大鼠白细胞介素1IL-IL-1酶联免疫分析
9 简述TLR4信号通路在炎症中的功能。
9 简述TLR4信号通路在炎症中的功能。
TLR4 recognizes lipopolysaccharide (LPS) together with myeloid differentiation factor 2 (MD2) on the cell surface. LPS is a component derived from the outer membrane of Gram-negative bacteria and is known to be a cause of septic shock.The crystal structure of a complex comprising TLR4, MD2, and LPS revealed that two complexes of TLR4-MD2-LPS interact symmetrically to form a TLR4 homodimer (Park et al., 2009).TLR4 is also involved in the recognition of viruses by binding to viral envelope proteins. In addition, TLR4 modulates the patho-genesis of H5N1 avian influenza virus infection by recognizing a DAMP rather than the virus itself (Imai et al., 2008). Acutelung injury caused by avian influenza virus infection produces endogenous oxidized phospholipids, which stimulate TLR4.Mice lacking TLR4 were found to be resistant to avian flu-induced lethality.1TL R4的结构分布及信号通路TLR4是人类发现的第一个TLR 相关蛋白,几乎分布于所有的细胞系,主要表达在参与宿主防御功能的细胞上,如单核巨噬细胞、粒细胞、树突状细胞、淋巴细胞、内皮细胞和上皮细胞,以骨髓单核细胞的表达尤其多[ 5 ],近年来发现,肾小管上皮细胞、心脏、呼吸道上皮细胞和肠上皮细胞也均表达TLR4[ 6 ] 。
人白介素1β (IL-1β)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书
2022年修订第一版（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!）产品货号：E-EL-H0149c产品规格：96T/48T/24T/96T*5Elabscience 人白介素1β(IL-1β)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书Human IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。
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Copyright ©2021-2022 Elabscience Biotechnology Co.,Ltd. All Rights Reserved目录用途 (3)基本性能 (3)检测原理 (3)试剂盒组成及保存 (4)试验所需自备物品 (5)样品收集方法 (5)注意事项 (6)■ 试剂盒注意事项 (6)■ 样品注意事项 (6)样本稀释方案 (6)检测前准备工作 (7)操作步骤 (8)结果判断 (10)技术资源 (10)典型数据 (10)性能 (11)■ 精密度 (11)■ 回收率 (11)■ 线性 (11)声明 (12)Intended use (13)Character (13)Test principle (13)Kit components & Storage (14)Other supplies required (15)Sample collection (15)Note (16)■ Note for kit (16)■ Note for sample (16)Dilution Method (17)Reagent preparation (17)Assay procedure (18)Calculation of results (20)Technical resources (20)Typical data (20)Performance (21)■ Precision (21)■ Recovery (21)■ Linearity (21)Declaration (22)用途该试剂盒用于体外定量检测人 血清、血浆或其他相关生物液体中IL-1β浓度。
白介素-1结构式
白介素-1结构式全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：白介素-1（Interleukin-1）是一种由免疫系统产生的细胞因子，它在免疫反应中扮演着重要的角色。
白介素-1分为两种亚型，分别是白介素-1α（IL-1α）和白介素-1β（IL-1β），它们都属于促炎性细胞因子家族。
白介素-1在机体中的产生和作用机制十分复杂。
当机体受到外界侵袭或受损时，免疫细胞会释放白介素-1以启动炎症反应，并吸引其他免疫细胞前来清除病原体。
白介素-1也能促进伤口愈合和组织修复，加速受损细胞的再生。
白介素-1的受体是IL-1R1，当白介素-1结合到其受体上时，会激活多条信号通路，包括NF-κB和MAPK信号通路，进而促进炎症反应的发生。
炎症反应是机体对抗外界侵袭的一种重要防御机制，但如果炎症反应持续时间过长或程度过重，就会导致疾病的发生。
白介素-1也与多种疾病的发生和发展密切相关。
炎症性疾病如类风湿关节炎和炎症性肠病等，白介素-1的过度激活与疾病的发生有着直接的关系。
针对白介素-1信号通路的调控成为治疗这些疾病的重要方式之一。
白介素-1的抗体疗法已经被广泛应用于临床，例如使用IL-1拮抗剂可降低白介素-1的活性，减轻炎症反应，从而治疗炎症性疾病。
还有研究表明，通过调控肠道菌群可以影响白介素-1的产生，从而对炎症性肠病等疾病产生治疗作用。
白介素-1是机体免疫系统中一个非常重要的细胞因子，它在炎症反应的发生和调控中发挥着关键作用。
随着对白介素-1的研究不断深入，我们相信将能够更好地了解其在疾病发生和发展过程中的作用机理，为炎症性疾病的治疗提供更为有效的方法。
【2000字】第二篇示例：白介素-1，也称为IL-1α，是一种细胞因子，属于白细胞介素家族。
它在免疫应答中扮演着关键的角色，能够调节炎症反应、细胞增殖和分化等生理过程。
IL-1α的结构式如下所示：IL-1α是由一个单链多肽组成，其分子量约为17kDa。
在人类中，IL-1α基因位于染色体2的q13-21区域，含有7个外显子和6个内含子。
白介素1β,IL-1βELISA试剂盒说明书
白介素1β，IL-1βELISA试剂盒说明书白介素1β，IL-1βELISA试剂盒说明书kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶标试剂：3ml×1瓶（48）/6ml×1瓶（96）【白介素1β，IL-1βELISA试剂盒说明书】本试剂仅供研究使用计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96）说明书:1份密封袋:1个标准品：2700ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液: 3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存【白介素1β，IL-1βELISA试剂盒说明书】实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人铁蛋白(FE) 水平。
用纯化的人铁蛋白(FE) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入铁蛋白(FE) ，再与HRP标记的铁蛋白(FE) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的铁蛋白(FE) 呈正相关。
白细胞介素_1受体拮抗剂_IL_1ra_对大鼠佐剂性关节炎的影响
药 物 生 物 技 术Pharm aceutical Biotechno logy 2006,13(3):214~218白细胞介素 1受体拮抗剂(IL 1ra)对大鼠佐剂性关节炎的影响*季常新1,颜天华2,王秋娟2*(1.中国药科大学镇江校区,江苏镇江212003;2.中国药科大学生理教研室,江苏南京210009)摘 要 研究IL 1r a(Inter leukin 1Recepto r A ntago nist)对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用。
采用SD大鼠作为受试动物,一侧足爪注射完全弗氏佐剂造成大鼠佐剂性关节炎(A djuvant arthr itis,AA)模型,检测足爪肿胀度、脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞产生IL 1的水平。
结果:IL 1ra能明显减轻A A大鼠足肿胀程度;明显减少A A大鼠足爪评分分值;明显降低AA大鼠B淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞I L 1的产生,可恢复降低的T淋巴细胞增殖反应。
病理组织学观察结果表明,IL 1ra可明显减轻A A大鼠关节中炎性细胞浸润、滑膜增生、血管翳形成、软骨和骨的破坏。
IL 1r a对A A有明显的治疗作用关键词 白细胞介素 1受体拮抗剂;佐剂性关节炎;完全弗氏佐剂中图分类号:R965 1 文献标识码:A 文章编号:1005 8915(2006)03 0214 05类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种免疫介导的慢性、炎症性和破坏性疾病,其病变主要在于滑膜,滑膜的增生、增厚是造成关节损害的主要病理基础之一,晚期导致的关节周围肌肉萎缩,患病关节发生畸形性强直,导致永久性残疾。
据文献报道未经治疗的病人,30年的致残率为60%,目前RA仍属一种难治性疾病。
国外有资料表明IL 1ra对关节炎有明显的治疗作用[1~3],作者以佐剂性关节炎为模型对它的药效作用和机制作了初步的研究。
1 材 料1.1 动物SD大鼠,体重(180 20)g,雄性;C57BL/6J 小鼠,雄性,体重(20 2)g,购于安徽医科大学动物实验中心,皖实动准字第01号。
白细胞介素-1(IL-1)检测及临床意义
白细胞介素-1检测及临床意义一、概述1、白细胞介素-1（IL-1）主要由巨噬细胞产生；此外几乎所有的有核细胞，如B细胞、NK细胞、体外培养的T细胞、角质细胞、树突状细胞、星形细胞等也可产生IL-1。
2、正常情况下只有皮肤、汗液和尿液中含有一定量的IL-1，绝大多数细胞在受到外来抗原或丝裂原刺激后才能合成和分泌IL-1。
3、IL-1有两种不同的分子形式，一种称IL-1α，由159个氨基酸组成；另一种称为IL-1β，含153个氨基酸；两者由不同的基因分别编码。
虽其氨基酸顺序仅有26%的同源性，然而IL-1α和IL-1β以同样的亲和力结合于相同的细胞表面受体，发挥相同的生物学作用。
4、IL-1受体（IL-1R）几乎存在于所有有核细胞表面。
