Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子的初步研究

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体外SELEX技术筛选灭活铜绿假单胞菌适体的研究及初步应用的开题报告

体外SELEX技术筛选灭活铜绿假单胞菌适体的研究
及初步应用的开题报告
这个开题报告的研究领域应该是微生物学，应该是对铜绿假单胞菌进行筛选适体的研究。

具体内容应该如下：
背景介绍：
铜绿假单胞菌是一种常见的严重细菌感染病原体，针对其的操控和治疗可遏制其快速扩散和传播。

基于此，本研究旨在运用体外SELEX技术筛选铜绿假单胞菌适体，并在此基础上开展进一步的应用研究。

研究内容：
本研究将利用体外SELEX技术，通过从单链随机寡核苷酸库中挑选铜绿假单胞菌识别分子序列的方法，筛选出适体分子，然后采用生物学实验验证其识别、结合铜绿假单胞菌的能力。

通过对文献资料的梳理，对铜绿假单胞菌适体的特异性、稳定性等生物学性质进行分析，为进一步的应用研究提供参考。

预期结果：
本研究希望通过体外SELEX技术筛选到具有高亲和力和特异性的铜绿假单胞菌适体分子，验证其在生物样本中的检测能力。

同时，进一步深入研究其在铜绿假单胞菌感染预后监测、治疗等方面的应用前景。

研究意义：
本研究将为紫色假单胞菌的适体的筛选、动态监测及治疗提供一定的基础和理论支持，同时也丰富了体外SELEX技术的应用领域。

SELEX筛选嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）适体方法的建立

SELEX筛选嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）适体方法的建立李元跃;王雷;陈融斌;黎中宝【期刊名称】《海洋与湖沼》【年(卷),期】2012(043)002【摘要】Aeromonas hydrophila is a relatively common disease-causing bacteria in aquaculture. The objective of this study is to obtain the aptamers to A. hydrophila by using SELEX and analysis its secondary structure. Take the A. hydro- phila as the object, the study is started by the advanced technology named SELEX. After 12 rounds of selection and the affinity-testing by Biological element-anti-digoxin alkalinity phosphatase colored system, the aptamers were cloned, se- quenced and then analyzed its primary and secondary structure by the DNAMAN Software. The result showed that after 12 rounds of selection, the affinity raised 2.25 times from 0.32 in the third round to 0.72 in the ninth round, aptamers with primary structure homology had been enriched to some extent which are consisted of GT. The secondary structure con- sisted mainly of Stem-loop structure. This implicated that these Stem-loops were the basis for aptamers binding to target molecules as well as the basis for its further form the three-dimensional structure.%嗜水气单胞菌是水产养殖中一种比较常见的致病病原菌。

SELEX技术的研究进展及在医学中的应用分析

SELEX技术的研究进展及在医学中的应用分析指数富集配体系统进化技术(Systematic evolution of legends by exponential enrichment SELEX)是一种能获取与靶分子高选择、高亲和力结合的寡核苷酸的筛选技术,制备出的产物被称为适配体(aptam-ersDlers)。

适配体安全、无毒,具备特殊的三维结构,确保了其可与靶分子高特异性的结合,并可进一步改变靶分子的生物活性和生命进程。

适配体最大优势是没有免疫原性,并且分子量小、可化学合成、稳定性强、易于修饰和标记,与传统化学方法和免疫学方法相比,具有无可比拟的优越性。

近年来在传统SEL-EX技术基础上,各类衍生SELEX技术也被不断发展和完善,被广泛应用在生命科学研究、生物医药等领域,特别是在疾病的诊断与治疗等方面,显示出广阔的应用前景。

目前已有几种适配体诊断技术和适配体药物进入到了临床试验或临床应用阶段。

1 SELEX技术简介1. 1筛选过程SELEX技术依据分子生物学的原理,首先人工构建一个随机寡核苷酸文库,随机核苷酸序列的长度为20-40bp左右,所包含的不同种立体构象,几乎可以涵盖自然界存在的所有种类的靶分子。

将靶标物质与随机文库在一定条件下进行混合,形成文库洋巴标复合物,把未结合的核酸洗脱掉,富集与靶物质结合的核酸分子,以后者为模板进行PC R扩增,得到的产物经分离纯化后,作为进行下一轮筛选的模板。

如此反复,通过多轮(8-15轮)筛选,与靶标不结合或亲和性弱的核酸分子被充分去除,而与靶分子亲和性强的核酸分子被分离出来,同时其纯度随着筛选轮数的增加而增加。

最后筛选到的文库要经过克隆测序和特异性修饰,经过这些步骤后,所获得的特异识别靶分子的核酸才是适配体。

1.2优势和特点1)亲和力高、特异性强。

适配体与靶标之间,凭借彼此互补的三维结构,相互作用后形成牢固稳定的复合物,其解离常数通常能达到pmol/L-nmol/L的水平,并且能分辨出靶标结构上细微的差别。

