硝态氮标准曲线工作表

土壤硝态氮测定--紫外风光光度计

土壤硝态氮的测定

【方法原理】

在波长220 nm 处，硝酸盐对紫外线光有强烈的吸收。溶解的有机质在波长220 nm 及275 nm 处均有吸收，而硝酸盐在275 nm 处没有吸收，从而可以通过测定275 nm 处的吸光度对硝酸盐的吸光度进行校正，校正吸光度A= A220-2A275计算硝态氮的含量,工作范围为N 0.1～3 mg L-1。

【试剂】

1）紫外分光光度计和石英比色皿

2）容量瓶

3）2mol/L KCl：

4）

【操作步骤】

1、浸提：

称取风干土样5.00g，放在250mL三角瓶中，加入2mol/L KCl 50mL，用振荡机振荡1h,悬液静置3～5 min放置澄清后，将悬液的上部清液用干滤纸过滤，澄清的滤液收集于干燥洁净的三角瓶中。

2、测定

吸取滤液5～20mL（视NO3－—N浓度）置于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，用1cm石英比色皿分别在220nm、275nm进行比色测定吸光度。

3、标准曲线的绘制

分别取20 g/LNO3－—N标准液0、0.5、1、2、3、4、5mL于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度,浓度分别为0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6g L-1用1cm石英比色皿分别在220nm、275nm进行比色测定吸光度。

硝酸盐标准曲线制定：

称取0.7220g于105°C烘箱中干燥冷却后的KNO3于小烧杯中，加入二次蒸馏水溶解，定量转入1000ml容量瓶中，定容，摇匀，即为100u g/ml硝酸盐氮标准溶液。移取该溶液20.00ml于100ml容量瓶，定容，摇匀，即为20ug/ml硝酸盐氮标准溶液。分别取20ug/ml 硝酸盐氮标准溶液0、0.5、1、2、3、4、5mL于50ml容量瓶中，加入二次重蒸水，定容摇匀。用1cm比色皿分别在220nm和275nm处测定吸光度。用公式：A= A220 -2A275求的校正吸光度。求此标准曲线方程。

植物生理学实验--植物组织中硝态氮测定2009-2

移液管立即冲洗移液管立即冲洗冷却比色冷却比色410nm410nm加加93ml8naoh93ml8naoh加加02ml02ml蒸馏水蒸馏水各加各加02ml02ml样品液样品液试管洗刷一遍试管洗刷一遍防止不防止不净致重复间误差较大净致重复间误差较大溶液加到试管溶液加到试管底部以免影底部以免影响结果重复性响结果重复性两组合作测定须用同一台分光光度计使用强酸强碱一定注使用强酸强碱一定注意安全如意外发生外意安全如意外发生外溅立即用水冲洗和擦洗溅立即用水冲洗和擦洗室温放置室温放置10min10min分光光度计
植物体内硝态氮含量的测定
1 教师提前烧水，讲解完内容后打开分光光度计开关
2 学生进教室先做硝态氮提取，后讲解实验内容。
三、实验材料
小白菜：绿叶片、叶柄
两个小组合作：一个小组测叶片，
另一个小组测叶柄。
二者必须是同几株上的材料。
同几株小白菜（一组叶片、另一组叶柄）
材料剪碎、混匀精确称取 1.0g，3份重复放入具塞试管，加去离子水至10ml 塞子封口，橡皮筋捆扎在一起沸水浴中提取30min (最好2次，本实验提取1次)
人体摄入的硝态氮81.2％来自蔬菜，当人摄取硝酸盐量较大时，体内的 NO3 －还原成 NO2 －进入血液，将血液中的血红素变成高铁蛋白，引起肌体中毒。 NO2 －还可间接与次级胺结合形成强制癌物质－亚硝胺。
咸菜的淹制初期咸菜内会大量积累硝酸盐，硝酸盐含量升高数倍或数十倍，当咸菜淹制成熟后硝酸盐含量减少（很低），所以，咸菜没有淹制完成之前，不要食用。

