利用液体培养基生产蛹虫草子实体的方法与设计方案
蛹虫草实验系列
目录学习目标一、综述：蛹虫草背景资料及市场调查分析（一）、蛹虫草背景资料1、生物学简介2、人工培养虫草的主要营养与药用成分均与野生虫草的含量比较3、蛹虫草的功能及产品开发（二）、蛹虫草人工栽培及产品开发研究概况1、固体栽培2、液体培养（三）、国内外虫草素研究现状1、国内的发展:高含量虫草素子实体研究2、虫草及虫草素在国外的研究现状（四）、市场分析1、市场调查2、需求分析：3、消费分析：4、医药行业分析二、学习前准备：实验室培养蛹虫草在完成本学习情境前，需要做好下列准备（一）、栽培管理（二）、灭菌方法三、工厂化蛹虫草生产（一）、建设条件和厂址选择1、资源情况。
2 、基础设施：(二)、工艺流程：制种(母菌种)一蛹虫草栽培一虫草素提取1、母菌种制作：2、蛹虫草栽培：(1)、配料：(2)、灭菌(3)、接种(4)、培养(5)、采收3、虫草素提取工艺（三）、环境保护与劳动安全1、排污情况2、治理环境的措施3、环境保护措施4、劳动保护与安全卫生四、结论学习情境三北冬虫夏草培养一、综述：蛹虫草背景资料及市场调查分析（一）、蛹虫草背景资料1、生物学简介虫草是我国的一种名贵野生中药材，具有补虚损、益精气、保肺、益肾、止血化痰、滋补强壮等功效。
与人参、鹿茸一起列为中国三大补药。
如一七五七年《本草从新》中就有“冬虫夏草甘平保肺，益肾，补精髓，止血化痰，已劳咳，治膈症皆良“的记载。
中医认为，虫草入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳萎遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。
全世界已知虫草类有350余种，我国目前有62种，但最为昂贵的只有冬虫草和北虫草。
古语日：宁要虫草一把，不要金玉满车；民间则称之为“活黄金“。
蛹虫草(又名北虫草、北冬虫夏草，) (c．mi litari s(L．)Link)，蛹虫草为子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科、虫草属的模式种，学名为cordyceps m．1itari s，世界性分布天然资源数量很少。
蛹虫草固体一级菌种培养基及液体菌种培养基的制作
蛹虫草固体一级菌种培养基及液体菌种培养基的制作一．实验目的学习并掌握蛹虫草固体一级菌种培养基、液体菌种培养基的制作方法二．实验原理蛹虫草（Cordyceps militaris），又名北冬虫夏虫，属于子囊菌门中的大型真菌，自然界中生长于昆虫的蛹体上，为虫生真菌。
20世纪30年代，有学者用昆虫蛹接种获得了具有成熟子囊壳的蛹虫草，之后人们用米饭培养基培养除了蛹虫草，用家蚕和柞蚕接种蛹虫草菌种培养出了批量的蛹虫草子实体。
蛹虫草作为一种食药用真菌，其生长所需要的营养物质包括碳源、氮源、维生素、矿物质元素等。
其各种培养基质的配置原则都要包含以上几种营养物质。
试验表明：适宜蛹虫草的碳源有蔗糖、葡萄糖、麦芽糖等；氮源有牛肉膏、蛋白胨、酵母浸出物、各种蚕蛹粉以及硝酸盐、铵盐等无机氮；维生素有维生素B1；矿物质盐有磷酸二氢钾、硫酸镁、磷酸氢二钠等。
三．仪器设备与实验材料1.主要仪器设备：电子台秤，高压蒸汽灭菌锅、电热炉等。
2.实验材料与试剂：玻璃棒，、脱脂棉、纱布、烧杯，漏斗，漏斗架，去皮刀，牛皮纸，量筒，马铃薯，葡萄糖，琼脂，水，蛋白胨，维生素B1，磷酸二氢钾等。
四．实验方法与步骤1.固体一级培养基的制作（1）配方一：改良PDA培养基：1000ml培养基包括200g马铃薯、20g葡萄糖、15-20g琼脂，2g蛋白胨、1g磷酸二氢钾，0.5g硫酸镁操作流程：马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加琼脂融化→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜面（2）配方二：大米培养基大米50g，磷酸二氢钾0.05g，葡萄糖10g，维生素B1 0.5g，水50ml操作方法：大米用清水浸泡5至6小时，沥水。
将0.05g磷酸二氢钾，10g葡萄糖，维生素B1 溶于50ml水中。
●将配置好的水溶液和大米共同装入罐头瓶中，瓶口用聚丙烯薄膜扎封。
❍高压灭菌1h2.液体菌种培养基制作培养基配方：1000ml液体培养基磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，葡萄糖30g，蛋白胨3g，维生素B1 50mg，马铃薯20g操作流程：马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、生素B1 50mg→分装→加棉塞→包扎→灭菌注：250ml摇瓶中中加入液体培养基120ml五．实验注意事项。
蛹虫草人工培育技术
