PH、金属离子在溶菌酶提取过程中对酶活性的影响

2011届本科毕业生毕业论文

题目：PH、金属离子在溶菌酶提取过程中对酶活性的影响

作者姓名徐萧苟真汪磊

指导教师刘秀丽

学科专业生物技术

系别生命科学与技术学院

学号2007221121 2007221102

2007221115

提交论文日期2011年6月2日

PH、金属离子在溶菌酶提取过程中对酶活性的影响

徐萧苟真汪磊

指导老师：刘秀丽

（陇东学院生命科学与技术学院甘肃庆阳 745000）

摘要:本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过在提取过程中施以不同的PH和加入不同的金属离子，来测定其对提取的溶菌酶活性的影响。结果表明酶活性在PH6.0-6.5最强、且在5-7范围内较稳定；金属离子中Na+、K+对其活性有轻微激活作用。Mn2+、Mg2+对溶菌酶活性无明显影响，Ca2+、Cu2+、Fe2+、Zn2+使溶菌酶活性下降。

关键词：盐析蛋清溶菌酶；酶活性；影响因素；金属离子；提取；PH

Ph, Metal Ions In Mind The Enzymes Are Extracts Of The Enzyme Activity

Xuxiao gouzhen wanglei

（Gansu College of Life Science and Technology, Biotechnology, 07 classes in

Qingyang 745000）

Abstract: Objective To study the extraction process of egg white lysozyme PH, metal ions on enzyme activity levels.Methods: egg white lysozyme in the extraction process or by changing the PH by adding various metal ions the size of the different factors to determine the results of the activity of egg white lysozyme was observed enzyme activities. The results of activity of the strongest in the PH6.0-6.5 and was stable in the range 5.0-7.0; metal ions in the Na +, K + activation of its activity slightly. Mn2 +, Mg2 + had no effect on the activity of lysozyme, Co2 +, Ca2 +, Cu2 +, Fe2 +; Zn2 + is the activity of lysozyme decreased. Conclusion Preliminary results showed that acid extraction of lysozyme as part of the environment and enhance the metal ions for their activity and reduce the effect

Keywords ：out truffles are an enzyme ;enzyme activity ; factors influencing Metal ion; extraction;pH;

0引言

溶菌酶(Lysozyme),正式名为N-乙酰基糖胺酶（N-lhexosaminodase）,属胞壁质酶

（muramidase）, 有称N-乙酰胞壁质酶，能选择性地分解微生物的细胞壁而具有杀菌、抗病毒、抗肿瘤细胞等功效，在食品工业、医疗、生物学领域有着广泛的应用[1]。当前、可以从牛、羊、马等动物乳汁中分离溶菌酶，从番木瓜、无花果、大麦、卷心菜等植物中也可分离溶菌酶。溶菌酶在临床现象常用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等。在食品工业上中还可以作为防腐剂。利用溶菌酶处理革兰阳性菌还可得到原生质体，因此，溶菌酶也是基因工程、细胞工程中细胞融合操作必不可少的工具酶。因此，开发溶菌酶具有良好的经济价值和研究价值[2-4].

国内上市制剂有溶菌酶含片和肠溶片两种，尚未有溶菌酶液体制剂上市。目前使用的溶菌酶为鸡蛋清溶菌酶，为C型溶菌酶，从人乳汁、尿和胎盘中提取的溶菌酶也属于C型。鸡蛋清溶菌酶占蛋清总蛋白3.5%左右，作为溶菌酶类的典型代表是目前重点研究对象。本文为了拓展溶菌酶应用，对蛋清溶菌酶的酶学活性质进行研究，探讨PH、常见金属离子对其在提取过程中活性的影响，以期提高酶提取纯度和酶活。

1 仪器与材

1.1 材料

溶菌酶(15000U/mg)、枯草芽孢杆菌、牛肉浸取物、蛋白胨、琼脂等；

生化药品：PBS缓冲液、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、氯化钠、利丙酮等。鲜鸡蛋：市售。

1.2主要仪器

722型分光光度计、电子天平、离心机、超净工作台、烧杯、量筒、漏斗、离心管、定性快速滤纸、移液管（10mL）、移液枪、试管及试管架

2 试验方法

2.1培养基的配制

2.11 液体培养基葡萄糖20g,蛋白胨15g,氯化钠5.0g，牛肉膏0.5g,琼脂20g,调PH至7.0，定溶于1L蒸馏水中，封装与三角瓶中，121℃灭菌15min。

2.12 固体培养基液体培养基加琼脂2%，调PH至7.0，置于1L水蒸馏中，加热溶解，封装于斜面中，121℃灭菌15min[5-6].

2.2 蛋清液的配制

选择新鲜鸡蛋，用水清洁掉蛋壳表面的不洁之物，破壳分离蛋清，将蛋清搅拌稠度均匀，以不引起泡沫为宜，防止蛋白质变性，用双层纱布滤去卵带和碎蛋壳。