转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法

六、氮含量〔硝酸盐、亚硝酸盐、游离氨基酸、铵

态氮等〕的测定：〔2g〕

样品提取液的提取: 称取新颖植物组织2g，参加15ml无离子水研磨成匀

浆，置于45℃振荡机中摇动浸提〔或超声波〕lh后用5ml无离子水冲洗干净，然后离心或过滤(如含色素需用活性炭脱色)，滤液备用。

备注〔lg的经历〕：可溶性糖、可溶性蛋白质、VC等需要研磨提取的简单指标也可以使用此提取液按比例测定。

1硝态氮的测定：

标准氮试剂：精称KNO3 0.9021g，溶于少量重蒸无离子水中，并定容至250ml，含N 量为500µgNO3一N／ml。

5％水杨酸一硫酸溶液：称取水杨酸5g，溶于100ml浓H2SO4(比重1．84)中，搅拌溶解后贮于棕色瓶内，冰箱中至多保存l周，最好现用现配。

2mol／L NaOH溶液：称取NaOH 80g放入500ml硬质烧杯中，参加重蒸无离子水200ml，溶解后定容至l000ml。

操作方法

标准曲线制作取：50ml容量瓶6只(编号)，依次参加标准氮试剂5、l0、l5、20、25、30ml，用无离子水定容，那么成为50、100、l50、200、250、300 ug／ml 的氮系列标准溶液；再取干沽50ml三角瓶7只，分别装入上述系列溶液0．2ml，剩下的1只三角瓶参加无离水0.2ml(作为O 点)；然后分别参加5％水杨酸一硫酸溶液0.8ml，混匀静置20--30min(显色)；最后参加2mol／L NaOH溶液l9ml，混匀。冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；并以OD 值为纵座标，以标准氮(0、50、l00、150、200、250、300 ug)为横座标，绘制一条标准曲线(通过原点的直线)。

土壤硝态氮铵态氮的测定

（二）土壤硝态氮的测定

1、酚二磺酸比色法

1）方法原理

土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。

C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O

2，4-酚二磺酸6-硝基酚-2，4-二磺酸

此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg•L-1。

2）主要仪器

分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。

3）试剂

（1）酚二磺酸试剂：

称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。使用时须注意其强烈的腐蚀性。如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。

（2）10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液：

准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3－—N 溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液。

（3）CaSO4•2H2O（分析纯、粉状）、

植物组织中硝态氮含量的测定

目的意义根系吸收的无机态氮，有铵态氮和硝态氯。植物体内硝态氮合量可以反映土壤氮素供应情况，常作为施肥指标。叶菜类和根菜类中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害人体健康。测定植物组织硝态氮含量对研究植物氮素营养和农产品安全性均有重要作用。

一、实验原理

本实验采用硝基水杨酸比色法测硝态氮，其原理是在有浓硫酸的条件下NO3-与水杨酸生成硝基水杨酸。产物硝基水杨酸在碱性条件下(PH>12)呈黄色，在410 nm处有最大吸收峰，在范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。

二、材料、设备和试剂

1.材料玉米、接骨木、瓜类、葡萄等植株幼苗。

2.设备电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、容量瓶、刻度试管、漏斗、滤纸等。

3.试剂

（1）100mg/L硝态氮标准溶液精确称取烘干至恒重的KNO3 0.7221g溶于蒸馏水（无离子水）中，定容至1000ml。

（2）5%水杨酸-硫酸溶液称取5g水杨酸溶于100ml浓硫酸中（密度为1.84），搅拌溶解后，贮存于棕色瓶中，置冰箱保存1周有效。

（3）8%氢氧化钠溶液称取20g氢氧化钠溶于250ml蒸馏水中。

三、操作方法

1．标准曲线的制作

(1)吸取100 mg/L硝态氯标准溶液1m1、2ml、4m1、6m1、8ml、10ml、12m1分别放入10ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，使之成为10、20、40、60、80、100、120µg /m1硝态氮的系列标准液。