蛹虫草人工培育技术蛹虫草人工培育技术蛹虫草，又称北冬虫夏草，北虫草，是子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科，虫草属的模式种，与冬虫夏草是同属不同种，也是一种久负盛名的药用真菌。
可全草入药，具有特殊的药用价值和滋补成效。
含有虫草酸、虫草素、虫草多糖、超氧化物歧化酶 SOD 和微量元素硒等多种生物活性物质，可促进机体新陈代谢，提高机体的免疫功能。
古人就有宁要虫草一把，不要黄金满车之说。
蛹虫草生理独特，生态复杂，自然界是鳞翅目昆虫的蛹体感染虫草菌后形成的虫与真菌两局部组成复合体，主要生长在针、阔叶林或混交林地表土层中。
在冬季幼虫蛰居土里，菌类寄生其中，吸取营养，幼虫体内充满菌丝而死。
到了夏季，从幼虫尸体上面生出幼苗，形似草，夏至前后采集而得到。
蛹虫草自然分布资源数量很少，价格昂贵。
采用传统人工栽培，是把虫草菌注入到活的蚕蛹身上，模拟自然条件得到蛹虫草。
但采用这种方法培育，注射技术难以控制，容易污染，产量低，一般农户难以操作。
近年来，也有不少人参照常规药用真菌的生产方法，出现培养基营养配比不合理，菌种退化、污染严重等多种现象，导致产量下降、效益较低。
为此，杭州市农科院科研人员通过多年的高产栽培研究和不同菌株比拟试验，采用大米代替蛹体作为培养基，培育蛹虫草，获得了成功。
经检测，人工培养虫草的主要营养与药用成分与野生虫草的含量相当。
而且采用人工代料培育蛹虫草具有成功率高，生长周期短等优点，一般从接种到子座成熟只要 40 —45 天。
蛹虫草人工培育过程与天然冬虫夏草不同，只是生产虫草上部子座，没有下部虫子。
现将培育技术介绍如下：人工培育蛹虫草的操作流程主要可分为以下几个阶段。
菌种准备→ 培养基的准备→ 接种→ 菌丝培养→ 出草管理→采收菌种准备：蛹虫草的菌种不能长期保存，也不要屡次转管扩繁，否那么菌种容易退化、变异，使子实体生长不良，而且产量和质量都会有明显下降。
因此采用人工栽培，需要经常留种，更新原来保存的菌种。
蛹虫草培育详细技术全套资料
蛹虫草培育技术全套蛹虫草生产工艺流程图1、削茧：即把蚕蛹从蚕茧中剥离出来，并进行挑拣，去除死蛹和不良蛹。
2、菌种培养基：按照菌种生长配方配制液体培养基，分装在摇瓶中，灭菌备用。
3、菌种培养：在装有灭菌过的培养基的摇瓶中接种原母种，置于恒温环境中的摇床上，培养7天。
即得菌液，用于接种（4接种）。
4、接种：将上述3得到的菌液通过接种针接种到上述1得到的优良蚕蛹体内。
5、硬化：将上诉4得到的接种后的蚕蛹，置于硬化室内，在恒温（并干燥）的环境下，硬化20天，让菌丝体布满蛹体内。
6、培养：将上述5硬化后的蚕蛹，置于培养室内，在恒温（湿度较大）的环境下培养30天，让菌体充分生长。
7、阴干：将培养生长好的菌体（连同载体蛹），置于干燥的阴干房内阴干5天，待水分降至20%以下，即转为干燥。
8、干燥：将上述7得到的半干后的菌体，置于烘房内，50度烘干至水分8%以下。
9、包装：按照上市要求，分装成若干g/袋。
9、检验：按照企业标准对产品进行检验，合格即可上市。
一、卫生要求1、进入净化车间需穿戴鞋套、净化服、帽子及口罩，并将个人物品放入个人衣柜内。
2、更衣完成后需洗手消毒并穿戴一次性手套。
3、严禁将食物、饮料等易造成微生物污染的物品带入净化车间内。
4、每天下班前需整理净化车间内卫生，所有接种用具均应摆放在指定位置，及时打扫工作台及地面卫生。
5、下班时，将鞋套、一次性手套丢入更衣室垃圾桶内，净化服、帽子等放置在个人物品柜内，净化服不得带出车间。
6、车间内垃圾、废料须每天清理，垃圾归整后统一倒入楼下垃圾箱内。
二、生产操作标准1、培养基制备及灭菌所有培养基配制必须按照培养基配方所要求药品、比例配制，不得私自更改配方或药品比例。
灭菌过程必须严格按操作方法要求执行。
操作方法：（1）称量：按培养基配方比例依次准确的称取配方药品放入烧杯中。
（2）熔化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅拌均匀，然后在石棉网上加热使其溶解。
培养蛹虫草的实验报告
培养蛹虫草的实验报告材料与方法一、材料1、菌种来源：蛹A，江苏铜山县七庙真菌厂；蛹B，武汉市新宇食用菌研究所；蛹C，河南清丰；蛹D，华中农大菌种中心；蛹Sc，华南师大生科院微生物研究室。
2、培养基：(1)斜面菌种培养基：综合PDA培养基。
(2)一级液体种培养基：玉米粉S0g，蔗糖10g，蛋白陈2g，KH PO0。
5g， KHPO40。
5g， MgSO4 1g，VitB微量，pH6-7，水1000ml(3)液体振荡发酵培养基：a综合PD培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，蛋白陈5g，KHPO4 1g，KHPO41g，MgS04 1g， VitB微量，pH6-7，水1000ml。
b番薯培养基：番薯200g，其他同a。
玉米粉培养基：玉米粉50g，其他同a。
