酵母蛋白质提取对照品
适用于质谱分析的酵母蛋白提取
酵母 酵母
BB-319716 BB-319817
酵母总蛋白提取试剂盒 （离心柱，2-D电泳用） 酵母总蛋白提取试剂盒 （无去污剂）
酵母 酵母
BB-319908
酵母蛋白提取试剂盒 （蛋白组、质谱适用）
酵母
下游应用 WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA, purification,kinase assays,activity assays,reporter assays,amine reactive labeling,etc. WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA, purification,kinase assays,activity assays,reporter assays,amine reactive labeling,etc. WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA, purification,kinase assays,activity assays,reporter assays,amine reactive labeling,etc. 磷酸化蛋白质谱,2-D,IEF, WB,IP,ELISA,EMSA,purification,kinase assays,activity assays, reporter assays,amine reactive labeling,etc. 2-D,IEF, WB,purification,etc. WB,IP,ELISA,EMSA,purification,kinase assays,activity assays, reporter assays,amine reactive labeling,etc. 2-D,IEF, WB,purification,etc. 蛋白质谱,2-D,IEF, WB,IP,ELISA,EMSA,purification,kinase assays,activity assays, reporter assays,amine reactive labeling,etc. 蛋白质谱,2-D,IEF, Pull-down, co-IP, WB,IP,ELISA,EMSA,purification,kinase
Protein extraction from yeast(酵母蛋白质提取)
Protein extraction from yeast1. Glass beads lysisConzelmann A, Riezman H, Desponds C, BronC.1988. A major 125 kd membraneglycoprotein of Saccharomyces cerevisiae is attached to the lipid bilayer through aninositol-containg phospholipid. EMBO J 7: 2233±2240.2. rapid protein extraction in optimized SDS sample bufferHorwathA,RiezmanH.1994.RapidproteinextractionfromSaccharomycescerevisiae. Yeast 10: 1305±1310.Sample Buffer:0.06M Tris-HCl, pH6.810% (v/v) glycerol2% (w/v) SDS5% (v/v) 2-mercaptoethanol0.0025% (w/v) bromophenolblue10 ml0.6 ml 1M Tris6.82 ml 50% glycerol2 ml 10% SDS0.5 ml 2-mercaptoethanol0.1 ml Sat. Bromphenolblue4.9 ml H2OMake sample Buffer fresh before use. Can store buffer frozen at—20 degrees for ~6 months.1. Grow cells overnight (~1x107cells/ml; A600 =0.7) and collect1.5 ml cells (adjustvolumes according to cell density of cultures) in1.5 ml microfuge tube (1 minute, 14000xg).It is important not to grow the cells to a high density.10 microliters of a saturated overnight culture in YPD innoculated to 5 ml SD + essentialamino acids for ~16 hrs gives A600 of0.5 to1.0 for wild-type cells grown at 30 degrees150 microliters of YPD saturated culture diluted to 5 ml YPD and grown for ~5 hrs at 30degrees gives an A600 of ~0.8 for wild-type cells.2. Wash cells 1X with water and collect again by centrifugation.3. Resuspend cells in 100 microliters sample buffer.4. Heat at 95 deg C for 5 minutes.5. Centrifuge 14000xg for 5 minutes. Load 15 microliters per lane on an SDS PAGE3. post-alkaline extractionVitalyV.Kushnirov2000.Rapidandreliableproteinextractionfromyeast.Yeast2000; 16: 857±860.about2.5 OD600 (which constitutes about2.3 mg of wet weight) of yeast cells wereharvested by centrifugation from liquid culture or scraped off the agar plate usingabacteriologicalloop.Thesecellsweresuspendedin100mldistilledwater,added100 ml0.2 M NaOH, incubated for 5 min at room temperature, pelleted, resuspendedin50mlSDSsamplebuffer,boiledfor3minandpelletedagain.About6μlsuper natantwastypicallyloadedperlaneofmini-gel(Bio-RadMini-Proteancell).Thesamplebuffer(0.06MTris±HCl,pH6.8,5%glycerol,2%SDS,4%bmercaptoethanol,0.0025% bromophenolblue) was slightly modi®ed fromstandard(Laemmli, 1970).SDS-Boil-Beads Whole Cell ExtractsREFERENCE:Hoffman,G.,Garrison,T.R.,andDohlman,H.G.,AnalysisofRGS proteins inSaccharomyces cerevisiae, Methods Enzymol.344:617-631,2002.-Use sterile technique and sterile solutions in steps 1 to3.