酵母蛋白质提取对照品
实验三_酵母RNA的提取及含量测定
酵母RNA的提取及含量测定
一、实验目的与要求
1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法；
2、了解测量核酸浓度不同方法的原理；
3、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法；
4、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理
1、RNA提取原理：
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。酵母含RNA 达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
2、测定RNA含量的方法：
（1）紫外吸收法原理：核酸具有吸收紫外线的性质，在波长260纳米处有最大吸收，且在一定浓度范围内光吸收值与浓度成正比（0—50微克/毫升），符合朗伯-比尔定律。优点样品用量少，不用显色，测完后样品可以继续使用。
（2）地衣酚显色法：核酸与浓盐酸共热，放生降解，生成糠醛，后者与地衣酚反应，在三价铁离子或二价铜离子作用下，生成鲜绿色的复合物，670纳米处有最大吸收，且光吸收值与浓度成正比，符合朗伯-比尔定律。缺点反应特异性差，易受干扰。
酵母双杂交protocol(精)
目录
(一介绍 4
(二试剂盒物品清单 7
(三额外附加物品列表 9
(四酵母菌株 11
(五酵母载体 14
(六方法简述:单杂交文库的构建和筛选 16 方法简述:双杂交文库的构建和筛选17
(七构建用于酵母单杂交的报告质粒载体 18
(八构建用于酵母双杂交的 DNA-BD 融合载体 19
(九构建生成 cDNA 文库 21
(十构建和筛选酵母单杂交和双杂交文库(简述 27 (十一酵母单杂交文库的构建和筛选 28 (十二酵母双杂交文库的构建和筛选 30 方法 A:通过酵母配对(Yeast Mating来筛选目的蛋白 30 方法 B:通过共转化的方法筛选目的蛋白 35 (十三分析阳性相互作用结果 38 (十四问题解决指南 44 (十五参考文献 47 (十六相关产品 50 附录 A: 双链 cDNA合成的典型结果 51 附录 B: 酵母感受态的制备— LiAc 法 52 附录C :单杂交对照载体信息 53 附录 D :双杂对照载体信息 54 表格列表
Table I. BD Matchmaker酵母菌株的基因型 11 Table II. BD Matchmaker酵母菌株的表型 11 Table III.单杂交系统的载体 14 Table IV. 双杂交系统的载体 15 Table V. 各 BD-Matchmaker DNA-BD 载体的比较 19 Table VI. RNA起始浓度和 PCR 扩增循环数之间的关系 24 Table VII.单杂交共转化的对照实验的设置 29 Table VIII.单杂共
小鼠实验方案
酵母提取物对小鼠肝损伤保护作用试验方案
酵母提取物抗氧化能力的测定
概述：
自由基是指是机体代谢的正常产物，在体内有很强的氧化反应能力，可以在细胞代谢的过程中不断地产生。大量的研究结果证明，自由基是衰老的决定因素。
在生命活动过程中产生的各种自由基中轻自由基的作用最强，进攻性也最强，几乎可以和所有的生物分子、有机物或无机物发生不同类型的化学反应。超氧阴离子不仅自身具有毒性，而且可以通过其他反应产生更多的氧自由基，进一步对生物体产生损伤作用。
试验拟采用DPPH自由基体系、超氧阴离子(O2-)自由基体系、羟自由基(HO-)体系以及还原力测定体系评价酵母提取物的抗氧化活性。
试验方法
1）DPPH 自由基清除试验
DPPH储备液配制：精密称取19.7 mg DPPH溶解于25 mL甲醇中，再吸取2.5 mL溶液，以甲醇补足体积至25 mL，得到200 µM DPPH母液，暗处保存备用。
药品及对照品储备液配制：酵母提取物采用甲醇溶解，得到终浓度为1 mM的母液。再将母液加甲醇稀释至一定浓度梯度，加3 mL于比色管中（对照组加入3 mL甲醇或水），再加入1 mL DPPH母液，剧烈震荡后，与暗处保存30 min，以甲醇做空白，测其517 nm吸光值。以Vc作为阳性对照，各组反应平行测定三次，DPPH自由基清除率按照下面公式计算：