(4)液体静止培养基：d综合PD培养基：成分同a。
e综合PD +3g琼脂。
f 综合PD+5g蚕蛹粉。
g综合PD + 5g蚕蛹粉+3g琼脂。
1。
2方法。
二、一级液体菌种培养方法及条件将培养两周、长满的斜面菌种接种于母种培养基中，25℃，140r/min，摇床振荡培养5天。
液体发酵培养方法和条件250m1三角瓶，培养基65ml，接入一级液体种7ml。
每个菌种，分别接入a、 b、c、3种培养基，每组设3个重复；在25℃，140r/min 进行振荡培养，3天后长满，测定菌丝干重和粗多糖产量。
1、2、3 菌丝干重测定。
深层培养液经3000r/min离心，去上清液后得菌丝体，置60-70℃烘箱中烘干达恒重，称重。
1、2、4粗多糖产量的测定。
深层培养液离心后的滤液，常压蒸发浓缩为 10m1-15ml 粘稠状液体，加入三倍体积的95%乙醇沉淀，4℃冰箱中静置24小时，过滤后置60-70℃烘干至恒重，称重。
结果与分析蛹虫草的液体振荡培养菌种在不同液体培养基上生长的情况在马铃薯液体培养基上，5个菌种的生长势最好，生成的菌球最多。
而在玉米粉培养基上培养的菌种的生长势最差，生成的菌粒较少或小。
蛹虫草液体深层发酵的研究
麦 角菌科 （ ｌ ｉｐｉ ｅｅ Ｃａ ｃ ｔ ｃａ）虫草 属 （ ｖｉ ａ
ｙｅ ｓ食 药 用 ｃｐ ）
来， 人们 已经把与 其有 相 同药用 和滋补 功效 ， 能人 工 并 培育 的蛹虫草作为冬虫 夏草 的替代 品 ， 以替代 天然冬虫
夏草的不 足 。而蛹虫草在人 工条件下 培育其子 实体 ， 具
真菌 ， 又称北冬虫 夏草…。经 中国 中医研究 院等权威 机 构检测发现 ， 其所含药用成分 和多种药效 可与冬虫夏 草 相媲美［ 。具有补肺益肾 、 一 补虚损 、 益精气 、 抗疲劳 、 抗肿 瘤、 抗衰老 、 美容 、 养颜等保健作用 以及 显著增强免疫 力 的食药用功能 ｊ 。
蛹 虫 草 ［ ｏｄ ｃ ｓ ｌ ａｉ（ ．； ｅ． ｒ Ｌｎ ］ Ｃ ｒｙ ｅ ｉ ｒ Ｖｕ１ Ｌ ｘ Ｆ ） ｉｋ ｐ ｍｉｔ ｓ ｌ
是 子囊 菌 亚 门（ ｓｏ ｃｔ ｉ）核 菌纲 （ ｙｅ ｏ ｃｔ ） Ａ ｃｍｙｏｉ ａ 、 ｎ Ｐ ｒ ｍｙｅ ｓ 、 ｎ ｅ
由于冬虫夏草人工栽培还没有获得成 功 ， 天然冬虫 夏草有限资 源 已 日益 枯 竭 ， 场 价 格 十分 昂贵 。近 年 市
基金 项 目 ： 吉林省教 育厅 “ 一 五 ” 学技 术 研 究 资 助 项 目（ 十 科 吉教
科合 字［ｏ８ 第 ２９ ） ２ｏ］ ４ 号 。
收稿 日期 ： ｌ —Ｏ —１ ２ Ｏ ９ ２ ０
液体培养基进行试验研究 ， 选 出适 合蛹虫草 菌丝生长 筛
Ｃｏ ｍｐ ｒ ｔ ｅ ｏ ｆｅ ｅ ｔＰ ｅ ｅ ｖ ｔ ｅ １ ｔ ｅ ａ ａ ｉ ｆＤｉｆ ｒ ｎ ｒ ｓ ｒ ａ ｉ ｓＯ１ ｈ ｖ ｖ Ｆｒ ｓ － ｅ ｐ ｎ ｆ ｃ ｆＣｕ ｅ ｎ ｗｅ ｓ ｅ ｈ ｋ ｅ ｉ ｇ Ｅｆｅ ｔｏ ｔＰ ｏ ｙ Ｈｏ ｒ
蛹虫草菌丝体液体培养条件研究
维普资讯
山
东
科
学
２０ 年 ０７
将活化的斜面菌种取 １ ２ 块接人基础培养基 （ 装液量为 １ ｉ ０ Ｌ三角瓶 ） 于一定温度下摇床 ０ ｍｄ ５ ｍ ０ ０ 内，
培养 ６ 。 ｄ
２ １ 干茵体 测定 方法 ．
将发 酵液 以 ３０ｒ ｉ ００／ ｎ离心 分离 ２ ｉ， ｍ ０ｍｎ 去除 上清 液 ， 质量 分数 为 ０８ 用 ．％的生 理盐水 反 复洗 涤后 ，Ｏ ￣ Ｉ０Ｃ 烘 干 ２ ３ｈ至恒 重 ， 用分析 天平 称取 菌 丝体 干质 量 。
ｗ ｉ ｔ ｏ ｅｍ ｃｌ ｍ ｂ ｉ ｉ ｅ ，ｎ ｅｏｔ ｕ ｑ ｉ ｃ ｔ ｅｎ ｕｌ ｏｄｃ ｓ ｉｔ ｉＬ ） ｅ ｈｓ ｆ ｙｅｉ ｅ ｇａ ｎ ｘ ａｄｔ ｐｉ ｍ ｌ ｄ ｕ ｕ ｌ ｎ ｏ Ｃ ｒ ｅ ｌａ （ ． ｇ ｔ ｈ ｕ ｎ ｄ ｈ ｍ ｉ ｌ ｒ ￣ ｕ ｆ ｙ ｐ ｍ ｉｒ
依据 。
ｌ 实 验 材 料
菌株来 源 ： 实验 室保 存 的菌株 。 本
实验设备 ：Ｅ Ｋ Ａ 一 ５一 型离心机；０ — Ｂ Ｃ Ｍ ＮＪ ２ Ｆ １１ ２电热鼓风烘箱 ； 一１０ 分析天 平 ； Ｔ— ＝ Ｆ ０４ ｊ Ｈ Ｓ 超净工作 ｓ 台，Ｋ 一 一 恒温震荡培养箱 ； ＳＬ ２ Ｆ 显微镜。
ｉ ｋ ｉ ｅｅ ｍｎ ｗ ｔ ｓ ｌ— ｔｒ ｅ ｐ ｒ Ｌ ｎ ｓ ｄ ｔｒ ｉｅ ｉ ｉｇｅ ｆｃｏ ｘ ｅ ｉ ｎ ｉ ｏ ｔ ｍ ｄ ｈ ｎ ａ ｍｅ ｔ Ｏｌｐ ｉ ｓ ｍｕ ￣／ ｏ ．ｌ ， ｎｔ ｅ ．ｌ ，ｃ ｔ ｒｌ ｂ ｎ ｓｌｃ ）Ｉ ｉ ｗｇ ｎ ｓ ｌ 【 ）Ｉ ｌ ｕ ｕ ａ
蛹虫草菌栽培实验
蛹虫草菌栽培实验一、实验目的1.掌握培养基的制作方法2.通过实验掌握蛹虫草接种和人工栽培的一般技术二、材料与用具1.材料：菌种（蛹虫草、细脚虫草、粉背虫草）培养土、PDA培养基（马铃薯、琼脂、葡萄糖、蛋白胨、牛肉浸、硫酸镁）2.用具：三角瓶、电磁炉、高压灭菌锅、剪刀、超净工作台、酒精灯及各种接种工具。