-ingasaturatedstarterculture,inoculate25to30mlofappropriatemedia in a 125 ml flask.***Since it is often difficult to estimate the growth rate of yeast, itishelpfultostartseveral25mlcultures,eachwithadifferentdilutionof the starter culture (e.g. 1:100, 1:300, 1:900).2.Growat30Cshaking(250rpm)untiltheOD600nm~1.0(Thisusuallydone overnight).***When growingseveral strains atonce, itis likely thatthey willallreachOD600nm~1.0atdifferenttimes.Ifdesired,sodiumazide(1Mstockin water, diluted to a final concentration of 10 mM) can be added to acultureonceitreachesanOD600nm~1.0.Theculturecanthenbeplacedon ice until the others are ready.3. Transfer to a 50 ml conical tube and centrifuge for 10 min at 2000 xg at 4C.4. Resuspend each sample in 1 ml of 10 mM sodium azide and place on ice.5. Calculate the volume of resuspended cells that would translate to anOD600 nm reading of10. For example, this would equal 1 ml if 10 ml ofculture at OD600 nm =1.0 had been centrifuged and resuspended.***This step is necessary to equalize the amount of cells (and protein)in a given volume of whole cell extract.6.Transferthecalculatedvolumeofresuspendedcellstoamicrofugetubeand centrifuge at 16,000 x g for 1 min.7. Aspirate the supernatent.8. Resuspend the pellet in 200 ul of 1X SDS-PAGE sample buffer.9. Immediately place in a 100 C heat block for 10 min.10.Allowthetubetocoolandadd200ulofglassbeads(Sigma,#G-8772).11. Vortex at high speed for 2 min. Invert after the first min.***Several tubes can be vortexed at the same time by using a foam tubefloater to hold them together.12. Using a 21 gauge needle, poke a hole in the bottom of each tube andplace it into a new microfuge tube.13.Centrifugeat2000xgfor10sectoexpeltheliquidintothebottomtube, leaving the glass beads in the top tube.14. Discard the glass beads and centrifuge the bottom tube at 16,000 xg for 2 min. This sediments any insoluble material.15. Transfer the supernatant to a new microfuge tube. Store at -20C.16. When ready to use, heat at 37 C for 10 min, vortex, and centrifugeat 16,000 x g for 1 min.***Keepinmindthatrepeatedfreezingandthawingcandegradetheproteinsample.17. Immunoblots can be performed using standard methods.Small Scale Yeast Whole Cell Extract for IPSteve HahnAugust 2007Grow 100 ml yeast cells in desired media overnight to an A600 of ~1.0 (0.6 to1.2 workswell).Forgrowthinminimalmedia,1mlofasaturatedovernightcultureinminimalmedia(Synthetic dextrose (SD) with only the required amino acids) was inoculated to 100 ml of thesame media and grown ~16 hrs at 30 degrees.Harvest cells and wash with 20 ml of cold extraction buffer in a 50 ml tube.Resuspendcellsin0.5mlextractionbuffercontaingDTTandproteaseinhibitorsinamicrocentrifuge tube with a locking top (marsh tube).Add ~500 microliters of glass beads. In the cold room, shake tubes on the foam ring of thevortex mixer platform at top speed for 1 min. Transfer to ice for 1 min. I have done up to 20extracts at once.Repeat for a total of 10 min of vortexing.Briefly microcentrifuge to remove all liquid and leave behind most of the glass beads.Centrifuge at top speed at 4 degrees for 15 min and remove supernatant, being careful toavoid any glass beads.Assay protein concentration using BioRad or Pierce assays. Freeze extracts and store at -80deg. Expect 10-15 mg/ml protein.Extract Buffer:100 mM Tris pH7.9250 mM Ammonium Sulfate1 mM EDTA10% GlycerolBefore use, add DTT to0.5 mM (low concentration so IP reactions can be done directly)And 1X protease inhibitors from the following stock solutions:0.1 M PMSF (100x) 16 mg/ml Ethanol; Store at -20 