生物发光技术在生命科学中的应用
生物发光技术的研究及其应用
生物发光技术的研究及其应用生物发光技术指的是生物体在代谢过程中产生并发射光线的现象和方法,是生命科学和材料科学的重要交叉领域。
生物发光技术不仅在基础科学的研究中有着广泛的应用,还在医学、环境监测、食品安全等领域具有重要意义。
生物发光的原理生物发光是一种特殊的光化学反应,由叶酸辅酶和氧化还原酶催化作用产生。
生物发光的过程可以概括为以下几个步骤:首先,叶酸辅酶(FMN)和荧光素(Lum)在存在氧气和氧化还原酶的条件下结合,形成激活态的过氧化氢酶(POD)。
其次,POD通过氧化还原作用将近似白噪声的电子加速运动,产生可见光谱范围内的激发光线(420-480nm)。
最后,荧光素反应总光强到达最大值时释放出来,荧光素释放的光子被检测到,形成发光现象。
生物发光技术的应用生物发光技术在实际应用中有着广泛的应用。
以下是其中几个方面的应用:1. 医学使用在医学方面,生物发光技术可以用于病毒和细菌诊断,对于某些细菌和病毒,只需加入荧光素或一些与之反应的物质,就可以通过其释放的荧光检测这些生物的存在。
同时,生物发光技术也被广泛应用于免疫学中。
可以使用荧光素标记特定抗体,以便检测免疫反应中指定的患者抗原是否存在。
2. 环境监测生物发光技术用于检测水和气体中的污染物现已成为环境监测的一个重要方法。
仪器能够检测水或空气样品中的污染物含量,这些污染物可以是地下水混污、生物污染以及化学污染物等等。
3. 食品安全生物发光技术在食品安全方面应用也非常广泛。
可以利用这一技术进行快速检测,例如快速检测水产中的重金属是否超标,或者检测牛奶中是否含有菌群等。
总的来说,生物发光技术因其灵敏度高、快速、方便等优势而在各个领域中得到广泛应用。
未来随着科技的不断发展,相信生物发光技术的研究和应用会变得更加广泛和深入。
生物发光技术在荧光成像和分析中的应用前景
生物发光技术在荧光成像和分析中的应用前景近年来,生物发光技术在荧光成像和分析领域取得了巨大的发展,并且在生物医学、生命科学及化学领域中展现出了广阔的应用前景。
生物发光技术以其高度敏感、无损伤、高时空分辨率等优点,成为了生物学研究中不可或缺的重要工具之一。
本文将探讨生物发光技术在荧光成像和分析中的应用前景,并分析其存在的挑战和发展方向。
生物发光技术在荧光成像方面的应用非常广泛。
通过利用荧光探针和生物体的发光属性,可以实现对生物体内各种生理过程的高效监测和可视化。
例如,生物发光技术可以用于细胞内信号转导通路的研究。
研究人员可以将荧光标记分子与目标信号分子结合,通过观察其发光强度的变化来研究细胞信号传递过程。
此外,生物发光技术还可以用于探索细胞器间的相互作用及细胞内分子的运动轨迹等。
通过标记不同的细胞组分,可以用生物发光技术来观察细胞器的分布、形态和互作情况。
另外,生物发光技术还可用于研究细胞分裂、细胞凋亡、蛋白质合成和代谢等生命过程。
因此,生物发光技术在荧光成像方面的应用能够为生命科学领域的研究提供深入理解生物体结构与功能的手段。
除了荧光成像,生物发光技术在分析方面也具有广泛的应用前景。
生物发光技术可以用于荧光标记的定量分析,从而实现对样品中特定分子的快速检测和定量测量。
例如,生物发光蛋白质标记法可以用于检测特定蛋白质的存在和相对表达水平。
通过构建适当的报告基因和荧光标签,可以对细胞中的蛋白质进行高灵敏度的定量检测。
此外,生物发光技术还可用于研究生物体内的药物代谢和药物传递。
通过在药物分子上连接荧光探针,可以实现对药物在生物体中的代谢途径和转运动态的监测。
这对于新药的开发和药物传递系统的设计至关重要。
生物发光技术在分析领域的应用也将为生物医学和化学领域的研究提供了新的思路和工具。
然而,尽管生物发光技术在荧光成像和分析中的应用前景非常广阔,但仍面临一些挑战。
首先,生物发光技术的灵敏度和分辨率还有进一步提高的空间。
生物发光技术在荧光显微镜中的应用
生物发光技术在荧光显微镜中的应用荧光显微镜是分子细胞生物学研究的重要工具,其基本原理是利用特定的荧光染料标记生物分子,通过激发荧光染料的发光来观察样品中的生物分子分布、形态、数量和活动状态等信息。
然而,传统荧光染料存在着染色不均匀、互相干扰、光漂白等问题,限制了荧光显微镜的应用范围。
随着生物发光技术的发展,越来越多的研究者开始利用发光生物体系作为荧光标记,取得了许多有趣的研究进展。
本文将介绍生物发光技术在荧光显微镜中的应用,包括发光蛋白、荧光素、纳米颗粒等。
发光蛋白发光蛋白是指能够在生物体内或外发出荧光的蛋白质分子,具有快速、无需添加荧光染料等优点。
其中最为常用的是来自于水母的荧光蛋白,如绿色荧光蛋白(GFP)、黄色荧光蛋白(YFP)、红色荧光蛋白(RFP)等。
发光蛋白是通过在它们的空间构象中纳入芳环結構来发光的。
芳环结构跨越了α螺旋和β折叠的氨基酸残基,形成带有共轭双键的色团。
在发光状态下,芳环结构的π轨道与相邻的基团相互作用形成自旋极化态,随着自旋松弛,碳氧双键形成共振结构,最终将电子激发至高能级,进而脱离体系形成荧光。
发光蛋白的研究发展经历了不断的改进和优化,包括产生多种颜色变异体、改善抗性等。
目前已经广泛应用于各种生物领域中,如细胞标记、蛋白质交互作用研究、基因表达调控等。
在荧光显微镜中,发光蛋白分子可以直接标记蛋白质、细胞结构等,形成高亮度、无毒性的荧光信号,帮助研究者观察和追踪细胞生命周期、活动过程等。
荧光素荧光素是自然界中广泛存在的一类发光物质,具有自发性荧光的特性。
荧光素分子由苯并噁唑环和苯环构成,其中苯并噁唑环通过与苯环形成氢键,形成电荷转移络合物稳定荧光态。
荧光素分子广泛存在于生物界中,如萤火虫、柿子、蘑菇等,是萤火虫发光的原因。
荧光素也可以通过化学合成获得,被广泛应用于生物荧光显微镜的研究中。
荧光素分子可以一次性激发多种荧光色,最常见的是蓝色荧光素、绿色荧光素和红色荧光素等。
生物发光技术在生物分析中的应用
生物发光技术在生物分析中的应用生物发光技术指的是利用生物体内或外的物质在特定条件下发出的光来进行分析的技术。
这种技术是一种非常重要的分析技术,因为它具有高灵敏度、高特异性和实时分析等优点,适用于分析多种生物分子,如蛋白质、核酸、酶等。
本文将介绍生物发光技术在生物分析中的应用。
一、生物发光技术在荧光检测方面的应用生物发光技术在荧光检测方面应用广泛。
荧光是生物分析中最常用的检测方法之一。