三、操作步骤1.培养基制作PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。
土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～2，（提前搞碎），然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。
（4）加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有好的通气性能。
(4)包扎加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
2.高压灭菌该法使用高压灭菌锅，在121℃，O．105MPa压力下灭菌15～30min。
微生物实训所需的一切器皿、器具、培养基(不耐高温者除外)、无菌水、工作服等物品都可用此法灭菌。
高压灭菌结束后,按无菌操作步骤,在酒精灯火焰上将分离培养好的蛹虫草斜面菌种,挑出一小块菌丝接入液体培养基中,将菌丝用接种环搅散。
蛹虫草菌丝体液体培养工艺的研究
关键词 ：蛹 虫草 ；液体 发酵 ；响应 面法 ； 中心 组合 设计
中 图分 类 号 ：Ｑ８ ５ １ 文献 标 志码 ： Ａ 文章编 号 ： ６ ４１ ７ （０ １ ０ —０ ３０ １ ７ —３ ４ ２ １ ） １０ ８ —５
Ｓｔ ｄ ｎ ｔ ｅ ｃ ｌｉａ ｉｎ ｔ ｃｈ ｏｌｇ ｆ ｕ ｙ ｏ ｈ ｕｔｖ ｔｏ ｅ ｎ ｏ ｙ ｏ
ｄｅ ｉ ｎ． ｓｇ
收 稿 日期 ：２ １ ＿卜Ｏ ０ ｌＯ ８ 作 者 简 介 ：房 天琪 （ ９ ７ ） 女 ， 族 ， 林 长 春 人 ， 春 工 业 大 学 硕 士 研 究 生 ， 要 从 事 功 能 食 品 与 生 物 技 术 方 向 研 究 ， — ｉ １８一 ， 汉 吉 长 主 Ｅ ｍａｌ ：
研究 ， 对虫 草产 业 发展 具 有 一定 的理 论 与 实 际 意
义 。
菌 操作 台上接 入 １ ０ ５ｃ 块 ． ｍ 菌 种块 ， 入 恒 温 放 振 荡培 养箱 中 ， ２ １ ０ｒ ｒｉ 在 ５ｏ ５ ／ ｎ的条 件下振 荡 Ｃ， ａ 培养 ３ｄ 得 到带 有菌 丝 体球 的种 子 液 ， ， 以一 定 接 种 量转 接至 发酵 培养 液 中 ， 同条 件 下培 养 ２ｄ 相 ，
Ｃｏ ｄｙ ｅｐ ｉｔ ｉ ｃ ｉｍ ｉ ｉ ｒ ｃ ｓ ｍ ｌ ａｒｓ ｍｙ ｅｌ ｉ ｕ ｌ ｄ ｑｕ
Ｆ ＡＮＧ ａ — ｉ ＱＩ Ｆａ ｇ ｐ ｎ ， Ｗ ＡＮＧ ａ ｇ ｚ ｏ Ｊ ａ —ｅ ｇ Ｔｉｎ ｑ ， Ｕ ｎ — ｉ ｇ Ｃｈ ｎ —ｈ ｕ， Ｘｉｏ ｆ ｎ Ｉ
通过预 实验 （ 源考察 和氮源 考察 ） 碳 选择 对蛹
干重 。 ２ ３ Ｐａｋ ｔ ２ ｕｍａ （ Ｂ ． ｌｃｅ Ｂ ｒ ｎ Ｐ ）设 计 ｔ
蛹虫草的制作工艺
用二龄蚕种植虫草方法及步骤1．悬浮液的制配方：葡萄糖20克（粉壮），黄豆粉10克，维生素B15片，硫酸镁0.4克，磷酸二氢钾3克，味精0.1克，食盐0.3克，水1000毫升。
（2）制法：按上面配方称好，放入锅中煮沸10分钟，然后将悬浮液倒入时筒或量杯中，如果不够1000毫升，加清水补足。
沉淀10分钟后，把上面清液装入盐水瓶中（葡萄糖瓶）。
装量为瓶体积的7/10瓶口用棉塞塞紧，注意：寄去的虫草一级母种可接4～5瓶悬浮液，故最少要装4瓶悬浮液。
（3）灭菌：①用手提式小型高压灭菌锅灭菌，乡村只要有卫生院医院点，均有小高压来菌锅，可借用不必购买，把瓶放进小高压锅，把螺旋用力拧紧，为防止漏气，升温火力应逐渐加大，当气压表指针升到0.5公斤／平方厘米时，即可打开排气阀排出冷空气，待冷气放尽后，压力表指针到零，再关上排气阀重新升温，当气压表指针达到1.5公斤／平方厘米时，再保持40分钟，即灭菌完毕。
把灭菌锅拿下火炉，让其自然冷却，待压力表指针到零时，打开放气阀排出残留蒸气，打开锅盖，取出灭菌的悬浮液瓶。
②用常压锅灭菌，用家里蒸馒头的锅也可，把瓶放在锅里，盖严盖子，等水开后，计算时间，8小时即灭菌彻底，也可每次灭菌3小时，第二次再灭菌3小时，第三次再灭菌2小时，总之需灭菌8小时。
（4）接种：按资料上无菌箱严格操作接种，首先把经过灭菌的4瓶悬浮液放入接种箱，再放酒精灯、火柴、接种钩（用自行车条自制一个钩即可），寄去虫草母种，然后把高锰酸钾30克放入瓷碗或铁盒内，再将20克甲醛也倒入盛有高锰酸钾的容器内，迅速关闭接种箱门，几秒钟后，甲醛溶液即沸腾挥发。
高锰酸钾是一种强化剂，当它与一部分甲醛作用时，由氧化反应产生的热可使其余的甲醛挥发为气体。
灭菌40分钟即可。