(2)取8支试管，分别编号为0-7，以0号管加入0.1ml蒸馏水作空白，1-7号管分别吸取上述系列标准溶液0.1ml。再分别加入0.4ml 5％水杨酸—硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min后，再加入8％NaOH溶液9.5ml，摇勾冷却至室温，以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度，以硝态氯含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。见下表。

实验七水体铵态氮亚硝态氮与硝态氮的测定

（一）实验目的
了解养殖水体硝酸盐的垂直分布特点掌握硝酸盐测定的方法——酚二磺酸法
（二）实验原理
硝酸盐在无水情况下与酚二磺酸反应，生成黄色的硝基二磺酸酚，溶解后溶液在410nm处吸光度与硝酸氮的含量呈线性关系。
（三）仪器与试材
仪器
瓷蒸发皿水浴锅玻璃漏斗 50 mL具塞比色管分光光度计比色皿等
混匀加入1.0 mL纳氏试剂
混匀显色10 min
420 nm处比色
溶液呈黄色
实验注意事项
本方法只能用于较清洁的水样，污水需采用蒸馏发将氨分离收集后再加纳氏试剂比色
鱼池水常有色且浑浊，多数是由于水中生物或泥沙所造成，经Zn(OH)2 吸附处理后，一般可用此法测定
（五）结果计算与分析
二、亚硝酸态氮的测定
410 nm处比色
转移至比色管
定容至标线
溶液呈黄色
加10ml纯水
加3~4mL
氢氧化钠
样品测定
将过滤后的水样50.0 mL置于干燥的蒸发皿内，以氢氧化钠溶液调节pH至微碱性（pH≈8），置水浴上蒸发至干。
冷却后加入
玻棒研磨
酚二磺酸试剂1.0 mL 放置片刻
再研磨一次放置10 min
410 nm处比色
5.00 mL，以氢氧化钠溶液调节pH至微碱性（pH≈8），置水浴上蒸发至干。

土壤硝态氮的测量-紫外法

2018-1-17

本方法适于测定以1-2M KCl及各种浓度氯化钙、氯化钠、硫酸钠等提取的土壤硝态氮，标液用提取液配制。要求土壤提取液没有可见的颜色，土壤有机质含量小于5%，测定范围为1-10ppmNO3-N（溶液浓度）。不能用乙酸铵、碳酸氢钠等在紫外区有强烈吸收的提取剂；测定硝态氮时，如果提取液氯离子、碳酸盐离子、氢氧根离子等较多，需要酸化处理：取2-3ml标液、滤液于塑料试管中，加1:5（硫酸：水）0.5ml，除去紫外去有吸收的CO2、OH-等的干扰。

如果需要在测定中不包含亚硝态氮，可在测定时加入氨基磺酸（FW.97.09）至其浓度达到0.5-0.8%，以掩蔽亚硝态氮的紫外吸收。

硝态氮的紫外吸收有较为明显的温度效应，样品冷冻后有明显的沉淀效应，需要使样品和标液在同一温度下平衡到室温，充分混匀再测定。

2 提取：称取鲜土10-12g（约10g干土，或者根据用户要求设定水土比，是否测定含水量等），加50ml 1M KCl提取液，25℃震荡30分钟，过滤，检查滤液颜色，没有明显可见颜色样品可进行紫外测定，对有颜色液体，要怀疑其测定精度，提高提取液KCl浓度有利于减少有机质干扰，对样品和标液加适量活性炭可减少颜色干扰。

3、500ppm NO3-N：将 1.8045 g 硝酸钾 (KNO3，F.W. 101.018)溶解到 400 mL水中,定容500 mL。避光保存。

标准曲线：以500ppm NO3-N 标液按下配制于50ml 容量瓶中，以1M KCl提取液定容。

土壤硝态氮测定方法

一、测定原理

测定原理硝酸根离子在220 nm处有强吸收,在275 nm处即无吸收，而主要干扰因子。土壤有机质均有吸收，首先测定有机质在这二个吸光度之间的转化系数(即校正因数f)，然后以浸提液在275 nm处的吸光度(A275)的f倍代替有机质在220 nm处的吸光度值，将它从浸提液在220 nm处的吸光度(A220)中扣除，即得到硝态氮在220 nm处的校正吸光度，因此，这种方法也称紫外分光光度校正因数法。

