甲砜霉素纯度标准物质定值研究及其不确定度评估
甲砜霉素注射液的研制及稳定性实验
四川畜牧兽医学院学报 2000,14(4)Jo urnal o f Sichuan Institute of Animal Husbandry and V eterinary Medicin e甲砜霉素注射液的研制及稳定性实验吴俊伟1 曾忠良1 罗音久1 杨秀岑2(1 四川畜牧兽医学院动物药物研究所 重庆荣昌 402460)(2 华西医科大学药学院 四川成都 610041)摘 要 为了开发甲砜霉素注射液新剂型,设计出合理的处方及制备工艺。
用紫外分光光度法在265nm 处测定其含量变化,以经典恒温加速法测试该注射液的稳定性,并预测其有效期。
甲砜霉素注射液的热降解属一级动力学过程,在50℃、70℃、90℃、100℃的降解速度常数分别为5.37×10-5、6.88×10-4、1.80×10-3、1.03×10-2,根据Arrhenius 的指数定律k =Ae -E /RT推算出室温(25℃)条件下的速度常数k 25℃为2.878×10-6/h,室温贮存有效期为4.18年。
该处方及工艺是合理可行的,制备的制剂是稳定的。
关键词 甲砜霉素 注射液 处方 稳定性 有效期中图分类号 R943甲砜霉素系合成的广谱抗菌素,其抗菌谱、抗菌作用及作用机制与氯霉素相似,常用于呼吸道感染、伤寒,亦可用于肠道感染,且甲砜霉素的毒性比氯霉素低,即使引起了骨髓抑制也是可逆性的[1]。
目前市场上只有片剂和散剂两种剂型,因此开发该药的注射剂有重要意义。
本试验首先设计了甲砜霉素注射液处方,经条件优化制备了较稳定的注射液,建立了一套简洁高效的分析方法,然后考察了甲砜霉素注射液稳定性,按照稳定性试验中规定考察条件,对热加速处理后的样品进行了性状和含量的考察。
试验说明该注射液稳定,有关各项指标无明显变化。
现将试验步骤及结果分述如下。
1 仪器设备及试剂1.1 仪器Spectr onic 紫外分光光度计(美国),联想P Ⅱ300计算机作处理器并使用Excel 作数据处理,BS60电热三用水箱(北京市医疗设备厂),FA2004上皿电子天平(上海天平仪器设备厂)。
甲砜霉素检验记录
平均值（%）
标准规定
减失重量不得过1.0%
项目结论：
炽灼
残渣
样品号
1
2
供试品质量（m0）
炽灼前坩埚的重量（m1）
炽灼后坩埚和残渣的重量（m2）
计算公式：m2-m1
炽灼残渣= *100%
m0
炽灼残渣
平均值
标准规定:残渣的重量不得过0.1%
项目结论
复核人：检验人：
有限公司
原辅料检验记录辅页
本品的熔点为163-167℃.
吸收
系数
取本品，精密称定，加水溶解（约40℃加热助溶）并稀释成每1 ml中约含200ug的溶液，照分光光度法（附录17页）在266和273nm的波长处有最大吸收，吸收系数（E1cm1%）分别为25~28和21.5~23.5；取上述供试品溶液1ml，加水稀释成20ml在224nm的波长处有最大吸收，吸收系数（E1cm1%）为370-400。
（3）应显氯化物的
鉴别反应规定
（3）检查：
1、氯化物应符合规定规定
2、干燥失重不得过1.0%规定
3、酸碱度应符合规定规定
4、吸收系数应符合规定规定
5、炽灼残渣不得过0合规定规定
8、熔点 应为163-167℃规定
（4）含量测定：
按干燥品计，含规定
检查结果：
酸碱度
取本品0.2g，加水20ml溶解，加溴麝香草酚蓝指示液0.1 ml，如显蓝色，加0.02mol/L盐酸溶液0.10 ml，应变为黄色，加0.2mol/L氢氧化钠溶液0.10 ml，应变为蓝色。
检查结果：
氯化物
取本品0.5g，加水30ml，振摇5分钟滤过，取滤液15 ml，加稀硝酸1.5 ml，并立即加入0.1mol/L硝酸银溶液1 ml；在暗处放置2分钟，依法检查（附录51页），与标准氯化钠溶液5.0 ml制成的对照液比较，不得更浓（0.02%）。
SNT 2289-2009 进出口化妆品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素的测定 液相色谱-质谱 质谱法
氯霉素 ／ １ ５ ２． ０ ３ ２ １． ０
ａ ／ ３ ５ ３． ９ １ ８ ５． １
甲砜霉素 ／ ３ ５ ３． ９ ２ ９ ０． ０
ａ ／ ３ ５ ６． ０ ３ ３ ５． ７
氟甲砜霉素 ／ １ ８ ５． １ ３ ５ ６． ０ ａ 为定量离子对 。
） 附录 Ａ 所列参数是用 Ａ 此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考 ， 并 １ Ｐ Ｉ ４ ０ ０ ０ 质谱仪完成的 ， 非商业性声明 ： 不涉及商业目的 ， 鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器 。 ４
／ ２ ２ ８ ９—２ ０ ０ ９
附 录 （ 资料性附录 ） 氯霉素 、 甲砜霉素和氟甲砜霉素混合标准溶液选择性离子流图
） ａ
） ｂ
） ｃ
） ｄ
） ｅ
ห้องสมุดไป่ตู้
） ｆ
图
甲砜霉素和氟甲砜霉素 （ 混合标准溶液的选择性离子流图 ． １ 氯霉素 、 ０． ２ ５∰／ ∭ ）
５
中华人民共和国出入境检验检疫
行 业 标 准 进出口化妆品中氯霉素 、 甲砜霉素 、 氟甲砜霉素的测定 液相色谱 质谱／质谱法
相对离子丰度／％ 允许的相对偏差／％ ０ ＞５ ʃ２ ０ ０～５ ０ ＞２ ʃ２ ５ ０～２ ０ ＞１ ʃ３ ０ ０ ≤１ ʃ５ ０
５． ２． ５ 空白试验 除不加试样外 ， 均按上述操作步骤进行 。 ６ 结果计算和表述 ） 用色谱数据处理机或按式 （ 计算试样中氯霉素或甲砜霉素或氟甲砜霉素含量 ， 计算结果需扣除空 １ 白值 ：
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
／ ２ ２ ８ ９—２ ０ ０ ９
进出口化妆品中氯霉素 、 甲砜霉素 、 氟甲砜霉素的测定 ／ 液相色谱 质谱 质谱法
甲砜霉素
