HPLC系统性能地测试

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仪器分析实验 HPLC性能检查和参数测定

HPLC 性能检查和参数测定一、实验目的二、实验原理1、性能检查：噪音、漂移、定性重复性、定量重复性、检测限；2、色谱参数：理论塔板数（n ）、理论塔板高度（H ）、有效塔板数（n eff ），有效塔板高度（H eff ），容量因子（k ），分配系数比（α），分离度（R ）。

三、色谱条件色谱仪由岛津10AT vp 泵、10AT vp 紫外检测器及岛津ODS 色谱柱（150×4.6mm ，5μm ）组成；流动相：甲醇-水（85:15，v/v ）；流速：0.8ml/min ；柱温：常温；检测波长：254nm ；进样量：定量环20μl 。

四、实验步骤1、打开计算机、工作站，确认参数；打开泵电源（power ），更换流动相，排气，设定流速，开泵（pump ）；打开检测器电源，自检完毕后设定检测波长；采集基线，观察噪音和漂移，记录。

2、进样一次，出峰完毕后手动停止，保存。

重复5~6次。

3、打开保存的色谱图，积分处理；打印一副色谱图和所有实验数据，老师审阅后签名。

4、关闭检测器，停泵，更换纯甲醇，排气，设定流速0.5ml/min ，开泵，关闭工作站、计算机，用纯甲醇分别在Inject 和Load 位置清洗进样口。

5、计算性能指标（灵敏度，检测限，定性、定量重复性）。

6、以苯和萘的数据计算色谱参数。

五、数据处理要求1、计算公式：21/25.54R t n W ⎛⎫= ⎪⎝⎭，H = L/n ，21/2'5.54R eff t n W ⎛⎫= ⎪⎝⎭，H eff = L/n eff ，W = 1.699W 1/2，2121(1)(2)121/21/22() 1.177()1.5R R R R t t t t R W W W W --==≥++， 222111''R R k t K k t K α===， 0's R m m t k m t ==，灵敏度：)(601000m in)/()()/(g m ml F S V A g ml mV S ⨯⋅=⋅μ，检测限（g/ml ）：D=2N/S ，N 为噪音（mV ），C 萘= g/ml 。

高效液相色谱仪仪器确认指导原则

高效液相色谱仪仪器确认指导原则高效液相色谱仪（HPLC）是一种用于分离、鉴定和定量化学混合物中成分的分析仪器。

在使用HPLC进行分析时，需要遵循一些仪器确认指导原则，以确保实验的准确性和可靠性。

以下是一些常见的HPLC仪器确认指导原则：●系统稳定性测试：在每次使用HPLC系统之前，应进行系统稳定性测试，包括流速、压力、温度和检测器灵敏度等参数的测试。

这有助于确保HPLC 系统处于良好的工作状态。

●柱效应测试：对于液相色谱柱，应定期进行柱效应测试，检查柱的性能是否正常。

这可以通过分析已知的标准溶液或参考物质来实现，以确保柱的分离效果和分辨率。

●检测器校准：对于UV/VIS检测器、荧光检测器、电化学检测器等，应定期进行校准，以确保检测器的灵敏度和响应性能。

●溶剂纯度检查：在使用HPLC进行分析之前，应检查使用的溶剂的纯度。

使用纯度较低的溶剂可能会影响实验结果，因此应选择高纯度的溶剂，并定期进行纯度检查。

●标准曲线校准：对于定量分析，应根据需要制备标准溶液，并利用标准曲线对样品进行定量分析。

标准曲线应当定期进行校准和更新，以确保准确性和可靠性。

●数据记录和审查：在进行HPLC分析时，应当及时记录实验数据，并进行数据审查。

这有助于发现潜在的问题或异常，并及时采取纠正措施。

质量控制和验证：对于关键参数和流程，应建立质量控制和验证程序，确保实验结果的准确性和可靠性。

这包括校准、验证、质量控制样品的使用和记录等。

通过遵循这些仪器确认指导原则，可以确保HPLC分析的准确性、可靠性和重复性，并为实验结果的正确解释和数据分析提供可靠的基础。

液相色谱系统性能测试方法

液相色谱系统分析系统性能测试方法本液相色谱系统分析系统性能测试方法以国家质监局液相色谱仪国标JJG-705-2002检定规程为基础，由上海伍丰科学仪器有限公司编写。