×100
DPPH自由基清除率（%）=A0−A1
A0
式中A0代表对照组的吸光值；
A1代表加药组的吸光值。
2）超氧阴离子(O2-)自由基清除试验
采用NADH-PMS方法评估酵母提取物对超氧阴离子自由基的清除能力。试管中依次加入1 mL NBT (81µM)溶液，1 mL NADH (468µM )溶液，1 mL不同浓度的待测溶液，0.4 mL PMS (88µM)溶液，充分混匀，静置5 min，在560 nm处测其吸光值。用水代替待测溶液做阴性对照，水代替PMS做本底组对照，Vc做阳性对照。清除率计算:
新-酵母单杂交筛选与启动子pHIS2-A互作蛋白结题报告
目的：筛选与启动子pHIS2-A互作的蛋白。
方法：以启动子A构建到酵母单杂交启动子载体pHIS2，文库质粒为pGADT7-中山杉文库。
材料：
1．启动子克隆：pHIS2-A。根据实验需求进行扩增并酶切构建载体，两端的EcoR I和SacI酶切位点，序列如下：
GAATTC AGTTGGAATCACATCTATCATCAGAATGAAAGACCTAAGAAAAAAATGGCA TATAAAAATATGAAAGATTGTTTTTTTTTAACTGATGACCCACATATTTTTTTAATCTGTTCA ACTAAAAAAACTTCTGAAC GAGCTC
通过启动子序列两端的酶切位点构建到酵母单杂交启动子载体pHIS2上。
2．启动子载体：pHIS2
3．prey载体：pGADT7
4．CLONTECH酵母单杂交系统
5．培养基：
1). 酵母完全培养基：
YPDA：1% Yeast extract，2% Tryptone，2% Glucose, 0.02% Adenine。
2). 酵母缺陷型筛选培养基：
参照Clontech公司的PT3024-1/ Yeast Protocols Handbook。其中各种培养基分别以下列符号表示：
SD-T：-trp；
SD-TH：-trp,-his；
SD-TL：-trp, -leu；
SD-TLH：-trp, -leu, -his；
1.1酵母转化反应
反应AD质粒pHIS2质粒转化平
板
检测平板检测内容
1 2
——
pGAD53m
pHIS2-A
PHIS2-p53
SD-T
SD-TL
实验一 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定1
实验三蛋白质的提取、分离纯化及定量
实验目的
1.学习蛋白质的提取方法。
2.掌握凝胶过滤法使蛋白质脱盐。
3.掌握紫外分光光度法或考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。
实验原理
（一）蛋白质的提取：盐析法或等电点法。
蛋白质是两性电解质，在蛋白质溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态与解离程度受溶液的酸碱度影响，当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点，在等电点时，蛋白质的溶解度最低，可用于提取蛋白质。
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵中析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆沉淀反应，可用于提取蛋白质。
（二）蛋白质的分离纯化
蛋白质溶液中如含有无机盐离子，用葡聚糖凝胶过滤法可使蛋白质与无机盐分离，效果理想。葡聚糖凝胶（商品名SepHadex），又称右旋糖苷，它是葡萄糖通过α－1,6－糖苷键形成的长链，与交联剂环氧氯丙烷交联生成（见图）。