二、生物学活性1、局部作用：局部低浓度的IL-1主要发挥免疫调节作用。
①与抗原协同作用，可使CD4+T细胞活化，IL-2R表达；②促进B细胞生长和分化，可使脾细胞的溶血空斑数（PFC）增加100倍，这说明IL-1也促进抗体的形成；③促进单核－巨噬细胞等抗原递呈细胞（APC）的抗原递呈能力；④与IL-2或干扰素协同可以增强NK细胞活性；⑤吸引中性粒细胞，引起炎症介质释放；⑥可刺激多种不同的间质细胞释放蛋白分解酶并产生一些效应；例如类风湿关节炎的滑膜病变（胶原破坏、骨质重吸收等）就是由于关节囊内Mφ受刺激后活化并分泌IL-1，使局部组织间质细胞分泌大量的前列腺素和胶原酶，分解破坏滑膜所致；⑦IL-1对软骨细胞、成纤维细胞和骨代谢也均有一定影响。
2、全身性作用：IL-1的大量分泌或注射可以通过血循环引起全身反应。
①作用于下丘脑可引起发热，具有较强的致热作用。
这种作用与细菌内毒素明显不同：IL-1致热曲线为单向、潜伏期200 min左右，而内毒素致热曲线为双向，潜伏期至少为1H；IL-1对热敏感、易破坏，而内毒素耐热；给家兔反复注射内毒素可出现耐受，但对IL-1不会耐受。
②刺激下丘脑释放促肾上腺皮质素释放激素，使垂体释放促肾上腺素，促进肾上腺素释放糖皮质激素，对IL-1有反馈调节作用。
人白细胞介素1a(IL-1a)
人白细胞介素1a（IL-1a）酶联免疫检测试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。
本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人白细胞介素1a（IL-1a），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素1a（IL-1a）的测定。
工作原理本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人白细胞介素1a （IL-1a）的水平。
向预先包被了人白细胞介素1a（IL-1a）单克隆抗体的酶标孔中加入白细胞介素1a（IL-1a），温育；洗涤后，加入HRP标记过的白细胞介素1a（IL-1a）抗体。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅与样品中人白细胞介素1a（IL-1a）的浓度呈正相关。
试剂盒组成需要而未提供的试剂和器材1．37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．精密移液器及一次性吸头4．蒸馏水，5．一次性试管6．吸水纸注意事项1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3．建议所有标准品、样本都做双份检测。
如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
4．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.5．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
7．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。
根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠白细胞介素1IL-1ELISA试剂盒使用方法
大鼠白细胞介素1（IL-1）ELISA试剂盒使用方法检测范围：96T 8ng/L-180ng/L使用目的本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本白细胞介素1（IL-1）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白细胞介素1（IL-1）水平。
用纯化的大鼠白细胞介素1（IL-1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素1（IL-1），再与HRP 标记的白细胞介素1（IL-1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素1（IL-1）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞介素1（IL-1）浓度。
试剂盒组成1、30倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1瓶2、酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（360ng/L）0.5ml×1瓶3、酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1瓶4、样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1份5、显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2张6、显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
180ng/L5号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl标准品稀释液90ng/L4号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl标准品稀释液45ng/L3号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl标准品稀释液22.5ng/L2号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl标准品稀释液11.25ng/L1号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl标准品稀释液2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
糖尿病肾病大鼠ET-1、IL-1β的表达及多种银杏叶提取物的干预作用比较
本 实验发现牛磺 酸在心肌缺血再灌注 损伤 中的运用 ，可 以提 高血
清 和肝 组织Ｓ Ｏ Ｄ含量 ，降 低Ｎ０ 含量 和Ｐ Ｌ Ａ 浓度 ，提示牛磺酸可 以减 轻大 鼠心 肌缺血再灌注对肝组织 的损伤。其作用机制 可能是通 过清除 自由基 、防止 脂质过 氧化 、提高 机体 抗氧化 能力 、改善细 胞 内钙超
【 关键 词 】糖尿 病 肾病 ；Ｅ Ｔ － １ ；Ｉ Ｌ 一 １ Ｄ；相 关性 ；舒血 宁 注射 液 ；银 杏达 莫注射 液 ；金 纳 多注射 液
载、抑制过量Ｎ Ｏ 生成、抑￥ Ｊ １ Ｐ Ｌ Ａ 相关的炎症反应，减少组织的急性
损伤 ，从 而对大 鼠心肌 缺血再灌注肝损伤起到保护作用 。 参 考文 献 ［ １ ］ 王银环 ， 董淑 云， 张娜， 等＿ 牛磺 酸对 大 鼠肢体缺 血再 灌注后 肝脏 损
伤的保 护效 应 ［ Ｊ ］ ． 第四军 医大学 学报 ， ２ ０ ０ ６ ， ２ ７ （ ２ ２ ） ： ２ ０ ４ ７ － ２ ０ ５ ０ ．
７ ０ ・实验研究 ・
伤 ，研究认为在其发生机制 中起重要作用的包括氧 自由 基 的生成、钙超 载、白细胞和细胞因子等 】 。组织在缺血再灌注时释放大量 氧自由基， 引起脂质过氧化反应 ，以及细胞钙超载和细胞 因子大量释放入血至各组
Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． １ １ ， Ｎ ｏ ． ３ ４ 围哑
实验 中牛磺酸 可 以降低大 鼠心肌缺血 再灌 注血清 和肝组织 中Ｐ Ｌ Ａ 浓
度 ，减轻肝 损伤。
［ ４ ］ 张金 池， 郑 国富， 吴 明祥 ， 等． 异甘草酸 镁对 大 鼠肢体缺 血再 灌注 肝 损伤 时磷脂酶 Ａ ２ 的影响 【 Ｊ 】 ． 中华肝脏病 杂志， ２ ０ １ ２ ， ２ ０ （ ７ ） ： ５ ３ ７ — ５ ４ １ ． ［ ５ 】 徐 勇， 涂植 光 ． 两 类磷脂 酶Ａ２ 抑 制剂对 大 鼠内毒素 性肝 损伤 的保 护 作用［ Ｊ ］ ． 国际检验 医学杂志 ， ２ ０ ０ ７ ， ２ ８ （ １ ０ ） ： ９ ０ ７ — ９ ０ ９ ．
大鼠白介素-1ELISA试剂盒说明书
导致试验失败。
-1-
本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据
Enzyme Linked Immunosorbent Assay [ELISA]
大鼠白细胞介素 1β[IL-1β]酶联免疫分析试剂盒使用说明书
5 该试剂盒内不包含有传染性试剂。 6 不要混用不同指标不同批号的试剂和包被微孔板。 7 试验过程中试剂和待测样品均应充分混匀。 8 包被微孔板应放置 2-8℃干燥保存，避免受潮。 9 如有剩余试剂请放置 2-8℃冷藏保存。 10 试验过程要严格按照说明书操作，先后顺序不得颠倒。 11 如果样品量较大应注意加样时间，避免加样过慢或间隔时间过长。 12 使用和贮存底物Ⅱ时应注意避光。 13 终止液含有酸性成分具有腐蚀性，勿将其溅落到皮肤或衣服上。如有该情况发生应
分析过程
实验前处理步骤
1 试验前将试剂和待测样品放置室温下平衡[20-25℃]充分混匀。并确定好本次检测 所需的酶标板孔数目，将所需要的微孔放置到配套板架上。
2 按照要求用蒸馏水或纯净水来稀释浓缩清洗液，充分混匀后备用。 3 将本次实验所需微孔做好相应标记，[如有需要做空白对照孔可预留一孔作为空白
对照孔备用]，最好采用双孔平行加样。
大鼠白细胞介素 1β[IL-1β]酶联免疫分析试剂盒使用说明书
试剂盒各项性能指标综述
1 最低检测限：1.0pg/mL。 2 板内批间差异：≤ 6% 3 以标准品浓度及其测定吸光度值拟合出线性回归曲线的相关系数 r≥0.98 4 失效期限：6 个月[具体日期以试剂盒外盒标签为准] 5 由于现有的科学和条件我们还不能对所有原材料进行更全面的鉴定和分析，故本产品可
大鼠白介素 4(IL-4)酶联免疫分析试剂盒 说明书
检测，或将标本放于 -20℃或-80℃保存，但应避免反复 冻融。 2. 血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° C 1000 x g 离心 15 分钟，或将标本放于 -20℃或-80℃保存，但应避免反复 冻融。 3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将标本放 于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准 曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度 时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml，盖好后静置 10 分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为 50 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释 50 ng/ml， 25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，0.78 ng/ml，样品稀释液直接作 为标准浓度 0 ng/ml，临用前 15 分钟内配制。 如配制 25 ng/ml 标准品：取 0.5ml（不要少于 0.5ml）50 ng/ml 的上述标准品加入含 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则： 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制 （每孔 100μl），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如 10μl 生物素标记抗体加 990μl 生物素标 记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则： 临用前以辣根过氧化 物酶标记 亲和素稀 释液稀释，稀释前根据预先计算好 的每次实 验所需 的 总量配制（每孔 100μl），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如 10μl 辣根过氧化物酶标记亲和 素加 990μl 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内 配制。
