细胞培养的设施与基本条件
细胞培养实验室建设基本要求
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细胞培养实验室建设基本要求
细胞培养实验室是进行细胞培养研究和实验的重要场所，为确
保实验的准确性和顺利进行，以下是细胞培养实验室建设的基本要求：
1. 设备和设施：
- 实验室应具备适当的面积和布局，确保实验操作的顺利进行。
- 实验室内应配置细胞培养箱、恒温培养箱、显微镜等必要的
设备。
- 实验室内应具备合适的洗手设施，并配备必要的实验室安全
设备。
2. 环境控制：
- 实验室应具备良好的通风系统，确保空气流通和污染物的排除。
- 实验室内的温度、湿度和光照条件应适宜，以满足细胞培养
的要求。
- 实验室内应设置适当的防护措施，避免细菌和真菌的污染。
3. 材料和试剂：
- 实验室应配备高质量的细胞培养耗材，如培养基、培养皿、
培养液等。
- 实验室应储备必要的实验试剂，如抗生素、细胞凋亡试剂等，并确保其保存和使用符合规范。
4. 实验操作：
- 实验室应建立严格的实验操作规范，包括细胞培养的标准操
作流程。
- 实验人员应接受相应的培训，熟悉和掌握细胞培养实验的技
术要求。
- 实验操作过程中应注意卫生和安全，遵守实验室操作规程。
细胞培养实验室建设的基本要求对于确保实验结果的准确性和
可靠性非常重要。
建立符合标准的实验室能够为科研工作提供良好
的支持，确保实验顺利进行。
细胞培养注意事项大全
细胞培养注意事项大全一、细胞培养实验室的基本要求细胞培养实验室必须具备以下设施和基本条件，以确保实验的准确性和可靠性，同时为研究人员提供一个安全、舒适的工作环境。
1.实验室布局：实验室应合理布局，功能明确，便于清洁和消毒。
室内布局包括细胞培养区、仪器设备区、试剂储存区、清洗区、办公区等。
各区域应相对独立，避免交叉污染。
2.实验室温度和湿度：实验室应保持恒定的温度和湿度，通常温度为20-26℃，湿度为40%-60%。
3.空气洁净度：细胞培养对空气洁净度要求较高，建议配备高效空气过滤器（HEPA），确保室内空气洁净。
4.光照和空气流通：实验室应有良好的自然光照或人工照明，同时具备良好的空气流通性。
5.电源和插座：实验室应提供稳定的电源和充足的插座，以满足各种仪器设备的需要。
6.实验台和储存柜：实验台应具备防震、防腐、防火等功能，储存柜应具备防潮、防尘、防霉等功能。
7.清洁和消毒设施：实验室应配备适当的清洁和消毒设施，如紫外线灯、酒精灯、灭菌器等。
8.防护设备：实验员应佩戴防护设备，如实验服、一次性手套、口罩等，以防止细胞培养过程中的污染和交叉污染。
二、细胞培养的基本操作细胞培养是一项技术性很强的工作，需要掌握各种基本操作技能，以保证实验的准确性和可靠性。
以下是细胞培养的一些基本操作。
1.细胞复苏：将冷冻保存的细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴中融化，然后离心洗涤、消化，最后加入新鲜的细胞培养基中。
2.细胞传代：当细胞密度达到一定程度时，将细胞从培养瓶中取出，消化成单个细胞，然后分种到新的培养瓶中继续培养。
3.细胞冻存：将处于对数生长期的细胞消化成单个细胞，然后与冷冻保护剂混合后放入低温冰箱中冷冻保存。
4.细胞观察：定期观察细胞的生长状况，包括生长速度、形态、颜色等方面。
5.细胞计数：通过显微镜或细胞计数仪对细胞数量进行计数，以评估细胞的生长速度和密度。
6.细胞分离：根据细胞的密度、大小、表面电荷等特性，通过离心、过滤等方法将不同细胞分离出来。
细胞培养技术
细胞培养技术一、细胞培养基本概念细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。
在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。
外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可反复取材等优点，它在临床染色体分析中使用最广泛。
体外培养细胞株可在培养过程中发生自发的或在外界作用下的转化，成为永久细胞系，也可直接建成永久细胞系，永久细胞系能在体外无取制的传代和生长。
永久细胞系通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特性。
但细胞克隆的细胞系其这一特性可以不明显。
二、细胞培养的环境细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。
1、无污染环境培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。