泡沫细胞寡核苷酸适配子PM2的特异性研究

泡沫细胞寡核苷酸适配子PM2的特异性研究林广庆;严鹏科;汪江波;张慧;段才闻;李世煌【摘要】目的研究寡核苷酸适配子对动脉粥样硬化病变组织结合的特异性.方法将前期研究获得的特异性适配子命名为PM2,FITC标记后,荧光显微镜分别观察适配子与血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞、巨噬细胞源性泡沫细胞结合情况.采用高脂方法建立兔的动脉粥样硬化模型.利用PCR方法和荧光显微镜观察适配子与动脉粥样硬化病变结合情况.结果 PM2适配子与巨噬细胞源性泡沫细胞高度特异性结合,但不与血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞结合;PM2适配子能特异性结合动脉粥样硬化斑块组织,而不结合正常动脉组织结合.结论筛选出的PM2适配子特异性结合巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2011(001)012【总页数】4页(P20-23)【关键词】SELEX;特异性;巨噬细胞源性泡沫细胞;动脉粥样硬化病变【作者】林广庆;严鹏科;汪江波;张慧;段才闻;李世煌【作者单位】广州医学院附属第三医院药剂科,广东广州,510150;广州医学院附属第三医院药剂科,广东广州,510150;广西壮族自治区南溪山医院药剂科,广西桂林,541002;南华大学药物药理研究所,湖南衡阳,421001;南华大学药物药理研究所,湖南衡阳,421001;南华大学药物药理研究所,湖南衡阳,421001【正文语种】中文【中图分类】R543.5泡沫细胞是动脉粥样硬化病变的特征性病理细胞，其中巨噬细胞源性的泡沫细胞是动脉粥样硬化病变中最早出现、最主要的泡沫细胞。

Andrew等在Nature Medicine上专文指出，巨噬细胞源性的泡沫细胞有可能成为动脉粥样硬化诊断和治疗的靶点[1]。

SELEX技术是20世纪90年代创立的一种的生物文库技术[2-3]。

利用该技术可以从一个大容量的随机寡核苷酸文库中筛选得到与靶物质高特异结合亲和的配基即适配子。

Cell-SELEX技术筛选急性早幼粒细胞白血病NB4细胞适配体

Cell-SELEX技术筛选急性早幼粒细胞白血病NB4细胞适配体陈鑫;李卫滨;王开宇;兰小鹏【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2012(30)7【摘要】目的用以细胞为靶标的指数富集配体的系统进化(Cell-SELEX)技术获得与急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4高亲和力、高特异性的适配体.方法以NB4细胞为靶标,用Cell-SELEX技术从随机单链DNA(ssDNA)文库中筛选出一组适配体,将筛选得到的适配体群进行克隆、测序及结合力测定,用流式细胞仪和荧光显微镜对结合率最高的适配体进行亲和力和特异性分析.结果第1,4,7,10,13,16,19轮筛选获得的次级文库与NB4细胞的结合率分别为(1.6％,3.8％,6.3％,11.4％,15.4％,19.9％,16.7％);第16轮筛选的21个阳性克隆菌测序结果表明,存在有3种高度富集的适配体,分别为CX1序列2个,CX5序列3个,CX9序列16个;流式细胞仪检测3种序列的结合率分别为9.7％,12.6％,17.2％;CX9的解离常数(Kd)为16.2 nmol/L;荧光显微镜下发现,CX9与NB4细胞结合的荧光强度高于K562细胞.结论用Cell-SELEX技术成功筛选到针对NB4细胞的适配体CX9,为荧光标记适配体快速鉴定APL提供实验依据.【总页数】4页(P518-521)【作者】陈鑫;李卫滨;王开宇;兰小鹏【作者单位】第二军医大学福州总医院临床医学院,福州350025;解放军第94医院检验科,南昌330002;南京军区福州总医院检验科,福州350025;南京军区福州总医院检验科,福州350025;第二军医大学福州总医院临床医学院,福州350025;南京军区福州总医院检验科,福州350025【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.Cell-SELEX筛选人骨肉瘤细胞MG-63核酸适配体的实验研究 [J], 翁艳;陈冬冬;涂少臣;周燕芸;张韬2.用于未纯化蛋白样品核酸适配体筛选的Western印迹-SELEX筛选技术的建立[J], 李慧;邵宁生;赵强;梁超;丁红梅;李洁;黄皑雪;苏雪婷;张令强;李少华3.基于cell-SELEX技术筛选高转移胃癌细胞系HGC-27核酸适配体 [J], 刘涛;王进军;方晓娜;何磊;杨伟丽;罗昭锋;王亚雷4.CELL-SELEX筛选膀胱癌核酸适配体的细胞学研究 [J], 平秦榕;李翀;梁剑伟;刘杨文易;雷容;王剑松;颜汝平5.基于Cell-SELEX技术的去势抵抗性前列腺癌细胞核酸适配体的筛选与鉴定 [J], 仲津漫;丁健科;邓蕾;向颖;刘朵朵;杨全新因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

巨噬源性泡沫细胞形成过程中的机理研究及其进展

综述：巨噬源性泡沫细胞形成过程中的机理研究及其进展[摘要]巨噬源性泡沫细胞的形成是动脉粥样病变的关键环节，清道夫受体与胆固醇代谢相关受体在此过程中发挥极其重要的作用。