它适用于许多生命科学领域,例如药物研究、分子生物学、遗传学等。
荧光分析有许多种,如荧光定量PCR (qPCR)、细胞荧光检测等。
这些方法不仅灵敏度高、反应快,而且可以通过标记特定的生物分子来进行定量分析。
二、生物发光技术在化学发光检测方面的应用化学发光检测是生物发光技术的一种重要应用。
化学发光是指诱导化学反应所产生的光量,通常是利用化学反应的特异性和灵敏性来检测分析样品中的分子。
荧光检测和化学发光检测相比,虽然在灵敏性上差异不大,但是在特异性和方便性上有一定的优势。
例如,利用化学发光法检测病毒抗体、药物残留等都相当方便。
三、生物发光技术在免疫检测方面的应用生物发光技术在免疫检测领域广泛应用,包括放射性免疫学、酶联免疫吸附测定(ELISA)等。
这些技术具有高灵敏度、高特异性和快速性等优点,广泛应用于疾病的诊断和治疗。
四、生物发光技术在基因编辑方面的应用近年来,基因编辑技术飞速发展并成为热门领域。
生物发光技术在基因编辑领域也得到了广泛应用。
目前常见的基因编辑技术有CRISPR-Cas9技术。
其中,Cas9是一种蛋白酶,能够通过人工引导RNA找到特定DNA序列并将其剪切断。
利用生物发光技术,我们可以通过发射荧光信号监测到DNA序列的切割。
综上所述,生物发光技术在生物分析领域得到了广泛的应用。
随着技术的进步和发展,相信生物发光技术将在未来的生命科学领域中起到更加重要的作用。
基于发光的生物检测技术
基于发光的生物检测技术生物检测技术一直是生命科学领域的一个热门研究方向,其重要性在于帮助人们更好地了解和保护生态系统,探究人体内部生物活动信息等。
近年来,发光技术在生物检测中得到了大量应用,并且已经形成了一个完整的技术体系,成为了生命科学领域中的重要手段之一。
本文将围绕着基于发光的生物检测技术展开论述,探讨其原理、应用及未来的发展趋势。
一、发光生物检测的理论基础能够产生发光现象的物质称为发光物质,也叫做荧光剂或发光物质。
采用发光物质进行生物检测的基本原理,是将一种已知的特定分子标记为荧光物质,通过检测荧光物质的发光情况,来识别或测定样品中的生物分子。
发光生物检测系统的主要组成部分包括发光标记物、检测仪器、基质及样品等。
发光标记物是进行生物检测的重要组成部分,发光物质应满足荧光强、发射光谱窄以及抗干扰性好等特点,从而提高生物检测的准确性和灵敏度。
由于生物分子复杂性和变化性较大,对荧光标记物的选择具有很大的难度,一般使用的标记物包括有机荧光染料和荧光标记蛋白等。
检测仪器是发光检测的核心部分,其功能是通过检测发光活性物质的光谱、亮度、颜色等特征,进而确定样品中的生物分子种类、质量、浓度等信息。
随着发光生物检测技术的应用日益扩大,发光检测仪器也逐步发展出了不同类型、不同功能的仪器,以适应不同的检测需求。
二、发光生物检测技术的应用发光生物检测技术具有较强的实用性,它可以应用于生物医学、环境保护、农业及食品行业等领域。
下面就以医学领域为例,简要介绍一下发光生物检测技术的具体应用。
发光生物检测技术在医学领域中应用较广,一般用于测定体液中的特定成分,监测病情变化以及筛选药物等。
例如,在临床研究方面,通过对癌细胞标记物的检测,可早期诊断癌症,对癌症的治疗也提供了有力的基础。
在药物筛选方面,发光检测技术也可以帮助快速筛选出具有生物活性的化合物,进一步提高新药研发的效率。
三、未来发展趋势当前,发光生物检测技术已经相当成熟,但存在着需要进一步改进和完善的地方。
生物荧光知识点归纳总结
生物荧光知识点归纳总结一、荧光的基本概念1. 荧光是一种物质受到激发后发出的可见光。
2. 荧光现象是指物质在受到光激发后,吸收光能并转换成发射光能的过程。
3. 荧光现象广泛存在于生物体内,是一种重要的生物发光现象。
二、荧光发光的原理1. 荧光发光的主要原理是激发态分子从高能级跃迁到低能级时,释放出光能。
2. 荧光发光的分子通常包含有共轭结构,使得分子内的电子能级之间的能隙能够产生可见光的跃迁。
3. 不同的物质对于激发光的吸收和发射波长有不同的特性,这也决定了荧光发光的颜色不同。
三、生物荧光的产生机制1. 有机体内的荧光主要是通过特定的光敏色素或蛋白质来产生的。
2. 绿色荧光蛋白(GFP)是一种常见的生物荧光蛋白,它可以在被紫外线激发后发出绿色荧光。
3. 生物荧光的产生通常与有机体内的代谢活动有关,如氧化还原反应、光合作用等。
四、生物荧光在生命科学研究中的应用1. 生物荧光成像技术是现代生命科学中常用的一种检测手段,可以用于研究细胞的形态、功能、代谢过程等。
2. GFP标记技术是一种常用的生物荧光标记方法,可以用于追踪特定蛋白质或基因在生物体内的表达和定位。
3. 生物荧光在生命科学研究中的应用还包括分子探针的设计、荧光染料的应用等。
五、生物荧光在医学诊断中的应用1. 生物荧光在医学诊断中可以用于多种标记试剂的设计和制备,可用于检测生物标志物、病原体、药物等。
2. 荧光显微镜成像技术可以用于病理组织的检测和分析,有助于医学诊断和疾病研究。
3. 生物荧光在医学诊断中的应用还包括荧光免疫分析、荧光原位杂交等技术。
六、荧光振荡1. 荧光振荡是一种特殊的荧光现象,是指在荧光物质中产生连续的吸收和发射光能的现象。
2. 荧光振荡可以在受到激发光照射后持续产生,并且有较高的荧光效率和稳定性。
3. 荧光振荡在光学、信息传输、光电子学等领域具有广泛的应用价值。
七、荧光材料的开发与应用1. 随着科学技术的发展,荧光材料的开发与应用已经得到了广泛关注。
atp生物发光法的应用
atp生物发光法的应用
ATP生物发光法是一种用于检测生物体内ATP含量的技术,其应用广泛,包括但不限于以下几个方面:
1. 微生物检测:ATP生物发光法可以用于检测食品、医疗和废水处理等行业的微生物数量。
其原理是在有氧环境中,荧光素在荧光素酶催化和ATP作用下生成氧化荧光素,氧化荧光素发出光子,光子数量可换算成ATP的量。
2. 食品工业:ATP生物发光法可被用于检测肉类食品中细菌污染情况。
研究表明,这种方法与标准的细菌培养菌落计数法相比,具有良好的相关性。
此外,ATP生物发光法还可用于乳制品中乳酸菌的测定、啤酒中菌落总数测定、调味品及脱水蔬菜的细菌学测定等。
3. 环保行业:ATP生物发光法也可被用于废水处理过程中的微生物检测,以监测和优化废水处理的效果。