二、操作步骤：

取5.00 g土样，加入50 ml 2 mol/L KCI溶液，振荡1 h，悬液静置3~5 min 后过滤。测定浸提液在220 nm和275 nm处吸光度A220和A275。按照下式计算校正吸光度A：

A= A220 -2A275

三、标准曲线：

分别取10 mg/L硝态氮标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 ml 于50 ml容量瓶中，加入二次重蒸水，定容摇匀。用1cm比色皿分别在220 nm 和275 nm处测定吸光度。A=A220 -2A275求的校正吸光度。求此标准曲线方程。

四、试剂配制

10 mg/L NO3-N：称取0.7220 g于105 ℃烘箱中干燥冷却后的KNO3于小烧杯中，加入二次蒸馏水溶解，定量转入1000 ml容量瓶中，定容，摇匀，即为100 mg/L硝态氮标准溶液。移取该溶液10.00 ml于100 ml容量瓶，定容，摇匀，即为10 mg/L硝态氮标准溶液。

2 mol/L KCI: 称取二倍分子量的KCI（105℃烘2 h），双蒸馏水溶解，定容至1000 ml。

硝态氮测定---酚二磺酸比色法

硝态氮是水体中一种重要的污染物质，它们来源于农业、城市污水、化学工业废水等。硝态氮的含量过高会导致水生态系统的生物多样性减少、水体富营养化、藻类爆发等不良

影响。因此，快速准确地测定水体中的硝态氮含量对环境监测和治理具有重要意义。本文

将介绍一种常用的硝态氮测定方法——酚二磺酸比色法。

一、测定原理

酚二磺酸比色法是常用的硝态氮测定方法之一。它的原理是在弱酸条件下，硝酸根离

子（NO3-）和苯环（C6H5）反应生成蓝色的化合物——苯醛磺酸（C6H5SO2OH）和硝基苯（C6H5NO2），其反应方程式为：

NO3- + C6H5SO3H → C6H5SO2OH + N2O5

N2O5 + C6H5SO3H → C6H5NO2 + HSO4- + H2O

测定条件：pH值在2.5~3.5之间、温度在25~30℃、时间在10~20min内。

测定范围：0.001~50mg/L。

二、试剂和设备

1、试剂：

硝酸钠（NaNO3）、酚二磺酸（C6H5SO3H）、硝酸甲酯（CH3ONO2）、氯化汞（HgCl2）、亚硫酸氢钠（NaHSO3）、水铁氰化钾（K4[Fe(CN)6]）、硫酸（H2SO4）、无水乙醇（C2H5OH）。

2、设备：

分光光度计、比色皿、倒吸滤器、分析天平、移液管、恒温水浴器、热板。

三、操作步骤

1、制备标准曲线

（1）分别称取50mL、25mL、10mL、5mL和2.5mL的1.0mg/L硝酸钠溶液放入50mL瓶中，用水定容。

（2）取出每个瓶子中的5mL溶液，用20%的氯化汞溶液处理5min后，加入2mL酚二磺酸溶液，然后加入适量的饱和的氯化钾溶液和1mL硝酸甲酯溶液（作为载体），加水至