甲砜霉素JiafengmeisuThiamphenicolC12H15Cl2NO5S 356.23本品为﹝R-(R*, R*)﹞N-﹝1-（羟基甲基）-2-羟基-2-﹝4-（甲基磺酰基）苯基﹞乙基﹞-2，2-二氯乙酰胺。
按干燥品计算，含C12H15Cl2NO5S不得少于98.0%。
【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭。
本品在二甲基甲酰胺中易溶，在无水乙醇中略溶，在水中微溶。
熔点本品的熔点（附录51页）为163～167℃。
比旋度取本品，精密称定，加二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成每1ml 中约含50mg的溶液，依法测定（附录53页），比旋度为－21°至－24°。
吸收系数取本品，精密称定，加水溶解（约40℃加热助溶）并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录26页），分别1％）分别为25～28和在266nm和273nm的波长处测定吸光度，吸收系数（E1cm21.5～23.5；精密量取上述供试品溶液适量,用水定量稀释制成每1ml中约含10µg的溶液，在224nm的波长处测定吸光度，吸收系数（E1cm1％）为370～400。
【鉴别】（1）取本品与甲砜霉素对照品适量，分别加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含10mg的溶液。
照薄层色谱法（附录33页）试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇（97：3）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。
供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液主斑点的位置和颜色相同。
（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。
（4）取0.1％的本品溶液5ml,加0.1mol/L硝酸银溶液2ml，不得有沉淀生成。
取本品50mg，加乙醇制氢氧化钾试液2ml使溶解，防止乙醇挥散，在水浴中加热15分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录25页）。
甲砜霉素原料检验操作规程
GMP管理文件引用标准：甲砜霉素内控质量标准一、目的：为规定甲砜霉素的检查方法和操作要求，特制定此标准。
二、适用范围：适用于本公司甲砜霉素的质量检测。
三、责任者：检验员。
四、正文：检品名称：甲砜霉素分子式：C12H15ClNO5S分子量:356.231．技术要求：1.1物理性状：本品为白色结晶性粉末；无臭，本品在二甲基甲酰胺中微溶，在无水乙醇中略溶，在水中微溶。
熔点：本品的熔点为163-167℃。
比旋度：取本品，精密称定，加二甲基甲酰胺溶解并稀释成每1mg中含50mg的溶液，依法测定，比旋度为-21°至-24°取本品，精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中约含200µg的溶液，照分光光度法，在266nm和273nm的波长处有最大吸收，吸收系数分别为25-28和21.5-23.5；取上述供试品溶液1ml，加水稀释成20ml，在224nm的波长处有最大吸收，吸收系数为370-400。
1.2该产品应符合以下标准：2．鉴别2．1仪器与用具:硅胶G薄层板、层析缸2．2试剂与溶液:甲醇、0.1硝酸银溶液mol/L、乙醇制氢氧化钠溶液、醋酸乙酯-甲醇（97：13）、2.3操作方法2.3.1取本品与甲砜霉素对照品，分别加甲醇制成每1 ml 中约含10mg的溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇（97：13）为展开剂，展开后，晾干，置紫外灯下检视，供试品所显主斑点的颜色和位置应与对照品的主斑点相同。
3检查3．1仪器与用具:烘箱、坩埚3.2操作方法酸碱度取本品0.1g，加水20ml使溶解，加溴麝香草酚蓝指示液0.1ml如显蓝色，加0.02mol/L盐酸溶液0.10ml，应变为黄色，如显黄色，加0.2mol/L的氢氧化钠溶液0.10 ml，应变为蓝色。
氯化物取本品0.5 g，加水30ml，振摇5分钟，滤过，取滤液15ml，加稀硝酸 1.5ml，并立即加入0.1mol/L硝酸银溶液1ml，在暗处放置两分钟，依法检查，与标准氯化钠溶液5.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.02%）。
甲砜霉素内控质量标准
制药GMP管理文件一、目的：制定甲砜霉素的内控质量标准，规范公司甲砜霉素的采购与使用。
二、适用范围：适用于甲砜霉素的采购与验收。
三、责任者：生产部、检验员、仓库保管员。
四、正文：甲砜霉素【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭。
本品在二甲基甲酰胺中易溶，乙醇中略溶，在水中微溶。
熔点本品的熔点为163--167℃。
比旋度本品，精密称定，加二甲基酰胺溶解并稀释成每1ml中含50 mg 的溶液，依法测定,比旋度为-210～-240。
【鉴别】1取本品与甲砜霉素对照品，分别加甲醇制成每1ml中约含10mg的溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇（97：13）为展开剂，展开后，晾干，置紫外灯（254nm）下检视，供试品所显主斑点的颜色和位置应与对照品的主斑点相同。
2 本品的红外线吸收图谱应与对照品的吸收图谱一致。
3取本品约5mg,加水5ml，加0.1mol/L硝酸银溶液2ml，不得有沉淀产生。
取本品50mg，加乙醇制氢氧化钾试液2ml使溶解，防止乙醇挥发，在水浴中加热15分钟，溶液显氯化物的鉴别反应。
4在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