4. 医疗领域:ATP生物发光法可以用于检测和监测医疗环境中的微生物,如手术室、ICU病房等,以确保患者安全。
总的来说,ATP生物发光法是一种快速、准确、非破坏性的检测方法,可用于各种需要检测微生物含量的场合。
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生物发光与生物荧光成像技术
生物发光与生物荧光成像技术生物发光和生物荧光作为生物学研究领域中的两个重要现象,已经被广泛应用于生命科学。
通过光学显微镜等设备,科学家们可以利用这两种现象来研究细胞和生物分子的运动、变化和互动情况。
在这篇文章中,我将介绍生物发光和生物荧光的基本概念、机制和应用,以及一些现代生物荧光成像技术的发展和应用。
生物发光和生物荧光的基本概念生物发光是指一些微生物或动物体内酶促反应产生的发光现象。
比如,萤火虫体内酶促反应将氧气和荧光素转化成氧化荧光素时,会产生强烈的发光。
而生物荧光则是指一些细胞或生物分子在受到特定波长的光激发后,会放出一种较弱但持久的发光。
比如,绿色荧光蛋白(GFP)是一种存在于水母等生物中的蛋白质,它在受到紫外线激发后会放出绿色荧光。
这两种现象都源于生物体内的化学反应,但机制有些不同。
生物发光主要是通过氧化还原反应产生的,而生物荧光则是通过一系列的电子跃迁来实现的。
不同的生物体和物种会产生不同种类的发光和荧光现象,其中一些种类已经被广泛研究和应用。
生物发光和生物荧光的应用在生命科学领域中,生物发光和荧光被广泛应用于生物成像、生命活动监测、基因表达分析等方面。
比如,在药物研发中,科学家可以利用荧光蛋白标记药物或生物分子,以跟踪其运动、变化和互动情况,从而了解它们的作用机理和效果。
在生物医学领域中,医生可以利用生物荧光成像技术来观察患者内部器官或组织的情况,实现无损检测。
生物荧光成像技术的发展随着生命科学研究的推进,生物荧光成像技术也在不断发展。
其中一个重要的进展是发展了基于转录调控的荧光标记体系,被称为“基因表达报告体系”。
这种体系通过将荧光蛋白的表达和特定基因的转录调控相结合,可以实现高效的荧光标记,并可以跟踪和研究不同基因在细胞和组织中的表达和调控。
同时,随着成像技术和成像设备的不断改进,比如:双光子激发荧光显微镜、荧光内窥镜等,生物荧光成像技术也变得更加精细和准确。
总结生物发光和生物荧光是生物学研究中的两个重要现象。
生物发光技术在生命科学中的应用研究
生物发光技术在生命科学中的应用研究生物发光技术是指利用生物体内产生的发光反应,将其应用于生命科学研究中的一种技术手段。
生物发光技术的应用范围非常广泛,包括生物分子的检测、生物荧光成像、生物传感器等。
下面将介绍一些具体的应用研究。
第一,生物分子的检测。
生物分子包括蛋白质、核酸、糖等,其检测是生命科学研究的基础。
利用生物发光技术可以实现高灵敏、高通量的生物分子检测,具有灵敏度高、特异性好、不需标记等优点。
例如,利用基于生物发光的微纳米纤维传感器能够实现对蛋白质、糖等分子进行灵敏度极高的检测,并有望应用于生物医学检测和环境监测领域。
第二,生物荧光成像。
生物荧光成像是通过对生物体内产生的荧光进行观察,获得生物样本的相关信息。
利用生物发光技术,可以实现对细胞、细胞器等生物体内结构的成像,从而深入研究其功能及生理过程等。
比如,荧光素酶标记的细胞能够在体外或体内形成荧光成像,利用生物发光技术可以对细胞、生物分子等进行成像,并从不同方面深入研究生物体的组织结构、功能、代谢等信息。
第三,生物传感器。
生物传感器是指能够通过生物发光反应对指定物质进行检测的传感器。
利用生物发光技术,可以开发出基于生物发光的传感器,这种传感器具有检测灵敏度高、反应时间快、可重复使用等特点。
例如,基于生物发光技术开发的葡萄糖传感器能够实现对血液中葡萄糖浓度的实时监测,这对于糖尿病患者的治疗具有重要的临床意义。
总之,生物发光技术在生命科学中的应用研究尚有很多方向需要探索,在生物分子的检测、生物荧光成像、生物传感器等方面都有着广泛的应用前景和研究价值。
未来生物发光技术的发展将更加智能化、高效化,对于生命科学的发展和人类健康事业的推进将起到重要的作用。
生物发光技术在生命科学研究中的应用
生物发光技术在生命科学研究中的应用生物发光技术是一种重要的生物化学检测技术,它通过植物、动物等生物体中的化学反应,来产生漂亮的荧光或发光分子,以实现对生物分子或代谢活动的检测。
生物发光技术广泛应用于生命科学领域,如药物研发、基因表达、蛋白质纯化、细胞活性检测、免疫学研究等方面。
以下是生物发光技术在生命科学研究中的应用介绍。
一、药物研发药物研发涉及到了化学、生物、药物等学科,而在药物筛选和评价方面,生物发光技术则具有不可替代的重要作用。
利用生物发光技术可以通过分析荧光蛋白发出的信号,快速、便捷地评价药物分子的活性和特异性,有助于加速新药开发进程。
二、基因表达基因表达是指基因到蛋白质的转录和翻译过程,是生物体内生命活动的关键环节。
利用生物发光技术,可以将荧光蛋白引入细胞或组织内部,从而实现对基因表达的实时监测和定量分析。
这为了解细胞组分、研究细胞生命活动等领域提供了有力的工具。
三、蛋白质纯化蛋白质是生命体内最基本的分子,它对生命活动发挥了至关重要的作用。
在蛋白质分离、纯化过程中,通常需要对特定的蛋白质进行标记,从而快速地识别和纯化特定的蛋白质。
利用生物发光技术,可以基于特定蛋白质和荧光蛋白的互作关系,设计出一系列快速、精确的纯化方法,大大提高了蛋白质的纯度和产量。
四、细胞活性检测利用生物发光技术,可以将荧光蛋白和细胞共同标记,通过分析荧光发光信号来判断细胞的活性和状态。
这种方法可以应用于细胞分化、细胞增殖、细胞毒性等方面,为细胞学研究提供了确凿的数据支持。
五、免疫学研究生物发光技术在免疫学研究中同样也有着重要的应用。
通过将荧光蛋白标记到特定抗体上,可以快速准确地检测人体中是否存在特定抗体。
此外,结果可以通过荧光信号来定量分析,进一步实现免疫学研究。
总之,生物发光技术是一种非常重要的生物化学检测技术,在生命科学研究领域扮演着极其重要的角色。
其应用也随着科技发展不断拓展,推动着生命科学的进步和发展。
我们相信,在未来的日子里,生物发光技术在生命科学研究领域将有更广泛、更深入的应用。
生物发光技术在生物学研究中的应用
生物发光技术在生物学研究中的应用在人们的生活中,我们经常可以看到一些神奇的现象,比如萤火虫在夜晚发出的亮光,或是海洋深处发出的绿色荧光。