IGF-1通过TLR4
㊃麻醉专栏㊃[收稿日期]2023-03-28[基金项目]新疆维吾尔自治区自然科学基金(2019D 01C 324)[作者简介]胡振飞(1987-),男,新疆乌鲁木齐人,新疆医科大学第一附属医院主治医师,医学学士,从事麻醉学㊁围术期器官保护研究㊂I G F -1通过T L R 4/N F -κB 信号通路对心肺复苏大鼠心肌坏死性凋亡的影响胡振飞,李 帆,戴晓雯(新疆医科大学第一附属医院麻醉科,新疆乌鲁木齐830000) [摘要] 目的探究心肺复苏对胰岛素样生长因子1(i n s u l i n -l i k e g r o w t h f a c t o r -1,I G F -1)的表达及其调节大鼠心肌损伤的作用机制㊂方法取30只S p r a g u e -D a w l e y 大鼠,随机平均分为5组,每组6只㊂随机选取1组为s h a m 组,其余4组大鼠构建心室颤动型心脏骤停/心肺复苏模型,建模成功后,随机选取1组作为C A /C P R ,剩余3组分为补充I G F -1㊁补充T A K -242[T o l l 样受体4(T o l l -l i k e r e c e p t o r 4,T L R 4)/核因子κB (n u c l e a r f a c t o r κB ,N F -κB )通路]抑制剂以及同时补充I G F -1和T A K -242组㊂利用伊文思蓝染色检测不同处理组大鼠的心肌损伤情况;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(r e v e r s e t r a n s c r i p t i o n -p o l y m e r a s e c h a i nr e a c t i o n ,R T -q P C R )检测I G F -1的表达水平;利用W e s t e r nb l o t 检测T L R 4㊁N F -κB ㊁髓样分化因子(m y e l o i dd i f f e r e n t i a t i o n p r i m a r y r e s p o n s e p r o t e i n88,M y D 88)㊁受体相互作用蛋白激酶3(r e c e p t o r -i n t e r a c t i n gpr o t e i nk i n a s e3,R I P K 3)㊁混合谱系激酶域样蛋白(m i x e d -l i n e a g ek i n a s e d o m a i n -l i k e ,M L K L )的表达水平;利用酶联免疫吸附法检测白细胞介素1β(i n t e r l e u k i n -18,I L -1β)和白细胞介素18(i n t e r l e u k i n -18,I L -18)的表达水平㊂结果与s h a m 组相比,当大鼠心脏骤停后,利用心肺复苏恢复心脏自主循环后,大鼠的心肌组织均出现较为严重的损伤,其中C A /C P R 组损伤严重,补充I G F -1和T A K -242组心肌损伤减轻;与s h a m 组相比,C A /C P R 组大鼠心肌细胞I G F -1的表达量显著降低(P <0.05);与s h a m 组相比,C A /C P R 大鼠心肌组织中I L -1β和I L -18的表达水平显著升高,补充I G F -1和T A K -242组大鼠在所有模型大鼠中I L -1β和I L -18的表达量最低(P <0.05);与s h a m 组相比,C A /C P R 大鼠T L R 4㊁M yD 88㊁N F -κB p 65的表达水平显著升高,其中模型组大鼠在所有模型大鼠中的表达水平最高,补充I G F -1和T A K -242组大鼠在所有模型大鼠中的表达水平显著降低(P <0.05);与s h a m 组相比,C A /C P R 大鼠R I P K 3㊁M L K L 的表达量显著升高,补充I G F -1和T A K -242组大鼠在所有C A /C P R 大鼠中的表达水平降低(P <0.05)㊂结论心脏骤停恢复自主循环后,I G F -1的表达量会降低,I G F -1可以通过抑制T L R 4/N F -κB 信号通路,抑制心肌细胞的坏死性凋亡,从而减轻大鼠的心肌损伤㊂[关键词] 肌细胞,心脏;心肺复苏;坏死性凋亡 d o i :10.3969/j.i s s n .1007-3205.2024.05.010 [中图分类号] R 542.2 [文献标志码] A [文章编号] 1007-3205(2024)05-0549-06E f f e c t o f I GF -1o nm y o c a r d i a l n e c r o p t o s i s i n r a t s u n d e r g o i n g c a r d i o p u l m o n a r yr e s u s c i t a t i o nv i aT L R 4/N F -κBs i g n a l i n gp a t h w a yHUZ h e n -f e i ,L IF a n ,D A IX i a o -w e n(D e p a r t m e n t o f A n e s t h e s i o l o g y ,t h eF i r s tA f f i l i a t e d H o s p i t a l o f X i n j i a n g M e d i c a lU n i v e r s i t y ,U r u m qi 830000,C h i n a )[A b s t r a c t ] O b je c t i v e T o e x p l o r e t h e ef f e c t o f c a r d i o p u l m o n a r y r e s u s c i t a t i o n (C P R )o n t h e e x p r e s s i o no f i n s u l i n -l i k eg r o w t hf a c t o r -1(I G F -1)a n d i t s r e g u l a t o r y m e ch a ni s m o n m yo c a r d i a l i n j u r y i n r a t s .M e t h o d s T h i r t y S p r a g u e -D a w l e y r a t sw e r e s e l e c t e d a n d r a n d o m l y di v i d e d i n t o f i v e g r o u p s ,w i t h6r a t s i ne a c h g r o u p .O n e g r o u p w a s r a n d o m l y s e l e c t e da s s h a m o p e r a t i o n g r o u p,㊃945㊃第45卷第5期2024年5月河北医科大学学报J O U R N A L O F H E B E I M E D I C A L U N I V E R S I T YV o l .45 N o .5M a y2024a n d i nt h eo t h e rf o u r g r o u p s,c a r d i a ca r r e s td u et ov e n t r i c u l a rf ib r i l l a t i o n/C P R m o d e l s w e r e e s t a b l i s h e d.A f t e rt h es uc c e s s f u lm ode l i n g,o n e g r o u p w a sr a n d o m l y s e l e c t e da sI/R,a n dt h e o t h e r t h r e e g r o u p sw e r e d i v i d e d i n t o I G F-1s u p p l e m e n t a t i o n g r o u p,T A K-242[T o l l-l i k e r e c e p t o r 4(T L R4)/n u c l e a rf a c t o rκB(N F-κB)s u p p l e m e n t a t i o n]i n h i b i t o rs u p p l e m e n t a t i o ng r o u p a n d I G F-1a n dT A K-242s u p p l e m e n t a t i o n g r o u p.Th em y o c a r di a l i nj u r y o f r a t s i nd i f f e r e n t t r e a t m e n t g r o u p sw a s d e t e c t e db y E v a n s b l u e s t a i n i n g.T h e e x p r e s s i o n l e v e l o f I G F-1w a sd e t e c t e db y r e a l-t i m e f l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v er e v e r s e t r a n s c r i p t i o n-p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n(R T-q P C R).T h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f T L R4,N F-κB,m y e l o i d d i f f e r e n t i a t i o n p r i m a r y r e s p o n s e p r o t e i n88 (M y D88),r e c e p t o r-i n t e r a c t i n gp r o t e i nk i n a s e3(R I P K3)a n d m i x e d-l i n e a g ek i n a s ed om a i n-l i k e (M L K L)w e r ed e t e c t e db y W e s t e r nb l o t.T h ee x p r e s s i o nl e v e l so f in t e r l e u k i n-1β(I L-1β)a n d i n t