degreesBenzamidine (100X); 31 mg/ml H2O; Store frozen at -20 degreesLeupeptin (500X);0.15 mg/ml Ethanol; Store at -70 degrees for less than 6 monthsPepstatin (200X);0.28 mg/ml methanol; Store at -20 degrees.Chymostatin (2,500X); 5mg/ml DMSO; Store frozen at -20 degreesTCA protein precipitationTo concentrate proteins for analysis by SDS PAGE:If a small amount of protein is to be precipitated (less than a few micrograms), add Insulin asa carrier protein (10 micrograms of Sigma insulin, I-5500, per sample works well).1.Add an equal volume of 20% TCA (trichloroacetic acid) to protein sample.2.Incubate 30 min on ice.3.Spin in microfuge at 4 deg. For 15 min.4.Carefully remove all supernatant.5.Add ~300 ul cold acetone and spin 5 min at 4 degrees.6.Remove supernatant and dry pellet.7.Resuspend samples in SDS PAGE loading buffer. Load to SDS PAGE after heating at65 deg for 3 min.Acetone precipitation of protein1. Cool the required volume of acetone to -20°C.3. Add six times the sample volume of cold (-20°C) acetone to the tube.4. Vortex tube and incubate for 2 hours to overnight minutes at -20°C.5. Centrifuge 15 minutes at 13,000-15,000 x g at 4°C.6. Decant and properly dispose of the supernatant, being careful to not dislodge the proteinpellet.7. Briefly wash the pellet with 100ul of cold 90% acetone.8. Centrifuge 5 minutes at 13,000-15,000 x g at 4°C.9. Remove sup and repeat if necessary.10. Air dry for ~15-30 minutes and resuspend in an appropriate buffer.。
酵母蛋白提取方法
（双向电泳用）
产品组成：
产品组成 规格
试剂 A：酵母蛋白提取液（2D） 试剂 B：蛋白酶抑制剂混合物
使用说明书
BB-3185-1 50T 25ml 100ul 1
BB-3185-2 100T 50ml 200ul 1
组份编号
31850A 31850B
储存条件： 蛋白酶抑制剂-20℃保存； 蛋白提取液室温保存。
有效期： 一年。
产品简介： 贝博酵母蛋白提取试剂盒适用于从各种酵母样本中高效而温和地抽提可溶性总蛋白。提
取过程简单方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏，避免激 烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。可在 1 小时内完成。该试剂盒 含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
BB-3411 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105
BCA 蛋白定量试剂盒 细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物
BB-3401 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311
2. 取 50ml 酵母培养物，在 4℃，2500g 条件下离心 5-10 分钟，小心吸取培养基， 尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3. 用纯水洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每 100ul 体积酵母沉淀物中加入 500ul 酵母蛋白提取液，混匀后，在室温或 37℃
条件下于摇床振荡 30-60 分钟。 5. 在 14000g 条件下离心 5 分钟。 6. 将上清吸入另一干净离心管，即可得到酵母蛋白样品。 7. 将上述蛋白提取物分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
酵母基因提取实验报告
一、实验目的1. 学习酵母基因提取的基本原理和操作步骤。
2. 掌握利用CTAB法提取酵母基因组DNA的方法。
3. 熟悉DNA纯化、定量和鉴定等实验技术。
二、实验原理酵母基因提取是通过物理或化学方法将酵母细胞中的DNA与蛋白质、RNA等杂质分离的过程。
CTAB法是一种常用的DNA提取方法，其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与DNA的结合能力，以及酚/氯仿等有机溶剂的界面作用，将DNA从细胞中提取出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：酵母菌（如酿酒酵母）、Tris-HCl缓冲液、NaCl、CTAB、酚/氯仿、无水乙醇、RNase A、DNA标准品、琼脂糖凝胶电泳系统等。
2. 仪器：高速离心机、恒温培养箱、紫外分光光度计、凝胶成像系统、电泳仪、微波炉等。
四、实验步骤1. 酵母菌培养：将酵母菌接种于YEP培养基中，于28℃恒温培养箱中培养至对数生长期。
2. 酵母菌收集：用无菌吸管吸取适量酵母菌培养液，转移到无菌离心管中，以8000 r/min离心5分钟，弃上清液。
3. 细胞裂解：向离心管中加入适量Tris-HCl缓冲液、NaCl、CTAB、酚/氯仿，混匀后室温放置10分钟。
4. 分相：将上述混合液转移至新的离心管中，以12,000 r/min离心5分钟，弃上清液。
5. DNA纯化：向沉淀中加入适量Tris-HCl缓冲液、酚/氯仿，混匀后室温放置10分钟。
6. 分相：将上述混合液转移至新的离心管中，以12,000 r/min离心5分钟，取上清液。
7. 洗涤：向上清液加入等体积的无水乙醇，混匀后室温放置10分钟。
8. 离心：以12,000 r/min离心5分钟，弃上清液。
9. 洗涤：向沉淀中加入适量70%乙醇，混匀后室温放置5分钟。
10. 离心：以12,000 r/min离心5分钟，弃上清液。
11. DNA溶解：向沉淀中加入适量TE缓冲液，室温放置5分钟，使DNA溶解。
12. 定量：利用紫外分光光度计测定DNA的浓度和纯度。
酵母蛋白快速提取试剂盒使用说明
酵⺟母蛋⽩白质快速微量提取试剂盒Yeast Protein Miniprep Kit常温运输、4℃保存（溶液B成分二需-20℃保存），有效一年。
自备酵母培养基产品及特点 本产品用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。