下面就泡沫细胞形成过程中的关键因素及机理做如下综述，并探讨通过调节这些潜在因素和机理，开发靶向药物治疗方法，有效抑制动脉粥样硬化的发生发展。

[关键词] 巨噬细胞；清道夫受体；酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶（ACAT）；ATP结合盒转运子 AI（ABCA1); 胆固醇酯转运蛋白(CETP)动脉粥样硬化是多因素参与的复杂病理过程，在其早期，泡沫细胞的形成是主要的病理特征。

现已证实氧化型低密度脂蛋白(Oxidized LDL,OxLDL)是动脉粥样硬化开始和放大因子。

OxLDL通过其溶血卵磷脂部分，对单核细胞有强大的趋化作用，能吸引和滞留单核细胞，使进入内膜的单核细胞被激活并分化成巨噬细胞。

巨噬细胞大量表达多种受体，介导修饰脂蛋白的入胞，这种无反馈性调节的摄取脂蛋白，导致大量脂质蓄积，形成泡沫细胞。

在此过程中，有多种因素参与协同作用。

下面就巨噬细胞泡沫化过程中的机理做如下综述：1.清道夫受体（Scavenger Receptor,SR）与巨噬源性泡沫细胞巨噬细胞通过细胞表面LDL受体摄取LDL且受细胞内胆固醇浓度的负反馈调节。

因而,细胞外LDL水平增加并不引起细胞内胆固醇含量的增加。

但是,当LDL 氧化修饰形成Ox LDL 后，其受体识别位点发生了改变，即不能由LDL 受体识别，产生了OxLDL自身受体结合位点，被巨噬细胞上的清道夫受体或其他OxLDL 受体识别和摄取，且不受细胞内胆固醇浓度的负反馈调节。

经清道夫受体吞噬的OxLDL被转运到溶酶体,胆固醇酯被水解成游离胆固醇和脂肪酸。

过剩的游离胆固醇在酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶（Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase,ACAT）的作用下被酯化，从而使胆固醇酯在细胞内过量积聚而形成泡沫细胞。

《2024年4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞形成的影响》范文

《4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞形成的影响》篇一一、引言近年来，心血管疾病的发病率持续上升，其中动脉粥样硬化是最为常见的疾病之一。

巨噬细胞来源的泡沫细胞形成是动脉粥样硬化病变的关键过程之一。

4-PBA（4-苯基丁酸）作为一种具有生物活性的物质，其在细胞代谢和信号传导中发挥重要作用。

本文旨在探讨4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞形成的影响及其可能的机制。

二、材料与方法1. 材料（1）巨噬细胞系；（2）4-PBA溶液；（3）其他相关实验试剂及仪器。

2. 方法（1）培养巨噬细胞并诱导其形成泡沫细胞；（2）将不同浓度的4-PBA溶液加入到培养体系中；（3）观察并记录细胞的形态变化；（4）采用荧光染色法检测细胞内脂质含量；（5）采用Western blot检测相关蛋白表达水平；（6）数据统计与分析。

三、实验结果1. 4-PBA对巨噬细胞形态的影响实验结果显示，在加入不同浓度的4-PBA后，巨噬细胞的形态发生了明显变化。

随着4-PBA浓度的增加，细胞的形态逐渐变得更加圆润，同时细胞的伸展度也有所降低。

2. 4-PBA对巨噬细胞内脂质含量的影响通过荧光染色法检测细胞内脂质含量，我们发现，加入4-PBA后，巨噬细胞内的脂质含量明显降低。

随着4-PBA浓度的增加，脂质含量的降低程度也逐渐增大。

3. 4-PBA对相关蛋白表达水平的影响通过Western blot检测相关蛋白表达水平，我们发现，加入4-PBA后，与泡沫细胞形成相关的蛋白表达水平有所降低。

其中，胆固醇调节相关蛋白及脂质代谢相关蛋白的表达均受到了一定程度的抑制。

四、讨论根据实验结果，我们可以得出以下结论：4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞形成具有显著的抑制作用。

首先，从形态学角度来看，4-PBA使巨噬细胞的形态发生变化，这可能与其对细胞骨架的调控有关。

其次，从细胞内脂质含量及蛋白表达水平来看，4-PBA能够显著降低巨噬细胞内的脂质含量及与泡沫细胞形成相关的蛋白表达水平。

巨噬细胞参和泡沫细胞形成的机理

巨噬细胞参与泡沫细胞形成的机理第一军医大学南方医院肾内科，中国人民解放军肾脏病研究所刘尚喜动脉粥样硬化（ＡＳ）是１种严重威胁人类健康的疾嫡，也是慢性肾功能衰竭病人常见的并发症。

据流行病学调查显示慢性肾衰患者心脑血管疾嫡的死ｔ：率为５０％。

ＡＳ足一种以脂质、纤维性物质和矿物质在血管壁聚集为特征的慢性进展性疚痫。

涉及Ａｓ损伤产生的主要事件包括血管内皮损伤、单核细胞侵润转变为巨噬细胞、泡沫细胞的形成、脂质沉积、血小板激活、半滑肌细胞迁移和增生及细胞外基质和纤维组织的合成与沉平ｊ｛等。