在合成凝胶时，控制交联剂环氧氯丙烷的用量，可以制成网孔大小不同的葡聚糖凝胶（见图），即不同规格凝胶。葡聚糖凝胶从G-10到G-200有多种类型，G后的数字由每克干胶充分溶胀后吸水的克数乘以十所得，同时也代表网孔大小，G后的数字越小，其溶胀后的网孔越小，一般G-10到G-50适用于蛋白质与小分子或无机盐的分离，G-75到G-200适用于分子量大于一万的蛋白质的分离。本实验用G-25使蛋白质与硫酸铵分离，当蛋白质的盐溶液进入葡聚糖凝胶时，小分子的硫酸铵扩散进入G-25的网孔中，而大分子的蛋白质因颗粒直径大，不能进入网孔中，被排阻在凝胶颗粒（固定相）的外面，加入洗脱液（流动相）洗脱，因大分子蛋白质从凝胶颗粒的缝隙向下洗脱，阻滞力小，可首先被洗脱下来，故洗脱体积小。而小分子的硫酸铵因扩散进入凝胶颗粒的网孔中，阻滞力大，需要较大的洗脱体积才能从柱中洗出，这样可使蛋白质与硫酸铵很容易分离开。
酵母双杂交检测（Yeast
酵母双杂交检测（Yeast Two
酵母双杂交检测（Yeast Two-Hybrid Assay）产品专题
检测原理：
酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid assay）是⽤于体内研究蛋⽩相互作⽤的⼀种⾮常便利的⼯具，常⽤的如GAL4为基础的系统，使⽤酵母转录因⼦GAL4来检测转录激活后的蛋⽩相互作⽤。某些转录因⼦（如GAL4）由两个可以分开，功能上相互独⽴的结构域组成，N端有⼀个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA binding domain，BD），C端有⼀个由113个氨基酸组成的转录激活域（transcription activation domain，AD）。BD可以和上游激活序列（UAS）结合，⽽AD能激活UAS下游基因进⾏转录。单独的BD或AD不能激活基因转录，两者只有通过某种⽅式结合在⼀起形成完整的转录激活因⼦的功能【见图1】。酵母双杂交系统主要利⽤酵母GAL4的这个特性通过两个杂交蛋⽩在酵母细胞中的相互结合及对报告基因的转录激活来研究活细胞内蛋⽩质的相互作⽤，对蛋⽩质之间微弱、瞬间的作⽤都能通过报告基因敏感的检测到。
酵母双杂交系统应⽤：
1）对新的与已经蛋⽩相互作⽤的鉴定
2）对预测蛋⽩相互作⽤的确认
3）对蛋⽩相互作⽤区域的鉴定
双杂交检测原理图。两个蛋⽩分别表达，⼀个（诱饵蛋⽩bait protein）融合到Gal4 DNA 图1.双杂交检测原理图。
结合域表达，另⼀个（诱捕蛋⽩prey protein）融合到Gal4转录激活结构域（AD）表达。在
Y2HGold酵母菌株中，只有当两个蛋⽩之间相互作⽤并结合到Gal4反应性启动⼦上才能活化报告基因（AUR1-C, ADE2, HIS3, 和MEL1）的表达。
小鼠实验方案
酵母提取物对小鼠肝损伤保护作用试验方案
酵母提取物抗氧化能力的测定
概述：
自由基是指是机体代谢的正常产物，在体内有很强的氧化反应能力，可以在细胞代谢的过程中不断地产生。大量的研究结果证明，自由基是衰老的决定因素。
在生命活动过程中产生的各种自由基中轻自由基的作用最强，进攻性也最强，几乎可以和所有的生物分子、有机物或无机物发生不同类型的化学反应。超氧阴离子不仅自身具有毒性，而且可以通过其他反应产生更多的氧自由基，进一步对生物体产生损伤作用。
试验拟采用DPPH自由基体系、超氧阴离子(O2-)自由基体系、羟自由基(HO-)体系以及还原力测定体系评价酵母提取物的抗氧化活性。
试验方法
1）DPPH 自由基清除试验
DPPH储备液配制：精密称取19.7 mg DPPH溶解于25 mL甲醇中，再吸取2.5 mL溶液，以甲醇补足体积至25 mL，得到200 µM DPPH母液，暗处保存备用。
药品及对照品储备液配制：酵母提取物采用甲醇溶解，得到终浓度为1 mM的母液。再将母液加甲醇稀释至一定浓度梯度，加3 mL于比色管中（对照组加入3 mL甲醇或水），再加入1 mL DPPH母液，剧烈震荡后，与暗处保存30 min，以甲醇做空白，测其517 nm吸光值。以Vc作为阳性对照，各组反应平行测定三次，DPPH自由基清除率按照下面公式计算：
×100
DPPH自由基清除率（%）=A0−A1
A0
式中A0代表对照组的吸光值；
A1代表加药组的吸光值。
2）超氧阴离子(O2-)自由基清除试验
采用NADH-PMS方法评估酵母提取物对超氧阴离子自由基的清除能力。试管中依次加入1 mL NBT (81µM)溶液，1 mL NADH (468µM )溶液，1 mL不同浓度的待测溶液，0.4 mL PMS (88µM)溶液，充分混匀，静置5 min，在560 nm处测其吸光值。用水代替待测溶液做阴性对照，水代替PMS做本底组对照，Vc做阳性对照。清除率计算:
酵母产品分类导则
酵母产品分类导则1 范围
本标准规定了酵母产品的分类。
本标准适用于酵母产品的生产、销售、教学及科研交流。
2 分类
酵母产品分类及说明，产品示例见表１。
表1 酵母产品分类表
3 酵母菌种
各类酵母产品的生产菌种及菌种来源见附录A。
附录 A
（资料性附录）
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
⽣物111 杨明轩1102040128
⼀、研究背景及⽬的
⽣物⼤分⼦通常指的是动物、植物和微⽣物进⾏新陈代谢是所产⽣的蛋⽩质、核酸等有机化合物。它们不仅是⽣物科学⼯作者研究的重要对象，⽽且与化学、医学和⾷品等⼯业部门有着密切的关系。核酸作为⽣命体常见⽽重要的⼤分⼦物质，它通过酶解或化学法⽔解可得到4个核苷酸，再经脱磷酸可得4种相应的核苷。核酸构成遗传物质、传递遗传信息、构成核糖体和酶等⼤分⼦、合成多糖，与正常的⽣命活动密不可分。
医学家、诺贝尔奖得主富兰克研究认为，⼈体的⽼化是因其体内的核酸变质减少所致，可见核酸在⽣物正常发育中的重要性。由于核酸在⽣命体中的物质构成、功能⽅⾯的作⽤，近100年来核糖核酸（RNA）被⼴泛应⽤与⾷品⼯业、医药⼯业和农业⽣产上。在⾷品⼯业⽅⾯，RNA是开发新型⾷品调味品、保健品必不可少的原料；在医药⼯业上，RNA是⽣产治疗冠⼼病、肿瘤、⼼肌梗塞等疾病药物的原料；在农业上，RNA及其衍⽣物⼴泛⽤作农作物的⽣长促进物质。⽽在这些领域，所需要的是并不是结构完整的RNA，⽽是其单体核苷酸。因此，我们需要获得能够在⾷品医药卫⽣领域应⽤的核苷酸。
⽽核酸制品⽆⾮是利⽤其核苷酸或衍⽣物，因⽽⼯业上⽣产核酸的⽬的在于获得纯品核苷酸，以作为⽣产各种药物或测序分析等的原料。在⼯业⽣产中，还常常考虑到利润和成本的问题。因⽽实验室⾥提取核酸和将其放到⼯业⼤⽣产中是不同的。⼯业⽣产对核酸制品的完整性要求不⾼，⽽注重其产率和成本。考虑核苷酸分⼦的复杂结构，直接化学合成是⼗分困难的。所以⽬前⼈们主要采取从⽣物体系中分离纯化RNA，将其⽔解并通过其他分离⼿段获得⼩分⼦核苷酸的⽅法。本实验在于模拟⼯业⽣产的流程，探究提取酵母核糖核酸的⼯艺，掌握提取和测定酵母核糖核酸的⽅法，明确从⽣物体中提取RNA的思路和具体操作⽅法，了解产业开发的思路，体会⼯业化⽣产与实验室科研之间的不同。
酵母单杂交手册(translated by mony)
酵母单杂交手册
目录
1简介
2试剂盒包含的内容
3缩写
4 Y1H Gold 酵母菌株的相关信息
5附加材料&酵母培养基
A cDNA扩增、文库构建和筛选所需的附加材料
B 相应的培养基要求
6诱饵质粒及诱饵酵母菌株的构建
A方法：合成、克隆p目的基因-AbAi质粒
B方法：构建诱饵-受体酵母菌株
7利用AbA r的表达检测诱饵菌株
A方法：找到抑制诱饵菌株生长的最低AbA浓度
8 cDNA文库的构建
A方法：利用SMART技术合成cDNA第一链
B方法：利用Long Distance PCR (LD-PCR)扩增cDNA第一链
C方法：利用CHROMA SPIN+TE-400 Columns技术纯化合成的双链DNA
9单杂交的文库的构建和筛选
A方法：单杂交cDNA的文库的构建和筛选
10结果分析
11阳性克隆检验和猎物（prey）质粒分离
A方法：通过划板确认受体表型
B方法：酵母菌落PCR以消除Duplicate Clones（假阳性克隆？多拷贝？）C分离和纯化文库中可靠的具有受体活性的质粒
D方法：区分阳性克隆和假阳性克隆
E分析阳性克隆的序列
12问题排除指南
13参考文献
附录A：质粒信息
附录B：酵母生长培养基的配置及所需营养物
附录C：SMART技术原理
图1 利用Matchmaker Gold One-Hybrid System筛选蛋白-DNA的相互作用
图2 将相应的片段整合到Y1HGold菌株，构建诱饵受体菌株
图3 利用SMART技术和酵母的特点构建和筛选你的文库
图4 通过菌落PCR确认pBait-AbAi构建成功
图5 利用SMART技术合成cDNA第一链并因此合成相应的粘性末端能够整合到pGADT7-Rec 图6 利用SMART技术进行扩增