本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法，适合于各种形态的各种酵母材料。
本产品的其主要特点是：1.破壁效率高，能达到80-90%。
2.可以处理各种酵母样品。
3.操作简单，得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分析。
规格及成分成份 50次包装溶液A 100 mL溶液B成分一 50 mL溶液B成分二 1.5 g玻璃珠，400μL 5 g使用方法准备工作：将溶液B成分二（干粉）全部加到50mL溶液B成分一中，充分摇晃使之全部溶解，成为溶液B，然后分装成小分（体积根据每次实验的样品数决定）并放-20℃长期保存。
1、 将酵母细胞接种到5mL YPD 培养基中，30℃摇晃（250rpm/分钟）过夜培养使其OD600达到0.5～2.0。
2、 把酵母细胞培养物转到装有2mL 预冷溶液A 的10-15 mL 离心管中，混匀。
3、 4℃ 5000g 离心5分钟沉淀酵母细胞，吸出上清液。
4、 用30μL 溶液B 悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5mL 塑料离心管中。
5、 100℃下保温3分钟，使蛋白酶失活，样品存放于-20℃。
6、 加入0.1g 的玻璃珠。
7、 在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。
8、 加入70 μl 溶液B，稍加振荡，置100℃保温1分钟。
9、 取5-20μl 抽提液上样直接进行SDS-PAGE 凝胶电泳。
关联推荐 4X 蛋白上样缓冲液BCA 蛋白检测试剂盒蛋白markerECL 发光检测液。
酵母蛋白的提取方法
回收玻璃珠，并尽可能取上清到另一预冷的玻璃管中。
7 40ul的抽提buffer，同上涡流。
8离心后分离上清（回收玻璃珠）。
9液氮快速冷冻，-70℃储存。
10 提取的蛋白量通常约10-20mg/ml, 2-5ul用于实验。
请注意甄别内容中的联系方式诱导购买等信息谨防诈骗
酵母蛋白的提取方法
1 准备SD/-Leu或是YPD 培养基20ml，酵母过夜培养，30℃，230rpm。
2 测OD600 约1.0。
3 100ml过夜培养物，1000g，离心，5min，4℃。
4 弃上清，重悬于80ul抽提buffer：
0.1M Tris-Cl（PH7.5），0.2M NaCl，0.01Mβ-ME，20％甘油，5mM EDTA，1mM PMSF。(100×)：PMSF 0.1742g 溶于10ml 异戊醇（主要抑制丝氨酸蛋白激酶）， RT保存。
提取酵母蛋白实验报告
一、实验目的1. 学习酵母蛋白的提取方法。
2. 掌握蛋白质的检测方法。
3. 了解酵母蛋白的生理活性。
二、实验原理酵母蛋白是一种重要的微生物蛋白，具有丰富的氨基酸组成和生理活性。
本实验采用酸法提取酵母蛋白，通过检测蛋白质含量和生理活性，验证提取方法的可行性。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜酵母菌（酿酒酵母）。
2. 试剂：盐酸、硫酸铵、NaOH、BCA蛋白定量试剂盒、生理盐水、生理盐酸盐缓冲液等。
四、实验步骤1. 酵母蛋白提取（1）将新鲜酵母菌接种于YPD培养基中，30℃培养24h。
（2）收集培养液，用无菌生理盐水洗涤酵母细胞3次。
（3）将洗涤后的酵母细胞用无菌生理盐水悬浮，加入适量盐酸（pH 4.5）。
（4）在冰浴条件下，用高速匀浆机将酵母细胞匀浆。
（5）将匀浆液离心（8000r/min，10min），取上清液即为酵母蛋白提取液。
2. 蛋白质含量检测（1）取适量酵母蛋白提取液，按照BCA蛋白定量试剂盒说明书进行操作。
（2）根据标准曲线计算蛋白质含量。
3. 生理活性检测（1）取适量酵母蛋白提取液，按照生理活性检测方法进行操作。
（2）根据检测结果，分析酵母蛋白的生理活性。
五、实验结果与分析1. 蛋白质含量检测结果通过BCA蛋白定量试剂盒检测，酵母蛋白提取液中的蛋白质含量为2.0mg/mL。
2. 生理活性检测结果通过生理活性检测，酵母蛋白提取液具有一定的生理活性。
六、实验结论本实验采用酸法提取酵母蛋白，通过检测蛋白质含量和生理活性，验证了提取方法的可行性。
酵母蛋白提取液具有较高的蛋白质含量和一定的生理活性，为后续研究提供了实验基础。
酵母蛋白提取方法
相关产品：
产品 总蛋白提取试剂盒 核蛋白提取试剂盒 Bradford 蛋白定量试剂盒 ECL 化学发光检测试剂盒 细胞蛋白提取试剂盒 组织蛋白提取试剂盒 细菌蛋白提取试剂盒 酵母蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702
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3. 用冷 PBS 洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每 100ul 体积酵母沉淀物中加入 500ul 冷的酵母蛋白提取液，混匀后，在室温
-37℃条件下于摇床振荡 30-60 分钟。 5. 在 4℃，14000g 条件下离心 15 分钟。 6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母总蛋白。 7. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
酵母蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
试剂 A：酵母蛋白提取液 试剂 B：蛋白酶抑制剂混合物
使用说明书
BB-3125-1 50T 25ml
100ul 1
BB-3125-2 100T 50ml 250ul 1
组份编号
31250A 31250B
产品简介： 贝博酵母蛋白提取试剂盒可在 1 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，
产品 磷酸化蛋白富集试剂盒 膜蛋白提取试剂盒 BCA 蛋白定量试剂盒 蛋白 Marker 细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物 SD-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
酵母蛋白的制备实验报告
酵母蛋白的制备实验报告酵母蛋白的制备实验报告引言：酵母蛋白是一种常见的蛋白质，广泛应用于食品、医药、农业等领域。
本实验旨在通过培养酵母菌，制备酵母蛋白。
材料与方法：1. 酵母菌液2. 营养琼脂3. 生长培养基4. 离心机5. 取样器6. 电子天平7. 蛋白浓度检测试剂盒实验步骤：1. 准备培养基：将适量的营养琼脂加入适量的水中，加热搅拌至溶解。
待冷却至50℃左右时加入适量的酵母菌液，搅拌均匀。
2. 将培养基倒入培养皿中，待凝固后盖上培养皿盖，放入恒温箱中，温度设定为30℃。
3. 在培养箱中培养酵母菌24-48小时，直至菌落生长茂盛。
4. 取出菌落较多的培养皿，使用取样器将菌落转移到离心管中。
5. 使用离心机将酵母菌离心，离心速度设定为3000rpm，离心时间为10分钟。
6. 倒掉上清液，加入适量的生理盐水，将酵母菌重悬于生理盐水中。
7. 使用电子天平将离心管中的酵母菌称量，记录重量。
8. 将酵母菌蛋白抽提至适量的离心管中。
9. 使用蛋白浓度检测试剂盒检测酵母菌蛋白的浓度。
结果与讨论：经过培养和制备，成功制备了酵母蛋白。
经电子天平称量，酵母菌的重量为X克。
使用蛋白浓度检测试剂盒检测，酵母菌蛋白的浓度为X mg/ml。
酵母蛋白的制备主要涉及到酵母菌的培养和分离。
培养过程中，温度的控制非常重要，过高或过低的温度都会影响酵母菌的生长。
此外，培养基的配制和培养时间也会影响到酵母菌的生长情况。
制备过程中，离心是必不可少的步骤，它可以帮助我们将酵母菌从其他杂质分离出来。
最后，测量酵母菌蛋白的浓度有助于我们评估制备的质量和纯度。
结论：通过本实验成功制备了酵母蛋白。
经过酵母菌培养、离心、称量和蛋白浓度检测，得到了相应的数据结果。
实验的成功为进一步的研究和应用提供了基础。
参考文献：[1] 文献1[2] 文献2。