【检查】酸碱度取本品0.1g，加水20ml溶解，加麝香草酚蓝指示液0.1ml，如显蓝色，加0.02mol/L的盐酸溶液0.10ml，应变为黄色；如显黄色，加0.02mol/L氢氧化钠溶液0.10ml，应变为蓝色。
氯化物取本品0.5g，加水30ml，振摇5分钟，滤过，取滤液15ml，加稀硝酸1.5ml，并立即加入0.1mol/L硝酸银溶液1ml，在暗处放置2分钟，依法检查，与标准氯化钠溶液5ml制成的对照液比较，不得更浓（0.02%）。
干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过1.0%。
炽灼残渣取本品1.0g，依法检查，遗留残渣不得过0.1%。
重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查，含重金属不得过百万分之十。
甲砜霉素散(成品)检验操作规程
GMP管理文件一．目的：为规定甲砜霉素散质量检测方法和操作要求，特制定此标准。
二．适用范围：适用于甲砜霉素散的质量检查。
三．责任者：检验员四．正文：检品名：甲砜霉素散1．技术要求1．1理化性状：本品为白色粉末。
1．2该产品应符合以下标准：2．实验方法2．1鉴别：2．1．1试剂与溶液乙酸乙酯-甲醇（97：13）、甲醇2．1．2仪器与设备硅胶GF254薄层板、层析缸2．1．3鉴别方法取本品及甲砜霉素对照品，分别加甲醇制成每1ml中含10mg的溶液照薄层色谱法试验，吸取上述两种种溶液各5ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇（97：13）为展开剂，展开后，晾干，置紫外灯（254nm）下检视，供试品所显主斑点的莹光和位置应与对照品的主斑点相同。
2．2检查：2．2．1外观均匀度：取本品适量，平铺于光滑纸上，成5cm2，将表面压平，在亮的背景下观察，呈均匀色泽，无花纹与色斑。
2．2．2干燥失重：2．2．2．1仪器与用具:恒温干燥箱：温度在 105±2℃干燥扁形称量瓶：玻璃，带盖2．2．2．2测定方法:用干燥至恒重的称量瓶称取试样1g，准确至0.0002g，放入105±2℃的干燥箱中，打开称量瓶盖，干燥4小时。
盖好盖，放入干燥器中，冷却至室温，称量。
2．2．2．3结果的计算:干燥失重百分含量=（m1-m2）/（m1-m）×100%式中：m1—样品与称量瓶干燥前重量m2—样品与称量瓶干燥后重量m—称量瓶干燥后重量2．2．3装量：2．2．3．1仪器与用具:干燥器：用氯化钙或硅胶作为干燥剂2．2．3．2测定方法:取样品3个，清洗干净并在干燥器中干燥，称重，准确至0.1g。
除去内容物，将外包装清洗干净，干燥，称重，求出每个的装量及平均装量。
2．3含量测定；2．3．1仪器与设备:分光光度计、分析天平2．3．2试剂与溶液:无水乙醇2．3．3测定方法:取本品适量（约含甲砜霉素25mg）精密称定，置100ml瓶中，加温乙醇30ml，振摇30分钟，使溶解，冷却至室温，加无水乙醇稀释至刻度，滤过，弃去初滤液，取续滤液，加无水乙醇定量稀释成每1ml中约含10µg的溶液，照分光光度法，在226nm波长处测定吸收度，另取甲砜霉素对照按同法测定计算即得。
6甲砜霉素的检测方法研究进展11...
不同温度下甲砜霉素在鲫体内的药物动力学及残留研究目录摘要 (1)Abstract (2)缩略语表 (4)1前言 (5)1.1 立题背景与意义 (5)1.2甲砜霉素研究进展 (6)1.2.1氯霉素类药物概况 (6)1.2.2甲砜霉素的理化性质 (7)1.2.3甲砜霉素的药效学研究 (7)1.2.4甲砜霉素的毒理学研究 (8)1.2.5甲砜霉素的药物动力学研究进展 (9)1.2.6甲砜霉素的检测方法研究进展 (11)1.2.7 甲砜霉素的高效液相色谱法检测方法进展 (12)1.2.8 甲砜霉素的组织残留研究进展 (13)1.3 研究内容及目的 (14)2 材料与方法 (16)2.1 材料 (16)2.1.1 试验动物 (16)2.1.2 药品与试剂 (16)2.1.3 仪器设备 (16)2.2定量方法 (17)2.2.1 试验中相关溶液的配制 (17)2.2.2 色谱条件 (17)2.2.3 血浆样品的处理 (17)2.2.4 组织样品的处理 (18)2.2.5 血浆标准工作曲线 (18)2.2.6 组织标准工作曲线 (18)2.2.7 方法学验证 (19)I华中农业大学2012届硕士学位论文2.2.8 鲫血浆及组织中的药物浓度测定 (19)2.3 药物动力学试验设计 (19)2.3.1 动物分组、给药与采样 (19)2.3.2 药物动力学分析 (20)2.4 药物残留试验设计 (20)2.4.1 动物分组、给药与采样 (20)2.4.2 药物残留分析 (20)2.5 数据处理及统计分析 (20)3 结果 (21)3.1 定量方法 (21)3.1.1标准工作曲线及线性范围 (21)3.1.2甲砜霉素的色谱行为 (21)3.1.3 方法学验证 (22)3.1.3.1灵敏度考察数据 (22)3.1.3.2回收率及精密度考察数据 (22)3.2单剂量给药后的药物动力学数据分析 (25)3.3 药物残留数据分析 (27)4讨论 (33)4.1甲砜霉素在生物样品中的分离纯化 (33)4.2 色谱条件的选择与优化 (34)4.3 试验方案的制定 (34)4.3.1 给药方式的选择 (34)4.3.2 采血时间点和组织残留时间点的确定 (35)4.4 药物动力学 (35)4.5药物的残留消除 (36)5结论 (38)5.1 建立了甲砜霉素在鲫鱼血浆和各组织中的纯化和HPLC检测方法 (38)5.2对比分析了不同季节条件下甲砜霉素在鲫鱼体内的药物动力学特征的异同 (38)5.3对比分析了不同季节条件下甲砜霉素在鲫鱼体内的残留消除规律并制定了相应的休药期 (38)II参考文献 (39)致谢 (48)附录 (49)附录 1 标准工作曲线 (49)附录2 血浆及各组织中加样色谱图及空白对照图 (50)附录3 检测限色谱图 (52)III摘要本论文研究了在10℃和25℃两个水温条件下，甲砜霉素在鲫体内的药物动力学特征和残留消除规律特征。
甲砜霉素散(成品)检验记录