这些都是生物体发出的一种特殊的光,也被称为生物发光。
随着科技的发展,人们逐渐掌握了生物发光技术,这项技术也得到了广泛的应用。
本文将会对生物发光技术的应用进行探讨,特别是它在生物学研究中的应用。
一、生物发光技术的背景介绍从根本上说,生物发光技术是基于发光生物体分泌的酶和底物进行化学反应,从而产生光的一种技术。
这个技术的发现,可以追溯到18世纪末。
那个时候,一位名叫亚历山大·默里的科学家发现了火虫身上的化学物质会发光。
此后,研究者们不断地寻找着更多的生物体来进行研究,研究发现,不仅是萤火虫身上的物质可以发光,还有许多海洋动植物、菌类、细胞等也可以发光。
二、生物发光技术的种类目前,生物发光技术一般分为两种,其一是外源性生物发光技术,又称"化学发光法",是利用酶促催化活性底物氧化反应产生的荧光原理来进行分析检测。
其二是内源性生物发光技术,利用生物体内天然存在的生物程序进行发光,常见的是蛋白质荧光素(GFP)。
三、生物发光技术在生物学研究中的应用生物发光技术的应用已经涉及到很多领域,其中应用最为广泛的就是在生物学研究中。
其主要应用有以下几个方面:1. 细胞追踪:生物发光技术可以用于追踪细胞的运动、分裂等过程。
例如,将荧光标记的细胞注入小鼠脑部,可以看到细胞在小鼠体内的分裂和功能发挥情况,这对神经学的研究非常重要。
2. 突变检测:利用荧光标记的基质可以观测到突变基因的表达。
人们可以根据基因本身富含受体蛋白, 利用黄色荧光蛋白(YFP)和紫色荧光蛋白(CFP)产生FRET效应,评估蛋白质-蛋白质相互作用,这可以为新药物的研发提供重要的模型。
3. 基因转移:通过荧光标记的病毒或质粒来实现外来基因的转移, 从而达到研究基础遗传及基础生理等方面性质的作用。
生物发光技术的应用与前景
生物发光技术的应用与前景生物发光技术是指利用生物学原理,通过特殊的物质反应,从而发出某种频率的光波,达到发光目的的一种技术。
生物发光技术可以用来研究生物体内某些物质的生成、代谢、性质、反应等,甚至用在疫苗和疾病诊断上,是一种具有广阔应用前景的技术。
一、生物发光技术的发展历程生物发光技术的历史可以追溯到19世纪末期,法国科学家贝卡蒂在研究海洋生物发光的过程中,提取出了一种能够发光的物质——珊瑚红素。
这种物质可以在生physarum 草泥菇内逐渐发光,并且还可以通过人工合成得到。
1914年,日本的化学家古川亲雄在对珊瑚红素进行研究时,发现珊瑚红素的发光是由一种名为“荧光素”的化合物释放出的能量所致。
1953年,美国生物学家中村修二发现了一种昆虫————萤火虫的发光原理,萤火虫通过氧化反应产生的荧光素在媒介物体内发光,从而使萤火虫发出独特的闪烁光芒。
20世纪60年代,科学家们首次在大肠杆菌中实现了人工转移和克隆生物发光光源基因。
这些里程碑性的发现为生物发光技术的研究和应用奠定了坚实的基础。
二、生物发光技术的应用领域1. 生物发光技术在荧光成像中的应用荧光成像是生物学研究中不可或缺的一种手段,它可以为生物学、医学和生物医学研究提供定量信息、活细胞成像和定位分子组织分布等方面的信息。
例如,生物发光技术可以被用来研究特定生物分子或化合物的运动和空间分布情况,甚至可以进行单个分子监测。
靠近DNA或RNA的荧光探针可用来研究细胞分裂的过程;神经元被人为光刺激后的响应过程也可以通过荧光成像被观察到。
2. 生物发光技术在疫苗和疾病诊断中的应用生物发光技术也可以用于许多疾病的诊断,例如乙型肝炎、艾滋病、癌症、糖尿病等等。
科学家可以针对特定疾病,利用生物发光技术检测患者体内病原体的存在或感染程度。
除此之外,还可以利用生物发光技术开发一种新型疫苗——基因工程疫苗,基因工程疫苗是利用重组DNA技术提取疫苗的编码基因,然后把这些基因转移到生物体内的细胞中合成疫苗,以达到预防疾病的目的。
生物发光素应用于活细胞和活体成像的技术
生物发光素应用于活细胞和活体成像的技术近年来,随着科技的不断进步,生物学领域也逐渐被赋予了新的研究视角和方法。
其中,生物发光素应用于活细胞和活体成像的技术,成为了生命科学研究的重要工具。
生物发光素是许多生物体内的一种化学物质,具有发光性质。
生物发光素的光学特性、成本和对细胞影响较小等优势,使其成为细胞和组织活体成像的理想探针。
生物发光素的种类很多,如蛋白质发光素、荧光素等。
其中,蛋白质发光素是一种广泛存在于不同生物界中的光学探针。
它是由柔韧的肽链构成,包裹住一个发光色素结构域,靠着体内代谢循环形成、替换,完成发光的过程。
由于蛋白质发光素依附于蛋白质结构中,因此其能够稳定地嵌入细胞膜,并融入细胞液中发挥作用,从而具有较好的结构特异性,以及较好的信噪比。
蛋白质发光素是一种天然的生物感光体。
和荧光增强等非天然荧光探针相比较,蛋白质发光素的光量响应更为浓度感性,这意味着光发射量会随着灵敏度的变化而调整,从而将这种发光素应用于时间解析性较高的蛋白质结构和调控过程的研究上。
由于蛋白质发光素具有较好的光学性质,因此被广泛应用于蛋白质的生物成像研究中。
除了蛋白质发光素,荧光素是另一种许多生物体内存在的重要发光素。
荧光素由三个芳环组成,可以通过化学修改的方式,将其固定在分子或蛋白质上。
荧光素光发射能够从低波长移向高波长,从而形成荧光发射,从而得到荧光成像。
与传统的生物成像技术相比,生物发光素应用于活细胞和活体成像的技术具有以下三个优点:一是无损检测。
生物发光素发射的电子能够不接触细胞就被侦测到,因此生物发光素成像不会破坏样本,从而可以在较长时间内进行监测和追踪。
二是高时间分辨率。
生物发光素的发射在时间尺度上较短,可以应用于高时间分辨率的成像和跟踪。
三是较低成本。
生物发光素是一种生物性质的发光素,并且较容易制备,因此成本比较低,也非常适合大规模应用。
生物发光素应用于活细胞和活体成像的技术已经得到了广泛的应用。
在细胞水平上,生物发光素成像可以研究细胞的生物化学特征和信号通路,帮助我们更好地了解细胞的生命活动。
生物发光和荧光标记技术的应用
生物发光和荧光标记技术的应用在现代生物学中,生物发光和荧光标记技术成为了研究生命科学的重要手段。
借助这些技术,生命科学家们能够追踪、观察和研究动植物细胞及其分子的运动和相互作用过程,从而进一步了解生命活动的本质。
一、生物发光技术生物发光现象在自然界中广泛存在。
例如,某些微生物和海洋生物在暗夜中能发出亮光,这种亮光被称为生物发光。