Protein extraction from yeast(酵母蛋白质提取)
Protein extraction from yeast1. Glass beads lysisConzelmann A, Riezman H, Desponds C, Bron C. 1988. A major 125 kd membrane glycoprotein of Saccharomyces cerevisiae is attached to the lipid bilayer through an inositol-containing phospholipid. EMBO J 7: 2233±2240.2. rapid protein extraction in optimized SDS sample bufferHorwath A, Riezman H. 1994. Rapid protein extraction from Saccharomyces cerevisiae. Yeast 10: 1305±1310.Sample Buffer: 10 ml0.06M Tris-HCl, pH 6.8 0.6 ml 1M Tris 6.810% (v/v) glycerol 2 ml 50% glycerol2% (w/v) SDS 2 ml 10% SDS5% (v/v) 2-mercaptoethanol 0.5 ml 2-mercaptoethanol0.0025% (w/v) bromophenol blue 0.1 ml Sat. Bromphenol blue4.9 ml H2OMake sample Buffer fresh before use. Can store buffer frozen at —20 degrees for ~ 6 months.1. Grow cells overnight (~1x107 cells/ml; A600 = 0.7) and collect 1.5 ml cells (adjust volumes according to cell density of cultures) in 1.5 ml microfuge tube (1 minute, 14000xg). It is important not to grow the cells to a high density.10 microliters of a saturated overnight culture in YPD innoculated to 5 ml SD + essential amino acids for ~16 hrs gives A600 of 0.5 to 1.0 for wild-type cells grown at 30 degrees150 microliters of YPD saturated culture diluted to 5 ml YPD and grown for ~5 hrs at 30 degrees gives an A600 of ~0.8 for wild-type cells.2. Wash cells 1X with water and collect again by centrifugation.3. Resuspend cells in 100 microliters sample buffer.4. Heat at 95 deg C for 5 minutes.5. Centrifuge 14000xg for 5 minutes. Load 15 microliters per lane on an SDS PAGE3. post-alkaline extractionVitaly V. Kushnirov 2000. Rapid and reliable protein extraction from yeast. Yeast 2000; 16: 857±860.about 2.5 OD600 (which constitutes about 2.3 mg of wet weight) of yeast cells were harvested by centrifugation from liquid culture or scraped off the agar plate using a bacteriological loop. These cells were resuspended in 100 ml distilled water, added 100 ml 0.2 M NaOH, incubated for 5 min at room temperature, pelleted, resuspended in 50 ml SDS sample buffer, boiled for 3 min and pelleted again. About 6 μl supernatant was typically loaded per lane of mini-gel (Bio-Rad Mini-Protean cell). The sample buffer (0.06 M Tris±HCl, pH 6.8, 5% glycerol, 2% SDS, 4% bmercaptoethanol,0.0025% bromophenol blue) was slightly modi®ed from standard (Laemmli, 1970).SDS-Boil-Beads Whole Cell ExtractsREFERENCE: Hoffman, G., Garrison, T. R., and Dohlman, H. G., Analysis of RGS proteins in Saccharomyces cerevisiae, Methods Enzymol.344:617-631, 2002.-Use sterile technique and sterile solutions in steps 1 to 3.-1. Using a saturated starter culture, inoculate 25 to 30 ml of appropriate media in a 125 ml flask.***Since it is often difficult to estimate the growth rate of yeast, it is helpful to start several 25 ml cultures, each with a different dilution of the starter culture (e.g. 1:100, 1:300, 1:900).2. Grow at 30 C shaking (250 rpm) until the OD600 nm ~ 1.0 (This is usually done overnight).***When growing several strains at once, it is likely that they will all reach OD600 nm ~ 1.0 at different times. If desired, sodium azide (1M stock in water, diluted to a final concentration of 10 mM) can be added to a culture once it reaches an OD600 nm ~ 1.0. The culture can then be placed on ice until the others are ready.3. Transfer to a 50 ml conical tube and centrifuge for 10 min at 2000 xg at 4 C.4. Resuspend each sample in 1 ml of 10 mM sodium azide and place on ice.5. Calculate the volume of resuspended cells that would translate to an OD600 nm reading of 10. For example, this would equal 1 ml if 10 ml of culture at OD600 nm = 1.0 had been centrifuged and resuspended.