取甲砜霉素对照品适量，精密称定，同上法制得。
样品编号
内容
1
2
样品取量VS（g）
样品吸收度AS
对照品取量Wc
对照品吸收度Ac
计算公式:X=AS*Wc*N/VS*S*Ac
N（对照品含量）=S=5%
样品百分含量
含量平均值
标准规定:含甲砜霉素应为标示量的92.0%~108.0%。
项目结论：
检验结论：本品按<<甲砜霉素散内控质量标准（成品）>>检验，结果
干燥失重=
W1- W0
干燥失重量不得过10.0%
项目结论
含量测定：甲砜霉素散室温：℃湿度：%
主要分析仪器
名称
型号
精度
编号
分析天平
TG-328A
0.0001
HT-002
紫外分光光度计
752N
---------
HT-003
样品制备：取本品适量（约相当于甲砜霉素25mg），精密称定，置100ml量瓶中，加乙醇30ml，振摇30分钟，使溶解，冷却至室温，加无水乙醇稀释至刻度，滤过，弃去初滤液，取续滤液，加无水乙醇定量稀释成每1ml中约含10µg的溶液，照分光光度法，在226的波长处测定吸收度。
检验结果：
检查
装量
样品号
1
2
3
药+包装重
包装重
药重
平均
标准规定
每袋装量不得少于标示量,平均装量不得少于标示量
项目结论
干燥
失重
天平室温度℃湿度 %
干燥条件
105℃干燥至恒重
检品号
1
2
称量瓶重W0
瓶+药重W1
正相高效液相色谱法测定L-甲砜霉素
甲砜霉素（Thiamphenicol ，thiocymetin ，thio -phenicol ，TAP ）又称硫霉素或甲砜氯霉素，属于酰胺醇类广谱抗生素。
临床上用于敏感菌如流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、沙门菌属等所致的呼吸道、肝胆系统、肠道和泌尿系统感染及脑膜炎等治疗；并为具抗菌作用的有效免疫抑制剂，可用作器官移植的延长剂，常见有肠胃道反应，偶见皮疹、口炎、黏膜炎、中枢神经系统反应等。
L-甲砜霉素是甲砜霉素的左旋体，在原料药化学合成时带入，原料药生产企业对其进行内部控制，现行质量标准中国药典[1]未对其进行质量控制，原料药的质量对制剂的质量有着直接影响。
为了更好地控制甲砜霉素的质量，保证患者用药安全有效，本文建立了HPLC 法测定甲砜霉素原料及制剂中的L-甲砜霉素，该方法准确可靠，简便快捷。
1仪器与试药1.1仪器Agilent 1260高效液相色谱仪，DAD 二极管阵列检测器，梅特勒XS-205DU 电子天平。
1.2药品及试剂甲砜霉素（批号130433-201103，含量99.3%）购于中国食品药品检定研究院；L-甲砜霉素原料（批号P-051-CN20160801，含量98.7%）浙江海翔川南药业有限公司提供。
醋酸铵、乙腈均为色谱纯，水为纯化水。
甲砜霉素肠溶片8批次及甲砜霉素胶囊6批次，均为2017年国家评价性抽样样品。
2方法2.1色谱条件及系统适用性色谱柱为正相手性色谱柱[2-3]AS-H （250mm×4.6mm ，5μm ）；以正己烷-甲醇-乙醇（84∶8∶8）为流动相；检测波长为225nm ；柱温：30℃；流速：1.0mL ·min -1；L-甲砜霉素的相对保留时间约为0.87，L-甲砜霉素和甲砜霉素的分离度应符合规定。
2.2测定方法取本品细粉适量（甲砜霉素原料药直接称取样品细粉；甲砜霉素肠溶片取10片，研细后称取细粉；甲砜霉素胶囊取20粒内容物，混匀后称取细粉）加稀释剂［甲醇-乙醇（50∶50）］溶解并稀释制成约1mg ·mL -1的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密量取2mL ，置100mL 量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中氟甲砜霉素残留量的不确定度
超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中氟甲砜霉素残留量的不确定度作者：吴正双，王光新，林显活来源：《现代食品》 2018年第12期摘要：建立超高效液相色谱- 串联质谱法，并以此测定水产品中氟甲砜霉素的不确定度，对测量结果的不确定度来源进行分析。
评定结果表明，影响检测结果的主要因素为标准溶液配制、样品测量重复性和标准曲线拟合，当氟甲砜霉素含量分别为5.20 μg/kg 时，其扩展不确定度为0.313 μg/kg。
关键词：超高效液相色谱- 串联质谱；水产品；氟甲砜霉素；不确定度Abstract：A mathematical model was established for uncertainty evaluation inthe determination ofthiamphenicol residues in aquatic products by ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry (UPLC-MS/MS). The sources of uncertainty were analyzed and each component of uncertaintywas quantified. The results showed that the preparation of standard solution, measurement repeatability ofsamples and curve fitting were main sources of uncertainty. An expandeduncertainty of 0.313 μg/kg wasobtai ned for the determination of the presence of5.20 μg/kg thiamphenicol in aquatic products.Key words：UPLC-MS/MS; Aquatic products; Thiamphenicol; Uncertainty中图分类号：TS254.7不确定度是与测量结果相关的参数，用来表示被测量值的分散性，其数值大小反映了结果的准确性，与结果的判定相关，一切测量都不可避免地具有不确定度[1-3]。