e r l e u k i n-18(I L-18)w e r e d e t e c t e db y e n z y m e-l i n k e d i mm u no s o r b e n t a s s a y(E L I S A).R e s u l t s C o mp a r e dw i t h t h es h a m o p e r a t i o n g r o u p,t h em y o c a r d i a l t i s s u eo f r a t sw a ss e r i o u s l y d a m a g e d a f t e r c a r d i a c a r r e s t a n dC P R,a m o n g w h i c h t h em o d e l g r o u p h a d t h em o s t s e v e r e d a m a g e,a n d t h e I G F-1a n dT A K-242s u p p l e m e n t a t i o n g r o u p h a dt h e l e a s t s e v e r ed a m a g e.C o m p a r e dw i t hs h a m o p e r a t i o n g r o u p,t h ee x p r e s s i o n o fI G F-1i n m y o c a r d i a lt i s s u e o fr a t si n m o d e l g r o u p w a s d e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y(P<0.05).C o m p a r e dw i t hs h a m o p e r a t i o n g r o u p,t h ee x p r e s s i o n l e v e l s o f I L-1βa n d I L-18i nm y o c a r d i a l t i s s u eo fm o d e l r a t sw e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d,a m o n g w h i c h t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f I L-1βa n dI L-18w e r e t h eh i g h e s t i nt h em o d e l g r o u p a n dt h e l o w e s t i n I G F-1a n dT A K-242s u p p l e m e n t a t i o n g r o u p(P<0.05).C o m p a r e dw i t hs h a m o p e r a t i o n g r o u p, t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o fT L R4,M y D88a n dN F-κB p65i nm o d e l r a t sw e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d, a m o n g w h i c h t h e e x p r e s s i o n l e v e l sw e r e t h e h i g h e s t i n t h em o d e l g r o u p,a n d t h e l o w e s t i n I G F-1 a n dT A K-242s u p p l e m e n t a t i o n g r o u p(P<0.05).C o m p a r e dw i t h t h e s h a mo p e r a t i o n g r o u p,t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o fR I P K3a n d M L K Li n m o d e l r a t sw e r es i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d,a m o n g w h i c h t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o fm o d e l r a t sw e r e t h eh i g h e s t i n t h em o d e l g r o u p a n d t h e l o w e s t i n I G F-1 a n d T A K-242s u p p l e m e n t a t i o n g r o u p(P<0.05).C o n c l u s i o n A f t e r c a r d i a c a r r e s t a n d r e s t o r a t i o no f a u t o n o m o u s c i r c u l a t i o n,t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f I G F-1w i l l d e c r e a s e,a n d I G F-1c a n i n h i b i tn e c r o p t o s i so f m y o c a r d i a lc e l l sb y i n h i b i t i n g T L R4/N F-κBs i g n a l i n gp a t h w a y,t h e r e b y r e d u c i n g m y o c a r d i a l i n j u r y i n r a t s.[K e y w o r d s] m y o c y t e s,c a r d i a c;c a r d i o p u l m o n a r y r e s u s c i t a t i o n;n e c r o p t o s i s目前治疗心脏骤停(c a r d i a c a r r e s t,C A)的有效方法是尽早行高质量的心肺复苏(c a r d i o p u l m o n a r y r e s u s c i t a t i o n,C P R)并在适时进行除颤[1-2]㊂但出现的心脏骤停后综合征(p o s t c a r d i a c a r r e s t s y n d r o m e,P C A S)患者出院生存率仅1%[3-4],多伴有心肌损害等病理[5-7]㊂W u等[8]表明,儿茶酚胺激增可以刺激β-肾上腺素表达,引起心肌损伤㊂胰岛素样生长因子1(i n s u l i n-l i k e g r o w t hf a c t o r-1, I G F-1)能改善心肌梗死后患者的心脏功能[9],可能与调控受体相互作用蛋白激酶3(r e c e p t o r-i n t e r a c t i n gp r o t e i nk i n a s e3,R I P K3)介导的坏死性凋亡有关[10-11],而其对心肌细胞坏死性凋亡的调节作用暂未明确㊂本研究通过构建大鼠心室颤动型心脏骤停/心肺复苏(C A/C P R)模型,明确I G F-1对心肌细胞损伤的影响以及作用机制㊂1材料与方法1.1心室颤动型C A/C P R大鼠模型构建购买雄性S p r a g u e-D a w l e y大鼠(6~8个月,450~550g)30只,本实验已通过新疆医科大学第一附属医院动物伦理委员会审批,实验操作和动物处置符合实验动物伦理学标准和要求㊂所有大鼠在实验条件下(温度:22~25ħ,湿度:50%~60%,光照时间:12h)暂养10d㊂实验开始前12h禁食,可自由饮水㊂参照Z h a n g等[12]和L i n等[13]的方法构建心室颤动型C A/C P R大鼠模型,简言之,经腹腔注射戊巴比妥钠(美国S i g m a公司,45m g/k g)麻醉后,对大鼠进行气管插管和股动静脉置管等操作㊂机械通气20m i n,待动物状态稳定后记录动物基线心率和血压㊂随后,将5F冠状窦标测电极插入食管,随后㊃055㊃河北医科大学学报第45卷第5期暂停机械通气,将气管导管与呼吸机脱离,开始经食管电刺激,当心电图波形变为心室颤动或室性心动过速,血压迅速下降,C A模型建立成功标准㊂4m i n 后,开始机械通气(100%氧气),并进行C P R操作,按压频率约200次/m i n,深度约为胸廓前后径的1/3,保证胸廓充分回弹,同时静脉匀速缓慢推注肾上腺素(200μg/k g,用生理盐水稀释配制)㊂观察心电图和血压的变化,恢复R O S C时停止按压㊂C A标准:①动物心率逐渐下降;②平均动脉压(m e a na r t e r i a l p r e s s u r e,MA P)降至25mmH g(1mmH g= 0.133k P a)以下㊂R O S C标准为:①心电图恢复窦性或室上性节律;②MA P升至60mmH g以上且能维持至少10m i n㊂1.2实验干预与分组将所有大鼠随机分配为5组,按照S u n等[14]的方法对小鼠进行干预和分组,实验分组如下:①s h a m组,s h a m组大鼠在插管后48h经腹腔注射生理盐水(150μg/k g),不进行其他干预,包括C A和C P R;②C A+N C组,术前3d,通过尾静脉注射生理盐水;③C A+I G F-1组,术前3d,通过尾静脉注射I G F-1(30m g/k g);④N C+T A K-242组,术前3d,通过尾静脉注射生理盐水和T A K-242(3m g/k g;一种T L R抑制剂; S e l l e c k,U S A);⑤I G F-1+T A K-242组,术前3d,通过尾静脉注射I G F-1和T A K-242㊂1.3伊文思蓝染色为检测全身缺血-再灌注(i s c h e m i a-r e p e r f u s i o n,I/R)损伤后心肌组织损伤的程度,参照W u等[15]的研究方法,利用伊文思蓝(E v a n s b l u e,E B)染色进行检测㊂简而言之,在再灌注期结束前24h,按照5μL/g给小鼠腹膜内注射的E B染料(10m g/m L)㊂再灌注3h后,处死小鼠,利用T i s s u e-T e kO C T(S a k u r a,U S A)对心脏组织进行包埋处理,利用恒温冷冻切片机切片㊂低温切片利用i F l u o r647-麦胚凝集素缀合物复染(S o l a r b i o, C h i n a)对E B D阳性肌细胞进行定量㊂在共聚焦荧光显微镜(T C SS P8;L e i c a,G e r m a n y)下观察组织染色情况㊂1.4 R N A提取以及实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(r e v e r s e t r a n s c r i p t i o n-p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n,R T-q P C R)分析利用含有1ˑ蛋白酶抑制剂和磷酸抑制剂(T h e r m o F i s h e r S c i e n t i f i c, U S A)的裂解缓冲液(20mm o l/L T r i s-H C l,p H7.4;1%T r i t o n X-100;1m m o l/LE D T A;30m m o l/LH E P E S;50mm