对液相色谱系统的系统指标包括：基线噪音、基线漂移、最小检测限、定性重复性、定量重复性等分析性能进行检定。

系统测试优先于部件的测试。

进行系统测试之前，按照所要测试的配置，需要将紫外Array检测器、输液单元、进样单元、色谱柱，如果配有柱温箱，需要将柱温箱等单元的流路部分，通讯部件连接电脑工作站软件或数据处理装置，通讯后方可进行。

测试必备的条件：检定规程：国家质监局JJG-705-2002检定规程。

流动相：甲醇（色谱纯级）500mL，流量：1.000mL/min，标准样品：萘/甲醇溶液，C萘=1×10-4g/mL，C萘=1×10-7g/mL，色谱柱：150mm C18色谱柱，温度：18~25℃，温度变化不可超过±1℃，电源电压：~220±22V，检定波长：254nm，检定项目：基线噪音、基线漂移、最小检测限、定性重复性、定量重复性，鉴定项目和要求（参考：伍丰公司企业测试标准）：基线噪音≤2×10-5AU，基线漂移≤2×10-4AU/h，最小检测浓度≤1×10-8g/mL，定性重复性误差RSD6Rt≤0.5%，定量重复性误差RSD6A≤1%，输液单元流量设定值误差S S≤1.0%输液单元流量稳定性误差S R≤1.0%测试具体内容和步骤：（等度系统）1系统基线噪声检定系统按正常工作连接，以100%色谱级甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，连接C18色谱柱，紫外检测器波长设定254nm ，响应时间设定1s ，关闭波长扫描，关闭外部事件，开机预热，待仪器稳定后，记录基线4min ，停止采样后，设定峰宽5，斜率70，重分析谱图，查看谱图基线峰-峰高对应的吸光度值，计算系统的基线噪音。

HPLC方法验证

HPLC方法验证高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于药物、食品、环境、生物和化学分析等领域的分离和定性定量分析方法。

