安宫牛黄丸对大鼠脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿作用机制的实验研究_郑伟

295 g。 1．2 方法 1．2．1 制 作 大 鼠 弥 漫 性 脑 损 伤 模 型 采 用 Marmarou 方 法 ， 将 大 鼠 腹 腔 注 射 1％戊 巴 比 妥 钠 进 行 麻 醉 ， 然 后 将 其 俯 卧 固 定 在 特 制海绵床上， 并将特制铁头盔置于大鼠头顶， 当大鼠缓慢苏醒 时 用 450 g 的 铁 棒 从 1．5 m 高 度 自 管 内 自 由 坠 落 到 头 盔 上 方 ， 打击后立即移开海绵床以免二次损伤 ［2］。
·1246· ·论著·
２０１４ 年 １０ 月第 ２１ 卷第 １０ 期
（实验研究）
安宫牛黄丸对大鼠脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿
作用机制的实验研究
郑伟 1 ， 牛立健 1， 朱超 1 ， 宋思新 1， 侯大鹏 2， 陈会召 1， 谢方民 1， 张春普 1， 曹春光 1 （泰山医学院附属医院 1 神经外科， 2 ICU， 山东 泰安 271000）
收稿日期： 2014－06－26 修回日期： 2014-08-11 作 者 简 介 ： 郑 伟 （1975－ ）， 男 ， 山 东 宁 阳 人 ， 副 主 任 医 师 ， 博 士 在 读， 主要从事颅脑损伤的临床与基础方向的研究。
1 资料与方法
1．1 资料 选 择 80 只 健 康 SD 大 鼠 ， 雌 雄 各 40 只 ， 体 质 量 为 240 ～
表 1 安宫牛黄丸治疗前后大鼠脑组织变化情况
项目
治疗前 治疗后
P值
脑组织含水 量 （％ ）
84．11±1．02 76．21±1．01
＜0．05
脑组织梗塞 面 积 （％ ） 0．219±0．03 0．158±0．03 ＜0．05
记忆提取能 脑细胞凋亡数量
力评（分） （个 ／ 1000 个）
61．48±1．13 3253．1±10．33
【摘要】 目的 通过探讨安宫牛黄丸对大鼠脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿的作用机制， 旨在为临床研究安宫牛黄丸提高大

鼠脑外伤 及 脑 水 肿 的 治 疗 效 率 提 供 理 论 依 据 。 方 法 采 用 Marmarou 方 法 制 作 大 鼠 弥 漫 性 脑 损 伤 模 型 ， 并 给 予 安 宫 牛 黄 丸 后 应 用
模 型 建 立 完 成 后 给 予 大 鼠 1％吐 温 溶 液 和 安 宫 牛 黄 丸 混 合
２０１４ 年 １０ 月第 ２１ 卷第 １０ 期
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液 60 mg/mL， 在 大 鼠 脑 外 伤 后 12 h、 24 h、 36 h、 48 h、 60 h 给药， 5 d 后处死大鼠进行检测 ［3］。 1．2．2 脑组织含水量测定 处死大鼠后迅速断头取脑， 用滤纸擦 去表面水分和血迹， 取出损伤侧顶叶大脑皮层组织， 将其置于 称重杯中用电子分析天平称湿 重 ， 再 置 于 110 ℃恒 温 干 燥 箱 内 干 燥24 h 后 称 干 重 ， 脑 组 织 含 水 量 ＝ （湿 重 － 干 重 ） /湿 重 × 100％ ［4］。 1．2．3 脑 组 织 c－fos 和 c－jun的 表 达 模 式 的 观 察 取 大 鼠 大 脑 正 中处切取脑组织厚约 5 mm， 置于 4％多聚甲醛固定液中固定 24 h， 常规的脱水、 透明、 浸蜡、 石蜡包埋、 切片， 进行常规 HE 染 色 和 免 疫 组 织 化 学 染 色 ［5］。 提 取 大 鼠 脑 组 织 DNA 应 用 常 规 RT－PCR 进行扩增并作为模板观察脑组织 c－fos 和 c－jun 的表达 模式变化 ［6］。 1．2．4 观 察 指 标 统 计 给 予 安 宫 牛 黄 丸 前 后 大 鼠 脑 组 织 含 水 量 、 脑 组 织 梗 塞 面 积 、 记 忆 提 取 能 力 、 脑 细 胞 凋 亡 及 脑 组 织 c－fos 和 c－jun 的表达模式变化情况。 1．2．5 数 据 统 计 应 用 SPSS 16．0 软 件 进 行 统 计 学 处 理 ， 数 据 用 均数 ± 标准差表示， 组间比较采用 t 检验， 百分率比较采用 χ2 检验， 以 P ＜0．05 表示差异有统计学意义 ［7］。
方中犀角、 牛黄、 冰片、 黄芩、 黄连、 雄黄、 珍珠、 郁金、 朱 砂具有解毒、 降压、 抗炎、 泻火、 抗惊厥和降低机体耗氧量的 作 用 。 ［13］ 本 研 究 通 过 建 立 大 鼠 弥 漫 性 脑 损 伤 模 型 ， 脑 损 伤 后 对其HE 染色可见神经元肿胀、 出血点增多、 毛细血管腔阻塞、 淋巴细胞聚集等， 同时脑组织 c－fos 和 c－jun 的表达模式呈现先 增加后减少再增加的双峰模式； 给予安宫牛黄丸后， 结果显示 大鼠脑组织含水量减少、 脑组织梗塞面积减少、 记忆提取能力 提高、 脑细胞凋亡数减少， 与用药前比较差异显著， 表明安宫 牛黄丸可以减轻大鼠脑外伤后脑组织水肿、 保护血脑屏障、 降 低毛细血管通透性、 减少脑细胞凋亡、 提高记忆提取能力， 是 一种高效的治疗药物。
2 结果
应用安宫牛黄丸后大鼠脑组织含水量为 76．21％、 脑组织梗 塞 面 积 为 0．158％、 记 忆 提 取 能 力 评 分 为 87．11、 脑 细 胞 凋 亡 数 量 为2 341．2 个 ／ 1 000 个 ， 与 治 疗 前 比 较 差 异 显 著 ， 具 有 统 计 学意义 （P ＜0．05）， 具体数据见 表 1。 HE 染 色 检 测 脑 组 织 呈 弥 漫性分布， 损伤初期可见脑实质出血点、 体积增大、 神经元肿 胀 ， 部 分 脑 内 毛 细 血 管 管 腔 阻 塞 ［8］， 随 着 时 间 延 长 脑 组 织 疏 松、 神经细胞周围间隙增多， 损伤血管周围可见大量淋巴细胞 和 单 核 巨 噬 细 胞 聚 集 ［9］； 脑 组 织 c－fos 在 大 鼠 脑 损 伤 后 1 h 表 达显著增多， 3 h 到达第一次高峰， 然后减低， 6 h 将为最低 点， 然后开始升高， 到伤后第 3 d 时再次达到高峰， 至 7 d 时 再次明显降低， c－jun 的表达模式在脑损伤后 6 h 达到高峰， 然 后 降 低 ， 在 伤 后 第 3 d 再 次 达 到 峰 值 ， 然 后 降 低 ， c－fos 和 c－ jun 的表达呈现先增加后减少再增加的双峰模式。
