呋喃唑酮代谢物抗体的制备与筛查

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呋喃唑酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备

呋喃唑酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备贾慧勤;丁焕中;刘晓云;李小红;张炳旭;鲁晓雄【摘要】为改进和完善免疫检测呋喃唑酮代谢物方法,制备了抗呋喃唑酮代谢物(AOZ)特异性抗体.采用对醛基苯甲酸对AOZ进行衍生化得到CPAOZ,还原CPAOZ结构中的C=N双键得到半抗原,半抗原用N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法与BSA偶联制备免疫原,免疫新西兰大白兔制得特异性抗体,采用间接(竞争)ELISA法评价抗血清效价及特异性.结果显示,试验获得了较高效价(1∶1280000)的抗AOZ 血清,AOZ半抑制浓度为5.9 ng/mL；抗血清与结构类似物呋喃它酮代谢物的交叉反应率仅为0.76％,与呋喃妥因代谢物和呋喃西林代谢物无交叉反应；利用该抗体建立的间接竞争ELISA检测法,AOZ在1～27 ng/mL与抑制率呈线性关系.结果表明,该特抗体虽然灵敏度较低,却对AOZ而非AOZ衍生物有特异性,可为畜产品中AOZ残留检测提供新的思路和方法.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2013(047)006【总页数】4页(P20-23)【关键词】呋喃唑酮代谢物;特异性抗体;间接(竞争)ELISA【作者】贾慧勤;丁焕中;刘晓云;李小红;张炳旭;鲁晓雄【作者单位】华南农业大学兽医学院,广州510642;华南农业大学兽医学院,广州510642;广州万孚生物技术股份有限公司,广州510641;华南农业大学兽医学院,广州510642;华南农业大学兽医学院,广州510642;华南农业大学兽医学院,广州510642【正文语种】中文【中图分类】S859.84呋喃唑酮是人工合成具有5－硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物(结构见图1)，代谢迅速，主要用于肠炎和菌痢的治疗［1］。

此药抗菌谱广，较少产生耐药性，在养殖业中广泛应用。

呋喃唑酮原药及其主要代谢物3－氨基－2－噁唑烷酮具有致畸致突变作用［2－3］。

因此含有呋喃唑酮残留的产品被人食用后，会对人体造成严重危害。

呋喃唑酮代谢物抗体的制备与筛查

呋喃唑酮代谢物抗体的制备与筛查杨悦熙1，李敏1，李文美2，何小维1（1.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）（2.广州万孚生物技术有限公司，广东广州 510530）摘要：利用呋喃唑酮的4种代谢物合成免疫原以及包被原，用4种免疫原各免疫两只新西兰大白兔，得到8份抗血清，再纯化抗血清。

采用间接ELISA方法，筛选出OD值明显高于阴性样本的血清用于以后的实验，同时对抗体的效价进行测定。

实验检测结果表明，当用包被原A和包被原B包被酶标板时，7号和8号抗血清对该包被抗原有很好的亲和性，呋喃唑酮代谢物衍生物对抗体有很好的抑制。

通过效价检测，7号和8号抗血清均具有高效价、高特异性的特点，其中8号抗血清的效价更高，亲和力更强。

再通过进一步对两种包被原和两份抗血清进行筛查，选择B包被原和8号兔子的抗体清用于ELISA法的建立。

关键词：呋喃唑酮代谢物；抗体；间接ELISA文章篇号：1673-9078(2013)2-362-366The preparation and screening of antibody of Furazolidone MetaboliteYANG Yue-xi1, LI Min1, LI Wen-mei2, HE Xiao-wei1(1.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)(2.Wondfo Biotech Co., Ltd, Guangzhou 510530, China)Abstract: Using of 4 Furazolidone Metabolite Residues, immunogen and coating antigen were synthesized. Then, 4 immunogen were used to immunize 2 New Zealand rabbits. 8 antiserums were obtained and purified. Using indirect ELISA method, the OD value which was higher than that of negative samples of serum were filtered out and used in subsequent experiments, and then antibody titer were determined. The results implied when coating antigen A and B coated microtiter plates. No.7 and No.8 antiserums had a good affinity on the coating antigen. The derivatives of Furazolidone Metabolite had a good effect on antibody inhibition. Through the determination of antibody titer, No.7 and No.8 antiserums both had high titer and high specificity features, of which NO.8 antiserum provided higher antibody titer and higher affinity. Through further screening of 2 coating antigen and 2 antiserums, coating antigen B and No.8 antiserum were chosed for ELISE method.Key words: furazolidone metabolite; antibody; indirect ELISA呋喃唑酮属于硝基呋喃类抗菌药，因其效高价廉，广泛应用在家畜、家禽、水产类的痢疾、肠炎、球虫病和火鸡黑头病的预防和治疗[1]。