HPLC方法验证是确保所采用的分析方法能够稳定、准确地进行分析的过程。

下面将以1200字以上的篇幅介绍HPLC方法验证的步骤、参数和标准。

HPLC方法验证通常包括以下步骤：系统适应性、选择性、线性性、准确性、精密度和重复性。

首先是系统适应性验证，目的是确保所选的HPLC系统可以满足所需的分析要求。

这一步骤通常涉及校准和校准曲线的建立，通过检查稳定性、重复性和灵敏度等参数来评估系统的性能。

选择性验证是指检测方法对目标分析物的选择性，确保所选择的分析方法能够清楚地分离目标分析物，而不会受到其他干扰物的影响。

这通常涉及方法的优化和杂质检测。

线性性验证是评估方法在一定浓度范围内的线性关系，即样品浓度与峰面积的关系。

这一步骤涉及建立标准曲线，并通过回归分析来评估方法的线性性。

准确性验证是确定方法对目标分析物的准确性和恢复率。

这通常涉及测量已知浓度的标准样品，并与理论值进行比较，以确定方法的准确性。

精密度和重复性验证是评估方法在同一实验室内和不同实验室之间的可重复性和精密度。

这一步骤涉及对同一样品的重复测量，并计算相对标准偏差（RSD）。

在HPLC方法验证中，除了上述步骤外，还需要根据相关准则和标准来设计验证实验，并记录和分析实验结果。

例如，美国食品药品管理局（FDA）和国际药典（USP）提供了一些关于HPLC方法验证的指南和标准，如FDA的ICHQ2(R1)和USP1225章节。

根据这些准则和标准，HPLC方法验证需要满足一些特定的参数和标准。

例如，在线性性验证中，通常要求相关系数（r）大于等于0.99，而在准确性验证中，通常要求恢复率在80%至120%之间。

精密度和重复性验证通常要求相对标准偏差（RSD）不超过2%或2.5%。

HPLC仪器验证方案

HPLC仪器验证方案HPLC（高效液相色谱）仪器验证是确保仪器正常运行和产生可靠结果的重要步骤。

以下是一个1200字以上的HPLC仪器验证方案，包括设备验证、性能验证和方法验证。

一、设备验证设备验证是验证HPLC仪器的各个组成部分和设备参数是否符合规定要求的过程。

以下是设备验证的主要内容：1.仪器校准：校准仪器的参数（如流速、温度、压力）并与参考值进行比较，以确保精确度和准确性。

2.设备清洁和维护：定期清洁仪器的各个部件，如针尖、柱头和流动通道，以确保仪器正常运行和消除污染的风险。

3.电源和地线：检查电源接头和插头是否正常连接，并确保地线连接良好，以避免电气故障和触电风险。

4.仪器参数设置：根据标准和方法要求，设置仪器的参数，如波长、检测器灵敏度和积分时间等，以确保仪器能够正确执行分析过程。

5.故障检测和保护：测试仪器的自动诊断和保护功能，如温度过高、压力异常和泄漏等故障的检测和报警系统，以及自动停止流程和保护仪器。

二、性能验证性能验证是验证HPLC仪器的参数和性能是否符合规定要求的过程。

以下是性能验证的主要内容：1.流速准确性：使用标准物质，验证仪器的流速准确性，测量仪器的流速与参考值之间的偏差。

2.重复性和精密度：通过多次重复测量相同样品，并计算测量结果的变异系数以验证仪器的重复性和精密度。

3.检测限和线性范围：使用标准物质，测量仪器的检测限和线性范围，并与规定要求进行比较。

4.分离度：使用混合物标准物质，检验仪器的分离度和分辨率，并与规定要求进行比较。

5.峰对称性：使用对称性标准物质，检验仪器的峰对称性，并与规定要求进行比较。

三、方法验证方法验证是验证HPLC仪器的分析方法是否能够正确、准确和可靠地分析样品。

以下是方法验证的主要内容：1.选择合适的标准物质：选择能够准确、快速和可靠地分析样品的标准物质，并制定合适的样品前处理方法。

2.优化分析方法：通过调整仪器参数和条件，优化分析方法，使得样品能够在较短的时间内获得准确的结果。

高效液相色谱仪的性能检查

高效液相色谱仪的性能检查一、实训目标 1．了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，把握高效液相色谱仪的基本操作； 2．认识高效液相色谱仪仪器性能检查的项目和办法； 3．把握液相色谱柱性能指标（如理论塔板数、峰不对称因子、柱的反压等）的测定办法，学会判别其性能优劣。

二、实训原理 1．高效液相色谱仪的性能指标 (1)流量精度仪器流量的精确性，以测量流量与指示流量的相对偏差表示。

(2)检测限本试验用法紫外检测器，其检测限为某组分产生的信号大小等于2倍噪声时，每毫升流淌相所含该组分的量。

(3)定性重复性在同一试验条件下，组分保留时光的重复性，通常以被分别组分的保留时光之差的相对标准偏差来表示（RSD≤1％认为合格）。

(4）定量重复性在同一试验条件下，组分色谱峰峰面积（或峰高）的重复性，通常以被分别组分的峰面积的相对标准偏差来表示（RSD≤2％认为合格）。

2．液相色谱柱的性能指标一支色谱柱的好坏要用一定的指标来举行评价。

通常评价色谱柱的主要指标包括：理论塔板数N；峰不对称因子；两种不同溶质的挑选性（(a)；色谱柱的反压；键合固定相的浓度；色谱柱的稳定性等。

一个合格的色谱柱评价报告起码应给精彩谱柱的基本性能参数，如柱效能（即理论塔板数N)、容量因子k、分别度R、柱压降等。

评价液相色谱柱的仪器系统应满足相当高的要求：一是液相色谱仪器系统的死体积应尽可能小；二是采纳的样品及操作条件应该合理，在此合理的条件下，评价色谱柱的样品可以彻低分别并有适当的保留时光。