液相色谱- 串联质谱法测定鱼肉中氟甲砜霉素的不确定度评估报告
doi:10.16736/41-1434/ts.2020.08.063
液相色谱 - 串联质谱法测定鱼肉中 氟甲砜霉素的不确定度评估报告
Uncertainty Report on Determination of Florfenicol Residues in Fish by Liquid Chromatography-Mass Spectro氯霉素类的 动物专用广谱抗菌药，用于敏感细菌所致的猪、鸡及 鱼的细菌性疾病，尤其对呼吸系统感染和肠道感染疗 效显著。农业部 235 号公告《动物性食品中兽药最高 残留限量》对氟甲砜霉素在不同的动物种类中的最高 残留限量有明确的规定 [1]。本文参照 JJF 1135-2005《化 学分析测量不确定度评定》[2] 和 JJF 1059.1-2012《测 量不确定度评定与表示》[3]，依据 SN/T 1865-2016《出 口动物源食品中甲砜霉素、氟甲砜霉素和氟苯尼考胺
级乙腈；分析纯乙酸乙酯、甲醇、甲酸、三氯乙酸、 无水硫酸钠、氨水、氢氧化钠、氯化钠；阳性鱼肉样 品（实验室制备）。 1.2 仪器与设备
AB SCIEX 5500 型高效液相色谱 - 串联质谱仪（配 ESI 源）；电子天平；固相萃取装置；涡旋振荡器； 高速离心机；氮吹仪；减压浓缩仪；C18 固相萃取柱 （500 mg/3 mL）。 1.3 方法
关键词：液相色谱 - 串联质谱法；鱼肉；氟甲砜霉素；不确定度 Abstract：According to JJF 1135-2005 and JJF 1059.1-2012, the uncertainty of determination of Florfenicol Residues in Fish by SN/T 1865-2016 was evaluated. By establishing a mathematical model, the sources of uncertainty were analyzed and the effects of different sources were measured and calculated. The results showed that the uncertainty generated by the calibration curve fitting and standard solution preparation process is the largest, followed by the uncertainty generated by the stock solution dilution process and the recovery rate. Key words：LC-MS/MS; Fish; Florfenicol; Uncertainty 中图分类号：TS254.7
食品中甲砜霉素测定的研究进展
160 食品安全导刊 2021年2月Tlogy科技食品科技甲砜霉素系氯霉素类广谱抗生素，其抗菌谱与氯霉素基本相似，属于广谱抗生素，对低浓度流感杆菌、脑膜炎球菌和淋球菌具有强大的杀菌作用。
在应用甲砜霉素治疗过程中应定期检查周围血象，疗程较长者尚需检查网织细胞计数，以及时发现血液系统不良反应。
肾功能不全者甲砜霉素排出减少，体内可有蓄积倾向，应减量应用，根据肾功能调整用药。
本文主要研究四环素的检测分析方法和，为以后的研究打好基础。
１ 食品中甲砜霉素的研究进展曹丽丽和她食品检验检测研究院的同事们合作研究了超高效液相色谱-三重四级杆/复合线性离子阱质谱技术结合谱库检索分析，建立了鸡蛋中氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素的快速检测方法。
样品加入氯霉素-D 5后，经乙腈提取，浓缩至干，3.00 mL 水复溶，正己烷去脂净化，以乙腈-水为流动相，经F 5色谱柱分离，用QTrap UPLC-MS/MS 进行多反应监测、信息依赖性扫描、增强子离子扫描和谱库检索分析；氯霉素内标法定量，氟苯尼考、甲砜霉素外标法定量。
结果表明，氯霉素和氟苯尼考在 0.03～50.0 μg/L，甲砜霉素在0.06～50.0 μg/L 的线性范围内线性关系良好，相关系数r ＞0.999；氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素在3个加标水平下，平均回收率为90.1%～120.0%，精密度为4.2%～11.9%，检出限为0.05～0.10 μg/kg。
该方法高效、简便、准确，可用于鸡蛋中酰胺醇类抗生素定性和定量分析[1]。
张丽萍和兽药饲料监察所的工作人员合作，一起探讨研究了鸡和猪组织中酰胺醇类药物残留，保障畜禽产品质量安全，建立了同时测定鸡和猪组织中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留量的气相色谱-质谱法。
样品经氨化乙酸乙酯溶液提取，固相萃取柱净化，双三甲基硅烷三氟乙酰胺衍生，气相色谱-质谱法测定，内标法定量。
结果显示，甲砜霉素（TAP）、氟苯尼考（FF）及其代谢物氟苯尼考胺（FFA）在5～5 000 μg/L浓度范围内线性关系良好，相关系数r 均大于0.999。
超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中氟甲砜霉素残留量的不确定度
超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中氟甲砜霉素残留量
的不确定度
吴正双;王光新;林显活
【期刊名称】《粮食流通技术》
【年(卷),期】2018(000)012
【摘要】建立超高效液相色谱-串联质谱法,并以此测定水产品中氟甲砜霉素的不确定度,对测量结果的不确定度来源进行分析.评定结果表明,影响检测结果的主要因素为标准溶液配制、样品测量重复性和标准曲线拟合,当氟甲砜霉素含量分别为
5.20μg/kg时,其扩展不确定度为0.313μg/kg.