***This step is necessary to equalize the amount of cells (and protein) in a given volume of whole cell extract.6. Transfer the calculated volume of resuspended cells to a microfuge tube and centrifuge at 16,000 x g for 1 min.7. Aspirate the supernatent.8. Resuspend the pellet in 200 ul of 1X SDS-PAGE sample buffer.9. Immediately place in a 100 C heat block for 10 min.10. Allow the tube to cool and add 200 ul of glass beads (Sigma, #G-8772).11. Vortex at high speed for 2 min. Invert after the first min.***Several tubes can be vortexed at the same time by using a foam tube floater to hold them together.12. Using a 21 gauge needle, poke a hole in the bottom of each tube and place it into a new microfuge tube.13. Centrifuge at 2000 x g for 10 sec to expel the liquid into the bottom tube, leaving the glass beads in the top tube.14. Discard the glass beads and centrifuge the bottom tube at 16,000 xg for 2 min. This sediments any insoluble material.15. Transfer the supernatant to a new microfuge tube. Store at -20 C.16. When ready to use, heat at 37 C for 10 min, vortex, and centrifuge at 16,000 x g for 1 min.***Keep in mind that repeated freezing and thawing can degrade the protein sample.17. Immunoblots can be performed using standard methods.Small Scale Yeast Whole Cell Extract for IPSteve Hahn August 2007Grow 100 ml yeast cells in desired media overnight to an A600 of ~1.0 (0.6 to 1.2 works well). For growth in minimal media, 1 ml of a saturated overnight culture in minimal media (Synthetic dextrose (SD) with only the required amino acids) was inoculated to 100 ml of the same media and grown ~16 hrs at 30 degrees.Harvest cells and wash with 20 ml of cold extraction buffer in a 50 ml tube.Resuspend cells in 0.5 ml extraction buffer containing DTT and protease inhibitors in a microcentrifuge tube with a locking top (marsh tube).Add ~500 microliters of glass beads. In the cold room, shake tubes on the foam ring of the vortex mixer platform at top speed for 1 min. Transfer to ice for 1 min. I have done up to 20 extracts at once.Repeat for a total of 10 min of vortexing.Briefly microcentrifuge to remove all liquid and leave behind most of the glass beads.Centrifuge at top speed at 4 degrees for 15 min and remove supernatant, being careful to avoid any glass beads.Assay protein concentration using BioRad or Pierce assays. Freeze extracts and store at -80 deg. Expect 10-15 mg/ml protein.Extract Buffer:100 mM Tris pH 7.9250 mM Ammonium Sulfate1 mM EDTA10% GlycerolBefore use, add DTT to 0.5 mM (low concentration so IP reactions can be done directly)And 1X protease inhibitors from the following stock solutions:0.1 M PMSF (100x) 16 mg/ml Ethanol; Store at -20 degreesBenzamidine (100X); 31 mg/ml H2O; Store frozen at -20 degreesLeupeptin (500X); 0.15 mg/ml Ethanol; Store at -70 degrees for less than 6 monthsPepstatin (200X); 0.28 mg/ml methanol; Store at -20 degrees.Chymostatin (2,500X); 5mg/ml DMSO; Store frozen at -20 degreesTCA protein precipitationTo concentrate proteins for analysis by SDS PAGE:If a small amount of protein is to be precipitated (less than a few micrograms), add Insulin as a carrier protein (10 micrograms of Sigma insulin, I-5500, per sample works well).1.Add an equal volume of 20% TCA (trichloroacetic acid) to protein sample.2.Incubate 30 min on ice.3.Spin in microfuge at 4 deg. For 15 min.4.Carefully remove all supernatant.5.Add ~300 ul cold acetone and spin 5 min at 4 