质粒转染实验步骤知识讲解
质粒转染实验步骤
质粒转染大肠杆菌
材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调pH），氨苄青霉素，卡那霉素，质粒提取试剂盒
仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒1.5ml离心管，消毒枪头，无菌操作台
实验步骤：
1.LB培养基的配制：
在950 ml去离子水中加入: 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.
固态培养基
LB固体培养基及倒板：
（1）.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉
（2）.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入氨苄抗生素（终浓度为50μg/ml），以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
（3）.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。
（4）.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。
2.从-70℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液，室温下使其解冻，解冻后立即置冰上。
3.加入质粒DNA溶液（含量不超过50ng，体积不超过10μl），轻轻摇匀，冰上放置
30分钟后。
4.42℃水浴中热击45s/90s，热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。
5.向管中加入1ml LB液体培养基（不含Amp），混匀后37℃振荡培养1小时，使细菌
恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因（Ampr ）。
Cerepron酵母抽提物(1)---胶原蛋白饮
Brand New 美白新革命
CEREPRON ® ？
安全可食用
酿酒酵母
PFI独创技术
CEREPRON
抑制黑色素生成
Experiment பைடு நூலகம்ethod
１．B16小鼠黑色素瘤细胞培养
２．抑制黑色素表达试验方法： 培养小鼠黑色素瘤细胞B16； 每个样品分别加入到培养基中培养3天，培养基中添加 αMSH（100 nm，黑色素细胞刺激素），激活相关黑色素 合成基因
8.0
7.0
6.0
5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0.0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Participants
10 11 12
Testimonial ①
12位摄入者之一（女性）（左手臂）
Before
0 Week 8 Weeks After
3.4% Brighter
（右手臂） 3.5% Brighter
证明②
12位摄入者之一（女性）（左手臂）
下图为一例Cerepron与对照组美白效果有3.2%的差异图片
Brightness 6.48 in Munsell
The difference of 3.2%
Brightness 6.28 in Munsell
酵母抽提物
5 工艺操作关键
(3) 调配。一般调配成10％～15％的酵母 悬浮液。 (4) 添加自溶促进剂和有关水解酶类。添 加自溶促进剂主要是为了激活酵母细胞内的 有关水解酶类，促进自溶过程，缩短生产时 间。同时在自溶开始或进行一段时间后，外 加部分水解酶类，更加有利于蛋白质、核酸 的降解，提高抽提率。
3 水产品类加工 和快餐食品
酵母抽提物可应用在鱼肉火腿、鱼糕等制品 中。由于水产品本身缺乏天然肉香呈味成分， 有腥臭味，因此在制作水产品时，可以将酵 母抽提物和香辛料同时使用，减少或消除腥 臭气味，增加肉香，以达到较理想的调香效 果。 酵母抽提物主要应用在各式快餐食品中以突 出肉类香味和增强鲜味。