【总页数】4页(P116-119)
【作者】吴正双;王光新;林显活
【作者单位】佛山市质量计量监督检测中心,广东佛山 528225;国家知识产权局专利局专利审查协作江苏中心,江苏苏州215163;佛山市质量计量监督检测中心,广东佛山 528225
【正文语种】中文
【中图分类】TS254.7
【相关文献】
1.水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留量高效液相色谱-串联质谱内标测
定方法的研究 [J], 王志杰;冷凯良;孙伟红;刘艳萍;翟毓秀;谭志军;郭萌萌;王瑜
2.分散固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定水产品中氯霉素类药物的残留量 [J],
张桂云;杨伟强
3.超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中氟甲砜霉素残留量的不确定度 [J], 吴正双;王光新;林显活;;;
4.超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中瑞他莫林的残留量 [J], 马剑锋; 张小军; 陈雪昌; 严忠雍; 宗婧婧; 曾军杰
5.同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法测定水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留量的不确定度评定 [J], 刘柱; 徐潇颖; 赵超群; 陈万勤; 梁晶晶; 毛思浩; 华颖
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氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考残留量的不确定度分析
氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考残留量的不确定度分析
谢翠美;姚婉仪;胡浩光;刘少彬;彭家杰
【期刊名称】《食品安全导刊》
【年(卷),期】2022()35
【摘要】为了得到更加精准可信赖的检测数据,采用液相色谱-质谱联用仪对水产品中酰氨醇类化合物中甲砜霉素、氯霉素、氟苯尼考残留量进行检测,分析影响测量结果的因素来源,并计算各影响因素的扩展不确定度。
计算结果显示,使用测试负离子较稳定的AB液质联用仪对甲砜霉素、氯霉素、氟苯尼考进行测量,其自身的校准因子影响也较大,此外回收率与工作曲线的拟合校准率也不容忽视,因此检测人员不但要注意检测过程的关键环节,也要经常对仪器进行清洗维护,确保仪器处于最优的运行状态。
【总页数】5页(P79-83)
【作者】谢翠美;姚婉仪;胡浩光;刘少彬;彭家杰
【作者单位】东莞市动物疫病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.虾肉中氯霉素甲砜霉素氟苯尼考及氟苯尼考胺残留气相色谱-微电子捕获检测法
2.水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺多残留的同时测定-GC/MS 法
3.鸡、猪组织中甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺残留量测定的GC-MS法建立
4.HPLC-MS/MS测定动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量结果的不确定度评定
5.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物组织中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和其代谢产物氟苯尼考胺残留量
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动物性食品中甲砜霉素残留检测技术的研究概况
山地农业生物学报 24(1):84～86,2005Journal of Mountain Agriculture and B iol ogy动物性食品中甲砜霉素残留检测技术的研究概况毛以智,陈眷华,王文博,陈欣毅(贵州大学动物科学学院,贵州贵阳 550025)摘 要:甲砜霉素是一种作用强,抗菌谱广的抗生素,是目前我国防治畜禽疾病的重要药物,在动物性食品中的残留已引起重视。
本文就此药物的残留分析方法作一综述。
关键词:甲砜霉素;药物残留;液相色谱法;气相色谱法;动物性食品中图分类号:S859184;TS20715 文献标识码:A 文章编号:1008-0457(2005)01-0084-03The research situa ti on of i n specti on techn i ques for tham phen i col resi due i n an i m a l productsMAO Y i2zh i,CHEN J uan2hua,WAN G W en2bo,CHEN X in2y i(College of A n i m a l S cience,Gu izhou U n iversity,Gu izhou Gu iyang550025,Ch ina)Abstract:Tha mphenicol is a kind of antibi otic which has str ong effect and br oad s pectru m against bacteria,was widely used as an i m portant medicine t o p revent and contr ol ani m al diseases in China and now the tha mphenicol residue in ani2 mal p r oducts has been paid more attenti on.This paper makes a revie w t o the analytic methods of tha mphenicol residue.Key words:tha mphenicol;medicine residue;P LC method;GC method;ani m al p r oduct氯霉素类抗生素除代表药氯霉素外,还有甲砜霉素和氟甲砜霉素,其中氯霉素和甲砜霉素已在我国畜牧业中广泛应用,对畜禽疾病控制及治疗起到了重要作用。