当细胞放置于体外培养时，与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代谢物质积累等，可导致细胞死亡。
因此在进行培养中，保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等，是维持细胞生存的基本条件。
2、恒定的温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。
培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时，即能受到一定损伤，但仍有也许恢复；在40-41℃1小时，细胞会普遍受到损伤，仅小半数有也许恢复；41-42℃1小时，细胞受到严重损伤，大部分细胞死亡，个别细胞仍有恢复也许；当温度在43℃以上1小时，细胞所有死亡。
3、气体环境气体是人体细胞培养生存必需条件之一，所需气体重要有氧气和二氧化碳。
氧气参与三羧酸循环，产生供应细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。
开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。
21.细胞培养的基本条件
移液器
顯微鏡
酶标仪
微孔板震荡器
高速离心机
液氮罐
实验室安全
层流净化细胞培养室管理规则 一级生物安全防护实验室 二级生物安全防护实验室 三级生物安全防护实验室 四级生物安全防护实验室ຫໍສະໝຸດ 层流净化细胞培养室管理规则
我院层流净化细胞培养室设计标准为万级，专供 细胞培养、冻存以及细胞治疗用。层流净化细胞培养 室的总体要求：经济、有序、高效、安全。初步制定 相关制度如下：
成无菌环境。
II级A型生物安全柜:
一种既能使操作造成无菌、 无尘的局部空气环境，保证检验、 检测不受污染，又能保证被研究 的对象（如病菌、细菌等）不外 溢，保护周围环境及操作人员的 安全隔离设备。
该设备可广泛应用于低、中 等危险度（病原体1--3，DNA重 组P1--P3）的临床细菌学，病毒 学、微生物学、组织培养、生物 学及生命科学的研究，加工、检 验部门。
高效过滤器:
高效过滤器是用超细玻璃纤维纸 作滤料，胶板纸作分隔板，可与铝合 金框、木框及镀锌钢板框组合而成。
特点：具有低阻高效、轻质、容尘 量大等特点，层高的要求，缩小净化 设备静压箱体积等优点。
适用于常温常压常湿条件下环境空 气的净化，尤其适用于需要高效空气 过滤器覆盖率高的净化厂房。
洁净层流罩:
1、准入制度：
1）必须取得实验室相关实验技能考试合格方可进入层流净化室； 2）在本室工作的实验人员应严格遵守本室工作守则，外来人员在进 入净化室工作之前，必须接受培训； 3）没有经过培训的人员不得单独进入净化室工作； 4）进入净化室后要保持安静，不得大声喧哗。
2、安全制度：
1）层流净化室内必须注意安全用电； 2）谨慎使用酒精灯，不能在有明火的情况下加、换酒精； 3）实验人员自觉维护室内设备的安全使用，对室内的仪器如CO2孵 箱等要经常注意机器运转情况，发现问题及时检修或报告请人检修； 4) 离开层流净化室必须断开必要的仪器电源； 5）对不符合层流净化室安全规定的行为主动报告主管老师。
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
细胞培养室的设置和相关设备
1)常规细胞培养室的设置和设施1.无菌操作室：1)由更衣间,缓冲间和操作间三部分组成2)更衣间：位于培养室最外部，用于更换洁净的衣帽鞋口罩。
放置消毒的防护服、衣帽柜、鞋柜。
3)缓冲间：位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境。
放置电冰箱、液氮灌、消毒好的无菌物品等。
4)操作间：位于内部，专用于无菌操作、细胞培养。
放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等。
房间要求：独立房间，按洁净厂房要求建造，并需要保持空气消毒和清洁无尘：1)紫外线灯—产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。
2)空气过滤的恒温恒湿装置—－最好，空气洁净度级别如下：洁净度级别尘粒最大允许数／立方米微生物最大允许数浮游菌／立方米沉降菌／皿100级3500 0 5 110000级350,000 2,000 100 3100000级3,500,000 20,000 500 10300000级10，500，000 60,000 1000 15注：空气洁净度级别表：一般普通培养室常选用100000级的2.准备室：常设置在无菌操作室外部，主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