不同类型色谱柱性能评价所需的样品与所采纳的操作条件是不同的，可查阅相关参考资料。

三、实训仪器与试剂 1．仪器 PE200型高效液相色谱仪或其他型号液相色谱仪（一般配置，带紫外检测器）；TC4色谱工作站或其他色谱工作站；色谱柱［PEBrownleeC18反相键合相色谱柱（5μm,4.6mmi.d.×150mm)];100μL平头微量注射器；超声波清洗器；流淌相过滤器；无油真空泵；容量瓶等玻璃仪器。

HPLC分析方法中系统适用性试验概念解析及评价参数

HPLC 分析方法中系统适用性试验概念解析及评价参数摘要：系统适用性试验是分析实验测定开始前，对分析系统（包括方法、操作和仪器）是否满足测定要求进行的验证操作，如果符合要求，则可继续进行测定且其结果可靠，如果不符合要求，则需对系统进行调整或改进以满足要求，保证后续实验结果可靠。

本文论述将从多维角度讲述HPLC分析方法中系统适用性试验概念解析，以及试验评价参数，及如何确定系统适用性实验内容，如何选择计算方法等研究部分。

关键词：系统适用性、评价参数、计算方法前言：《中国药典》2015年版四部0512中关于系统适用性试验的内容为：“色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、拖尾因子和重复性等四个参数。

按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求。

”一、系统适用性试验概念解析系统适用性试验定义，即为用规定的对照溶液或测试溶液，对仪器进行试验和调整，以确认色谱系统能满足当前检测的要求。

主要适用于色谱系统如气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC）。

整个验证试验是一个风险管理的过程，是对色谱系统的风险评估，对色谱系统是否符合检测要求进行的全面评估，不只是分离度的要求。

其评价的是检测中仪器、电信号、分析操作及样品等方面的综合特性。

1.系统适用性试验评价参数《中国药典》2015年版四部0512中关于系统适用性试验的内容为：色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、拖尾因子和重复性等四个参数。

2.1理论板数N以被分析物主峰或规定的色谱峰计算柱效，以确定色谱峰的尖锐程度，尤其在痕量组分测定中尤为重要。

理论板数高，峰高窄，则理论板数低，峰矮宽；低理论板数表明色谱条件与待测物的适用性较差，存在其他风险，如定量误差大，分离度较差等。

但随着技术发展，理论板数都较大，新开发方法较少制定该要求。

N =5.54*（tR /W1/2）2其中（dp =10μ N=5万、dp=10μ N=5万、dp——柱填料的颗粒直径，tR——保留时间，W1/2——半峰宽）2.2分离度R分离度是评价相邻峰分离程度，或内标峰与主峰的分离程度，便于定量分析时确定测定结果的准确性。

HPLC测定有关物质和含量方法验证解析

HPLC测定有关物质和含量方法验证解析HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，在药品分析、环境监测、食品安全等领域有着广泛的应用。

在HPLC测定有关物质和含量方法验证解析中，可以从方法验证的目的、内容和步骤等方面展开。

方法验证的目的主要是验证所采用的分析方法是否可靠、精确、准确且具有可重复性，以保证在日常分析中的可靠性和可应用性。

方法验证的内容包括系统适用性、灵敏度、线性度、准确度、精密度、稳定性等，可以通过一系列实验和分析来进行验证。

方法验证的步骤一般包括以下几个方面：1.系统适用性验证：通过对样品的系统性能参数进行验证，包括压力、回峰时间、分离度和理论板数等。

通过调整仪器条件和操作参数，使得方法能够恰当地适用于所测定的物质。

2.灵敏度验证：通过测定不同浓度的标准品，确定方法的最小测定限和最小检测限。

灵敏度的验证可以通过信噪比、回归方程等指标进行评估。

3.线性度验证：通过测定一系列浓度已知的标准品，绘制浓度与峰面积或峰高的线性关系图，确认方法的线性范围和相关系数。

4.准确度验证：通过加标回收实验，比较样品中已知添加量与实际回收量的差异，评估方法的准确度。

5.精密度验证：通过同一样品的多次测定，计算相对标准偏差（RSD）来评估方法的精密度。

6.稳定性验证：通过不同储存条件下样品的测定，包括短期和长期稳定性试验，评估方法的稳定性。

在方法验证的解析中，需要对上述步骤进行详细的数据处理和结果分析。

对于系统适用性验证，需要报告各项系统性能参数的测试结果，并说明是否符合要求；对于灵敏度验证，需要计算最小测定限和最小检测限，并评价方法的灵敏度；对于线性度验证，需要绘制线性关系图，并计算回归方程的相关系数；对于准确度和精密度验证，需要计算回收率和相对标准偏差，并进行统计学分析；对于稳定性验证，需要比较不同条件下测定结果的差异。