泡沫细胞的形成是Ａｓ发生的早期事件之一，在Ａｓ的发生、发展过程中起着至关重要的作ｊＨ。

形态学和免疫组织化学的研究表明泡沫细胞主要足ｆ＝三噬细胞吞噬大量低密度脂蛋白（ＬＤＩ．）来源的脂质而形成。

搞清巨噬细胞形成泡沫细胞的ＯＬＮ，将为Ａｓ的防治提供重要的理论依据。

经过近二十‘年的大量研究，人们对泡沫细胞形成的机制已有一定的认识，有本文结合自己的研究１：作对巨噬细胞转变为泡沫细胞的可能机制加以简要介绍。

Ｉ。

ＤＬ受体与泡沫细胞形成ＬＤＬ主要由载脂蛋白Ｂ和磷脂及胆固醇构成，其正常生理功能是将磷脂和胆固醇运输到分裂细胞，提供细胞分裂时合成细胞膜所需的脂质成分。

血浆ＬＤＩ．升高是Ａｓ的危险因素已为人们普遍接受，但ＬＤＬ导致Ａｓ的机制一直处于探讨之中。

Ｉ。

ＤＬ可通过ＬＤＩ。

受体被巨噬细胞识别和吞噬，但细胞膜ＬＤＬ受体的数量受到细胞内胆固醇水平的反馈调控，不会导致大量吞噬，因此，正常Ｉ。

ＤＬ通过其受体不会导致泡沫细胞的形成。

清道夫受体与泡沫细胞形成由于ＬＤＬ通过ＬＤＬ受体不能被巨噬细胞大量吞噬导致泡沫细胞的形成，推测ＬＤＩ。

可能通过其它的途径被巨噬细胞吞噬。

ＧｏＬｄｓｔｅｉｎ等首先发现乙酰化修饰的ＬＤＬ（ＡＣ—ＬＤＬ）可被巨噬细胞大量吞噬导致泡沫细胞的形成。

Ａｃ—Ｉ．ＤＬ不被正常ＬＤＬ受体所识别，而被“Ａｃ—ＬＤＬ受体”识别，由于“Ａｃ—ｌ。

cell celector介绍

材料中。细胞的定位精度极高，可以将单细胞转移到多孔板中，也可
以制备单细胞PCR。
CellCelector™-主要操作流程
显微镜观察细胞培养皿使用成像程序扫描并分选细胞根据细胞形态的标准进一步筛选将挑选的目标细胞转移到新的培养皿
重新培养
下游分选
CellCelector™-应用概述
干细胞应用
•自由转移培养的小鼠和人类胚胎克隆 •特定的转移未分化的干细胞集落 •转移胚体细胞，全能干细胞（iPS）和成体干细胞集落（HSC）
CellCelector™-杂交瘤细胞
• 为了分离培养的杂交瘤细胞需要特殊的工艺制备甲基纤维素培养基，大规模生产多克隆抗体可以通过与二抗结合在克隆周围产生荧光，重合区可以提供细胞周围的信息，可以避免转移不需要的细胞或细胞碎片。分离杂交瘤细胞重要的是要能够检测庞大范围内的小群体荧光细胞。
CellCelector™-单细胞
干细胞的应用
分离人骨髓间质单个干细胞
• 间质干细胞具有多向分化潜能，它可以分化成有限的细胞系系，如成骨细胞，肌细胞，脂肪细胞和（胰腺）β-细胞。本实验方法是通过一个胚胎环境（鸡）启动人类干细胞分化成多能细胞的一个过程
GFP阳性的人类间质干细胞被移植到鸡胚胎该胚胎为收获了几天后的胚胎。
通过可视化的绿色荧光蛋白的荧光信号可以看到人类胚胎组织细胞内的分布
甲基纤维素模式选择和分离产生抗体的细胞集落
甲基纤维素模式收集产生抗体的杂交瘤细胞CHO细胞集落
甲基纤维素模式收集的CHO杂交瘤细胞集落在96孔培养板中的生长情况
CellCelector™-其他应用
• 扩增细胞：将同一克隆的一
部分转移到两个不同的培养皿
• 定量的单细胞PCR和RT PCR技术：在小于0.1微升的体积内转移单细胞，进行全基因组分析 • 微阵列：细胞系的开发，单细胞蛋白质组学

适配体的筛选技术

适配体的筛选技术——SELEX[摘要] 适配体泛指具有抗体功能的单股寡核苷酸（RNA或DNA），其可形成的特殊的立体结构如以辨识特定的蛋白质。

在一定环境下, 单链DNA 或RNA能与某些物质形成多种热力学稳定的三维空间结构而成为各种功能分子。

在大多数情况下, 溶液中的单链DNA 或RNA 的空间构象是不确定的, 当有目标分子存在时, 在合适的环境下寡聚单链会发生适应性折叠, 形成发夹( hairpin) 、假结( pseudokno t ) 、凸环( bulg e) 、G-四分体( G-quar tet ) 等特殊结构, 通过氢键、疏水堆积作用、范德华力等与目标分子紧密结合。