主要设置：离心机、水浴锅、定时钟表、普通天平及日常分析处理物3.洗刷消毒间：要和其他区域分开，最好独立一室，主要用于各种培养器皿的清洗、准备和消毒，常设置：烘箱、高压蒸汽消毒锅、去离子水或者蒸馏水处理器、酸缸、水槽刷子等。
二．常用的基本设备1. 仪器：1)超净工作台－常用侧流式（垂直流）工作台，洁净度应达到100级。
国内产品一般都可以达标。
视场地大小选用一个较宽的或者多个较小的，如：北京嘉创博远生产的VC-S-10402)显微镜：倒置荧光显微镜，若有条件，尚可配置带有照相系统的高质量相差显微镜、解剖显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，以便随时观察、记录、摄影细胞生长情况。
需国外较好产品，如：Olympus3)CO2培养箱：需国外产品，如：SANYO/三洋4)干燥箱：电热干燥箱升温较高，一般需达到160℃以上。
细胞培养的原理和条件
细胞培养的原理和条件
细胞培养是一种体外培养细胞生长和增殖的技术，可用于研究细胞的生物学特性、疾病机制和药物筛选等。
其原理和培养条件如下：
原理：
细胞培养利用在体外提供的营养物质和适宜的环境条件，使细胞可以继续生长和增殖。
在培养细胞时，需要提供适当的培养基，该培养基含有必需的营养物质，比如氨基酸、葡萄糖、维生素、矿物质等，以满足细胞的生长和代谢需求。
同时，还需要控制培养基的温度、气氛、pH值等环境条件，以提供适宜的生长环境给细胞。
条件：
1. 培养基：培养基可根据不同细胞类型的要求进行调配。
常用的基本培养基包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）、RPMI-1640（Roswell Park Memorial Institute 1640）等。
基本培养基中含有必需的氨基酸、葡萄糖、维生素、矿物质等，以及常用的生长因子、荷尔蒙、抗生素等。
2. 温度：常用的细胞培养温度为37摄氏度，这是大多数哺乳动物细胞的最适生长温度。
3. 气氛：细胞培养需要采用无菌操作，培养环境要保持无菌。
常规的细胞培养环境为5%二氧化碳、95%湿度的空气气氛。
4. pH值：细胞在生长过程中需要维持适宜的pH值，通常为7.2-7.4。
培养基的pH值可以通过加入缓冲剂进行调节。
5. 细胞密度：需要进行适量的细胞接种，以确保细胞可以均匀地附着在培养皿上，并有足够的空间进行生长和分裂。
除了以上条件外，还需要定期更换培养基、观察细胞状态并进行细胞传代，以确保细胞的健康生长和增殖。
动物细胞培养的基本条件
动物细胞培养的基本条件
1. 培养基，动物细胞培养需要使用含有营养物质的培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）或RPMI 1640等。
培养基中通常含有氨基酸、糖类、维生素、无机盐、生长因子和血清等成分，以支持细胞的生长和增殖。
2. 温度，动物细胞通常在37摄氏度的温度下培养，这是因为这个温度符合动物体内的生理条件，有利于细胞的正常生长和代谢活动。
3. pH值，培养基的pH值通常在7.2-7.4之间，这个范围有利于细胞的生长和代谢，维持细胞内外环境的稳定性。
4. 湿度，细胞培养需要在恒定的湿度下进行，通常采用5%二氧化碳培养箱来维持适当的湿度和CO2浓度，以维持培养环境的稳定。
5. 无菌条件，动物细胞培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免细胞受到外源微生物的污染，通常在无菌工作台或生物安全柜中进行操作。
6. 细胞密度，在培养过程中，需要控制细胞的密度，避免细胞
过度增殖或过度稀释，通常通过离心和重新悬浮来调节细胞密度。
总的来说，动物细胞培养的基本条件包括适当的培养基、温度、pH值、湿度、无菌条件和细胞密度等因素，这些条件的合理控制对
于维持细胞的生长和稳定的培养环境至关重要。
通过严格控制这些
基本条件，可以有效地进行动物细胞培养实验，为细胞生物学和生
物医学研究提供可靠的实验基础。
细胞实验室建设标准
细胞实验室建设标准细胞实验室是生物医学研究中不可或缺的重要设施，其建设标准直接关系到实验室的安全性、实验结果的准确性以及研究工作的顺利进行。
为了确保细胞实验室的建设达到标准，我们需要从以下几个方面进行规范和要求。
首先，实验室的场地选择十分关键。
细胞实验室应该远离噪音、震动和污染源，同时要有良好的通风条件和充足的自然光照。
实验室的地面应该平整、防滑、易清洁，并且要能够承受实验设备的重量。
此外，实验室内的墙壁和天花板应该采用易清洁、耐腐蚀的材料，以确保实验室的卫生和安全。
其次，实验室的设备和仪器也是建设中需要重点考虑的方面。
细胞培养室需要配备恒温恒湿箱、培养箱、显微镜等设备；细胞分离室需要配备离心机、超速离心机等设备；细胞操作室需要配备生物安全柜、超净台等设备。