并且,许多发光生物中还含有一种被称为荧光素的化合物,这种化合物在受激后能发出荧光。
为了利用这种生物发光现象,科学家们开发出了基因工程技术,人造生物体中也能发出荧光。
生物发光技术的应用可以追踪生物体中特定化合物的分布和代谢过程。
例如,科学家们将来自柿子树的荧光素基因序列植入大肠杆菌中,这样大肠杆菌就能发出荧光。
随后,他们将这些细菌注入实验室老鼠的消化系统中,利用显微镜和摄影仪记录下消化道内各个部位的亮度和颜色变化,从而了解老鼠消化道中各个环节中的营养吸收情况。
此外,生物发光技术还被应用于生物体检测和预警方面。
例如,科学家利用荧光标记特异性细胞,可以在显微镜下追踪某些疫苗的效果。
对于一些热带地区患有疟疾的人群,科学家可以在蚊子体内注入受荧光标记的病原体,以追踪蚊子的传染途径和疾病扩散区域。
二、荧光标记技术荧光标记技术是利用有机荧光染料或荧光蛋白对生物体中特定分子进行标记,以追踪这些分子的运动和相互作用。
荧光染料的应用不仅限于科学实验室,例如,现今广泛使用的荧光胶衣和照相机闪光灯中便含有荧光染料。
在生物学领域,荧光标记技术的应用现在已经涉及到多个层面。
在分子水平上,荧光标记技术可以帮助我们了解分子和细胞结构以及化学反应途径。
例如,荧光标记技术可以用于分子定位、分子捕获以及生物大分子复合物结构的研究。
这种技术在观察蛋白质定位、分布等方面都能起到非常重要的作用。
在细胞水平上,荧光标记技术则可以用于细胞表面分子、内参与物和胞器的标记。
在观察某些免疫细胞内分子双向转运、蛋白解析等方面有着很好的应用前景。
生物荧光成像技术的应用
生物荧光成像技术的应用生物荧光成像技术是一种以生物发光现象作为特定研究对象的方法。
它通过利用生物分子的自然或人工的荧光发射来实现对生物体内部或外部事件的监测和研究。
该技术在生命科学领域中具有广泛的应用,如生物医学研究、药物开发、疾病诊断和显微成像等方面。
一、生物荧光成像技术在生命科学研究中的应用生物荧光成像技术在生命科学研究中发挥着重要作用。
例如,在细胞实验中,研究人员可以通过标记细胞内的特定蛋白质或分子,利用荧光探针识别这些标记物,从而了解细胞的生理和功能状态。
同时,生物荧光成像技术还可以用于观察细胞内分子的动态变化,例如钙离子水平的变化、物质的转运和代谢过程等。
二、生物荧光成像技术在药物开发中的应用生物荧光成像技术在药物开发过程中起到了至关重要的作用。
通过标记药物分子或靶向分子,荧光成像技术可以用于观察药物在生物体内的分布、代谢和清除过程,从而评估其药代动力学特性。
此外,荧光成像技术还可以用于筛选药物靶点、评估药效和副作用,加速药物开发过程并提高疗效。
三、生物荧光成像技术在疾病诊断中的应用生物荧光成像技术在疾病诊断中具有广阔的应用前景。
例如,在肿瘤研究中,研究人员可以利用荧光染料标记肿瘤细胞,通过荧光成像技术实现早期肿瘤的检测和定位。
此外,生物荧光成像技术还可以用于观察疾病相关标记物在体内的分布和表达水平,为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。
四、生物荧光成像技术在显微成像中的应用生物荧光成像技术在显微成像领域具有显著的优势。
与传统显微镜相比,生物荧光成像技术通过标记特定的生物分子,可以在活体组织中进行非侵入性、高分辨率的成像。
这意味着研究人员可以直观地观察和分析生物分子在细胞和组织水平上的表达和相互作用,进一步深入了解生物学过程。
综上所述,生物荧光成像技术在生命科学领域中扮演着重要的角色。
它不仅为研究人员提供了一种直观、高效、非侵入性的研究手段,也为药物开发和疾病诊断提供了新的思路和方法。
随着技术的不断进步和发展,相信生物荧光成像技术将在未来的生命科学研究中发挥越来越重要的作用,为人类的健康事业做出更大的贡献。
生物发光原理及其在生命科学中应用
生物发光原理及其在生命科学中应用生物发光是一种在生物体内产生和放射光能的现象。
这种引人注目的现象不仅引起了科学家们的好奇心,还在生命科学的许多领域中发挥着重要作用。
本文将介绍生物发光的原理以及其在生命科学中的应用。
生物发光的原理主要基于两种机制:荧光和生物发光。
荧光是一种光发射的过程,通过吸收光能后,分子进入激发态,并在较短的时间内返回到基态并释放光能。
与之相反,生物发光是由特殊的生物化学反应产生的,可以持续较长时间。
许多生物体都能发光,其中最为著名的是萤火虫。
萤火虫是一种昆虫,其身体内部含有一种称为荧光素的物质。
当荧光素与一种酶称为荧光素酶结合时,荧光素酶将荧光素氧化为激发态,随后返回到基态,并释放出光能。
这个过程被称为荧光素酶的“促进发光”。
除了萤火虫,其他生物如珊瑚、鱼类和一些微生物也能发光。
这种生物发光的机制是通过一系列复杂的酶催化过程实现的。
例如,海洋中的一种微生物称为荧光细菌,能够在光异常的环境中发光。
这些细菌产生一种称为荧光素的物质,并通过一系列酶反应使其发光。
生物发光在生命科学中有重要的应用价值。
首先,生物发光被广泛应用于生物成像技术。
通过将荧光素或其他相关发光物质标记在感兴趣的生物分子上,例如蛋白质和核酸,科学家可以实时观察这些分子在细胞和生物体内的位置和运动。
这种技术对于理解许多生物过程,如细胞分裂和基因表达具有重要意义。
其次,生物发光还被应用于检测和监测生物体内的重要生化过程。
例如,荧光素酶已被用作生物传感器,用于检测和测量生物体内的特定分子。
通过将荧光素酶与目标分子结合,当目标分子存在时,荧光素酶会发生催化反应并产生发光信号。
这种方法对于检测和监测生物体内的蛋白质、代谢产物和其他生物分子具有极高的灵敏度和特异性。
此外,生物发光还被用于研究和治疗疾病。
例如,在癌症治疗中,科学家利用荧光标记的抗体来定位和治疗肿瘤细胞。
这种方法可以帮助医生更准确地诊断肿瘤,同时也可以实时监测治疗效果。
化学发光与生物发光技术的比较研究
化学发光与生物发光技术的比较研究化学发光和生物发光是两种常见的发光技术,它们都有着广泛的应用领域。
尽管两种技术都可以用于生命科学研究、临床诊断和环境监测等多个领域,但它们的基本原理和优缺点却存在很大差异。
本文将对这两种技术进行比较研究,探讨其特点和应用前景。
一、化学发光技术化学发光技术是通过特定化学反应产生的发光现象,而不需要外界的激发或光源。
简言之,这种技术是利用活性物质的化学反应释放能量,使荧光染料产生发光。