(2) 性状：深褐色糊状或淡黄褐色粉末， 呈酵母所特有的鲜味和气味。粉末制品具 有很强的吸湿性。一般糊状品含水20％～ 30％，粉状晶含水5％～10％，5％的水 溶液pH约为5.0～6.0。 (3) 制法：所用原料以啤酒酵母、葡萄酒 酵母和面包酵母为主，分自溶法、加酶法 和酸水解法等。一般以自溶和酸水解混合 法为主，即酵母在40～60℃左右下自溶 48～72h，再加盐酸使其进一步分解，中 和后离心分离，分离液经脱色、脱臭精制 成糊状，或进一步干燥制得。
(4) 质量指标： 自溶抽提法（FCC,1983）的质量标准
项 目 总氮量/% —氨基氮含量/% 指标 ≥9.0 ≥3.5 砷(以As计，GT-3)含量/mg/kg ≤3.0 天门冬氨酸含量/% ≤8.0，总氨基酸计 谷氨酸含量/% ≤12.0，总氨基酸 重金属(以Pb计，GT-16-2)含量 ≤0.002 不溶性物质含量/% ≤1 铅（GT-18）/mg/kg ≤l0 钠含量/% ≤20.0
蛋白表达步骤
1．培养基的配制
原理
步骤
LB培养基，是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。尽管该培养基的名称被广泛解释为Luria-Bertani 培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。
LB培养基的配制：
成分
胰蛋白胨(tryptone)
10g
酵母提取物(yeast extract)
5g
氯化钠(NaCl)
10g
固体培养基另加琼脂粉15-20g
加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min
配制方法
（1）称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。
（2）溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。
（3）调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。
（4）定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。
（5）加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。
（6）分装、加塞、包扎。
（7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
2、大肠杆菌菌种活化
原理
菌种的活化就是将处于保藏状态的菌种放入合适的培养基中进行培养，逐级增大培养是为了得到纯而壮的培养物，可以理解为就是为了获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物进行培养。菌种发酵一般情况下需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化,让菌种逐渐适应培养环境
蛋白纯化经验
1) 硫酸铵沉淀后直接过疏水柱，应该用多大浓度的硫酸铵平衡柱子啊
看你蛋白情况了,一般也就2M左右吧.挂不住就提高浓度,挂太牢就适当降低盐浓度,一般要根据实验决定.我一般就用苯基琼脂糖凝胶,一般纯化IgG用0.7M硫酸铵就可以挂住.
你有个贴子中说在纯化过程中上样的样品中pH和盐浓度,以及种类等组分一定要平衡缓冲液完全相同至少相当。我想试试你说的硫酸铵沉淀后直接过疏水柱，那我是不是要先确定复溶后样品的盐浓度再确定平衡缓冲液的盐浓度啊，如果是我怎么检测样品的盐浓度啊
其实差不多就可以,也不一定特别严格,例如疏水盐浓度你的样品的盐高于平衡的也可以,但是别相差太多,尤其不能样品的盐浓度小于平衡缓冲液,这样也许挂不住,或者会产生沉淀.而缓冲液和盐浓度不同混合也许会产生沉淀,所以要小心,而一样的缓冲液体系和盐浓度可以避免这样的问题.
硫酸铵沉淀后的样品,如果是上清按盐浓度稀释到你缓冲液盐浓度就可以,如果是沉淀,直接用缓冲液去溶解,沉淀里的盐可以忽略.
最好的办法你可以用电导的方法去检测,只要样品的电导和你的平衡缓冲液一样就可以了.