此外，在HPLC测定有关物质和含量方法验证解析中还需要注意的是，要同步验证色谱柱的适用性、短柱、长柱分析的差异，以及可能的干扰和修正因子等因素。

HPLC验证方案

HPLC验证方案HPLC（高效液相色谱）是一种常用的分析测试技术，广泛应用于各个行业，包括制药、化工、环境监测、食品安全等领域。

为了确保HPLC的可靠性和准确性，需要进行验证实验。

1.仪器验证：验证仪器的性能是否符合要求。

包括泵的流量准确性、进样系统的精密度和准确性、检测器的灵敏度和线性度等方面。

可以使用标准样品进行验证，比较测试结果与标准结果的偏差。

2.HPLC柱验证：验证柱的性能是否符合要求。

柱的选择对于HPLC分析测试非常重要，柱的质量直接影响分析结果的准确性和重复性。

柱验证可以通过一系列的测试来完成，比如测试分离效果、压力、回收率等指标。

3.方法验证：验证分析方法的准确性和可靠性。

分析方法验证是确保分析结果的准确性和可靠性的重要环节。

常用的方法验证包括线性性、准确性、精密度、重复性、特异性、检出限和定量限等。

4.校准曲线的建立：建立标准曲线，用于定量分析未知样品。

标准曲线是通过一系列已知浓度的标准溶液测定其响应后得到的，可以用于测定未知样品的浓度。

5.系统适用性：检验该分析方法对所需测定物质的准确性和可靠性。

可以进行类似方法验证的测试，比如线性性、准确性、精密度等。

6.选择合适的峰区和背景区：峰区应选在不邻近拐点和峰尾上升区域，以避免与其他成分重叠；背景区应选在物质浓度较低处，以避免与干扰物质重叠。

以上是HPLC验证方案的主要内容，具体实施时需要根据实际情况进行调整。

验证实验的结果应进行分析和总结，确保验证结果的可靠性和准确性。

并且，验证实验应定期进行，以便及时发现和解决问题，确保测试的可靠性和准确性。

仪器分析实验HPLC性能检查和参数测定

仪器分析实验HPLC性能检查和参数测定HPLC（高效液相色谱）是一种广泛应用于化学分析和生物科学领域的分析工具。

在进行HPLC分析之前，需要对仪器进行性能检查和参数测定，以确保仪器的正常运行并获得准确的分析结果。

一、HPLC性能检查：1.系统漏率检查：将HPLC柱安装在系统中，关闭柱前和柱后的开关，然后观察系统是否存在漏气。

如果存在漏气，应检查并修复可能的漏点。

2.系统稳定性检查：打开系统，让其稳定运行30分钟，观察系统是否有任何问题，例如气泡形成或压力不稳定等。

如果出现异常，应检查并修复问题。

3.系统噪声检查：将检测器设置为负值和零值，并观察噪声水平。

如果噪声过高，可以检查并清洁检测器或更换耗材。

二、HPLC参数测定：1.流速测定：测定流速是确保HPLC系统正常运行的重要参数。

可以使用标准溶液通过系统进行测定，记录流速，以确保其稳定性和准确性。

2.程序温度测定：对于一些分析，需要控制系统温度以保持准确的分析结果。

使用温度传感器测量系统温度，确保其与设定的温度一致。

3.峰面积测定：使用标准品进行测定，记录峰面积，并与文献或已知值进行比较，以验证分析方法的准确性。

4.分辨率测定：使用合适的混合物进行测定，计算分离峰的分辨率。

分辨率测定是评估HPLC方法性能的重要指标之一需要注意的是，HPLC参数测定的具体方法和步骤可能会因应用和分析对象的不同而有所变化。

在进行参数测定时，应参考相关文献和方法，并按照实验要求进行操作。

总之，HPLC性能检查和参数测定是确保HPLC系统正常运行和获得准确分析结果的关键步骤。

通过定期检查和测定，可以保证仪器的稳定性和可靠性，并确保实验结果的准确性和可重复性。

高效液相色谱仪的使用及运行性能测试