脑损伤后血脑屏障受到损害会使大脑的结构和功能发生改 变， 并引起脑水肿的发生， 严重降低患者生活质量甚至威胁患 者生命。 近年来， 安宫牛黄丸临床应用越来越广泛， 药物对急 性期脑出血、 脑缺血损伤有较好的保护作用 ［1］， 本研究通过建 立大鼠弥漫性脑损伤模型， 探讨安宫牛黄丸对脑组织含水量、 脑组织梗塞面积、 记忆提取能力等的影响， 旨在为研究药物作 用机理、 临床的合理用药提供理论依据。
87．11±1．20 2341．2±12．51
＜0．05
＜0．05
3 讨论
血脑屏障是维持脑内微环境稳定， 保障大脑正常功能的重 要 生 理 屏 障 。 ［10］ 当 脑 损 伤 时 ， 血 脑 屏 障 的 结 构 和 功 能 都 发 生 改 变 ， 屏 障 作 用 减 弱 使 通 透 性 增 加 ， ［11］ 导 致 正 常 生 理 状 态 下 不能通透的物质可以穿越血脑屏障， 到达组织间隙， 引起脑水 肿 。 ［12］ 安宫牛黄丸是我国中药中具有良好疗效的 急 救 药 物 ， 药
Experimental Study on the Mechanism of Angong Niuhuang Pill on Blood Brain Barrier Injury and Brain Edema after Traumatic Brain Injury of Rats // ZHENG Wei 1, NIU Lijian 1, ZHU Chao 1, SONG Sixin 1, HOU Dapeng 2, CHEN Huizhao 1, XIE Fangmin 1, ZHANG Chunpu 1, CAO Chunguang 1 ( 1 Department of Neurosurgery, 2 ICU, the Affiliated Hospital of Tai'an Medical College, Tai'an 271000, China) [Abstract] Objective To investigate the mechanism of Angong Niuhuang Pill on blood brain barrier injury and brain edema after traumatic brain injury of rats, in order to provide a theoretical basis for clinical study of Angong Niuhuang Pill improving the treatment efficiency of brain injury and brain edema of rats. Methods The rat model of diffuse brain injury was made by Marmarou, and the water content in brain, the infarction area of brain tissue, the memory retrieval ability of brain, the apoptosis of brain tissue, the situation changes of expression patterns of c-fos and c-jun of brain tissue were counted by HE-staining, RT-PCR, immunohistochemistry, dry wet weight methods after given the Angong Niuhuang Pill to rats. Results After the application of Angong Niuhuang Pill, the water content of rats brain tissue decreased significantly, the cerebral infarction area decreased, the memory retrieval ability increased, the number of the apoptosis of brain cells decreased, with statistically significant difference (P <0.05). The expression pattern of c-fos and c-jun of brain tissue increased firstly, then decreased, and it increased again, appeared double peak model. Conclusions The treatment of Angong Niuhuang Pill on blood brain barrier injury and brain edema after traumatic brain injury of rats can significantly reduce the edema, cerebral infarction area and apoptosis of brain cells, and effectively protect the blood brain barrier and brain tissue. [Key words] Angong Niuhuang Wan; Blood brain barrier; Brain edema