o l/L N a4P2O7;100mm o l/L N a F)从大鼠心脏组织中提取心肌细胞㊂使用T R I z o l试剂盒(t h e r m o s c i e n t i f i c,U S A)提取大鼠心肌细胞的总R N A,使用S u p e r S c r i p tⅣ逆转录酶试剂盒(T h e r m oF i s h e r S c i e n t i f i c,U S A)逆转录成c D N A㊂随后,利用R T-q P C R检测I G F-1的表达水平,引物如表1所示㊂表1引物序列T a b l e1P r i m e r s e q u e n c e基因名称上游引物(5'-3')下游引物(5'-3')I G F-1A G C T T T G C A G T G C C T T G C A G C A G A C G T T T A G CG A P D H A C C A G G T A T C T T G G T T G T A A C C A T G T C A G C G T G G T1.5 W e s t e r nb l o t利用W e s t e r nb l o t检测坏死性凋亡和T L R4/N F-κB信号通路相关蛋白的表达水平㊂简言之,收集组织或细胞,使用R I P A裂解缓冲液(S o l a r b i o,C h i n a)提取总蛋白,并使用B C A蛋白检测试剂盒(B e y o t i m e,C h i n a)进行定量㊂使用S D S-P A G E分离样本,并转移到P V D F膜(B i o-R a d)上㊂用含2%纯化牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(p h o s p h a t e b u f f e r s o l u t i o n,P B S)-0.05% T w e e n20在室温下封闭膜2h,并与适当的一抗一起在4ħ孵育过夜㊂本研究使用的一抗包括a n t i-R I P K3(a b286151,A b c a m)㊁a n t i-M L K L(a b243142, A b c a m)㊁a n t i-T L R4(a b217274,A b c a m),a n t i-M y D88(a b219413,A b c a m),a n t i-N F-κB(a b239882, A b c a m)和β-a c t i n(a b8226,A b c a m)㊂孵育完成后,利用P B S洗涤,并与相应的二抗在室温下孵育1h㊂再次利用P B S T洗涤后,使用增强化学发光检测系统(T h e r m o S c i e n t i f i c,U S A)和定量红外成像(F U S I O NS O L OS)对W B结果进行可视化㊂1.6酶联免疫吸附法(e n z y m e-l i n k e d i m m u n o s o r b e n ta s s a y,E L I S A)按照制造商的说明,使用E L I S A 试剂盒(R&DS y s t e m s,U S A)检测心肌组织中白细胞介素1β(i n t e r l e u k i n-1β,I L-1β)和白细胞介素18的表达水平㊂1.7统计学方法应用G r a p h p a d8.0统计软件分析数据㊂计量资料采用t检验㊁单因素方差分析㊁S N K-q检验㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1I G F-1对心肌损伤的影响为探究I/R对心肌损伤的影响,本研究构建了心室颤动型C A/C P R 大鼠模型,随后利用E B染色验证大鼠心肌损伤的情况㊂结果显示,与s h a m组相比,C A/C P R组大鼠的心肌损伤明显(图1)㊂本研究利用R T-P C R对大鼠心肌细胞内I G F-1的表达水平进行检测㊂结果显示,与s h a m组相比,C A/C P R大鼠体内的I G F-1的表达水平显著降低(P<0.05)㊂为验证I G F-1对㊃155㊃河北医科大学学报第45卷第5期I/R大鼠的影响,向C A/C P R大鼠注射I G F-1,结果显示,与C A+N C组相比,C A+I G F-1组的心肌损伤情况显著降低(图1)㊂综合以上结果可以看出,当出现I/R时,大鼠体内I G F-1的表达水平降低,心肌组织会出现损伤,当补充I G F-1时,大鼠心肌损伤明显减轻㊂2.2I/R与T L R4/N F-κB信号通路和坏死性凋亡之间的关系利用W B和E L I S A进行检测㊂结果显示,与C A+N C组相比,C A+I G F-1组中T L R4/ N F-κB信号通路相关蛋白T L R4㊁髓样分化因子(m y e l o i dd i f f e r e n t i a t i o n p r i m a r y r e s p o n s e p r o t e i n 88,M y D88)和N F-κB的表达水平显著升高(图2A)㊂不仅如此,炎症相关蛋白I L-1β和I L-18的表达水平也呈现上升的状态(表2,图2B;P<0.05)㊂为探究I/R中T L R4/N F-κB信号通路对细胞坏死性凋亡的影响,本研究利用W B检测坏死性凋亡相关蛋白的表达水平㊂结果显示,与C A+N C组相比,C A+I G F-1组中R I P K3㊁混合谱系激酶域样蛋白(m i x e d-l i n e a g e k i n a s e d o m a i n-l i k e,M L K L)的表达水平显著升高(图2)㊂图1I G F-1对I/R大鼠心肌损伤的影响F i g u r e1E f f e c t o f IG F-1o nm y o c a r d i a l i n j u r y i n I/Rr a t s表2C A/C P R大鼠体内的I G F-1表达水平T a b l e2I G F-1e x p r e s s i o n l e v e l s i nC A/C P Rr a t s(n=6,x-ʃs)组别I G F-1s h a m0.99ʃ0.15I/R0.81ʃ0.12t值2.295P值0.045图2T L R4/N F-κB信号通路对C A/C P R大鼠心脏的影响A.不同分组大鼠心肌组织坏死性凋亡以及T L R4/N F-κB信号通路相关蛋白的表达水平;B.坏死性凋亡相关蛋白的表达水平F i g u r e2E f f e c t o f T L R4/N F-κBs i g n a l i n gp a t h w a y o nt h eh e a r t o f C A/C P R r a t s表3炎症相关蛋白I L-1β和I L-18的表达水平T a b l e3E x p r e s s i o n l e v e l s o f i n f l a m m a t i o n-r e l a t e dp r o t e i n I L-1βa n d I L-18(n=6,x-ʃs,n g/L)组别I L-1βI L-18s h a m组22.54ʃ4.2617.36ʃ3.84C A+N C组64.28ʃ7.82*36.05ʃ5.27*C A+I G F-1组40.62ʃ5.35*#24.12ʃ4.83#F值73.07824.481P值<0.001<0.001*P值<0.05与s h a m组比较#P值<0.05与C A+N C组比较(S N K-q检验)2.3I G F-1通过T L R4/N F-κB信号通路促进大鼠心肌细胞的坏死性凋亡为探究I G F-1与T L R4/ N F-κB信号通路以及心肌细胞坏死性凋亡之间的关系,本研利用I G F-1和T L R4抑制剂处理C A/ C P R大鼠模型㊂E B染色结果显示,不同处理组之间大鼠心肌损伤的情况表现差异,与C A+N C组相比,N C+T A K-242㊁I G F-1+T A K-242和I G F-1+ T A K-242组的心肌损伤情况明显减轻(图3A)㊂W B结果显示,与C A+N C组相比, N C+T A K-242㊁I G F-1+T A K-242和I G F-1+ T A K-242组的R I P K3;M L K L㊁T L R4㊁M y D88㊁N F-κB p65的表达显著降低(图3B)㊂利用E L I S A 检测炎症相关蛋白表达水平与C A+N C组相比, N C+T A K-242㊁I G F-1+T A K-242和I G F-1+ T A K-242组中I L-1β和I L-18的表显著降低,见表4㊂这一结果显示,利用T L R4/N F-κB信号通路抑制剂处理大鼠,可以显著抑制心肌细胞的坏死性凋亡,而提高I G F-1的表达水平同样可以抑制T L R4/ N F-κB信号通路㊂㊃255㊃河北医科大学学报第45卷第5期图3I G F-1通过抑制T L R4/N F-κB信号通路调节的坏死性凋亡减轻I/R引发的心肌损伤A.不同分组大鼠C A/C P R后心肌损伤情况;B.T L R4/N F-κB信号通路以及坏死性凋亡相关蛋白的表达水平F i g u r e3IG F-1r e d u c i n g m y o c a r d i a l i n j u r y i n d u c e db y I/R b y i n h i b i t i n g T L R4/N F-κB s i g n a l i n gp a t h w a y-r e g u l a t e dn e c r o p t o s i s表4I L-1β和I L-18的表达水平T a b l e4E x p r e s s i o n l e v e l s o f I L-1βa n d I L-18(n=6,x-ʃs,n g/L)组别I L-1βI L-18C A+N C组62.36ʃ7.3536.85ʃ4.07C A+I G F-1组37.53ʃ4.28*26.19ʃ2.74*N C+T A K-242组35.17ʃ4.02*30.84ʃ3.08*# I G F-1+T A K-242组32.62ʃ3.18*24.77ʃ2.65#әF值46.17017.553P值<0.001<0.001*P值<0.05与C A+N C组比较 #P值<0.05与C A+I G F-1组比较 әP值<0.05与N C+T A K-242组比较(S N K-q检验)3讨论I G F-1在保护心脏㊁预防心脏损伤方面起着重要的作用,其机制可能是通过调控一些信号通路来发挥作用㊂研究证实,I/R会影响T L R4/N F-κB信号通路[16],且T L R4/N F-κB信号通路与炎症因子的表达密切相关㊂另有研究表明,T L R4/N F-κB信号通路与细胞的坏死性凋亡显著相关[17]㊂一项研究证实,三碘甲状腺原氨酸T3可以通过激活I G F-1,从而介导磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路来保护心肌细胞免受H/R诱导的损伤[18]㊂本研究对C A/C P R大鼠心肌细胞中的I G F-1的表达水平进行检测,发现I/R后大鼠心肌组织中的I G F-1表达水平显著降低㊂E B染色结果也显示,大鼠心肌组织较为严重的损伤㊂为验证I G F-1在心肌损伤中的作用,构建了补充I G F-1的C A/C P R大鼠模型,E B 染色结果显示,大鼠的心肌损伤缓解㊂以上研究结果可以看出,大鼠经历C A后,心脏的I/R会抑制I G F-1的表达,而补充I G F-1可以有效缓解I/R给大鼠心脏带来的心肌损伤㊂心脏由于I/R出现心肌损伤,导致大量炎性因子出现,其紧密黏附于血管内皮细胞,损伤血管内皮[19]㊂T L R4在心肌细胞和微血管内皮细胞中高度表达,能够通过M y D88依赖性途径促进干扰素β的表达并激活N