这时，把手用75％的酒精棉球擦一下，把手伸进接种箱，先点燃酒精灯，左手拿寄去的虫草母种，将试管口的棉塞在酒精灯火焰上烧一下灭菌（主要烧死棉塞上的杂菌），然后用右手指将棉塞拨出试管口，右手拿起接种钩在酒精灯火焰上通过两次，并立即将接种钩伸进试管内，取试管内的母种，只要试管斜面上的白色丝菌，少带一点斜面培养基也可迅速接入悬浮液中，接过种后，悬液瓶口棉塞必须再塞紧，每支母种可接4瓶县浮液。
蛹虫草液体培养基的优化试验研究
Ｓ ｅｉ ｉ ｃ ｎ ｍｉ Ａｎｍａ ａ ｄＰａｔ ｓａｃ ｐ ｃ ｌ ｌ Ｅ ｏ ｏ ｃ ｉ ｌ ｎ ｌ ｅｒｈ ａＷ ｄ ｎ Ｒｅ
Байду номын сангаас特 产 研 究
文 章编 号 ：０ １ ４ ２ （ ０ ０ ０ － ０ ０ ０ １ ０ — ７ １ ２ １ ）３ ０ ３ － ３
蛹虫草液体培养基 的优化试验研 究
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（ ．ｌ ｒ ｕｔｒ ｃ ｎ ｅ ｎ ｅ ｈ ｏ ｇ ｏ ｅ ｅＪ ｉ １ ２ １Ｃ ｉａ １ ｉｎ ｉ ｌ ｅＳ ｉ ｃ ｄ ｃ ｎｌ ｙＣ ｌ ｇ ，ｉｎ ｈｎ ； Ｊ ｉ Ａｇ ｃ ｕ ｅ ａ Ｔ ｏ ｌ ｌ ３ １ ， ０
关键词 ： 蛹虫草 ； 液体培养 ； 培养基 ； 菌丝体 中图分类 号： ９５３ Ｑ ４． 文献标识码 ： Ａ
Ｏｐ ｉ ｉａ ｉ ｎ Ｔｅ ｔ ｆ ｑ ｉ ｅ ｉ ｍ ｆＣｏ ｄ ｃ ｐ ｉ ｔ ｒｓ ｔｍ ｚ ｔ ｓ ｕ ｄ Ｍ ｄ ｕ ｏ ｒ ｙ ｅ ｓＭ ｌ ａ ｉ ｏ ｏ Ｌｉ ｉ
ｍ ｉｔｒｓｌｑ ｉ ｄ ｕ ． ｌ ａ ｉ ｕｄ ｍｅ ｉｍ ｉ ｉ
Ｋ ｅ ｒ ｓ： ｌ ａ ｉ ； ｑ ｉ ｕ ｔ ｒ Ｍ ｅ ｉｍ ； ｃ ｌ ｍ ． ｙ ｗｏ ｄ Ｍｉｔ ｒｓ Ｌｉｕ ｄｃ ｌｕ ｅ； ｄ ｕ Ｍｙ ｅｉ ｉ ｕ
蛹虫草又称北冬虫夏草 ， 是著名 的食药用菌 ， 具有 较高的食药用价值ｌ 其菌体内蛋 白质含量高达 ４ ％ 以 ｌ １ 。 Ｏ 上 ，氨基酸种类齐全 （ 中含有人 体必需的 ８ 其 种氨基
ｈ ｇ ｎ ｌｔｓ ： ｔ ｏ ｏ ａ ｅ ｔ ３ ％ ｓ ｃｏ ｅ， ％ ｙ ａ ｔｅ ｔａ ｔ ０ １ ％ ＫＨ２ Ｏ４０ １ ％ ｏ Ｓ ． ｅ ｓｕ ｙ ｐ ｏ ｉｅ ｈ ｏ ｅｉａ ａ ｉ ｒ ｕ ｒｓ ３ ｅ ｓ ｘｒｃ ， ． Ｐ ， ． ５ ｆＭｇ Ｏ４ Ｔｈ ｔ ｄ ｒ ｖｄ ｓ ａｔ ｅ ｒｔ ｌｂ ｓｓｆ ｃ ｏ
蛹虫草鲁山株C0511菌丝液体培养基筛选试验
河南农业科学蛹虫草鲁山株C0511菌丝液体培养基筛选试验宋越冬(山东理工大学农业工程与食品科学学院。
山东淄博255049)摘要：液体培养蛹虫草鲁山茵株，以茵丝体产量为指标，对培养基的碳源、氮源、无机盐、维生素Bl 进行单因素试验，并在单因素基础上进行四因素三水平正交试验，结果表明：影响液体培养茵丝产量的主次因素依次为氮源、碳源、维生素B。
和无机盐。
最佳培养基为：蔗糖20g／L、蛋白胨25g／L、维生素B l0。
159／L，无机盐为K H2P041．59／L+M gS040．59／L+C aCl20．259／L。
关键词：蛹虫革，液体培养基I正交试验中图分类号：S567．3+5文献标识码：A文章编号：1004—3268(2010)12—0107—04Sel ect i on of Subm e r ged C ul t ur e M edi um f orC or dyceps m i l i t ar i s St r ai n L us han C0511SO N G Y ue-dong(S c hool of A g r i c ul t ur e a nd Fo od Engi nee r i ng，S handong S c i e nce and Tec hn ol og y U ni ver si t y，Z i bo255049，Chi na)A bs t r act：T he ef fe ct s of cul t ure m edi um com pos i t i on s uch a s car b on s our ce，ni t rogen，m i ner al sa l t sand vi t am i ne Bl t o bi om as s O f C or dyceps m i l i t ai r i s w e r e i nv es t i gat ed by s i ngl e f ac t or exp er i m e nt and4f ac t ors and3l eve l s or t hogonaI des i gn r es pect i vel y．T he r es ear ch s how ed t hat t he or der of t he f act ors f r om pr i m ar y t o s econdar y w as：ni t r og en，car bon s our ce，vi t am i ne and m i ner al s al t s．