HPLC法测定人血浆中多西紫杉醇浓度

2.8 临床应用 1 例乳腺癌根治术后患者于 1 h 内静脉滴注多西紫杉醇
110 mg，于给药前 0 h，给药 0.5 h，给药结束后 0、0.5、1、2、4、6、 23 h 时采集血样，分离血浆，按上述方法测定多西紫杉醇血药 浓度。结果，不同时间点的血药浓度分别为 0、0.622、0.495、 0.452、0.162、0.159、0.154、0.150、0.140 μg·mL－1。
· 130 · China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 2
中国药房 2011 年第 22 卷第 2 期
在本试验条件下，多西紫杉醇峰形良好，无干扰峰，保留 时间约为 11.5 min，空白血浆中的杂质峰对多西紫杉醇的峰形 亦无干扰。对常用辅助用药进行干扰试验，结果盐酸多柔比 星、地塞米松磷酸钠、盐酸昂丹司琼、维生素 C、维生素 B6对多 西紫杉醇无干扰。色谱图见图 1。
1 材料
1.1 仪器 600 系列高效液相色谱仪，包括 M32 色谱工作站、600 四元
梯度泵、717 自动进样器、2487 紫外检测器（美国 Waters 公司）； XW-80A 涡旋混合器（上海医科大学仪器厂）；TDL-5 低速容量 离心机、TGL-16C 台式高速离心机（上海安亭科学仪器厂）； E100H 超声混悬仪（德国 Elmasonic 公司）。
表 1 精密度及回收率试验结果（x±s） Tab 1 Results of precision and recovery test（s x±s）
加入量
日内精密度（n＝5）
日间精密度（n＝5） 回收率（n＝5）
/μg·mL-1 测得量/μg·mL-1 RSD/％ 测得量/μg·mL-1 RSD/％ x±s/％ RSD/％
3 讨论
国内有文献报道[7]多西紫杉醇的保留时间为 25 min，时间 耗费极长，另有文献[5，6]分别采用甲醇-四氢呋喃-水-氨水和甲 醇-醋酸钠（75 ∶ 25）为流动相，由于流动相中含有无机盐离子， 长 期 使 用 会 导 致 色 谱 柱 冲 洗 不 干 净 ，对 柱 效 能 产 生 不 利 影 响。本方法采用乙腈为流动相，测得多西紫杉醇保留时间约 为 11.5 min，分析时间较短，分离度和峰形良好。
取空白血浆 1.0 mL，加入不同量的多西紫杉醇贮备液（用 乙腈溶解多西紫杉醇对照品配制成浓度为 201.2 μg·mL－1的贮 备 液 ，置 4 ℃ 避 光 贮 藏 备 用），配 制 成 浓 度 分 别 为 0.167、 0.333、0.503、1.006、1.166 7、3.333 μg·mL－1 的血浆标准品，按 “2.2”项下方法操作，记录色谱。以血浆标准品峰面积（Y）对 血浆标准品中多西紫杉醇浓度（X）进行线性回归，得回归方 程 Y＝9 548.3X－767.22（r＝0.995 2）。结果表明，多西紫杉醇 血药浓度在 0.167～3.333 μg·mL－1范围内线性关系良好，检测 下限为 0.167 μg·mL－1。 2.4 方法专属性考察
Determination of the Concentration of Docetaxel in Human Plasma by HPLC CHEN Yao，ZHAO Yin，LIU Qing-qing（Dept. of Pharmacy，Yunnan Provincial First People’s Hospital，Kunming 650032，China） ZOU Jun（Dept. of Pharmacy，Medical School of Putian College，Putian 351100，China）
多西紫杉醇（多西他赛，Docetaxel），是一类作用于微管的 抗肿瘤药。多西紫杉醇在血浆中 90％以上以结合形式存在， 主要通过肝脏代谢和胆汁排泄，清除率与年龄、体表面积和α1 酸性糖蛋白有关[1]。其毒性反应包括骨髓抑制、液体潴留、血 管性水肿、过敏反应、皮肤毒性和消化道反应等[2]，最主要的剂 量限制性毒性反应是中性粒细胞减少。与紫杉醇不同的是， 多西紫杉醇所致白细胞减少呈剂量依赖性而非时间依赖性， 药物在血浆中的浓度高低就直接决定着毒性发生的可能性及 严重的程度。由于肿瘤患者药物代谢个体差异性，对多西紫 杉醇血药浓度进行监测有着重要意义。测定人血浆中多西紫 杉 醇 浓 度 的 方 法 ，目 前 有 高 相 液 相 色 谱 串 联 电 喷 雾 质 谱 （LC-MS/MS）法[3，4]和高效液相色谱（HPLC）法[5～7]，本试验通过 对色谱条件和提取方法的改进，建立一种简便、准确、快速测 定多西紫杉醇血药浓度的 HPLC 法。
本试验还对提取方法作了改进。前述文献报道以地西泮 作为内标测定血浆中多西紫杉醇[7]，采用叔丁基甲醚提取，3 次 提取后，合并上清液用氮气吹干进样。此类方法操作烦琐，提 取效率不高，重复性差，且叔丁基甲醚价格昂贵致提取成本较 高。由于多西紫杉醇具有较高的脂溶性，在乙腈中溶解度极 高，同时乙腈可沉淀血浆中蛋白。故本次试验采用外标法，用 乙腈提取血浆中多西紫杉醇，通过充分振荡，离心、过滤后取 滤过液直接进样分析，操作简便、准确、快速、重复性好，而且 更为经济，有利于临床血药浓度测定的广泛开展。