这种技术广泛应用于荧光染料标记、酶标记和DNA芯片等实验室检测。
加上现代化学发光中得到的新灵敏性检测方式,如LUCIA和替代辐射检测(如Scintillation Proximity Assay和磁性bead-based assay),已发展出一系列极其敏感和特异的检测技术。
二、生物发光技术生物发光技术是利用生物体内的发光性物质(如荧光素,蛋白、生物物质)产生发光现象。
生物发光技术是分一类生物发光技术,第一类是短亮氧的荧光蛋白技术,常用于细胞内外标记;第二类是Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET)。
另外该技术还常用于基因探索、分子生物学和医学诊断领域。
近年来,随着基因测序技术的发展,本技术在检测和监测生物靶分子中的应用越加广泛。
三、技术比较化学发光的灵敏度要优于生物发光。
化学发光是利用催化剂(或其他引发反应的物质)作为催化活性中心,能产生大量的荧光分子释放,能够产生高强度的光信号,更易于检测。
相较之下,生物发光的发光量和灵敏度较低。
由于生物体内外生物分子颗粒物与荧光染料的空间位置相对固定,生物染料的发光过程能被有效的抑制;又因为光子在空气中的传播极易受到不同介质的影响,进而影响到样品的检测结果,而荧光染料又容易受氧化等因素的影响。
在成本上,化学发光技术的成本较高,生物发光则大多基于生物体成生发光物质不被显微组织化学处理、强光照射等差、异形现象,成本相对较低。
生物发光技术在生物医学研究中的应用
生物发光技术在生物医学研究中的应用近年来,生物发光技术在生物医学研究领域中得到了广泛的应用。
生物发光技术是一种通过发射光子的方式来传递信息的技术,它可以在无需外部激发的情况下,自然地发出光束,具有广泛的应用价值。
1. 什么是生物发光技术?生物发光技术是指将生物体内的光学效应制备成实验手段,通过分子或细胞自身的发光信号对其进行定位和分析的技术。
这种技术基于自然界中一些生物物质具有自发发光的特性,例如萤火虫和某些海洋生物,在一定条件下可以产生明亮的发光现象。
自发发光的原理是由于某些生物体内特定的生物学过程和分子化学反应产生了能量,这些能量被通过光子方式释放,就产生了生物体内的自发发光现象。
2. 生物发光技术在生物医学研究中的应用生物发光技术在生物医学研究中有着广泛的应用,包括:生物成像、分析代谢物、生物传感器和拯救重病等方面。
2.1 生物成像医学成像是现代医学中的一项重要技术,可以通过显像技术对人体进行全面、立体的检查,使医生获得更为准确的诊断结果。
生物发光技术可以通过成像技术来观察光生物学系的动态变化过程,及时检查有助于捕获很多细微的生物学过程,从而提高医学成像技术的敏感度和准确度。
因此在生物成像上,生物发光技术可以很好地用于肿瘤诊断、有关神经信号传递、合成或统计研发多元通道透析设备、以及实验室现场实验等方面,使未来的生物医学研究更加精确和高效。
2.2 分析代谢物生物发光技术可以通过寻找生物体内某个代谢物是否存在,观察生物体内代谢物的变化,从而进行分析。
这是一种快速而敏感的定量和定性分析的方法。
利用该技术,能够研究与生物体代谢相关的一系列问题,如蛋白质定量、酶学重构、代谢物平衡调节等等。
2.3 生物传感器生物传感器是一种将生物反应和传感器技术相结合的智能药品系统。
生物发光技术可以帮助我们开发出更加高效的生物传感器。
该技术能够以非侵入、无损伤的方式监控生物体内一系列生物学过程,从而帮助生物体在极短时间内识别合适的药物,加速其修复和康复过程。
生物发光技术在生命科学中的应用
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生物发光作为报告基因的应用及其优点
生物发光在生命科学研究中最广泛的应用是作 为监测基因转录活动的报告基因。其中,萤火虫体 内天然存在的萤光素酶通常是研究人员的首选。萤
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生
物
物
理
学
报
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底,显著提高了实验的相对信号强度。 优化后的萤光素酶报告基因可以成功地应用在 各项生物研究领域中,例如对肿瘤坏死因子信号转 导的研究。肿瘤坏死因子是由单核 - 巨噬细胞产生 的能致肿瘤细胞坏死的活性因子,能加强中性粒细 胞的吞噬和消化功能,促进其粘附于血管内皮和迁 移出血 管之外 ,并能激 活转录 因子 NF-资B 调控的
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生物发光的其它应用
生物发光的强度取决于酶促化学反应中的各个 反应成分的浓 度 ,包 括 荧光 素 酶 浓度、 ATP 浓 度 和萤光素酶底物即萤光素的浓度。通常,在生物发 光的检测体系中,如果保持其它成分的浓度过量且 恒定,就可以检测与生物活性相关的某个特定成分 的浓度变化。我们上面谈到的用萤光素酶作为报告 基因来监测基因转录活性的实验,就是把萤光素酶 浓度和基因转录活性直接关联起来,萤光素酶浓度 是我们的最终监测目标。此外,如果我们固定萤光 素酶的浓度并使其过量,生物发光还可以用来监测 与 ATP 或萤光素浓度相关的生物学活性 ( 图3 ) 。 通过检测萤光素的浓度来监测某一生物学活性 的实验原理是:在萤光素上添加一个化学基团进行 修饰, 建立一 个 萤光 素 酶无法识 别 的“修饰” 底 物,而只 有 通过特 定 的生物反应 切除 这 个 化学 基
Bioluminescence
Excitation from a chemical reaction S2
1
生物发光的特点
根据产生光子的能量来源不同,发光可分为以 下四大类,一是荧光 ( fluorescence ) :依靠光子发 光;二是化学发光 ( chemiluminescence ) :依靠化 学能量发光;三是辐射发光:依靠放射性能量发 光;四是电能发光:依靠电能量发光。其中,生物 发光 ( bioluminescence ) 是依靠天然的酶促化学反 应产生的能量而发光,属于化学发光,它天然地存 在于许多生物体内,例如萤火虫、深海里的水母和 一些细菌。目前,在生命科学研究中,应用最为广
化学发光原理和生物发光技术