这些设备和仪器的选购和摆放需要符合相关的标准和规范，以确保实验室的工作环境和操作流程符合要求。
另外，实验室的安全管理也是至关重要的。
实验室应该配备相应的安全设施，包括紧急洗眼器、紧急淋浴器、灭火器等。
同时，实验室的工作人员需要接受相关的安全培训，了解实验室内各种化学品和生物制品的危险性，掌握正确的应急处置方法，确保实验室的安全生产。
最后，实验室的卫生和环境管理也是不可忽视的。
实验室应该定期进行卫生消毒，保持实验室的整洁和干净。
同时，实验室的废物处理也需要符合相关的规定，确保废物的安全处理和处置，避免对环境造成污染。
综上所述，细胞实验室的建设标准涉及到多个方面，需要全面考虑实验室的场地选择、设备和仪器、安全管理以及卫生和环境管理等方面。
只有严格按照标准规范要求进行建设和管理，才能确保实验室的安全性和工作效率，为生物医学研究提供可靠的支持。
希望各位实验室建设者和管理者能够重视实验室建设标准，确保实验室的安全和顺利运行。
细胞培养基本条件
1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
细胞培养设施和基本条件
细胞培养设施和基本条件1、试验室设计: 细胞培育是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必需保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响.细胞培育室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清爽,干燥和无烟尘.细胞培育工作包括:工作液配制、无菌操作(采样)、温育、无菌处理,细胞和用品贮存等.细胞培育室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培育于一室,而洗刷消毒在另一室.2、常用设施及设备:(1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式、直流式和外流式三大类.(2)无菌操作间:一般由更衣间、缓部间和操作间三部分组成.操作间放置净化工作台及二氧化碳培育箱、离心机、倒置显微镜等.缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等.(3)操作间:一般培育箱、离心机、水浴锅、定时钟、一般天平及日常分析处理物品.(4)洗刷消毒间:烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等.(5)分析间:显微镜、计算机及打印机等.3、培育器皿:细胞培育以玻璃器皿为主,常预备最需是使用最的三倍.器皿应选择透亮度好、无毒、中性硬度玻璃制品.常用的玻璃器皿有下面几种.(1)液体储存瓶:用于储存各种配制好的培育液、血清等液体,常以500ml、250ml、100ml生理盐水瓶或血浆瓶代替.(2)培育瓶:依据培育细胞种类要求不同培育瓶的形态各异,用于细胞传代培育的细胞要求瓶壁厚簿匀称,便于细胞贴壁生长和观看,瓶口要大小全都,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等几种.用于外周血培育的常用10ml一般圆瓶.两种培育瓶均要求选用优质玻璃制成.(3)培育皿:用于开放式培育及其它用途.分直径30mm、60mm、120mm等几种.(4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管.其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体.常用1ml和10ml两种.短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种.(5)离心管:离心管是细胞培育中使用最广泛的器皿,依据用途不同形态各样,常用于细胞培育的离心管有大腹式尖底离心管和一般尖底离心管两类.前者分别为50ml、30ml、15ml;后者则多为10ml和5ml.(6)其它:如三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗、注射器等.。
细胞培养基本知识技术
物质溶解其中。 • 4．大气的CO2溶解 （二）纯化水制备应注意事项： • 在准备室选择一处洁净、无尘、清静的地方放置纯
化水的装置。 • 所得的纯化水贮备在专用的干净玻璃瓶内，最好用
硼砂硅玻璃瓶内，标记上制备的日期。
• CO2培养箱是培养细胞的专用设备. • CO2培养箱培养细胞必须满足细胞生长的
三个条件. • 稳定的温度. • 大于95%的相对湿度. • 稳定的CO2浓度 • 三气培养箱是从CO2培养箱基础上发展出来
的新品种,它可同时控制O2浓度.