水体硝态氮的测定方法

水体硝态氮的测定方法（紫外分光光度法）

硝酸盐氮（NO３-N）（紫外分光光度法）

仪器紫外分光光度计

试剂

（1）１mol/L 盐酸（优级纯）：（3.1ml→100ml）或（15.5ml→500ml）

（2）酸盐标准贮备液（0.100mgN/ml）：0.7218克KNO3（105℃—110℃干燥２h）→1000ml

容量瓶，定容后加２ml三氯甲烷，稳定６个月

步骤

（１）50ml水样于50ml比色管→加入1.0ml盐酸溶液

10 mm石英比色皿，220、275nm波长处，以新鲜去离子水50ml加１ml盐酸溶液为参比，测吸光度

（２）标准曲线

６个200ml容量瓶中分别加入0,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0ml硝酸盐氮标准贮备液，用新鲜去离子水稀释至标线，浓度分别为0,0.05,0.10,0.25,0.5，1.00mg/L硝酸盐氮。同上操作，测量吸光度

计算

Ａ校＝Ａ220－2Ａ275（即用220nm处的吸光度减去两倍275nm处的吸光度）

Ａ----吸光度

从校准曲线中查得相应的硝酸盐氮量，即为水样，测定结果（mg/L）

土壤硝态氮的测定

酚二磺酸比色法

１原理用饱和CaSO 4·2H 2O 溶液浸提后，取一份浸出液在微碱性条件下蒸干，残渣用酚二磺酸试剂溶

解，此时NO 3－

既与试剂生成硝基酚二磺酸：

C 6H 3OH （HSO 3）2＋HNO 3=C 6H 2OH （HSO 3）2NO 2＋H 2O 2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸

此反应必须在无水的条件下才能迅速完成，产物在酸性介质中无色，碱化后为稳定的黄色盐溶液，可在400～425 nm 处有最大吸收峰，用分光光度计比色测定。本法中Cl -为主要干扰物，但在15mg ·L -1以下无影响，大于此范围可用AgSO 4 消除（按0.1mg AgSO 4可沉淀22.7mgCl -）。２仪器设备

分光光度计；水浴锅；蒸发皿，震荡机；三角瓶；容量瓶等。３试剂

３.１CaSO 4·2H 2O （分析纯、粉状）３.２Ca ＣO ３（分析纯、粉状）

３.３酚二磺酸试剂：25.0ｇ白色苯酚于500ml 三角瓶，加225ml 浓硫酸，混匀，瓶口松松的加塞，于沸水

浴加热６小时。试剂冷却后可能会有结晶，用时需重新加热溶解，但不可加水。必须贮于玻塞棕色瓶中，严防吸潮。

３.４NO ３－

－Ｎ标准溶液：取0.1805ｇ120℃烘干2ｈ的KNO ３溶解并定容于250ml ，此为100mg ·L -1，取

此液20ml ，定容于200ml ，为10mg ·L -1标准液。

３.５其它试剂：１：１NH ４OH ；AgSO 4；MgCO ３４操作步骤

４.１提取：称取新鲜土样50克于500ml 三角瓶，加250ml 饱和硫酸钙（或风干土样５ｇ，加30ml 饱和硫

植物生理学实验-硝态氮

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四、注意事项：
1 实验使用强酸、强碱，一定注意安全。防止倒在实验台和桌面上。若不小心倒出，应迅速擦干净。吸取反应液的移液管用后一定要用水冲洗干净后再放回架子上。 2 加上SA－H2SO4后，一定要放置20min，否则显色不稳定。
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植物体内硝态氮含量的测定
王衍安
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意义：
植物体内硝态氮含量可反映土壤氮素供应情况，作为施肥指标。
硝酸盐含量是蔬菜及其加工品的重要品质指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养状况，而且对鉴定蔬菜及其加工品质也有重要的意义。
本实验学习和掌握水杨酸法测定植物体内硝态氮含量
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一、实验原理
OH
+源自文库COOH
H2 SO4 NO 3
OH
COOH + OH
水杨酸
NO 2
硝基水杨酸
在碱性条件下（pH>12）呈黄色
最大吸收峰的波长为410nm
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一、实验原理
在浓酸条件下，NO3－与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。
生成的硝基水杨酸在碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。