这种结合不需要依靠通常的核糖磷酸骨架的亲和力, 而且靶物质既可以是蛋白质, 也可以是多肽及小分子物质。

这种寡核苷酸片段被称为适配体。

适配体的产生是借由一种指数富集配体的系统进化技术( systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)。

SELEX是20世纪90年代发展起来的一项组合化学技术。

利用该技术可以从随机单链核酸序列库中筛选到特异性与靶物质高度亲和的核酸配体( ap tamer) , 其解离常数可以与单克隆抗体媲美。

经过十几年的发展, SELEX技术已经成为一种重要的研究手段和工具,被广泛应用到分子生物学、基因组学、临床医学等众多研究领域, 并且衍生出了混合靶SELEX、体内SELEX、基因组SELEX等各种子技术。

随着基因组学和蛋白质组学的深入开展, SELEX技术会有更广泛的应用前景。

[关键词]适配体；指数富集配体的系统进化; 配体;Aptamer screening technology - SELEX[Abstract] Aptamers function refers to a single-stranded antibody oligonucleotides (RNA or DNA), which can form three-dimensional structures such as special to identify specific proteins. In certain circumstances, asingle-stranded DNA or RNA can form a variety of substances with certain thermodynamically stable three-dimensional structure for a variety of functional molecules. In most cases, the solution of the single-stranded DNA or RNA conformational is uncertain, when the presence of target molecules in a suitable environment occurs adaptive single-stranded oligo folded forms a hairpin (hairpin) , fake knot (pseudokno t), convex ring (bulg e), G-tetrad (G-quar tet) and other special structure, through hydrogen bonding, hydrophobic stacking interactions, van der Waals and other closely integrated with the target molecule. This combination does not need to rely on the usual affinity ribose phosphate backbone and the target substance may be a protein, polypeptide can also be small molecules. This oligonucleotide is called aptamers. Aptamer is produced by means of ligands by exponential enrichment caused by a phylogenetic techniques (systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX). SELEX was in the 1990s developed a combinatorial chemistry techniques. This technology can be single-stranded nucleic acid sequence from a random library was screened with the target substance to a specific high affinity nucleic acid ligands (ap tamer), dissociation constant of the monoclonal antibody can be comparable. After ten years of development, SELEX technology has become an important research tool, and tools are widely applied to molecular biology, genomics, clinical research and many other fields, and derived from a mixed target SELEX, in vivo SELEX, genome SELEX various sub-technologies. Withgenomics and proteomics in depth, SELEX technology has wider applications. [key words]Aptamer,SELEX,ligand20世纪90年代初, 美国科罗拉多大学(University of Col2 orado)的Tuerk 和Gold 将翻译T4 DNA 聚合酶( gp43 ) 的mRNA 中一含有8个碱基的环状结构进行序列随机化(该区域为茎环结构, 含18 个碱基, 其中环的部分有8 个碱基,gp43本身可以结合该区域并对自身合成进行调节) , 得到一个含65 536种序列的核酸库, 经过几轮筛选从中得到了两种与gp43紧密结合的核酸配体: 一种为已知的野生型, 另一种变体与野生型相差4个碱基, 两者的解离常数接近(野生型Kd = 5 ×10 - 9 mol/L, 变异性Kd = 3. 2 ×10 - 7 mol/L ) 。

基于Cell-SELEX的核酸适配体在生化分析与生物成像中的应用

基于Cell-SELEX的核酸适配体在生化分析与生物成像中的应用堵玉林;莫柳婷;易娅莎;邱丽萍;谭蔚泓【摘要】Aptamers are single-stranded oligonucleotides ( DNA or RNA ) selected through a technology termed "Systematic evolution of ligands by exponential enrichment" ( SELEX ) . In addition to high affinity and high specificity for their target molecules, aptamers have some advantages such as low molecular weight, easy synthesis, high chemical stability, low immunogenicity, and convenient modification. Based on the Cell-SELEX technique, a panel of aptamers which can specifically recognize target cell lines has been generated. By targeting specific membrane proteins in their native state, these aptamers can identify subtle molecular differences among different cell lines, thus have attracted a broad interest in biomedical research. In this review, we summarized the development of aptamers and their use in detection, profiling and imaging of tumor cells. Also, their perspectives were discussed.%基于Cell-SELEX的核酸适配体是指以活细胞为靶标物,通过指数富集的配基系统进化技术(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的单链寡核苷酸.它能够与靶标细胞高亲和性、高特异性结合,具有分子量低、合成简单、化学稳定性好、免疫原性低、易于功能化修饰等优点,已广泛应用于生命科学研究领域.本文综述了基于Cell-SELEX技术筛选的核酸适配体在肿瘤细胞检测、分析和成像方面的研究进展,并对核酸适配体研究的发展前景和趋势进行了展望.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2017(045)012【总页数】9页(P1757-1765)【关键词】核酸适配体;Cell-SELEX;生化分析;生物成像;肿瘤细胞【作者】堵玉林;莫柳婷;易娅莎;邱丽萍;谭蔚泓【作者单位】分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082;分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082;分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082;分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082;分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082【正文语种】中文近年来，癌症的发病率和死亡率不断上升，已成为我国居民最主要的死亡原因之一。