degrees.6.Remove supernatant and dry pellet.7.Resuspend samples in SDS PAGE loading buffer. Load to SDS PAGE after heating at65 deg for 3 min.Acetone precipitation of proteinThis procedure is suitable for recovering proteins from most aqueous solvents and from SDS containing buffers. It is not recommended for proteins dissolved in urea or guanidine or for peptides.1. Cool the required volume of acetone to -20°C.2. Place protein sample in acetone-compatible tube, such as polypropylene and able to hold six times the sample. Screw cap tubes may help minimize sample losses.3. Add six times the sample volume of cold (-20°C) acetone to the tube.4. Vortex tube and incubate for 2 hours to overnight minutes at -20°C.5. Centrifuge 15 minutes at 13,000-15,000 x g at 4°C.6. Decant and properly dispose of the supernatant, being careful to not dislodge the protein pellet.7. Briefly wash the pellet with 100ul of cold 90% acetone.8. Centrifuge 5 minutes at 13,000-15,000 x g at 4°C.9. Remove sup and repeat if necessary.10. Air dry for ~15-30 minutes and resuspend in an appropriate buffer.。
酵母蛋白质的制备实验报告
酵母蛋白质的制备实验报告实验报告：酵母蛋白质的制备实验一、实验目的1. 学习酵母的培养和繁殖方法；2. 掌握酵母蛋白质的提取和制备方法。
二、实验原理1. 酵母培养和繁殖：酵母是一种微生物，可以在富含营养物质的培养基上进行培养和繁殖。
培养基中通常含有碳源、氮源、矿物质等营养物质，同时还需提供适当的温度和湿度条件，以促进酵母的生长和繁殖。
2. 酵母蛋白质的提取和制备：在酵母细胞中，蛋白质是一种重要的生物大分子，具有多种生物学功能。
为了提取和制备酵母蛋白质，可以采用细胞破碎、离心、过滤等方法将细胞壁和细胞膜去除，得到纯净的蛋白质溶液。
三、实验步骤1. 酵母培养和繁殖：(1) 准备含有适当营养物质的酵母培养基；(2) 在培养基中接种适量的酵母菌种；(3) 恒温振荡培养，促进酵母的生长和繁殖；(4) 按照一定时间间隔观察酵母细胞数量的增加情况，确定适宜的培养时间。
2. 酵母蛋白质的提取和制备：(1) 收集足够数量的酵母细胞；(2) 将酵母细胞经过离心分离，去除培养基；(3) 使用细胞破碎法将细胞壁和细胞膜破碎，破碎液中含有蛋白质；(4) 经过离心和过滤等步骤，去除残留的细胞碎片和杂质；(5) 得到纯净的酵母蛋白质溶液。
四、实验结果与分析1. 酵母培养和繁殖结果：(1) 观察到酵母细胞在培养基中生长并繁殖；(2) 根据酵母细胞数量的增加情况，确定适宜的培养时间。
2. 酵母蛋白质的提取和制备结果：(1) 成功从酵母细胞中提取到酵母蛋白质溶液；(2) 通过对酵母蛋白质溶液进行离心和过滤，去除了细胞碎片和杂质，得到较纯净的蛋白质溶液。
五、实验总结通过本次实验，我们学习了酵母的培养和繁殖方法，并成功提取了酵母蛋白质。
实验过程中，我们掌握了培养基的制备和培养条件的控制方法，同时也学会了蛋白质的提取和制备技术。
总体而言，本次实验为我们深入理解酵母蛋白质的结构和功能提供了基础，并为今后的研究工作提供了参考。
酵母蛋白提取试剂
酵母蛋白提取试剂酵母蛋白提取试剂是一个可以从酵母细胞中提取蛋白质的试剂。
酵母蛋白提取试剂包括几个组分，包括缓冲液、还原剂、表面活性剂和蛋白酶抑制剂。
这些组分协同作用，可有效地提取酵母细胞中的蛋白质，用于鉴定、分析和研究酵母蛋白。
1. 缓冲液：缓冲液提供恰当的 pH 值，帮助蛋白质稳定，并防止蛋白质的降解和失活。
缓冲液也有助于酵母膜的溶解。
2. 还原剂：还原剂帮助去除酵母细胞中的还原剂，使蛋白质结构更加开放，更容易与其他分子相互作用。
3. 表面活性剂：表面活性剂增加膜上张力，有助于溶解酵母细胞膜，并使蛋白质更容易进入溶液。
4. 蛋白质酶抑制剂：当酵母细胞破裂时，内源性蛋白酶会降解蛋白质。
蛋白酶抑制剂可以防止蛋白酶的活性，保护蛋白质。
1. 称取酵母菌落（大约10-20毫克）。
2. 加入酵母蛋白提取试剂，混匀，并放入70℃水浴中加热10分钟。
3. 冷却至室温，随后进行机械打碎，如用超声波进行打碎，取10秒打碎，之后静置15秒，重复上述操作6-9次。
4. 超声波打碎后，应将细胞碎片离心，以去除细胞碎片和细胞壁碎片。
5. 快速转移清亮的上清液到一个新的离心管中。
6. 风干或用沸水浴进行浓缩（加热的时间应小于5分钟），以浓缩蛋白质。
1. 操作简便，可快速提取酵母蛋白质。
2. 组成的各种成分，有助于保护蛋白质的稳定性。
3. 可用于纯化多种酵母蛋白，并可使蛋白质进入溶液。
4. 成分与其他酵母蛋白质提取方案相比，价格便宜。
总之，酵母蛋白提取试剂是酵母生物学研究中必不可少的试剂，提取酵母细胞中的蛋白质是酵母生物学研究和其他生物学研究的基础。
07酵母抽提物
• 主要工艺要点：离心、洗涤、过筛目的是除去杂质； 预处理主要是加入一定浓度的碳酸氢钠处理，除去 苦味和异味，酒花皂化；调配成为 15% 浓度的酵母 液；添加酶制剂是便于缩短水解时间，加速降解和 提高抽提率；自溶是控制一定的温度和 PH值（40— 60℃/36h）；升温灭酶，促进美拉德反应； • 利用自溶法生产的酵母抽提物，主要特点是：蛋白 质分解率高，鲜味氨基酸含量高，风味好，呈味性 强，成本比较低。 • 影响得率和氨基氮含量的因素：破壁处理、外加蛋 白酶、 pH 值和温度、自溶促进剂、酵母浓度、自溶 时间。 • 影响酵母抽提物呈味核苷酸含量的因素： PH值影响、 5’磷酸二酯酶添加量，因此在实际生产中，自溶作用 一定时间后进行灭酶再补充磷酸二酯酶，防止生成 2019/2/8 21 的核苷酸继续降解，使I+G的量减少。
• 2、酶分解法：它使用菌体内酶失活的酵母菌为 原料，通过控制一定的酵母浓度、一定的温度、 PH值，干燥的酵母原料在细胞壁分解酶、蛋白 酶、肽酶、磷酸二酯酶的作用下，分解成小分 子物质。离心分离后上清夜浓缩或喷雾干燥即 可。 • 原料相当广泛，但酶制剂要求高，生产成本高， 适合生产高质量的酵母抽提物。目前日本领先。
B族维生素
2019/2/8
27
一、应用
• 调味料市场由单一、低档向多样化、高档化和天然、健康的
方向发展，美味、方便、天然、营养的复合调味品深受喜爱。 与动植物的成分比较，酵母抽提物的蛋白质和游离氨基酸均 高于动植物抽提物，它的特性介于动植物水解蛋白（HVP， HAP）和动植物及鱼贝类抽提物之间。 在食品工业中，用做液体调料、特鲜酱油、粉末调料、肉 类加工、鱼类加工、动植物抽提物、罐头、蔬菜加工、饮食。 1 、家庭及饮食业用调味品：家庭及饮食业日常烹调（替代 味精）；各类调味料（酱油等） 2 、肉类食品加工：火腿、香肠、肉丸、肉馅，抑制不愉快 气味，具有矫味作用 3、水产品类加工：鱼肉火腿、鱼类香肠、鱼糕 4、快餐食品：各类快餐增强肉味和鲜味
酵母核蛋白提取方法
核蛋白提取试剂盒
BB-3102
膜蛋白提取试剂盒
BB-3103
Bradford 蛋白定量试剂盒
BB-3411
BCA 蛋白定量试剂盒