HLB-牛奶中甲砜霉素的检测-29689
牛奶中甲砜霉素的检测参考方法：GB 29689-2013 食品安全国家标准 牛奶中甲砜霉素残留量的测定 高效液相色谱法（优化方案）产品名称：HPSW HLB 规格：200mg/3ml 【概述】甲砜霉素为白色到类白色结晶性粉末或晶体；无臭。
在二甲基甲酰胺中易溶，在无水乙醇中略溶，在水中微溶。
药理作用为主要通过弥散进入细菌细胞内，可逆性地结合在细菌核糖体的50S 亚基上，使肽链增长受阻(可能抑制了转肽酶的作用)，抑制肽链的形成，阻止蛋白质的合成，从而起抗菌作用。
对革兰阳性菌如肺炎球菌、溶血性链球菌作用很强。
【标液配置】甲砜霉素标准使用液(30μg/mL)，临用前用乙腈配置。
【样品提取】牛奶:取本品，取约5g ，精密称定，置具塞离心管中，加入1.5g 氯化钠，精密加入乙腈10ml ，涡旋，离心，5000转/分离心5分钟，取上清液置15ml 氮吹管中，残渣再加5ml 乙腈重复提取一次，合并上清液，45℃氮吹干，加4ml 水，加4ml 正己烷，涡旋，5000转/分离心2分钟，弃去正己烷层，水层待净化。
【净化】（1）活化：5ml 乙腈，5ml 水（2）上样淋洗：取提取液过柱，弃去流出液。
用3ml 水润洗氮吹管，洗液过柱，弃去流出液，吹干。
（3）洗脱：用10ml 乙腈洗脱小柱，收集洗脱液。
45℃氮吹干，加乙腈-水（2+8）定容至1ml ，涡旋， 过0.22μm 有机滤膜，上机。
【参考仪器条件】 仪器：Waters UPLC色谱柱：Morphling WD -C18(4.6mm×250mm,5μm) 检测器：PDA ，检测波长：225nm流速：1.0ml/min 进样体积：10μL 柱温：35℃【实验结果】标准溶液图1样品图2加标图3。
出口肉及肉制品中甲砜霉素留量检验方法
出口肉及肉制品中甲砜霉素留量检验方法1.适用范围本方法适用于出口鸡肉中甲砜霉素残留量的检验。
2.原理概要将鸡肉样用丙酮提取，加入氯化钠溶液，用乙酸乙酯提取，蒸除乙酸乙酯后，加入乙腈及正己烷，振摇均匀，分取乙腈层，真空除去乙腈后，用乙酸乙酯、乙酸酐、吡啶进行乙酰化，用硅胶柱净化后用配有火焰光度检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。
3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂丙酮：分析纯，重蒸馏；正己烷：分析纯，重蒸馏；乙酸乙酯：分析纯，重蒸馏；乙腈：分析纯，重蒸馏；甲醇：紫外光谱纯；三氯甲烷：分析纯，重蒸馏；乙酸酐：优级纯；吡啶：优级纯；氯化钠：优级纯；无水硫酸钠：分析纯，于650℃灼烧4h，冷却后贮于密闭容器中；甲砜霉素标准品：纯度≥99％；甲砜霉素标准溶液：精确称取甲砜霉素标准品10.0mg溶于丙酮，定容至50mL；取此液5mL用丙酮稀释至50mL，为标准工作溶液。
此液1mL含甲砜霉素20μg。
3.2.仪器离心管：50mL；高速均质器；旋转蒸发器；离心机；硅胶柱：将柱色谱用硅胶(100～200目)3g用三氯甲烷装入10mm×300mm玻璃层析柱中，上面装入无水硫酸钠1g；气相色谱仪：配FPD检测器，S型滤光片(329nm)。
4.试样的抽取与制备4.1.检验批以不超过2500件商品为一检验批。
同一检验批内商品应具有同一特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。
4.2.抽样数量检验批中的件数最低抽样件数1～25 126～100 5101～250 10251～500 15501～1000 171001～2500 204.3.抽样方法按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。
每件至少取一包，去掉塑料薄膜，从每包抽取肉样不少于50g，总量不少于2kg，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。
4.4.样品的制备将所取原始样品缩分出1kg，取可食部分，经组织捣碎机捣碎，均分成两份，装入洁净容器内，密封，作为试样，并标明标记。
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法袁 具有快速简单等优点遥 选择用于定值的核磁内 标物至关重要袁 首先袁 要求内标物是具有量值溯源 性的有证标准物质曰 其次袁 内标物与待测物不发生 反应曰 第三袁 所选定量峰互相无干扰 遥 [10～11] 此外袁 示差量热扫描法也是一种快速简单的纯度测量方 法袁 其基于纯物质中杂质造成熔点下降原理测定纯 度袁 所以适用性受化合物本身性质尧 升温速率尧 称 样量尧 固体粉末颗粒大小等因素影响[12～13]遥 为了支 撑政府监管和提高实验室测量水平袁 农业农村部农 产品质量标准研究中心开展甲砜霉素纯度国家有证 标准物质的研制袁 根据国家有证标准物质研制技术 规范要求[14～16]袁 采用质量平衡法与定量核磁法两种 不同原理的方法对甲砜霉素标准物质原料进行纯度 定值袁 同时采用示差量热扫描法进行了纯度定值结 果的对比分析袁 并系统评估了标准物质研制过程中 引入的不确定度遥