一种动脉粥样硬化的靶向适配子及其制备方法和应用[发明专利]

专利名称：一种动脉粥样硬化的靶向适配子及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：严鹏科
申请号：CN201310237217.X
申请日：20130614
公开号：CN103290019A
公开日：
20130911
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种动脉粥样硬化的靶向适配子及其制备方法和应用，该靶向适配子是采用SELEX方法，通过巨噬细胞源性泡沫细胞筛选同时用平滑肌细胞、内皮细胞以及THP-1细胞反筛选得到的动脉粥样硬化的靶向适配子片段，并通过将该靶向适配子应用于制备MRI动脉粥样硬化靶向纳米造影剂，只特异性地与巨噬细胞源性泡沫细胞结合，高特异性结合于AS病变血管组织，提高MRI动脉粥样硬化靶向纳米造影剂的靶向性，可实现动脉硬化的早期特异性诊断。

申请人：严鹏科
地址：510140 广东省广州市荔湾区多宝路63号
国籍：CN
代理机构：广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙)
代理人：汤喜友
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巨噬细胞源性泡沫细胞的功能变化研究进展

巨噬细胞源性泡沫细胞的功能变化研究进展作者：高媛康林来源：《中国实用医药》2008年第18期【摘要】巨噬细胞源性泡沫细胞在动脉粥样硬化中起着至关重要的作用，其功能变化与动脉粥样硬化的形成与发展密切相关。

本文综述了有关巨噬细胞源性泡沫细胞功能变化方面的研究进展，对于找寻动脉粥样硬化治疗的新靶点有着重要的意义。

【关键词】泡沫细胞；动脉粥样硬化；功能变化【Abstract】 Monocyte-macrophage-derived foam cells play important roles in the atherosclerosis.The metergasis of overall protein is closely related with the occurrence and development of artherosclerosis.In this paper,recent advance in the research of the metergasis of overall protein are reviewd,and suggesting a new strategy for atherosclerosis treatment.【Key words】 Overall protein；Atherosclerosis(AS)；Metergasis动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一个复杂的病理生理过程，巨噬细胞源性泡沫细胞是早期动脉粥样硬化斑块的主要组成和特征。

泡沫细胞源于巨噬细胞，是巨噬细胞通过表面的多种受体无限制地摄取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)颗粒及其他配体，在胞内大量蓄积胆固醇酯和三酰甘油而形成。