F-κB[20]㊂在缺血㊁缺氧等条件下,磷酸化的T L R4增加,T L R4被激活,进一步提高N F-κB的磷酸化,激活T L R4/N F-κB通路,从而增加炎性因子的含量[21-23]㊂L u o等[24]研究表明,人参皂苷R g1可以通过抑制T L R4/N F-κB/N L R P3信号轴,减轻脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和炎症㊂本研究对心脏骤停后R O S C大鼠的心肌组织进行检测,发现心肌组织中T L R4/N F-κB信号通路相关蛋白的表达量显著升高,而补充I G F-1的大鼠T L R4/N F-κB信号通路相关蛋白的表达量虽然依旧呈现升高状态,但其上升幅度显著低于未补充组㊂以上结果表明,I G F-1可以显著抑制C A/C P R大鼠心肌细胞中T L R4/N F-κB信号通路的激活㊂既往研究表明,心肌缺血可以通过激活坏死性凋亡相关相通路引发心肌损伤㊂据报道,c i r c R N A C N E A C R通过促进F o x a2的表达,抑制了心肌细胞中R I P K3的表达水平,从而抑制R I P K3介导的坏死性凋亡,改善I/R损伤心脏的心脏功能[25]㊂此外T L R4/N F-κB信号通路在介导细胞坏死性凋亡中的作用也不可忽视,Y u等[26]研究表明,K l o t h o可以通过T L R4/N F-κB信号通路减弱血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞坏死性凋亡㊂本研究对I/R大鼠心肌组织进行检测,发现心肌组织中T L R4/N F-κB信号通路相关蛋白表达量升高的同时,坏死性凋亡标志蛋白R I P K3和M L K L的表达量也明显升高㊂这些结果表明,由于I/R的出现,激活了T L R4/ N F-κB信号通路,引发心肌细胞进行坏死性凋亡,从而造成心肌损伤㊂综上所述,I/R会抑制心肌组织中I G F-1的表达,而I G F-1可以通过抑制T L R4/N F-κB信号通路,从而抑制C A/C P R大鼠心肌细胞的坏死性凋亡㊂这是首次证明I G F-1与T L R4/N F-κB信号通路之间的作用关系,及其诱导心肌细胞坏死性凋亡中作用机制㊂但本研究尚未探究I G F-1在心肌损伤中的下游调控基因,同时其与心肌细胞坏死性凋亡之间暂不清楚㊂在未来的研究中,将进一步完善㊃355㊃河北医科大学学报第45卷第5期I G F-1/T L R4/N F-κB信号轴通过引发心肌细胞坏死性凋亡导致C A/C P R患者心肌损伤的作用机制,为验证I G F-1在减轻C A/C P R患者心肌损伤提供理论依据㊂[参考文献][1] H e n s o n T,R a w a n d u z y C,S a l a z a r M,e ta l.O u t c o m ea n dp r o g n o s t i c a t i o na f t e rc a r d i a ca r r e s t[J].A n n N Y A c a dS c i2022,1508(1):23-34.[2] P a n c h a lA R,B a r t o s J A,C a b a n a s J G,e t a l.P a r t3:A d u l t b a s i ca n da d v a n c e dl i f es u p p o r t:2020A m e r i c a nh e a r ta s s o c i a t i o ng u i d e l i n e s f o rc a r d i o p u l m o n a r y r e s 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miR-141-3p通过调节Keap1-NRF2
实验研究miR-141-3p通过调节Keap1-NRF2/ARE信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化的影响龙光文，张谦，杨秀林，孙鸿鹏，吉春玲摘要：目的探讨miR-141-3p对急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠肺纤维化的影响及作用机制。
方法将大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、agomir-NC组、miR-141-3p agomir组，每组10只；除对照组外，其余大鼠采用脂多糖（LPS）滴注法构建ARDS模型；将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN细胞分为NC组、LPS组、miR-NC组、miR-141-3p mimics组、miR-141-3p mimics+pcDNA组、miR-141-3p mimics+NRF2与Kelch样环相关蛋白1（Keap1）组，除NC组外，其余各组建立LPS细胞模型；qPCR检测肺组织和细胞中miR-141-3p、Keap1mRNA表达；Western blot检测肺组织和细胞上皮型钙黏附素（E-cadherin）、神经型钙黏附素（N-cadherin）、微管相关蛋白轻链3B（LC3B）、自噬相关基因Beclin-1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）、Keap1、核因子E2相关因子2（NRF2）、血红素氧合酶1（HO-1）表达；HE和Masson染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分和肺纤维化面积评分；试剂盒检测肺组织羟脯氨酸（Hyp）；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎性因子白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α和氧化应激指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；双萤光素酶报告实验验证miR-141-3p与Keap1靶向关系。
结果ARDS大鼠肺组织和细胞中miR-141-3p表达下调，Keap1表达上调（P＜0.05）；过表达miR-141-3p可降低大鼠肺组织病理损伤和纤维化程度、Hyp含量，上调肺组织和细胞中SOD、E-cadherin、LC3B、Beclin-1、NRF2、HO-1表达，下调IL-1β、TNF-α、MDA、N-cadherin、α-SMA、Col-Ⅰ、Keap1表达（P＜0.05）；过表达Keap1可逆转过表达miR-141-3p对ARDS大鼠肺泡上皮细胞损伤的改善作用（P＜0.05）；双萤光素酶报告基因实验证实miR-141-3p与Keap1可能存在靶向调控关系。
有氧运动对大鼠白细胞介素IL-1的影响
ｗｅ ｋ ｃ ｎ ｔｎｔｌａ ｅ ｏ ｉ ｔｍｉ ａ ｅ ｅ ｃｓ ｅ ｏ ｓａ ｏ ｄ ａ ｒ ｂ ｃ ｓａ ｎ ｘ ｒ ｉｅ．ｅ ｃ ｐ ｏ Ｋ 一３Ｈ ｎ ｔ ｅ ｔ ｉｄ ｗｅ ｋ，ｔ ｅ ＬＩ— ｌ ｅ ｅ ｆｔ ｅ ｏ ｅ ｘ ｅ ｔｆ ｒ Ｗ ｉ ｈ ｒ ｅ ｈ ｈ ｌｖ ｌｏ ｈ ｔ ｒ ｈ
次急性运动后 即刻组大 鼠与安静对照组相 比， ＷＫ—Ｂ组血清 Ｉ Ｌ一１水平 显著 升高 （ ０ ０ ） 而 ＷＫ一３ Ｐ＜ ． １ ， Ｈ组 Ｉ Ｌ一１的水平 虽有下 降（ Ｐ＜０ ０ ） 但仍然高 于 ＷＫ—Ｒ组 （ ００ ） ２ ４周恒定负荷有 氧耐力运动 ， ．５ ， Ｐ＜ ．５ 。（ ） 除第三周运动 ３小时宰杀组 外 ，Ｌ一１的水平在 Ｉ 其他 ４周各组都呈现 出“ 一升 一降 ” 升 的趋 势 ， 在第三周有明显上升 ， 四周 达到最高峰 。 第 关键词 ： 有氧运动 ； 白细胞介素 １免疫 ； ； 细胞 因子
ｇ ｏ ｐ ｈ ｗｓ ｔ ｅ ｔ ｎ ｅ ｃ ｆ”ｒｓｎ ｒ ｕ ｓ ｓ ｏ ｈ ｅ ｄ ｎ ｙ ｏ ｉｉ ｇ—ｒｓｎ ｉ ｉ ｇ—ｆ ｌｉ ” ｆ ｒ ｔ ｅ ｒ ｓ ｆｔ ｅ ｆｕ ｅ ｓ．ｒｓｎ ｈ ｒ ｌ ｎ ｔ ｅ ｔ ｉｄ ｗｅ ｋ ａｌ ｎｇ ｏ ｅ ｔｏ ｏ ｒ ｗｅ ｋ ｉ ｉ ｇ ｓ ａ ｐ ｙ ｉ ｈ ｈｒ ｅ ｈ ｈ ａ ｄ ｒ ａ ｈｉ ｈ ａ ｎ ｔ ｅ ｆ ｕ ｔ ｅ ｎ ｅ ｃ ｎｇ ｔ ｅ ｐｅ ｋ ｉ ｈ ｒｈ ｗｅ ｋ． ｏ
赵 子 建
（ 州大 学体 育 系 ， 南 郑 州 ４ ００ ） 郑 河 ５０ １
摘要 ： 以雄性 ３月 龄大 鼠为实验对象 ， 随机分 为安静对照组 （ ＷＫ—Ｒ） 运动前 即刻宰杀组 （ ， ＷＫ—Ｂ ， ） 运动后 即刻宰杀组 （ ＷＫ— Ａ） 和运动后 ３小时宰杀 组（ ＷＫ一３ ， Ｈ） 采用恒定负荷 跑台运 动方式 ， 运动 时间分为 一次性运 动和 ４周有氧 耐力运动 。结果 ： １ 一 （）
白细胞介素-1β(IL-1β)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)及核转录因
白细胞介素-1β（IL-1β）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）及核转录因子-κB（NF-κB）联合检测在鼻息肉组织中的表达及价值评价发表时间：2018-04-13T14:19:27.210Z 来源：《航空军医》2018年3期作者：屈斌[导读] 鼻息肉作为耳鼻喉常见炎症之一，有研究表明[1]，该病症发病率为0.2%-4.3%，且具有较难治愈，病情易反复等特点.（湖南省肿瘤医院/中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院湖南长沙 410009）摘要：目的研究白细胞介素-1β（IL-1β）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）及核转录因子-κB（NF-κB）联合检测在鼻息肉组织中的表达及价值评价。
方法选取2016年7月至2017年10月在我院进行治疗的51例鼻息肉患者作为研究组，同时选取2016年10月至2017年10月在我院行鼻中隔矫正术康复的50例患者作为健康组，比较其EOS浸润情况及白细胞介素-1β（IL-1β）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）及核转录因子-κB（NF-κB）水平。
结果研究组患者EOS浸润阳性率为62.75%，显著高于健康组的16.00%，（P＜0.05）。
同时可观察到，研究组切片表现为上皮增生，且出现少量复层临床上皮细胞，同时间质出现水肿症状，且研究组患者白细胞介素-1β（IL-1β）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）及核转录因子-κB（NF-κB）检测阳性率分别为88.24%、80.39%及76.47%，且均显著高于健康组相应水平（P＜0.05）。
结论IL-1β、MIF及NF-κB可能在一定程度上参与鼻息肉的发生及发展，对存在相应症状的患者进行以上指标的检测，能够帮助医务人员更好的对该疾病进行诊断，值得推广。