化学发光原理和生物发光技术化学发光原理和生物发光技术是两个不同方向的研究领域,但它们都在某种程度上涉及到发光现象。
化学发光原理主要研究化学反应过程中,某些化学物质能够通过放出能量的方式,发出可见光或紫外线。
而生物发光技术则主要研究一些生物体内能够产生发光效应的组织、酶或者生物分子,并从这些发光现象中探索生命活动的奥秘。
化学发光原理有着广泛的应用,可以用于照明、光电显示和发光材料等方面。
例如,火柴的头会因为内含的磷酸盐和氧化剂等物质引起化学反应而发光燃烧,这就是最常见的化学发光现象之一。
但是,最典型的化学发光反应则是芳香族上引入氧化物基团和红色荧光基团来制造荧光素。
因此,荧光素自然也成为了化学发光领域中的基础物质之一。
生物发光技术的应用远比化学发光原理更加广泛和重要。
事实上,许多生物体都能够产生特定的生物发光效应,例如萤火虫在发出明亮的绿色光线时,就是一种最为常见和著名的生物发光现象。
而在自然界中,许多海洋生物也拥有发光的能力,如关节虫、蝎角蝶、深海八爪鱼等,它们发光的原理和机制都是不尽相同的。
对于萤火虫而言,发光过程是由荧光素(Luciferin)、辅酶A (CoA)、氧化剂和生物催化酶Luciferase等物质参与的。
荧光素被施加一定的能量后会进入激发态,然后经过Luciferase的催化作用,释放出能量并发出光线。
而在一些水生动物的发光过程中,则是由一种叫做生物发光素(Photoprotein)的蛋白质来实现的。
生物发光素带有荧光基团,当它们受到某个因素的刺激后,便会分解的一部分生物发光素产生荧光基团激发态,通过还原反应产生能量并发出光线。
生物发光技术的应用可以广泛应用到医学、生物学、环保、食品、农业、生物工程等多个领域。
例如,通过利用基团特异性的反应,科学家能够将荧光素和生物分子相结合,制造一种叫做荧光蛋白的生物分子,而荧光蛋白则可以被广泛应用到生命科学领域中的食品检测、工业分析、医学诊断和研究等方面。
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第二十五卷
第五期
ACTA BIOPHYSICA SINICA Vol.25 No.5
二九年十月 Oct. 2009
生物发光技术在生命科学中的应用
Jey Cheng, Keith Wood, Frank Fan (Promega Corporation, Madison, WI 53711 USA)
团,萤光素才能恢复活性,酶促反应才能发生,这 样我们就可以把生物发光的强度和这个特定的生物 反应 联系 起 来 [1]。 如图 4 所示, Asp-Glu-Val-Asp6'-aminoluciferin 是一个没有活性的萤光素衍生物, 只有当半胱氨酸 - 天冬氨酸蛋白酶 ( caspase-3 )存 在并切除 这个 四 肽的 序列, 释 放出 游 离 的 萤 光 素 时,萤光素酶酶促反应才能发生。因为半胱氨酸 天冬氨酸蛋白酶的活性是检测细胞凋亡的一个重要 指标,这样的设计使生物发光成为一个有效的检测 细胞凋亡的手段。当然这一设计也可以用于运用荧 光的细胞凋亡检测上,即把同样四肽的序列加到荧 光染料 Rhodamine110 上。但由于生物发光独特的 低表达和高灵敏度,在相同的实验条件下,运用生 物发光研究细胞凋亡,其敏感性比运用荧光技术高 将近一 百倍 ( 图4 ) 。类似 的设计 也可以用来利 用 生物发光检测其它蛋白酶的活性,比如 caspase-8、 caspase-9、 二 肽 基 肽 酶 Ⅵ (DPPIV )、 caspase-3、 钙蛋白酶 ( calpain ) 、 蛋白酶体 ( proteosome ) 等,
火虫的萤光素酶是一个 61 kDa 的单 体蛋白,它 主 要催化 作用于名 为萤光 素 ( luciferin ) 的萤光素 酶 底物,在有 ATP 和氧气存在的条件下产生黄緑色 的光 ( 发射光波长是 560 nm ) 。 当使用报告基因来监测基因转录活性的时候, 研究人员最大的顾虑是引进外源的报告基因可能会 影响正常的生物活性,尤其是当报告基因通常需要 和生物体内自身细胞的分子活动相联系时,高浓度 的外源基因会过分加重生物内部细胞活动的负担, 从而影响正常的生理活动,甚至造成不正常的生理 现象。因此,尽量降低报告基因的浓度就成为研究 成功的关键。以绿色荧光蛋白为例,它是一类天然 存在的发光蛋白 ,由 于它能产生 高强度 的发射荧 光,所以可以获得非常清晰、生动的显微图像,在 单细胞生物图像分析中已经得到广泛应用。但因为 清晰 图 像 的产生 通常需 要绿色 荧光 蛋白 高 浓 度 表 达,从而加重了生物内部细胞活动的负担,使得绿 色荧光蛋白不适合作为监测基因转录活动的报告基 因。所以在选择合适的报告基因时,特别是和绿色 荧光蛋白相比较之后,生物发光由于其低表达和高 灵敏度使其在众多的选择中脱颖而出。 监测基因转录活性要求报告基因能够快速监测 目标基因细微的动态变化。细胞内报告基因的浓度 取决于两大动态过程:即蛋白合成过程 ( 受基因转 录活性的调控 ) 和蛋白降解过程。如果蛋白降解过 程很慢,则会使蛋白高度稳定,从而会造成蛋白的 本底表达水平过高,那么基因转录活性改变所产生 的新蛋白的合成就不容易被检测到。这样一来,报 告基因的表达就不能准确地反应基因转录活性的变 化。实验证明,在萤光素酶的序列上添加蛋白降解 序 列 , 如 小 鼠 鸟 氨 酸 脱 羧 酶 (mouse ornithine decarboxylase, ODC ) 中 富 含 脯 氨酸 - 谷 氨酸 - 丝 氨 酸 - 苏 氨 酸 (proline-glutamate-serine-threoninerich, PEST ) 的序列,可以显著地提高检测技术的 应答性,并且不会对检测手段的灵敏度造成太大影 响[3]。与之相反,由于绿色荧光蛋白的高表达和高 稳定性,使得添加蛋白降解信号反而在很大程度上 限制了检测的灵敏度。 为了进一步提高检测基因的效率,我们对萤光 素酶基因序列的密码子进行了优化,使得它在多种 哺乳细胞中的表达水平提高了 5~ 10 倍;同时,为 了减少对基因的非特异性调控,我们也对萤光素酶 的载体进行了优化,去除了载体上哺乳动物转录因 子结合序列的保守序列,从而大大降低了实验的本