泡沫细胞在保持巨噬细胞原有的功能的基础上，各种细胞功能均发生变化。

这一系列功能变化影响AS形成和发展。

研究泡沫细胞功能的变化，对于找寻AS治疗的新靶点有着重要的意义。

Cell-SELEX技术在肿瘤诊治中的应用进展

ｃａｎｃｅｒ
ｗｉｔｈｈｉｇｈｃｅｌｌｓ，ａｒｅｍａｎｙ
ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ，ａｆｆｉｎｉｔｙａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ａｐｔａｍｅｒｓｔｈａｔｇｅｎｅｒａｔｅｄｂｙ
ａ
ｂｉｎｄｗｈｏｌｅｃｅｌｌｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ
ｗｉｔｈ
ｍｅｔｈｏｄ
ｃａｌｌｅｄ
ｒａｎｇｅ
ｃｅｌｌ—ＳＥＬＥＸ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ
（Ｒａｍｏｓ
ｃｅｌｌｓ）作为靶标，筛选出高亲和力、高特异
性核酸适配体ＴＤ０５，通过链霉亲和素磁珠与核酸适配体的结合捕获和富集目标受体，最后利用质谱分析确定ＴＤ（）５的受体为免疫球蛋白ＩｇＭ重链，后者已被证明表达于伯基特淋巴瘤细胞。随后，Ｂｅｒｅｚｏｖｓｋｉ等［２”３提出了“核酸适配体促进的生物标记发现（ａｐｔａｍｅｒ—ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ
ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇａｎｄｂｙｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ，
蛋白质乃至整个细胞的寡聚核苷酸（几十个碱基的单链ＤＮＡ或ＲＮＡ）。大小一般小于１００个碱基，多为１５～４０个碱基，因其独特的三维结构，能以高亲和力、高特异性与一系列靶物质结合Ｅ…。核酸适
ＳＥＬＥＸ）技术筛选出的能特异结合金属离子、多肽、
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈ
特异性ＤＮＡ适配体的技术称为细胞ＳＥＩ。ＥＸ（ｃｅｌｌ— ＳＥＬＥＸ）技术。通常肿瘤细胞系被用作靶标，以获得可将靶细胞从其他肿瘤细胞或正常细胞中区分开的核酸适配体。具体步骤为：（１）随机合成单链
ＤＮＡ（ｓｉｎｇｌｅ—ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ，源自ＳＤＮＡ）；（２）２２９
新的肿瘤标志物的甄别
细胞膜蛋白的改变与
体传感器用于蛋白识别提供了方向，同时也为高效发现未知标志物提供了理论及技术支持。肿瘤体外、体内成像分子成像，是指在人或其他活体系统的分子、细胞水平实现生物过程的可视化、描述及测量［２７｜。通过分子成像，不仅可以定位病灶（如肿瘤等），还可以观察特定分子的表达及运动，观察细胞和某些影响肿瘤行为的生物过程，观察肿瘤细胞对治疗性药物的反应口…。大多数分子成像探针是由报告基团以及受体特异性的高亲和力配体组成。抗体因其高亲和力、高特异性结合肿瘤抗原，故被广泛用于肿瘤诊断。但是抗体分子量大，在血液中长时间存在，导致较高背景信号的产生进而影响体内成像效果。核酸适配体半衰期短，是用于发展分子探针的理想配体。通过ｃｅｌｌ—ＳＥＬＥＸ筛选获得的核酸适配体，因其良好的靶向性、热稳定性及易于化学修饰，可以在分子成像领域得到广泛应用。ｓｇｃ８ｃ适配体是靶向人急性淋巴细胞白血病Ｔ淋巴细胞系（ＣＣＲＦ—ＣＥＭ）的特异适配体。Ｗａｎｇ等瞳叼构造了一种声学液滴，其核心是液相全氟正戊烷，液滴表面为脂质外壳，并包被有ＦＡＭ标记的ｓｇｃ８ｃ及抗肿瘤药物阿霉素。液相全氟正戊烷在超声作用下可快速转变为气相，形成的微小气泡（空化核）在超声场的作用下振动、生长并不断聚集声场能量，当能量达到某个阈值时，空化气泡急剧崩溃闭合，并释放出巨大的能量，有效杀伤肿瘤细胞。实验证明这种声学液滴可在体外成像，并在超声下可特异性破坏ＣＣＲＦ—ＣＥＭ细胞，有助于肿瘤早期诊断及治疗。荧光成像在分子成像领域进展迅速，它与靶向分子探针的结合在肿瘤成像领域应用广泛［３０Ｉ。基于核酸适配体的荧光成像基本可分为两类：直接成像和激活式核酸适配体探针成像［３“。基于核酸适配体的直接成像是指将核酸适配体与荧光染料、量子点或其他纳米颗粒结合作为靶向探针，通过核酸适配体与靶分子的特异结合实现荧光成像。Ｓｈｉ等Ｄ２３将近红外染料Ｃｙ５标记的ＴＤ０５适体（Ｃｙ５一ＴＤ０５）作为探针，首次对Ｒａｍｏｓ细胞进行体内分子成像。研究者将Ｒａｍｏｓ细胞皮下注射进入ＢＡＩ。Ｂ／ｃ裸鼠，２～３周后尾静脉注射Ｃｙ５一ＴＤ０５。数小时后荧光探针扩散至小鼠全身，在所有组织包括肿瘤中可见红色信号。随后，大部分区域红色信号减弱，但在肿瘤区域信号持续变强，且信号可持续５～６ｈ之久。直接成像虽然可以在体内识别肿瘤细胞并实现

RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定

RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定周云;沃兴德;卢德赵【期刊名称】《中国动脉硬化杂志》【年(卷),期】2010()9【摘要】目的以小鼠巨噬细胞RAW 264.7为对象,建立简便而又准确的泡沫细胞诱导及鉴定方法。

方法将实验分为正常对照组和不同浓度氧化型低密度脂蛋白与细胞孵育组,在以孵育时间为24 h的前提下,用MTT法和流式细胞术来确定诱导泡沫细胞的氧化型低密度脂蛋白合适浓度区间范围,并用总胆固醇试剂盒和游离胆固醇试剂盒测定不同程度泡沫细胞内胆固醇酯含量。

结果氧化型低密度脂蛋白浓度范围为20～30 mg/L时,细胞存活率已受到显著抑制,并随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增高细胞凋亡率和坏死率逐渐增大,起初以细胞凋亡为主,当氧化型低密度脂蛋白浓度大于40 mg/L时凋亡的细胞不断坏死。

20 mg/L和30 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW 264.7细胞共孵育24 h,细胞内胆固醇酯比重分别为66.26%和71.19%,而10 mg/L的氧化型低密度脂蛋白诱导24 h的泡沫细胞不典型,40mg/L以上的氧化型低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞泡沫化程度严重,贴壁不牢,大部分细胞破裂或凋亡,脂滴散布于细胞外。

结论 20～30 mg/L氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW 264.7巨噬泡沫细胞模型稳定且形态较完整,符合泡沫细胞的形态学特征。

【总页数】4页(P687-690)【关键词】RAW264.7细胞;泡沫细胞;胆固醇酯;氧化型低密度脂蛋白【作者】周云;沃兴德;卢德赵【作者单位】浙江中医药大学生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】R36【相关文献】1.U937巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立 [J], 唐世英;胡桂才;杨凤国;徐大为;李春华2.昆明种小鼠腹膜巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立 [J], 周元芳;谭健苗3.鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及比较 [J], 祁芳菲;楼滨;杨青4.THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定 [J], 王术玲;潘华新;王培训5.动脉粥样硬化敏感小鼠C_（57）BL／6J腹膜巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立[J], 杨永宗;谭健苗;杨小毅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