A nd t he be s t m edi um w as20g／L s ucr os e+25g／L pept one+0．15g／L vi t am i neB l+1．5g／LK H2P O,+0．59／L M gSO．and0．259／L C a C l2．K e y w or ds：C or dyceps m i l i t a i r i s Subm er ged cul t ure m edi um；O r t hogona l des i gn蛹虫草又称北冬虫夏草，其所含药用成分和多种药效可与冬虫夏草相媲美I t-,]。
人工栽培蛹虫草液体菌种发酵工艺优化
人工栽培蛹虫草液体菌种发酵工艺优化蛹虫草是一种珍贵的药材，在中医药领域有着广泛的应用价值。
人工栽培蛹虫草是一种重要的保护性栽培方式，可以有效提高蛹虫草的产量和质量。
而液体菌种发酵工艺是人工栽培蛹虫草的关键环节之一，对于提高产量和质量具有重要意义。
本文将重点介绍人工栽培蛹虫草液体菌种发酵工艺的优化方法。
一、菌种筛选在人工栽培蛹虫草的液体菌种发酵过程中，合适的菌种选用至关重要。
一般来说，选用菌株的标准应包括菌株的活力、产孢量、产生药用成分的能力等。
通过多次试验筛选，选出活力强、产孢量高、产生有效成分的菌株，用于后续的液体菌种发酵。
二、菌种激活选好菌株后，需要进行菌种的激活。
菌种激活的目的是提高菌株的活力和产孢量，使其适应液体菌种发酵的环境。
常用的激活方法有液体培养和固体培养两种。
一般情况下，液体培养法能够更好地激活菌株，产生更多的孢子。
三、发酵液配方发酵液的配方是液体菌种发酵过程中的关键环节之一。
科学合理的发酵液配方可以提高发酵效果，增加产量。
一般来说，发酵液的配方包括碳源、氮源、无机盐和辅助培养物等。
碳源可以提供能量和碳，促进菌株的生长和繁殖。
氮源可以提供菌株合成蛹虫草多糖等活性成分的原料。
在配方中添加适量的无机盐和辅助培养物，可提供菌株所需的微量元素和生长因子，促进发酵液中菌株的繁殖和代谢。
四、发酵条件发酵条件的优化是提高液体菌种发酵效果的重要措施。
在液体菌种发酵中，温度、酸碱度、氧气供给和搅拌速度等都是重要因素。
一般来说，温度应在25-28摄氏度之间，酸碱度应保持在6-7之间，氧气供给要充足，搅拌速度要适中。
还需根据菌株的生长特性和环境条件进行调整，以提高液体菌种的发酵效果。
人工栽培蛹虫草液体菌种发酵工艺优化是保证蛹虫草产量和质量的关键环节。
只有通过合理的菌种筛选、菌种激活、发酵液配方和发酵条件优化等方法，才能提高液体菌种发酵效果，获得优质的蛹虫草产品。
希望本文对相关研究和生产工作有所启示和帮助。
人工栽培蛹虫草液体菌种发酵工艺优化
人工栽培蛹虫草液体菌种发酵工艺优化蛹虫草液体菌种发酵工艺是指在一定的条件下，将蛹虫草孢子或菌丝体细胞通过发酵培养和营养调节，最终形成所需的发酵液体菌种。
优化这一工艺能够提高蛹虫草的产量和品质，降低生产成本，对于蛹虫草产业的发展具有重要意义。
本文将针对蛹虫草液体菌种发酵工艺进行优化研究，探讨其发酵条件、培养基配方、发酵参数等方面的优化策略。
一、影响蛹虫草液体菌种发酵的因素1. 发酵条件：发酵条件是影响蛹虫草液体菌种发酵效果的重要因素之一。
发酵温度、pH值、溶氧量等条件的选择直接关系着菌种的生长和代谢过程。
合理的发酵条件能够提高蛹虫草的产量和品质，降低发酵过程中的能耗和资源消耗。
2. 培养基配方：培养基是支撑菌种生长和发酵的基础，其成分和比例的选择对于菌种的生长速度和产量具有重要影响。
合理的培养基配方能够提供菌种生长所需的营养物质，同时减少一些不必要的成分的浪费。
发酵参数包括发酵时间、发酵速率、产物浓度等，直接反映了菌种在发酵过程中的生长和代谢情况。
通过优化发酵参数，能够有效地提高菌种的生产效率和产量。
针对蛹虫草液体菌种的发酵条件，可以通过实验方法和数学模型进行优化。
首先是根据蛹虫草的生长特性和需求，选择适宜的发酵温度和pH值。
通过合理的气流控制和搅拌速率，保证菌种在发酵过程中的充分混合和氧化。
还可以利用生物反应器和传感器技术，实时监测并控制发酵条件，以获得最佳的发酵效果。
蛹虫草液体菌种的培养基配方优化，主要在于提高培养基的营养价值和菌种的生长条件。
可以通过单因素试验和响应面试验等方法，对培养基的各组分进行优化。
合理选择碳源、氮源、微量元素等成分的比例和种类，以满足菌种对于营养物质的需求。
还可以考虑添加生长因子和促进因子等，以促进菌种的生长和发酵产物的积累。
3. 发酵参数的优化：发酵参数的优化，可以采用传统的试验方法，也可以借助于现代化的自动控制技术。
通过对发酵时间、发酵速率、产物浓度等参数进行系统分析和调整，以获得最佳的发酵效果。
蛹虫草人工培养研究进展
蛹虫草人工培养研究进展蛹虫草是一种传统的中药材，具有多种功效，如增强免疫力，抗氧化，抗肿瘤等。