(A) 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 0 原12 原11 原10 原9 原8 原7
包括 IL-1、GM-CSF 在内的多种基因的表达。在外 源表达 NF-资B 萤 光素 酶 报告 基因的 HEK293 细 胞 中,肿瘤坏死因子的刺激可以有效地使萤光素酶的 表达提高 1000 倍以上 ( 图 2A ) 。同样的检测方法 也可以成功地检测肿瘤坏死因子阻断剂对肿瘤坏死 因 子 生 物 活 性 的 阻 断 效 率 (IC50=0.77 nmol, 图 2B ) 。
Bioluminescence
Excitation from a chemical reaction S2
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生物发光的特点
根据产生光子的能量来源不同,发光可分为以 下四大类,一是荧光 ( fluorescence ) :依靠光子发 光;二是化学发光 ( chemiluminescence ) :依靠化 学能量发光;三是辐射发光:依靠放射性能量发 光;四是电能发光:依靠电能量发光。其中,生物 发光 ( bioluminescence ) 是依靠天然的酶促化学反 应产生的能量而发光,属于化学发光,它天然地存 在于许多生物体内,例如萤火虫、深海里的水母和 一些细菌。目前,在生命科学研究中,应用最为广
excited state; S1: excited state after vibrational relaxation
收稿日期:2009-10-09 通讯作者:Jey Cheng,E-mail:jey.cheng@
第5期
生物发光技术在生命科学中的应用
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强度的信号与高强度的实验本底共存,使得其检测 相 对信号强度 的能力 大大降低。 对 于生物发光来 讲,它与荧光形成鲜明对照,因为生物发光依靠天 然的酶促化学反应发光,不需要引进外源的光能, 所以应用生物发光作为检测手段的报告基团的实验 本底很底。虽然生物发光的信号强度没有荧光那么 高,但由于其独特的发光原理,生物发光可以比荧 光敏感一百甚至一千倍以上[1,2]。这是生物发光越来 越成为很多生物研究领域首选的生物检测手段的原 因之一。 在实际应用时,需要反复权衡信号强度的要求 和实验本底的影响,以选择最佳的检测技术。在光 子检测能力比较低的情况下,实验本底很大程度上 取决于 仪 器检测的对 象 ,例如 显 微镜 和流式 细 胞 仪,由于需要检测单个细胞光学信号的变化,对发 射光信号的强度要求非常高,因此,荧光通常会成 为这一类应用领域的首选。然而,当需要检测大量 的生物样品的时候,对光子检测能力的要求就会相 应降低,对降低实验本底的要求相应会增加,比如 在检测单个试管样品、多孔培养板样品,或者对器 官( 如老鼠器官 ) 进行图像分析的时候,生物发光 因其低本底和高灵敏度而倍受欢迎。而且由于生物 发光检测器不需要使用光学滤片,从而为缩短样品 和检测器之间的距离提供了可能,由此也更加提高 了检测的效率。 生物发光的灵敏度可以达到 10原20 mol,相当于 6,000 多个萤光素酶分子。对于一个有几百个细胞 的生物样品来说,一个细胞里只要有几个分子的萤 光素酶就可以被检测到。而且生物发光的高灵敏度 使得它可以检测的浓度范围非常宽,大多数可以跨 越 6~ 8 个数量级,而且现代生物发光检测仪技术 的更新也使得如此大跨度的检测成为可能。另外, 由于生物发光来源于天然生物体内的酶促化学发响。而且,因为萤光素 酶的底 物在反应 时是 被包裹 在 萤 光 素 酶分子的 内 部,从而可以在最大限度上保护正常的酶促发光反 应不受外界的干扰。
was measured after 5 h induction with addition of 1 ∶ 3 serial dilutions of TNF琢 using ONE-GloTM Luciferase system in
NF-资B luciferase reporter assay using GloResponseTM NF-资B-RE-luc2P HEK293 cells. (A) Firefly luciferase activity
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生物发光的其它应用
生物发光的强度取决于酶促化学反应中的各个 反应成分的浓 度 ,包 括 荧光 素 酶 浓度、 ATP 浓 度 和萤光素酶底物即萤光素的浓度。通常,在生物发 光的检测体系中,如果保持其它成分的浓度过量且 恒定,就可以检测与生物活性相关的某个特定成分 的浓度变化。我们上面谈到的用萤光素酶作为报告 基因来监测基因转录活性的实验,就是把萤光素酶 浓度和基因转录活性直接关联起来,萤光素酶浓度 是我们的最终监测目标。此外,如果我们固定萤光 素酶的浓度并使其过量,生物发光还可以用来监测 与 ATP 或萤光素浓度相关的生物学活性 ( 图3 ) 。 通过检测萤光素的浓度来监测某一生物学活性 的实验原理是:在萤光素上添加一个化学基团进行 修饰, 建立一 个 萤光 素 酶无法识 别 的“修饰” 底 物,而只 有 通过特 定 的生物反应 切除 这 个 化学 基
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生物发光作为报告基因的应用及其优点
生物发光在生命科学研究中最广泛的应用是作 为监测基因转录活动的报告基因。其中,萤火虫体 内天然存在的萤光素酶通常是研究人员的首选。萤
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底,显著提高了实验的相对信号强度。 优化后的萤光素酶报告基因可以成功地应用在 各项生物研究领域中,例如对肿瘤坏死因子信号转 导的研究。肿瘤坏死因子是由单核 - 巨噬细胞产生 的能致肿瘤细胞坏死的活性因子,能加强中性粒细 胞的吞噬和消化功能,促进其粘附于血管内皮和迁 移出血 管之外 ,并能激 活转录 因子 NF-资B 调控的
Fluorescence
Excitation from a photon S2 S1 Excitation (photon) Emission (photon)