高效液相色谱仪的使用及运行性能测试高效液相色谱仪的使用及运行性能测试实验目的1.了解高效液相色谱仪的基本原理和结构。

?2.掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。

3.掌握测试高效液相色谱仪运行性能的指标和方法，验证各部件及整机的性能。

实验器材?高效液相色谱仪，LC-ATvp高压泵、SCL-10Avp程序控制器、SPD-M10Avp二极管阵列检测器、CTO-10Asvp温度控制器。

Shim-packVP-ODS C18 150×分析柱、20μl进样器、AS3210型超声波发生器。

无水甲醇和双蒸水各500ml（脱气处理）、萘、咖啡因（均为色谱纯或分析纯）。

实验原理高效液相色谱法是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。

由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。

描述高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。

LC-2010和Agilent1100型为单泵型，适于单一流动相的洗脱；LC-10Avp型为双泵型高效液相色谱仪，适于程序洗脱。

单泵型高效液相色谱仪的结构示意见图9-1。

实验步骤?（一）高效液相色谱仪的基本操作步骤（以岛津LC-10A为例）1.依照顺序开机，自检完毕后进入操作模板；2.设定洗脱程序、检测器的条件及测定报告；3.完成实验过程，打印试验结果，依照顺序关机。

（二）性能测试高效液相色谱仪的性能检查分为单个部件的验证和整机验证。

验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。

验证目的是检查并确认高效液相色谱仪运行性能是否符合要求。

1.验证标准按照中华人民共和国国家计量检定规程，高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的合格标准见表9-1。

九高效液相色谱仪的性能检查和色谱参数的测定

线性范围
检查自动进样器在不同进样量下的线性响应范围，以确保其适用于不同浓度的样品分析。
检测器性能检查
噪声与漂移
评估检测器的基线噪声和漂移，以确保其稳定性和灵敏度。
线性范围与响应因子
检查检测器在不同浓度下的线性响应范围和响应因子，以确保其准确性和可靠性。
检测限与定量限
确定检测器的检测限和定量限，以评估其对于低浓度样品的检测能力。
九高效液相色谱仪的性能检查和色谱参数的测定
目录
• 性能检查 • 色谱参数测定 • 方法开发与验证 • 仪器维护与故障排除 • 数据处理与结果分析 • 法规要求与实验室管理实践
01 性能检查
泵系统性能检查
01
02
03
流量准确性
通过测量实际流量与设定流量的偏差来评估泵系统的准确性。
流量精密度
03 方法开发与验证
方法开发流程梳理
明确分析目标
确定需要分析的样品类型、目标化合物以及分析要求。
确定洗脱程序
通过优化洗脱程序，包括梯度洗脱和等度洗脱，使目标化合物在合适的时间内出峰，
并获得良好的峰形和分离度。
选择色谱柱和流动相
根据目标化合物的性质选择合适的色谱柱和流动相，确保目标化合物能够得到有效的分离和检测。
峰识别、定量计算及结果解读方法分享
峰识别
根据色谱峰的保留时间、峰形等特征，识别出样品中的各组分，并与标准品进行比对验证。
定量计算
通过比较样品峰与标准品峰的峰面积或峰高，使用内标法、外标法等定量方法，计算出样品中各组分的含量。
结果解读
根据定量计算结果，结合样品信息和相关标准，对检测结果进行解读和评估，判断样品是否符合要求。同时，对异常结果进行原因分析，并提出相应的改进建议。