蛹虫草的天然资源有限，采集困难，价格高昂。
人工培养蛹虫草成为许多研究者关注的重点之一。
本文将对蛹虫草人工培养的研究进展进行综述。
蛹虫草的人工培养主要分为液体培养和固体培养两种方式。
液体培养是将蛹虫草菌种接种到液体培养基中，通过调整培养基配方和培养条件来促进菌丝生长和子实体形成。
固体培养是将蛹虫草菌种接种到含有适宜营养物质的固体基质中，如米糠、木屑等，使菌丝在固体基质上生长并形成子实体。
在液体培养方面，研究者主要关注培养基的配方和培养条件的优化。
培养基的配方包括碳源、氮源、无机盐和添加剂等。
碳源可以是葡萄糖、麦芽糖等，而氮源可以是蛋白胨、酵母粉等。
无机盐主要包括硫酸镁、磷酸二氢钾等。
添加剂可以是维生素、激素等，用于促进菌丝生长和子实体形成。
培养条件的优化也非常重要，如温度、pH值、光照等。
研究表明，适当的温度和pH值可以促进菌丝的生长和子实体的形成，而光照对菌丝形态和生理代谢有一定影响。
在固体培养方面，目前主要关注的问题是固体基质的选择和菌种的接种方式。
固体基质的选择应具有适宜的饲养性能和营养成分，可以提供足够的营养物质，同时保持适宜的水分和通气性。
常用的固体基质包括米糠、木屑、豆壳等。
菌种的接种方式可以是点状接种、均匀接种或层状接种等。
调控培养条件和添加适宜的营养物质，可以促进菌丝的生长和子实体的形成。
蛹虫草的人工培养还面临一些挑战和争议。
蛹虫草的人工培养成本较高，需要保持适宜的温度、湿度和通气等环境条件，消耗大量的能源和资源。
蛹虫草的人工培养技术尚未完全成熟，存在一定的技术难题，如菌种的选育、子实体的质量控制等。
人工培养的蛹虫草与野生蛹虫草在化学成分和药效上可能存在差异，需要进一步的研究和验证。
蛹虫草的人工培养是一个具有挑战和前景的研究领域。
通过优化培养基的配方和培养条件，选择适宜的固体基质和接种方式，可以促进蛹虫草的菌丝生长和子实体形成。
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本技术一种利用液体培养基生产蛹虫草子实体的方法，利用粮食中的淀粉或粮食加工后的废液中的淀粉为原料，配以一定的维生素、无机盐和氮源而制备成液体培养基。
在液体培养基中接入蛹虫草菌种进行液体摇菌培养，而后在20℃的温度进行静置培养，由于蛹虫草菌丝体的好氧生长特性促使菌丝体在液体培养基表面纠结成菌丝块。
经过进一步静置培养，在菌丝块上可以形成蛹虫草的子实体。
采收时除可以获得子实体以外，还可以连同菌丝块一起采收，可大大增加相对生物量的收获。
该方法可以很容易地获得蛹虫草子实体，为蛹虫草的生产提供了一个全新的生产方法。
权利要求书
1.一种利用液体培养基生产蛹虫草子实体的方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：步骤1：
液体培养基配制时，其中干淀粉的含量控制在2wt%～8wt%之间，其他成分的含量控制在：维生素B1为10～100mg/L、KH2PO4为0.1% wt～0.3 % wt、MgSO4为0.1% wt～0.3% wt、蛋白胨或奶粉为0.5% wt～1.5 % wt；
步骤2：
将步骤1配制好的液体培养基煮沸后过滤，再装瓶灭菌；
步骤3：
按1%～5%的体积比，将蛹虫草液体菌种加入到步骤2灭菌后的液体培养基中，在25℃、转速180rmp下进行摇菌培养2.5～4天；
步骤4：
将步骤3培养好的蛹虫草菌丝体在光照下进行20℃的恒温静置培养，促使菌丝体聚集在液体培养基的表面而形成菌丝块；
步骤5：
步骤4液体培养基的菌丝块在20℃继续光照静置培养一个星期后形成子实体；维持培养6～8周后，将生长出来的蛹虫草子实体，连同菌丝块一并收集利用。
2.根据权利要求1所述的一种利用液体培养基生产蛹虫草子实体的方法，其特征在于：所述的步骤1中的液体培养基是富含淀粉的粮食或粮食加工以后含淀粉的废液。
技术说明书
一种利用液体培养基生产蛹虫草子实体的方法
技术领域
本技术涉及一种利用液体培养基生产蛹虫草子实体的方法，具体属于蛹虫草生产技术领域。
背景技术
蛹虫草（Cordyceps militaris）又称北冬虫夏草，属真菌子囊菌纲麦角菌科，可由其真菌子座
与夜蛾科昆虫蛹形成复合体。
近年研究证明蛹虫草除了富含蛋白质、氨基酸、维生素及钙、铁、锰、锌、硒等微量元素外，还含有虫草素（cordycepin）、虫草酸（cordycepicacid）、虫草多糖和SOD等生物活性物质，具有扩张血管、镇静、抗菌、降血压等功效，在许多方面其功效可以媲美甚至超过冬虫夏草。
卫生部发布09年3号公告批准蛹虫草为新资源食品。
目前蛹虫草的人工栽培培养基主要的原料为大米、小米、高粱、玉米、奶粉、黄豆等，传统的生产方法中培养基都是固体培养基。
而采用固体培养基的方法栽培存在一定的不足：（1）传统方法蛹虫草子实体生产过程中对培养基的利用有限，将会有大量的粮食浪费；（2）传统方法中，象马铃薯等薯类不方便制备成固体培养基，一般不会直接用于蛹虫草的生产中；（3）蛹虫草生产中只收获了它的子实体，而培养基中的菌丝体由于不方便采收，一般都弃而不用，生物利用率不高，造成不小的浪费；（4）操作上更繁琐。