注意事项
• 1 用螺旋口瓶培养细胞时需将瓶盖微松，以保证 通气。但瓶口过松，易污染。
倒置显微镜
工作原理
一般情况下,人眼只能在光波的波长(颜色)和振幅(亮 度)发生变化时,才能看到被检测物体.但生活状态下的细胞 都呈无色透明,光线通过这些物体时波长和振幅并不发生 变化，因此用普通显微镜无法看清活细胞的形态和结构。 相差显微镜是利用细胞内各结构密度的不同而对光产生折 射率有差异的原理，即光波在折射率大的物体中比在折射 率小的物体中前进的距离较短，此距离叫光程差，由于光 程差引起光的相位变化称为相位差或相差。使用相差显微 镜可使肉眼不能分辨的相位差变为可分辨的振幅差（即明 暗差），使无色透明的物体在镜下反差显著、影像清晰。
（三）纯化水的常用制备方法
• 1.去离子法和石英双重玻璃蒸馏器法结合
• 水中含有溶解或不溶解的矿物盐、油脂及酸类， 以及O2,CO2,H2S,Cl2等。这些物质通过离子交换 树脂除去。
• 采用阳离子树脂或阴离子树脂处理。常使用强酸 性阳离子交换树脂和强碱基性阴离子交换树脂， 将水流通过离子交换柱即得纯净的去离子水。
3.细胞培养的基本条件-07资料
1）无菌室
◆
为无菌操作而设计的空间，包括操作间和缓冲间。
◆
操作间又可分为细胞室和感染室
缓冲间能保护无菌间的无菌环境，可兼有更换无 菌衣帽和进行一些简单操作（如放孵育箱、离心 等）的功能。
◆
◆
整个面积约10m2，通入经滤过的无菌空气，与周 围实验室比较应保持正压，常备紫外灯，室内其 他陈设尽量减少。
常用的消化液： 胰蛋白酶 依地酸二钠（disodium edetate,EDTA-2Na） 胶原酶
（1）胰蛋白酶
◆
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽
健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨 架，从而使细胞分离。
◆
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定
限度会损伤细胞。 胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无 Ca2+ 、 Mg2+ 的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25 ％ 。用滤器过滤除菌。
◆二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁
殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于
维持培养基的PH值。
◆大多数细胞的适宜PH为7.2-7.4，偏离这一范
围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸 性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞 生长。有资料显示，原代羊水细胞培养PH6.8 时最适。
3）抗菌素溶液：
素的影响
具体工作： 器皿洗刷 孵育 细胞传代
试剂和培养液的配 制
制备细胞
细胞的冻存、复苏和运 输
无菌观念
◆必须树立无菌观念，坚持一贯的无菌操作，进
行无菌处理。
◆实验室应分为无菌室、准备室和洗刷消毒室，
除洗刷消毒室须分隔开外，无菌室和准备室可 在同一房间内，但需划分出不同功能区，即无 菌操作区和培养、观察区。
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
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显微镜
PCR
酶标仪
2.2 温室
为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。
1.2 常用仪器与设备
基本设备：水纯化装置、 冰箱、天平、酸度计、电炉、培养基分 装器、搅拌器、离心机及离心管、移液器（管）、吸管等。
灭菌设备： 蒸汽压力灭菌锅、电热干燥箱、过滤除菌装置、喷雾 消毒器、紫外灯。
无菌操作设备： 超净工作台
1.4 无菌操作室
无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通
常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的 作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启， 以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、 实验台、鞋帽架、柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或 瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台、紫外灯、酒精灯、解剖镜、各种接种器 械等。
分别设置于相连的各个房间，特别是无菌操作室最好 能单独设置。如安排在一大实验室内，则无菌操作区 与清洗、消毒灭菌区应分别位于两端，而培养、制备 和储藏区位于此两区之间。
植物细胞工程实验室的设置
有其特殊的设置，如具有光照条件的培 养室，试管苗培育所需的温室和移植驯化室 等。
基本实验室
1.1 清洗间
光温控制设备： 时间程序控制器、空调及温度感应器。
细胞培养设备： 培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、 摇床、生物反应器等。
细胞学鉴定设备： 光学显微镜、实体显微镜、倒置显微镜等。 除上述基本设备外，如果有条件和需要还可配制摄影设备、生
化分析设备等。
培养器皿及实验用具：玻璃器皿、新型材料器皿及金属材质用 具