液相色谱检定规程2017

液相色谱检定规程2017一、引言液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物和医药等领域。

为了确保液相色谱分析结果的准确性和可靠性，制定了液相色谱检定规程。

二、设备准备1. 液相色谱仪：确保液相色谱仪的性能符合要求，例如流量稳定、噪声小等。

2. 色谱柱：检查色谱柱的有效期和性能指标，如效能因子、分离度等。

3. 样品制备：准备待检样品，并按照指定方法进行制备和处理。

三、系统测试1. 测试流量准确性：使用标准常数流速器，设置不同的流速值进行测试，记录实际流速并计算误差。

2. 测试压力准确性：使用标准压力计，将其装在系统的进样口或检测器前，记录并比较实际压力值和设定值。

3. 测试噪声水平：将检测器置于理想条件下，没有样品注入时，记录背景噪声水平，并判断是否超出规定的限制。

4. 测试温度准确性：使用温度计测量色谱柱和进样器的温度，并与设定温度进行比较。

四、系统均匀性测试1. 使用标准物质进行均匀性测试：选择具有良好稳定性的标准物质，在不同位置进行连续检测，记录结果并评估系统的均匀性。

2. 测试系统的响应时间：通过注射标准物质，记录峰的出现时间，并计算系统的响应时间。

五、方法验证1. 选择适当的标准物质：选择与待检样品性质类似的标准物质，并按照指定方法进行制备和处理。

2. 测试线性范围：使用一系列标准溶液，将其注入系统进行检测，绘制响应曲线，并计算线性范围。

3. 测试重复性和精密度：使用一定浓度的标准物质进行多次测试，计算相对标准偏差（RSD）。

4. 测试准确性：通过添加已知浓度的标准物质到待检样品中进行测试，计算回收率并评估方法的准确性。

六、现场环境要求1. 温度和湿度控制：确保液相色谱仪工作环境的温度和湿度稳定，并符合规定的范围。

2. 避光要求：尽量将液相色谱仪安放在避光箱中，以避免光照对结果的干扰。

3. 电源供应：保证电源供应稳定，接地良好。

高效液相色谱系统性能验证报告_ 修订版

高效液相色谱系统性能验证报告验证方案编号：YB-SB049PQ -01上海和黄药业有限公司Shanghai Hutchison Pharmaceuticals Limited验证方案审批表验证项目名称：高效液相色谱系统性能验证验证项目编号：YB－SB049PQ -00一、方案起草二、方案审核三、方案批准目录1.验证组织 (4)1.1.验证小组人员及职责 (4)1.1.1.验证小组负责人： (4)1.1.2.验证小组成员及职责 (4)2.验证目的 (4)3.计量器具 (4)4.仪器简介 (5)5.安装确认 (5)6.操作验证 (8)6.1. 试验项目与限度 (8)6.2. 试验方法 (8)6.2.1. 流量控制阀 (8)6.2.2.流动相比例控制阀 (8)6.2.3. 进样体积控制阀 (8)6.2.4.柱温箱检查 (8)6.2.5.UV检测器波长准确性 (9)7.性能验证 (9)8.预防性维修 (10)9.附录 (10)文件检查记录 (11)流量稳定性检查数据 (12)流动相比例控制阀检查数据 (14)进样体积控制阀检查数据 (15)柱温箱检查数据 (16)波长准确性检查数据 (17)光电管检测记录 (19)柱效检测记录 (20)10.附原始记录 (21)1.验证组织1.1. 验证小组人员及职责1.1.1. 验证小组负责人：1.1.2. 验证小组成员及职责2. 验证目的为确保仪器在使用中符合原设计的要求，并达到原拟订的目的，产生可信赖的量测结果，对仪器进行安装验证（IQ）、操作验证（OQ）、及性能验证（PQ）。