关键词：IL-1β；MIF；NF-κB；鼻息肉Expression and value of interleukin-1 β，macrophage migration inhibitory factor（MIF-）and nuclear transcription factor-κ-κ-κ B in nasal polyps[Abstract] Objective to study the expression and value of IL-1 beta，MIF and NF- kappa B in nasal polyps. Methods from July 2016 to October 2017 were 51 cases of nasal polyps were treated in our hospital as the study group，and selected 50 cases from October 2016 to October 2017 in our hospital underwent nasal septum surgery rehabilitation patients as healthy group，compare the EOS and infiltration of IL-1 beta，MIF，NF- kappa B level. Results the positive rate of EOS infiltration in the study group was 62.75%，which was significantly higher than that in the healthy group（16%，P < 0.05）. At the same time can be observed，slicing research group showed epithelial hyperplasia，and appeared a little complex clinical layer of epithelial cells，and interstitial edema symptoms，and the patients in the study group，the positive rate of MIF NF- kappa B and IL-1 beta test were 88.24%，80.39% and 76.47%，and were significantly higher than those in healthy group（P < the corresponding level 0.05）. Conclusion IL-1 beta，MIF and NF- kappa B may be involved in the occurrence and development of nasal polyps to some extent. Detection of these indicators for patients with corresponding symptoms can help medical personnel to diagnose the disease better，and it is worth promoting.[Keywords] IL-1 beta；MIF；NF- kappa B；nasal polyps鼻息肉作为耳鼻喉常见炎症之一，有研究表明[1]，该病症发病率为0.2%-4.3%，且具有较难治愈，病情易反复等特点，对患者日常生活及身心状态具有严重影响。
白细胞介素-1β在病理性疼痛大鼠脊髓LTP中的作用及机制
白细胞介素-1β在病理性疼痛大鼠脊髓LTP中的作用及机制钟祎n;黄阳亮;许继德【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2012(028)003【摘要】目的:探讨白细胞介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角C纤维诱发电位长时程增强(long-term potentiation,LTP)中的作用及其机制.方法:用坐骨神经部分损伤(spared nerve injury,SNI)和腰5前根切断(lumbar 5 ventral root transection,L5 VRT)方法复制大鼠病理性疼痛模型,观察外源性IL-1β对正常大鼠及病理性疼痛模型大鼠脊髓背角C纤维诱发电位的影响,并且检测p38 MAPK (p38 mitogen-activated protein kinase)和NF-κB (nuclear factor-kappa B)信号通路在其中的作用.结果:500 μg/L IL-1β对正常大鼠C纤维介导的基本突触传递和高频刺激诱导的LTP都没有影响,而5 μg/L的IL-1β可以在神经病理性疼痛模型的大鼠上诱导出LTP.预先用p38 MAPK或NF-κB 的抑制剂(SB203580或PDTC)可以完全阻断IL-1β诱导的LTP.结论:外源性IL-1β可诱导神经病理性疼痛大鼠脊髓背角C纤维诱发电位的LTP.p38 MAPK和NF-κB 信号通路可能参与这一过程.【总页数】5页(P541-545)【作者】钟祎n;黄阳亮;许继德【作者单位】广州医学院生理教研室,广东,广州,510182;中山大学附属第一医院脊柱外科,广东,广州,510700;广州医学院生理教研室,广东,广州,510182【正文语种】中文【中图分类】R338【相关文献】1.电针降低神经病理性疼痛大鼠脊髓白细胞介素-6的表达 [J], 孙涛;宋文阁;姚尚龙;傅志俭2.酪氨酸家族激酶在大鼠脊髓背角LTP中的作用及其机制 [J], 钟祎n;黄阳亮;许继德3.脊髓白细胞介素-10/β-内啡肽通路抑制幼年大鼠神经病理性疼痛 [J], 唐雪琪;卢金淼;毛晓芳;王永祥4.脊髓白细胞介素-10/β-内啡肽通路抑制幼年大鼠神经病理性疼痛 [J], 唐雪琪;卢金淼;毛晓芳;王永祥;5.从大鼠脊髓背角Iba1的表达探讨天麻素对化疗诱导神经病理性疼痛的作用及其机制 [J], 宫登辉;郑卫红;罗妮;汤桂成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠维生素 K1(VK1)酶联免疫吸附测定试剂盒说明书
大鼠维生素K1（VK1）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究研究使用预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中Vitamin K1含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中维生素K1水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入维生素K1抗原、生物素化的抗大鼠维生素K1抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的维生素K1呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，其浓度为10ng/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成10ng/mL，5ng/mL，2.5ng/mL，1.25ng/mL，0.625ng/mL，0.312 ng/mL，0.16ng/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/mL，临用前15分钟内配制。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以抗体稀释液A1：100稀释。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以抗体稀释液B1：100稀释。
8.底物溶液：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
标本的采集及保存1．细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
2．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17和IL-23在精神分裂症患者血清中的表达及其临床应用价值
IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17和IL-23在精神分裂症患者血清中的表达及其临床应用价值李泽兵;李冬;杨雪松;孙祖俊;林萍;王峰;林斐然;徐筱;谢红涛【摘要】目的研究精神分裂症患者血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-17和IL-23水平变化及其在精神分裂症中的辅助诊断价值.方法选取85例精神分裂症患者(病例组),以85名体检健康者作为正常对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2个组的血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17和IL-23水平,比较病例组药物治疗前、治疗3个月末的变化.采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清细胞因子对精神分裂症的辅助诊断价值.采用Pearson相关分析评价细胞因子水平与阳性和阴性症状量表(PANSS)评分之间的相关性.结果病例组治疗前血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17、IL-23水平高于正常对照组(P<0.01).病例组治疗3个月末的血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17和IL-23水平均低于治疗前(P<0.01),与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).ROC曲线分析显示,IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17、IL-23辅助诊断精神分裂症的曲线下面积(AUC)分别为0.723、0.772、0.686、0.685、0.679.IL-1β、IL-17、IL-23与PANSS总分、阳性症状评分、一般精神病理学症状评分、攻击危险性评分均呈正相关(P<0.05),TNF-α与阳性症状评分呈正相关(P<0.05),而IL-6与PANSS总分、阴性症状评分呈正相关(P<0.05).结论精神分裂症患者存在IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17和IL-23的激活.血清细胞因子在精神分裂症的辅助诊断中有一定的价值,且与临床症状具有相关性.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2018(033)008【总页数】5页(P697-701)【关键词】细胞因子;精神分裂症;辅助诊断;临床症状【作者】李泽兵;李冬;杨雪松;孙祖俊;林萍;王峰;林斐然;徐筱;谢红涛【作者单位】上海市普陀区精神卫生中心,上海 200065;同济大学附属同济医院,上海 200065;同济大学医学院,上海 200092;同济大学附属同济医院,上海 200065;上海市精神卫生中心,上海 200030;上海市普陀区精神卫生中心,上海 200065;上海市临床检验中心,上海 200126;上海市普陀区精神卫生中心,上海 200065;上海市普陀区精神卫生中心,上海 200065【正文语种】中文【中图分类】R446.62精神分裂症是一类常见的精神症状复杂、至今未明确病理基础的重性精神障碍，多起病于青年或成年早期，具有知觉、思维、情感、认知、行为及社会功能等多方面的障碍和精神活动不协调[1]。
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大鼠白细胞介素1（IL IL--1）酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，细胞上清及相关液体样本中白细胞介素1（IL-1）的含量。