土壤硝态氮的测定

A 紫外分光光度法

1、方法提要

土壤浸出液中的NOj，在紫外分光光度计波长210nm处有较高吸光度，而浸出液中的其它物质，除OH-、CO32-、HCO3-、NO2-和有机

质等外，吸光度均很小。将浸出液加酸中和酸化，即可消除OH-、CO32-、HCO3-的干扰。NO2-—般含量极少，也很容易消除。因此，用校正因数法消除有机质的干扰后，即可用紫外分光光度法直接测定NO3-的含量。

待测液酸化后，分别在210nm 和275nm 处测定吸光度。A210 是NO3-和以有机质为主的杂质的吸光度；A275只是有机质的吸光度，因为”。3-在275nm处已无吸收。但有机质在275nm处的吸光度比在210nm 处的吸光度要小R 倍，故将A275 校正为有机质在210nm 处应有的吸光度后，从A210中减去，即得NO3-在210nm处的吸光度(△A)。

2、适用范围

本方法适用于各类土壤硝态氮含量的测定。

3、主要仪器设备

3.1 紫外—可见分光光度计；

3.2 石英比色皿；

3.3往复式或旋转式振荡机，满足180r/min ±20r/min 的振荡频率或达到相同效果；

3.4 塑料瓶：200mL 。

4、试剂

4.IH2SO4溶液(1 : 9):取10mL浓硫酸缓缓加入90mL水中。

4.2氯化钙浸提剂[c（CaCl2）=0.01mol • L-1]:称取2.2g氯化钙

（CaCl2 • 6H20,化学纯）溶于水中，稀释至1L。

4.3硝态氮标准贮备液[p （N）=100mg • L-1]:准确称取0.7217g经105〜110C烘2h的硝酸钾（KNO a,优级纯）溶于水，定容至1L,存放于冰箱中。

硝态氮测定---酚二磺酸比色法

1）方法原理

土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤

浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成

硝基酚二磺酸。

C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O

2，4-酚二磺酸6-硝基酚-2，4-二磺酸

此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范

围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。

酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3－—N，测

定范围为0.1～2mg•L-1。

2）主要仪器

分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。

3）试剂

（1）酚二磺酸试剂：

称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL 纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可

得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。使用时须注意其强烈的腐蚀性。如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。

（2）10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液：

准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3－—N溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液。

（3）CaSO4•2H2O（分析纯、粉状）、

铵态氮硝态氮的测定

二）土壤硝态氮的测定

1、酚二磺酸比色法

1）方法原理

土壤用饱和CaSO4.2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。

C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O

2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸

此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg•L-1。

2）主要仪器

分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。

3）试剂

（1）酚二磺酸试剂：

称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO4 75mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。使用时须注意其强烈的腐蚀性。如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。

（2）10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液：

准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3－—N 溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液。

（3）CaSO4•2H2O（分析纯、粉状）、

酚二黄酸比色法测土壤硝态氮含量

土壤硝态氮的测定--酚二黄酸比色法

一、方法原理

土壤浸提液中NO3--N在蒸干无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸：

C6H3OH(HSO3)2 + HNO3→ C6H2OH(HSO3)2NO2 + H2O

2，4-酚二磺酸6-硝基酚-2，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色深浅与NO3--N含量在一定范围内成正相关，可在400-425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg/L NO3--N，测定范围为0.1-2mg/L。

二、主要仪器

分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿

三、试剂

CaSO4·2H2O（分析纯、粉状）、CaCO3（分析纯、粉状）、Ca（OH）2（分析纯、粉状）、MgCO3（分析纯、粉状）、Ag2SO4（分析纯、粉状）、1:1NH4OH、活性炭（不含NO3-）。

酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500ml三角瓶中，以150ml纯浓硫酸溶解，再加入发烟硫酸75ml，并置于沸水浴中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。使用时须注意其强烈的腐蚀性。如无发烟硫酸，可用酚25.0g，加浓硫酸225ml，沸水浴中加热6h配成。试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。

10 μg/ml NO3--N标准溶液：准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100 μg/ml NO3--N溶液，将此溶液准确稀释10倍，即为10μg/ml NO3--N 溶液。