关键词院 甲砜霉素曰 标准物质曰 纯度曰 定值曰 不确定度
甲砜霉素是一种酰胺醇类广谱抗菌药袁 曾广泛 应用于人类和各种动物疾病的控制与治疗遥 由于甲 砜霉素具有较强毒副作用袁 其在畜禽尧 水产养殖中 的不规范使用造成的药物残留严重威胁着人体健康 和公共卫生安全 袁 [1～2] 农业农村部 235 公告严格规 定了甲砜霉素在畜禽尧 水产品等动物源食品中的最 大残留限量渊MRLs冤为 50 滋g/kg遥 甲砜霉素作为兽 药残留监测重要参数袁 已于 2018 年正式列入农业 农村部全国水产品例行监测计划中袁 然而从我国标 准物质资源共享平台检索发现袁 用于保证量值溯 源尧 校准仪器以及评价方法的甲砜霉素相关有证标 准物质尚属于空白袁 而市场销售的甲砜霉素纯品品 种繁多尧 质量参差不齐袁 这直接影响监测结果数据 的可靠尧 可比及计量溯源性遥
一尧 材料与方法
渊一冤 实验材料 1. 主 要仪 器 设 备 遥 高 效 液 相 公司冤曰 卡尔费休水分滴定仪
基金项目院 中国农业科学院科技创新工程 野农业标准与标准物质冶 创新团队项目曰 农业农村部财政专项项目支持遥 作者简介院 杨梦瑞 渊1983－ 冤袁 助理研究员袁 从事标准物质研制与分析方法研究遥 E－mail院 yangmengrui2014@163. com遥 王敏 渊1964－ 冤袁 研究员袁 从事农产品质量与安全研究遥 E－mail院 wangmincaas@ 渊通讯作者冤遥
渊二冤 实验方法 1. 质量平衡法遥 采用 HPLC－UV 法测定甲砜 霉素主成分袁 卡尔费休库伦法测定水分含量袁 顶空 气相 色谱 法测定 挥发 性杂 质含 量以及 ICP－MS尧 ICP－AES 法测定无机非挥发性杂质含量等遥 纯度 定值公式见式 渊1冤遥
MB＝ 0 伊 渊100％－ w－ n－ v冤 伊100％ 渊1冤 式 渊1冤 中袁 0 为主成分含量曰 w 为水分含 量袁 n 为无机非挥发性杂质含量袁 v 为挥发性杂 质含量遥 高 效 液 相 色 谱 条 件 院 色 谱 柱 采 用 Agilent Eclipse Plus C18 渊4.6 mm伊250 mm袁 5.0 滋m冤曰 流动相 为乙腈 / 水＝14/86 渊 / 冤曰 流速为 1.0 mL/min曰 进 样量为 10 滋L曰 UV 波长为 224 nm遥 卡尔费休水分 测定袁 采用标准物质校准仪器后袁 用称量纸称取 5～7 mg 待测样品袁 输入称量质量袁 待滴定结束袁 记录水分含量遥 2. 定量核磁法遥 将甲砜霉素标准物质与内标 物共溶解于 1 mL 氘代溶剂中袁 待充分溶解后袁 移 取至石英核磁管中待测袁 同时根据甲砜霉素标准物 质与内标物化学位移的归属袁 确定定量氢峰遥 定量 核磁法定值计算公式见式 渊2冤遥
2. 主要试剂材料遥 苯甲酸标准物质 渊SRM－350 b袁 质量分数为 99.997 8％依0.004 4％冤渊美国 NIST冤曰 肌酐标准物质 渊SRM－914a袁 质量分数为 99.7％依 0.3％冤渊美国 NIST冤曰 甲硝唑纯度标准物质渊GBW 渊E冤 090755袁 质量分数为 99.8％依0.4％冤 渊农业农村 部农产品质量标准研究中心冤曰 氘代乙酸尧 氘代甲 醇渊美国 Sigma－Aldrich 公司冤曰 固体水分国家一级 标准物质 GBW 13518 渊9.90 mg/g冤渊中国计量科学 研究院冤曰 甲砜霉素纯品原料渊日本 TCI 公司冤曰 其 他有机溶剂均为色谱纯渊德国 Merck 公司冤遥
农产品质量与安全 2019 年第 5 期
渊TOLEDO DL39袁 瑞士 Mettler 公司冤曰 示差量热扫 描仪 渊DSC－60 Plus袁 日本 Shimadzu 公司冤曰 核磁 共振仪器 渊Avance III袁 德国 Bruker 公司冤曰 分析天 平 渊XS105袁 瑞士 Mettler 公司冤曰 Agilent 6890 型 气相色谱仪袁 氢火焰离子化检测器 渊FID冤渊美国 Agilent 公 司 冤 袁 Agilent 1888 型 顶 空 自 动 进 样 仪 渊美国 Agilent 公司冤袁 10 mL 顶空瓶 渊美国 Agilent 公司冤遥
甲砜霉素纯度标准物质定值研究及其不确定度评估
杨梦瑞 李 鹏 简凌波 王 敏 周 剑 张丽媛 王彤彤
渊中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所袁 农业农村部农产品质量安全重点实验室袁 北京 100081冤
摘 要院 采用质量平衡法 渊MB冤 与定量核磁法 渊qNMR冤 两种不同原理的方法对甲砜霉素标准物质原料进行纯度定值袁 并系统评估了标准物质研制过程中引入的不确定度遥 实验中准确测定了影响主成分纯度的有机杂质尧 水分等微量杂质 的含量袁 充分考察了不同的定量核磁内标袁 系统分析了不确定度的来源袁 同时采用示差量热扫描法 渊DSC冤 对纯度定值结果 进行对比分析遥 结果表明袁 甲砜霉素纯度标准物质的纯度定值结果为 99.0％袁 扩展不确定度为 0.4％ 渊 ＝2冤袁 特性量值均匀 性尧 稳定性满足标准物质研制技术规范要求袁 符合国家有证标准物质条件并获得国家二级标准物质认定袁 编号为 GBW 渊E冤 090958遥 本研究为保证实验室相关检测结果的计量溯源性及我国农产品质量安全风险监测提供了物质保障与技术支撑遥
标准物质特性量值准确性主要取决于定值方法 的准确可靠遥 针对纯度标准物质定值袁 国际计量局 渊BIPM冤 推荐且被各个国家计量机构广泛认可的方 法主要有质量平衡法渊MB冤尧定量核磁法渊qNMR冤尧 示差量热扫描法 渊DSC冤 等 遥 [3～7] 其中质量平衡法 是一种需要综合分析杂质来源尧 准确测定杂质含 量尧 评价杂质对主成分影响的间接测量方法[8～ 9]遥 定量核磁法作为一种通过内标直接测量纯度的方