected, and it w as determ ined by ge l co lum n w ith m o lecular exclusion chrom atog ram

双齿围沙蚕化学成分及其浸膏抗肿瘤活性的研究

双齿围沙蚕化学成分及其浸膏抗肿瘤活性的研究宋淑梅;马睿霄;金枫清;佟长青;翟兴月;李伟【摘要】Two compounds were isolated from Perinereis aibuhitensis by column chromatography on silica gel and thin layer chromatography .Their structures were identified by spectroscopic analysis and physical-chemistry properties .The inhibition on tumour cells of all extracts fromP .aibuhitensis were evaluated by CCK -8 assay .The results showed thattwo compounds were obtained and identified as cholest -4-ene-3α,6β-diol and (E)-17 -(4 ,7 -dimethyloct -5 -en-2yl)-10 ,13 -dimethyl -2 ,3 ,4 ,7 ,8 ,9 ,10 ,11 ,12 ,13 ,14 ,15 ,16 ,17-tetradecahydro -1H -cyclopenta[a] phenanthren-3-ol . All extracts from P .aibuhitensis using 75% EtOHand ethyl acetate layer exhibited the potent inhibi‐tory activities agai nst HepG2 ,AGS and SKOV3 cells .The extracts could be considered as potential an‐ticancer candidate for further study .%采用硅胶柱色谱及薄层制备色谱等手段从双齿围沙蚕（Perinereis aibuhitensis）中分离纯化出2种化合物。