SELEX技术详解

冯俊奎单克隆抗体技术将产生抗体的单个B淋巴细胞同肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产单克隆抗体。

单克隆抗体单克隆抗体作为蛋白质，具有特定的空间结构，基于此空间结构其与底物结合具有特异性、多样性和定向性，使其在检验医学、蛋白质的提纯、肿瘤的导向治疗等多领域得到广泛应用。

正是由于抗体蛋白结构的多样性和特异性决定了单克隆抗体的广泛应用RNA结构的多样性RNA 分子中除G-C、A-U 碱基配对外, 还有G-U 等变偶碱基对的存在, 可以形成发夹、假结、凸环、G-四联体等空间结构, 即使一段很小的RNA 分子也能形成具有相当刚性的稳定结构。

多达1014个以上的随机寡核苷酸几乎涵盖了所有可能的立体构象, 基于核酸的三级结构，核酸配体可以高亲和力的结合于从单个小分子到复杂分子再到完整的生物细胞核组织的广泛靶目标。

SELEX 技术的诞生（1990年）Ellington 和Szostak报道了能够特异性结合于染料小分子的RNA 配体，并创造了适配体（aptamer）这个名词，以指代核酸配体。

Tuerk 和Gold描述了针对T4 DNA 聚合酶适配体的筛选，提出并命名了SELEX 技术。

Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX即指数富集的配基系统进化技术利用该技术可以从随机单链核酸序列库中筛选出特异性与靶物质高度亲和的核酸适体。

1.SELEX技术主要内容SELEX技术的基本思想是体外化学合成一个单链寡核苷酸库,用它与靶物质混合,形成靶物质—核酸的复合物,洗掉未与靶物质结合的核酸,分离与靶物质结合的核酸,以此核酸分子为模板进行PCR扩增,再进行下轮的循环筛选过程。

通过重复的筛选与扩增,最后得到与靶物质具有高亲和力与高特异性的适体。

自1990年以来，SELEX 技术所用作的靶物质种类不断增加。

2.SELEX 的靶物质无机离子Zn2+ Ni2+有机小分子乙醇胺茶碱有机染料胆酸等核苷酸类腺嘌呤ATP cAMP 黄嘌呤等辅酶因子辅酶A 生物素FMN FAD 等核酸 E.coli5SRNA 酵母苯丙氨酸tRNA等氨基酸L-缬氨酸D-色氨酸等糖类几丁质交联葡聚糖等抗生素卡那霉素A、B 链霉素等多肽蛋白质类HIV-I整合酶HGF 链霉亲和素等复杂结构炭疽孢子核糖体蛋白PC12cell等SELEX技术对靶物质的要求SELEX可以用于众多不同的靶物质，让人们不禁想到适配子的选择可能用于所有的物质。

Cell-SELEX技术研究进展

Cell-SELEX技术研究进展赵仲麟;李燕;袁超【摘要】适配子是通过SELEX技术,即指数富集配体系统进化技术,经反复放大筛选得到的、与目标分子有高度亲和性的分子.SELEX技术常使用纯化的靶分子,目前活细胞也可用于筛选目标,这种技术称为细胞指数富集配体系统进化技术(Cell-SELEX),其优点是产生的适配子可以与活细胞中的靶分子的天然构象发生作用.细胞表面的跨膜蛋白也可作为适配子的目标.此外,在不知道任何细胞表面分子的情况下也可以得到细胞特异性适配子.对Cell-SELEX技术的应用及研究进展进行综述.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P52-56)【关键词】Cell-SELEX;生物标记物;癌症研究;核酸;适配子【作者】赵仲麟;李燕;袁超【作者单位】河南农业大学理学院,郑州450002;郑州轻工业学院食品与生物工程学院,郑州450002;河南农业大学理学院,郑州450002【正文语种】中文适配子是从组合核酸库中筛选到的、与靶分子具有高度亲和性的分子［1] 。

与抗体类似，适配子对目标分子具有高度亲和性和特异性。

然而适配子还有很多额外的优点，如可以抵抗还原条件和热变性等。

典型的适配子一般少于40个核苷酸，同时还要易于化学合成。

另外，适配子可以在一些生理条件下，可通过反义寡核苷酸杂交使其失活。

因此，可以用于设计解毒剂。

适配子在分子生物学和医学已经被广泛应用［2] 。

适配子通过SELEX技术，即指数富集配体系统进化技术，经反复的放大筛选得到的［3，4] 。

这个过程中，单链核酸库与靶分子孵育，单链核酸包括DNA、RNA和修饰的核酸，库由30-100个核苷酸的随机序列组成，约含1014-1015变异体。

与目标有结合活性的变异体将被回收，然后通过RT-PCR进行文库富集扩增，然后利用富集的PCR产物，通过模板链除去或体外转录重建单链库。

该过程将重复几轮至20轮不等，最终找到目标适配子。