2)我在用镍柱亲和纯化后，蛋白已经比较纯了，仅在银染时能看见微弱的杂带（目的蛋白约25KD，杂蛋白约40KD)。但我还想试试能不能完全去除杂带。此前试过分子筛没效果，所以想试试离子交换。想请教一下，在变性条件下可以做离子交换吗？和复性后再做比起来哪个效果好呢？非常感谢！！
浓度太低一些杂带是很难出现的,所以这样的纯度很难说,我觉得得浓度高到25mg/ml左右,这样做电泳才能看得清楚些到底纯不纯.如果你是变性条件下做凝胶过滤没有意义,因为这时候蛋白是链状分子或者是不蜷曲的,不是球型,所以在这样的柱子中没有办法使他们分离,你最好的方法是优化你的亲和纯化条件,也可以在纯化前做好预处理,如果是包涵体,可以用分级沉淀的方法来初纯,亲和柱子的缓冲液中加点土温或者用pH洗脱和咪唑洗脱的方法配合,同时用阶段洗脱的方法,一般都能做得很好,用试剂盒的方法或者线性洗脱的方法有时候很难得到好的效果,你也许可以参考我们的方法,你留下邮箱我给你发一份做参考吧.
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
酵母蛋白质提取对照品
酵母蛋白概述
酵母蛋白是存在于天然酵母中的一种优质完全蛋白。酵母是人类利用最早、最多、最广泛的一种单细胞微生物，在真菌分类系统中属于子囊菌纲、担子菌与半知菌类。酵母自古以来就被人们应用于日常生活中，如发面、酿酒、助消化等。
酵母的营养价值
酵母也是天然的营养来源和营养载体，其营养成分具有“三低四优”的特点，即低脂、低糖、不含胆固醇，富含优质完全蛋白质、完整的B族维生素、以生命结合态形式存在的多种矿物质和功能膳食纤维。
优点
酵母是补充优质蛋白质的最好来源。
1、酵母中含有丰富的蛋白质，高达40%～60%。
2、酵母中的蛋白质的消化率可达96%，净利用率达59%。
3、酵母含有完整的氨基酸群，包括人体必需的8种氨基酸，特别是在谷物蛋白中含量较少的赖氨酸，在酵母中含量较高。此外，酵母中的氨基酸比例接近联合国粮农组织(FAO)推荐的理想氨基酸组成值，故其营养价值较高。
4、酵母中还含有一些功能蛋白，例如金属硫蛋白（简称MT），它具有广泛的生物功能，在体内主要参与微量元素的贮存、运输和代谢、拮抗电离辐射、清除羟基自由基及重金属解毒等多种作用。酵母还含有丰富的助消化酶（酵素），能帮助日常饮食中的、酵母本身的、以及外源补充的营养更好地消化、吸收和利用。
5、酵母蛋白是酵母本身所含有的，而非多种蛋白来源的简单混合。
如何选择含有蛋白质的食物
选择蛋白质食物首先应考虑蛋白质含量的多少。如果食物中蛋白质含量太少，即使营养价值很高，也不能满足人体需要。在常见的每100克食物中，肉类含蛋白质10-20克，鱼类含15-20克，全蛋含13-15克，豆类含20-30克，谷类含8-12克，蔬菜、水果含1-2克。判断蛋白质的优劣主要有三点：一是人体消化吸收的程度，吸收得越彻底，其营养价值就越高；二是人体吸收后的利用程度，生物利用度（即蛋白质的生理价值）越高，其营养价值也越高；三是所含的必需氨基酸是否丰富、种类是否齐全、比例是否适当，种类齐全、数量充足、比例适当的完全蛋白质质量最高。
关于酵母蛋白质提取对照标准品
作为一种标准品，酵母蛋白质提取对照标准品是一种分析试剂，可以检测其含量测定中的标准含量。广州优瓦独家专业提供。
缺乏蛋白质的害处
1.疲倦无力，学习或工作效率降低，且不能持久，记忆力衰退，怕冷，血压偏低，心率徐缓。
2.消瘦，体重减轻，皮下脂肪缺少，肌肉萎缩。
3.浮肿，轻者局限于踝部或小腿，重者全身浮肿，并可有胸水及腹水。
4.胃肠道腺体萎缩，分泌减少，消化不良，腹胀，水样腹泻。
5.儿童生长发育延迟，智力低下，学习困难。
6.肝脏有脂肪浸润，体积肿大，可形成脂肪肝，久则演变为肝硬化。
7.可有轻度或中度贫血，血糖偏低。
8.免疫功能低下，抵抗力降低。