当仪器首次安装调试、经过一定周期（一年）或者变更位置时进行该验证。

3.计量器具验证所用的计量器具是经过校正并在有效期内。

电子天平、容量瓶、温度计。

4.仪器简介仪器名称：高效液相色谱仪本实验室拥有四台高效液相色谱仪，各自配有四元梯度泵、自动进样器、柱温箱及紫外检测器。

仪器的生产厂家，型号及设备登记号分别如下（表1）：、5.安装确认5.1.参加人员：5.2.检查清单：按设备登记号分开列。

HPLC性能测试

HPLC性能测试一、仪器性能测试1、流量准确性与重复性泵的稳定性与流量准确与否直接相关。

以100%水为流动相（经过过滤和脱气处理），设定流量为1ml/min，在泵出口处连接电子流量计，待流速稳定后连续记录5次读数，以5次读数的平均值作为流量测定值F m ,重复上面的测定步骤3次，按照下式计算S S和S RS S =（F m -F S)/ F S×100%式中：S S——流量准确度（%）F m——流量实测值，ml/min（取三次测量的平均值）F S ——流量设定值，ml/minS R =×S R——流量重复性误差（%）F m——流量实测值，ml/min——同一组测量的算术平均值，ml/min按照同样步骤测试0.1ml/min、2ml/min与5ml/min 的相应指标。

2、噪声与漂移实验条件：紫外吸收波长为254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，选用C18 色谱柱，开机，平稳运行2h后，记录基线60min,利用工作站计算噪声和漂移。

3、检出上限将检测器和记录仪连接好，检测器波长选在254nm,通电稳定后，用注射器直接向检测池中注射2%异丙醇水溶液冲洗检测池至记录仪读数不变，记下此值。

之后，依照上法分别注入丙酮/2%异丙醇系列水溶液（丙酮含量为0.1%、0.2%、0.3%…1.0%）冲洗检测池，并记录各溶液对应的稳定记录仪读数，每个溶液重复测量3次，取算术平均值。

以5个丙酮含量（0.1%-0.5%）和对应的记录仪读数做标准曲线，在曲线上找出丙酮含量大于0.5%各点的读数，与对应含量的测量值做比较，测量值低于读数5%时，认为曲线弯曲，此点的浓度作为检测上限C H。

二、应用性能测试1、梯度误差由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B经由5个梯度从0变到100%(0%-20%-40%-60%-80%-100%)。

将输液泵盒检测器连接（不接色谱柱），开机后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，求出A,B溶剂不同比例时的输出信号值（或记录仪读数），重复测量2次，计算平均值。

高效液相色谱仪校验方案

高效液相色谱仪校验方案一、引言高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于药物、食品、环境等领域。

为确保HPLC的准确性、可靠性和稳定性，需要进行定期的校验和保养。

本文将介绍一种高效液相色谱仪校验方案，旨在提供一套操作规范，以确保HPLC的正常工作。

二、校验前准备在进行HPLC校验前，需要进行以下准备工作：1.确保校验设备和试剂的准备和到位。

2.检查HPLC仪器各部件是否完好无损，如进样器、流动相泵、检测器等是否正常工作。

3.清洗进样器和流动相泵，确保没有残留物。

4.检查HPLC仪器上的管道连接是否牢固，是否有漏气现象。

三、校验项目及方法1. 流动相流速校验项目描述流动相的流速是HPLC分析的重要参数，需保证其准确性和稳定性。

校验方法1.用高精度天平称取准确质量的校验溶液，在恒温条件下，通过进样器将校验溶液输入到流动相泵中。

2.设置初始流速并启动流动相泵，采用亚洲最大采取法即可获得流速值。

3.重复上述步骤3次，计算平均值，并与预设的流速值进行比较。

2. 进样量校验项目描述进样量是HPLC分析中的重要参数，需要准确控制。

校验方法1.使用标准样品，并在恒温条件下设置流动相流速。

2.分别进行不同进样量的校验，每次重复3次。

3. 峰面积校验项目描述峰面积是HPLC分析结果的一个重要参数，可用于定量分析。

校验方法1.使用标准样品，并在恒温条件下设置流动相流速和进样量。

2.对标准样品进行3次连续进样分析，记录每个峰面积。

四、结果与讨论根据校验所得数据，可以计算相对偏差和标准差，并与厂家提供的规格要求进行比较。

如果相对偏差和标准差均在规定范围内，说明HPLC仪器的性能良好，可以继续使用。

如果超出规定范围，需要进行维修或调整。

五、结论通过本校验方案的实施，可以对HPLC仪器的流动相流速、进样量和峰面积进行有效校验，确保仪器的准确性和稳定性。

校验结果可为仪器的日常使用和维护提供依据。

六、参考文献暂无。