针对上述固体培养基方法的不足，本技术提出一种利用液体培养基生产蛹虫草子实体的方法，在液体培养过程中菌丝体充分接触养分，吸收营养充分，可以最大限度的利用营养物质，可最大限度转化利用，省工省时，适合规模化生产。
技术内容
本技术旨在建立一个利用含淀粉的粮食制备的液体培养基以及粮食加工以后含淀粉的废液作为液体培养基质，充分利用粮食资源深加工和生产具有食药用价值蛹虫草的一种方法。
本技术一种利用液体培养基生产蛹虫草子实体的方法包括以下步骤：
步骤1：
液体培养基配制时，其中干淀粉的含量控制在2wt%～8wt%之间，其他成分的含量控制在：维生素B1为10～100mg/L、KH2PO4为0.1% wt～0.3 % wt、MgSO4为0.1% wt～0.3% wt、蛋白胨或奶粉为0.5% wt～1.5 % wt。
步骤2：
将步骤1配制好的液体培养基煮沸后过滤，再装瓶灭菌。
步骤3：
按1%～5%的体积比，将蛹虫草液体菌种加入到步骤2灭菌后的液体培养基中，在25℃、转速180rmp下进行摇菌培养2.5～4天。
步骤4：
将步骤3培养好的蛹虫草菌丝体在光照下进行20℃的恒温静置培养，促使菌丝体聚集在液体培养基的表面而形成菌丝块。
步骤5：
步骤4液体培养基的菌丝块在20℃继续光照静置培养一个星期后形成子实体；维持培养6～8周后，将生长出来的蛹虫草子实体，连同菌丝块一并收集利用。
所述的步骤1中的液体培养基是富含淀粉的粮食或粮食加工以后含淀粉的废液。
本技术有益效果：
（1）可以充分利用粮食资源，包括马铃薯等薯类作物，甚至可以利用粮食加工过程中的废弃下脚料，由此可大大的降低原料的成本；（2）液体培养过程中，无论是在初期的摇菌培养，还是在随后的静置培养，菌丝体充分接触养分，吸收营养充分，可以最大限度的利用营养物质，培养基中的营养物质浪费少，达到较高的产出比；（3）生物利用率大大提高，生长出来的蛹虫草子实体可以连同下方的菌丝块一并收获，菌丝块中的营养成份和活性物质含量仍然很高，这样可达到最大限度转化利用的目的；（4）利用该方法省工省时，适合规模化生产。
具体实施方式
实施例1
马铃薯液体培养基生产蛹虫草子实体
步骤1.液体培养基的制备：液体培养基配制以每升200～300克鲜马铃薯为宜，同时可加入10～100mg/L维生素B1，0.1～0.3% KH2PO4，0.1～0.3% MgSO4，0.5～1.5%的蛋白胨或奶粉做为培养基的氮源。
培养基煮沸加热以后过滤去除大颗粒的杂质，高温高压灭菌。
步骤2.蛹虫草液体菌种的培养：预先将蛹草菌种接种在PDA平板培养基上，进行活化培养3天。
挑取蛹虫草菌丝体接种在有液体培养基的三角瓶中培养5天制备成蛹虫草的菌种。
步骤3.蛹虫草菌丝体的液体培养基中摇菌发酵培养：将制备好的液体菌种按液体培养基量的1～5%加入液体培养基中，以2%左右为好。
然后在25℃，转速180rmp下摇菌培养3天。
摇菌培养结束后，将发酵液在无菌操作的情况下倾倒入已经灭菌的容器中，液层约2.5～3 cm 厚。
如果生产量不多，也可在三角瓶中进行，无需再倒在其他容器当中。
步骤4.蛹虫草的静置发酵培养：倒有蛹虫草发酵液的容器在无菌的情况下，在光照下进行20℃的恒温静置培养，菌丝体由于好氧生长会自动在发酵液液面形成一层菌丝块。
步骤5.蛹虫草生长产生子实体的管理：由步骤4中形成的菌丝块为子实体的形成进行了必要的物质积累，20℃继续光照培养一个星期之后将可以形成子实体。
子实体生长期间可以根据需要置换其中的液体培养基2～3次，以补充形成子实体所需的部分营养。
在培养基置换时，培养基尽量不要沾在正在形成子实体的菌丝块上，以免影响子实体的生长。
培养周期大约在6～8周时间即可进行子实体的采收。
步骤6.蛹虫草子实体的采收：此方法生长出来的蛹虫草子实体可以连同下方的菌丝块一并收集，菌丝块中的营养成份和活性物质含量仍然很高。
实施例2
粮食加工中废弃物中的淀粉制备液体培养基生产蛹虫草子实体
步骤1.液体培养基的制备：粮食加工过程中收集废弃物中的淀粉（带有少量其他杂质也可以，但不能带有有害和有毒物质），得到的粗淀粉可以是固体的也可以是液体的。
在液体培养基配制时干淀粉含量在2～8%之间为宜，同时可加入10～100mg/L维生素B1，0.1～0.3% KH2PO4，0.1～0.3% MgSO4，0.5～1.5%的奶粉做为培养基的氮源。
培养基煮沸加热以后过滤去除大颗粒的杂质，高温高压灭菌。
步骤2.蛹虫草液体菌种的培养：方法同实施例1中步骤2。
步骤3.蛹虫草菌丝体的液体培养基中摇菌发酵培养：方法同实施例1中步骤3.
步骤4.蛹虫草的静置发酵培养：方法同实施例1中步骤4。
步骤5.蛹虫草生长产生子实体的管理：方法同实施例1中步骤5。
步骤6.蛹虫草子实体的采收：方法同实施例1中步骤6。