按“2.3”项下方法配制低、中、高（0.333、1.006、3.333 μg· mL－1）3 种浓度的多西紫杉醇血浆样品各 5 份，按“2.2”项下方 法操作，分别于同日内和 5 d 进行分析，测定日内及日间精密 度。结果 RSD 均＜10％。精密度及回收率试验结果见表 1。 2.7 稳定性试验
按“2.3”项下方法配制低、中、高（0.333、1.006、3.333 μg· mL－1）3 种浓度的多西紫杉醇质控样品，置日光室温、避光室温 条件下放置 4 h，测定其稳定性；将质控样品按照“2.2”项下方 法进行处理操作后，置日光室温、避光室温放置 8 h，测定其稳 定性；质控样品 1 周内连续冻融 3 次后，测定冻融稳定性。结 果显示，多西紫杉醇低、中、高 3 个浓度的质控样品在日光室 温、避光室温条件下放置 4 h 后，均能保持较好的稳定性，降解 低于 5％ ；将质控样品经血样处理过程操作后，置日光室温、避 光室温放置 8 h，均可保持较好的稳定性，降解低于 10％；经过 3 次反复冻融后的低、中、高 3 个浓度的多西紫杉醇质控样品均 较稳定，降解低于 5％。
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for the concentration determination of docetaxel in human plasma. METHODS：Using the external standard method，plasma samples were extracted with acetonitrile，shaken，centrifugated and filtrated. Kromasil C1（8 250 mm×4.6 mm，5 μm）column was adopted with mobile phase consisted of acetonitrile at flow rate of 1.0 L·min－1. The detection wavelength was set at 230 nm. Column temperature was room temperature，sensitivity was 2.0AUFS and injection volume was 10 μ L. RESULTS：The linear range of docetaxel was 0.167～3.333 μ g·mL － 1（r＝0.995 2）. The detection limit for docetaxel was 0.167 μg·mL－1. The extraction recovery was ranged from 84.7％ to 87.5％. The RSD of inter-day and intra-day were both lower than 10％ . CONCLUSION：The method is simple，accurate and rapid for the plasma concentration monitoring of docetaxel. KEY WORDS HPLC；Plasma concentration；Docetaxel
2.00 6.00 10.00 14.00 18.00 min 2.00 6.00 10.00 14.00 18.00 min 2.00 6.00 10.00 14.00 min
A
B
C
图 1 高效液相色谱图
A.多西紫杉醇对照品；B.空白血浆；C.空白血浆+多西紫杉醇对照品
Fig 1 HPLC chromatograms
摘 要 目的：建立测定人血浆中多西紫杉醇浓度的方法。方法：使用外标法，血浆样品经乙腈提取，振荡离心，过滤离心后进样 以高效液相色谱法测定，色谱柱为 Kromasil C18，流动相为乙腈，流速为 1.0 mL·min－1，检测波长为 230 nm，柱温为室温，灵敏度为 2.0AUFS，进样量为 10 μL。结果：多西紫杉醇血药浓度在 0.167～3.333 μg·mL－1范围内线性关系良好（r＝0.995 2），检测下限为 0.167 μg·mL－1；提取回收率在 84.7％～87.5％之间，日内、日间 RSD 均＜10％。结论：本方法简便、准确、快速，适用于多西紫杉醇 血药浓度监测。 关键词 高效液相色谱法；血药浓度；多西紫杉醇
Δ云南省社会发展科技计划（应用基础研究）项目（2009ZC171M） ＊副主任药师。研究方向：医院药学。电话：0871-3641285。Email：chyhdd@
1.2 试药 多西紫杉醇对照品（江苏恒瑞医药股份有限公司，纯度：
99.4％，批号：626090607RS）；乙腈为色谱纯，试验用水为双重 蒸馏水。空白血浆由云南省昆明血液中心提供。