BB-3401
ECL 化学发光检测试剂盒
BB-3501
蛋白 Marker
BB-3721
细胞蛋白提取试剂盒
BB-3121
细菌膜蛋白提取试剂盒
BB-3151
组织蛋白提取试剂盒
BB-3122
BB-3703
植物总蛋白提取试剂盒
BB-3124
细菌蛋白提取试剂盒
BB-3123
植物膜蛋白提取试剂盒
BB-3152
酵母蛋白提取试剂盒
BB-3125
蛋白酶抑制剂混合物
BB-3301
磷酸化蛋白提取试剂盒
BB-3105
磷酸酶抑制剂混合物
BB-3311
SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
BB-3702
SDS-PAGE 上样 Buffer
14. 在 4℃，16000×g 条件下离心 10 分钟。 15. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母核蛋白。 16. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。 相关产品盒
BB-3101
磷酸化蛋白富集试剂盒
BB-3108
储存条件： 蛋白提取液 2-8℃保存； 蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期： 一年。
产品简介： 贝博酵母核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母中提取核蛋白。提取过
程简单方便。制备的核蛋白纯度高，保持天然活性，绝少交叉污染。提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
酵母成分中蛋白质含量的测定
酵母 抽 提 物 ， 北 安 琪 酵 母 公 司 ；牛 白 蛋 白 湖 （ Ｓ 、硫 酸 铜 、 石 酸钾 钠 （ Ｒ） 中 国医 药 上海 Ｂ Ａ） 酒 Ａ ，
化学 试剂 公 司 ； 型高 速离 心 机 ， 京 实 验仪 器 厂 ； 微 南
７１ ２ 分光 光 度计 ， 海第三分 析器 厂 。 上
【 中图分类号 】 ０ ５ ．２ ６ ７３ 【 文献标识码 】 Ｂ 【 文章编 号 】 １０ ３ ６ ２ １ ）２— ０ ８ ２ ０ ３— ４７（０ １ １ ０ ５ —０
酵 母抽 提 物 主要成分 为蛋 白质 、 海藻糖 、 多种 氨
基 酸等 ， 成 分复 杂 ， 其 根据 蛋 白质 的 性 质 和成 分 ， 测
・
５ ・ ８
河南 化 工 Ｈ Ｎ Ｎ Ｃ Ｅ Ｃ ＬＩ Ｄ Ｓ Ｒ Ｅ Ａ Ｈ ＭＩＡ Ｎ Ｕ Ｔ Ｙ
２ １ 年 ６月 ０１
第２ ８卷
第 ６期 （ ） 下
酵 母 成 分 中 蛋 白 质 含 量 的 测 定
窦 明 ， 李 博
４８ ３ ） ５ ０ ０
（ 鹤壁职业技术学 院 ， 河南 鹤壁
收 稿 日期 ：０ ｌ Ｏ ２ １ — ６一ｌ ９
作者简 介 ： 窦
明（９ ４一 ） 男 ， １７ ， 讲师 ， 从事化学研究工作 ， Ｅ—ｍａ ： ａｇ ｏｇｉ ８６ ６ ＠１ ３ ｔｍ。 ｉ ｙｎ ｈｎｘａ ８０ ３ ６ ．ｏ ｌ ５
河 南 化 工
２１ ０ １年 ６月
第２ ８卷
第 ６期 （ ） 下
１ ２ 实 验方 法 ．
毽 鲢 瑚
试剂 配 制 ： 准确称取标 准 牛 白蛋 白 １０ （ 白 ．０ｇ 蛋 质含 量 ９ ％ ） 蒸馏 水至 １０ｍＬ 配 制成 １ Ｌ的 ０ 加 ０ ， ０ 标 准牛 白蛋 白溶 液 。
酵母提取物质量标准
酵母提取物质量标准一、感官指标1. 外观：酵母提取物应呈现均匀的浅黄色至黄褐色液体，无杂质和沉淀。
2. 气味：具有典型的酵母香味，无异味。
3. 口感：口感细腻，略带甜味，无涩味或苦味。
二、化学成分1. 总氮：采用克氏定氮法测定，以百分数表示。
参考范围：0.10%-0.30%。
2. 氨基酸态氮：采用氨基酸分析仪测定，以百分数表示。
参考范围：0.05%-0.15%。
3. 碳水化合物：采用GB 5009.88-2016测定，以百分数表示。
参考范围：≤6%。
4. 灰分：采用GB 5009.4-2016测定，以百分数表示。
参考范围：≤2%。
5. 水份：采用GB 5009.3-2016测定，以百分数表示。
参考范围：≤12%。
三、微生物指标1. 总菌落数：采用GB 4789.2-2016测定，以CFU/g表示。
参考范围：≤1000 CFU/g。
2. 大肠菌群：采用GB 4789.3-2016测定，以MPN/100g表示。
参考范围：≤30 MPN/100g。
3. 沙门氏菌：采用GB 4789.4-2016测定，不得检出。
4. 金黄色葡萄球菌：采用GB 4789.10-2016测定，不得检出。
四、添加剂和污染物1. 食品添加剂：酵母提取物中不得添加任何食品添加剂，包括防腐剂、着色剂等。
2. 重金属：采用GB 5009.15-2014测定，铅含量应小于等于0.5mg/kg，镉含量应小于等于0.1mg/kg。
3. 农药残留：采用相应的检测方法进行测定，应符合国家相关标准要求。
五、营养标签根据酵母提取物的营养成分分析结果，应按照GB 28050-2011的要求在产品包装上标示营养标签，包括能量、蛋白质、脂肪、碳水化合物、钠等营养成分的信息。
六、贮藏和运输酵母提取物应贮存在干燥、阴凉、通风良好的地方，避免阳光直射和高温。
运输过程中应防止挤压和污染。
七、使用方法酵母提取物可直接作为食品添加剂使用，也可作为调味品、营养补充剂等的原料。
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酵母蛋白质提取对照品
酵母蛋白概述
酵母蛋白是存在于天然酵母中的一种优质完全蛋白。
酵母是人类利用最早、最多、最广泛的一种单细胞微生物，在真菌分类系统中属于子囊菌纲、担子菌与半知菌类。
酵母自古以来就被人们应用于日常生活中，如发面、酿酒、助消化等。
酵母的营养价值
酵母也是天然的营养来源和营养载体，其营养成分具有“三低四优”的特点，即低脂、低糖、不含胆固醇，富含优质完全蛋白质、完整的B族维生素、以生命结合态形式存在的多种矿物质和功能膳食纤维。
优点
酵母是补充优质蛋白质的最好来源。
1、酵母中含有丰富的蛋白质，高达40%～60%。
2、酵母中的蛋白质的消化率可达96%，净利用率达59%。
3、酵母含有完整的氨基酸群，包括人体必需的8种氨基酸，特别是在谷物蛋白中含量较少的赖氨酸，在酵母中含量较高。
此外，酵母中的氨基酸比例接近联合国粮农组织(FAO)推荐的理想氨基酸组成值，故其营养价值较高。
4、酵母中还含有一些功能蛋白，例如金属硫蛋白（简称MT），它具有广泛的生物功能，在体内主要参与微量元素的贮存、运输和代谢、拮抗电离辐射、清除羟基自由基及重金属解毒等多种作用。
酵母还含有丰富的助消化酶（酵素），能帮助日常饮食中的、酵母本身的、以及外源补充的营养更好地消化、吸收和利用。
5、酵母蛋白是酵母本身所含有的，而非多种蛋白来源的简单混合。
如何选择含有蛋白质的食物
选择蛋白质食物首先应考虑蛋白质含量的多少。
如果食物中蛋白质含量太少，即使营养价值很高，也不能满足人体需要。
在常见的每100克食物中，肉类含蛋白质10-20克，鱼类含15-20克，全蛋含13-15克，豆类含20-30克，谷类含8-12克，蔬菜、水果含1-2克。
判断蛋白质的优劣主要有三点：一是人体消化吸收的程度，吸收得越彻底，其营养价值就越高；二是人体吸收后的利用程度，生物利用度（即蛋白质的生理价值）越高，其营养价值也越高；三是所含的必需氨基酸是否丰富、种类是否齐全、比例是否适当，种类齐全、数量充足、比例适当的完全蛋白质质量最高。
关于酵母蛋白质提取对照标准品
作为一种标准品，酵母蛋白质提取对照标准品是一种分析试剂，可以检测其含量测定中的标准含量。
广州优瓦独家专业提供。
缺乏蛋白质的害处
1.疲倦无力，学习或工作效率降低，且不能持久，记忆力衰退，怕冷，血压偏低，心率徐缓。
2.消瘦，体重减轻，皮下脂肪缺少，肌肉萎缩。
3.浮肿，轻者局限于踝部或小腿，重者全身浮肿，并可有胸水及腹水。
4.胃肠道腺体萎缩，分泌减少，消化不良，腹胀，水样腹泻。
5.儿童生长发育延迟，智力低下，学习困难。
6.肝脏有脂肪浸润，体积肿大，可形成脂肪肝，久则演变为肝硬化。
7.可有轻度或中度贫血，血糖偏低。
8.免疫功能低下，抵抗力降低。