根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30~50 用具和培养材
料等。中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工
作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1~2个洗液缸，专门用于洗涤对洁 净度要求很高的玻璃器皿。
还应配置落水架、干燥箱、超声波清洗器、纯水制备等。
2、辅助实验室
2.1 鉴定室
细胞学鉴定室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、 干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。
应配置各种显微镜、照相系统等
生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的实验室中，应建立相应的生化分
析实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。
离心机、酶联免疫检测仪、天平、PCR仪等
细胞工程实验室与其他一般实验室的主要区别在 于，要求保持严格无菌环境，避免微生物及其他 有害因子的影响。 一般来讲，它应能进行六方面的工作：无菌操作、 培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。
1.1 细胞工程实验室的设置
动物细胞工程实验室的设置
一般来讲，它应能进行六方面的工作：无菌操作、
培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。各区最好
基本原理：将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，
再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的、均匀
的断面风速通过无菌区，形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
超 净 工 作 台
侧流式（或垂直式）超净工作台：净化后的空气气流由左侧（或
右侧）通过工作台面流向对侧，也有从上向下（或从下向上）流 向对侧，形成气流屏障以保持工作区无菌；在净化气流和外边气
地面应耐湿并排水良好。
超 声 波 清 洗 机
洗 瓶 机
电 热 干 燥 箱
纯 水 仪
1.2 制备室
主要用于有关培养用液体、培养基母液和培养基的配制等。 面积60 m2左右，配备的主要仪器设备有：冰箱、实验台、药品柜、
器械柜、天平、微波炉、pH计、玻璃棒、烧杯、磁力搅拌器、培养基
分装器、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管（器）、 烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180~200 L为宜，用于储
电 热 干
优点：温度均匀、效果较好； 缺点：升温过程较慢 注意事项： 1、升温时不能先升温后鼓风，应鼓风与升温同时开始，至100℃时 停止鼓风 2、消毒后，不能立即打开箱门以免骤冷而致玻璃器皿损坏，应等 温度自然下降至100℃以下时方可开门 3、温度过高可致包裹玻璃器皿的纸或棉花烧焦，烧焦碎屑影响细 胞的生长
离心机
超净工作台
1.5 培养室
为了控制培养室的温度和光照，培养室的房间不要窗户，但应当 留一个通气窗，并安上排气扇。天花板和内墙最好用塑料钢板装修， 地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗 培养室。培养室外应有一预备间或走廊。室内温度由空调控制，光照 时间及其强度由日光灯和自动定时开关控制。 培养室应配有若干培养架，上面固定日光灯、转床、摇床、光照 培养箱、生化培养箱、自动控时器等。
预防培养细胞受到污染是细胞培养成功 与否的关键
为什么？生物体内的细胞可以通过机体的代谢、调节和保 护等机制而使其营养、环境、生长条件、抵抗有害因子能 力等方面处于最佳状况。而体外培养的细胞由于失去了对 整体的依赖性，对实验室细胞培养的设施条件和人员素质 提出了较高的要求。
为了最大限度的创造既适合于细胞生长又可防治污染的环 境，在培养过程中对细胞培养的设施、操作规程和检测方 法等制定了严格的规范要求。
体交界处可因气流的流动出现负压，使少许未净化气体混入，有
发生污染的可能性 外流式（或水平层流式）超净工作台：使净化后的空气面向操作
者流动，外方气流不致混入操作区；不能进行有害物质实验操作；
因多为开放式，没有防护挡板，操作和拿取物品方便，但可能受 外界气流流动的影响而引起不洁空气混入。
用于细胞培养中的有些器械、器皿烘干使用、玻璃器皿干燥消毒 温度范围：50~300℃ 实验室常用：鼓风式电热干燥箱
存培养基母液、激素、维生素等贵重药品、彩色胶卷及保存植物材料。
天平应有不同感量。
天平
移液器
pH计
1.3 消毒间
用于培养细胞所用器械、培养基的消毒与灭菌。
配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干燥箱、 消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌 锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可 选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的 卧式灭菌锅。 如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求设 备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、 防滑。