实验原理实验原理：：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白细胞介素1（IL-1）水平。
用纯化的大鼠白细胞介素1（IL-1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素1（IL-1），再与HRP 标记的白细胞介素1（IL-1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素1（IL-1）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞介素1（IL-1）浓度。
试剂盒组成试剂盒组成：试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：180ng/L 0.5ml ×1瓶 0.5ml ×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 1.5ml ×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 显色剂A 液 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 显色剂B 液 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml ×1瓶6ml ×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液（20ml ×20倍）×1瓶（20ml ×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS （PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml 左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS ，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS （PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤操作步骤：：1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100µl ，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl ，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100µl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl 弃掉，再各取50µl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50µl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl ，混匀后从第七、第八孔中分别取50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl ，混匀后从第九第十孔中各取50µl 弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50µl ，浓度分别为120 ng/L ，80ng/L ，40 ng/L ，20ng/L ，10 ng/L ）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl ，然后再加待测样品10µl （样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T 的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl ，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl ，再加入显色剂B50µl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50µl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项注意事项：：1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算计算：：以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释 倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值 代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）试剂盒性能试剂盒性能：：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围检测范围：： 8ng/L -150ng/L 保存条件及有效期保存条件及有效期：： 1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月Rat interleukin 1FOR RESEARCH USE ONLYDrug NamesGeneric Name：Rat interleukin (IL-1) ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of IL-1 concentrations in Rat serum, cell culture supernatant and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Rat IL-1 level in the sample，use Purified Rat IL-1 antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add IL-1 to wells, Combined IL-1 antibody which With HRP labeled,become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of IL-1 in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitMaterials provided withthe kit48determinations96 determinations Storage User manual 1 1Closure plate membrane 2 2Sealed bags 1 1Microelisa stripplate 1 1 2-8℃Standard：180ng/L 0.5ml×1 bottle0.5ml×1 bottle2-8℃Standard diluent 1.5ml×1 bottle 1.5ml×1 bottle2-8℃HRP-Conjugate reagent3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Sample diluent3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Chromogen Solution A3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Chromogen Solution B3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Stop Solution3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃wash solution （20ml×20 fold）×1bottle（20ml×30 fold）×1bottle2-8℃Specimen requirements1.serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.5.Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidlyfrozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）,Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100µl to the first and the second well, then add Standard dilution 50µl to the first and the second well, mix; take out 100µl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50µl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50µl from the third and the forth well discard, add 50µl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50µl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50µl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50µl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50µl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50µl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50µl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50µl to each well after Diluting ,(density: 120 ng/L，80ng/L ，40 ng/L，20ng/L，10 ng/L)2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40µl to testing sample well, then add testing sample 10µl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50µl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50µl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateAssay range8ng/L -150ng/LStorage and validity1．Storage ： 2-8℃. 2．validity ： six months.Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.This chartis for reference only。