食品中呋喃唑酮的免疫层析试纸条快速检测方法研究

食品中呋喃唑酮的免疫层析试纸条快速检测方法研究呋喃唑酮作为一种广谱抗生素被广泛地用于治疗大肠埃希菌和沙门氏菌属引起的胃肠道感染,并作为牛,猪和家禽的生长促进剂。

然而,有研究表明该药物的代谢物对人体有潜在的致癌、致畸和致突变等副作用。

欧盟,美国,中国等已经先后禁止此类药物的使用。

但是由于这种药物抗菌谱广,价格低廉,仍经常被不法分子滥用。

因此,建立一种灵敏度高的现场快速检测方法来监测这种现象具有很重要的现实意义。

呋喃唑酮半衰期短,在动物体内排泄快速,而其代谢产物3-氨基-2-恶唑酮（AOZ）却可以与动物组织中蛋白质紧密结合而长期存在于机体内,因此通过检测AOZ来监测其原药的滥用。

为检测不同食品体系中AOZ的残留,本研究以其衍生物CPAOZ为目标物,构建了三种免疫层析快速检测方法,实现了多种食品样品中AOZ的高灵敏检测。

本论文的研究内容及结果如下:（1）抗CPAOZ单克隆抗体的制备及性能鉴定:采用对小鼠腹腔注射的方法制备抗CPAOZ单克隆抗体腹水,纯化可得抗CPAOZ单克隆抗体,结果表明抗体纯度高,效价为1:128000,与抗原亲和力强,IC50为2ng·mL-1,灵敏度高。

（2）基于纳米金双标记信号放大的CPAOZ免疫层析快速检测试纸条的构建及性能鉴定:首先制备了传统的免疫层析快速检测试纸条,以纳米金为抗体标记材料,确定了金标抗体的最佳制备条件,试纸条对CPAOZ的肉眼检测灵敏度为5 ng·mL-1。

利用抗体和二抗的识别作用,合成了金标抗体和金标二抗两种复合物,以金标抗体作为检测探针,金标二抗作为信号放大剂,将两者均喷涂于同一个结合垫上以简化分析系统。

当两种复合物被先后洗脱下来后,在单抗和二抗的特异性识别作用下,大量的纳米金聚集在一起,形成了复杂的网状信号放大结构,从而加深了在检测线上的显色。

动物性食品中呋喃唑酮代谢物酶联免疫检测方法的研究

维普资讯
检分测析
禽硪究与辩发
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１５ｎ４
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动物性食品中呋喃唑酮代谢物酶联免疫检测方法的研究
徐蓓。志祥，徐王凤侠，张岩，王硕
（津科技大学食品营养与安全省部共建教育部重点实验室，天天津３０５）０４７
ｉｍｍｕｏｅｉａｒｅｒｔｉ．１ｅａｔｏｙｗａｅｅｔｄａｄｐｒｆｅ．ｅｌｉｏｅｅｔｎｏｎｇｎｃｃｒｉｒｏｅｎ１ｎｉｄｓｓｌｃｅｎｕｉｄＴｈｉｔｆｔｃｉｆｐｈｂｉｍｄｏＣＰＡＯＺｗａ．ｓ０２
ｗｔｃｍｅｔｅｎｙｅｌｋｄｉｕｏｏｅｔｓａＥＩＡ）Ｔｅｎｉｄａｈｇｌｓｅｉｃ０ＣＡｚａｄｉｐｔｉｚｍ－ｎｅｈｏｉｖｅｉｍｍｎｓｒｎａｓｙ（ＬＳ．ｈｔｏｙｓｉｙｐｃｒＰ０ｂａｂｗｈｉｆｆｎ
菌有一定作用。因其效高价廉，在医药、故畜牧及水产养殖中都得到广泛应用。呋喃唑酮有一定的副作用，但如引起视神经炎、药疹，精神障碍等，长期摄入会产且
生毒性反应，引起人体的各种疾病『１］。据ＦＯ和ＷＨＡＯ
数小时。经研究表明，呋喃唑酮的代谢物中有相当数量
（ｙＬｂｒｔｒｆｏｄＮｕｒｔｎａｄＳｆｔ，ｎｓｒｆｄｃｔｎｏｈｎ，ｉｎｉｅａｏａｒｏｄＮｕｒｉｎａｄＫｅａｏａｏｙｏｏｔｉｎａｅｙＭｉｉｙｏｕａｉｆｉａＴａｊＫｙＬｂｒｔｙｏＦｏｔｔｎＦｉｏｔＥｏＣｎｏｆｉｏＳｆｔ，ｉｎｉｎｖｒｉｆｃｅｃｎｅｈｏｏｙＴａｊ０４７ＣｉａａｅｙＴａｊＵｉｅｓｙｏｉｅａｄＴｃｎｌｇ，ｉｎｉ３０５，ｈｎ）ｎｔＳｎｎ

呋喃唑酮代谢物人工抗原的制备及鉴定

呋喃唑酮代谢物人工抗原的制备及鉴定李静宇1，何小维1，李敏1，刘晓云2，李文美1，2（1.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州510640）(2.广州万孚生物技术股份有限公司，广东广州510663) 摘要：在催化剂条件下，以碳酸二甲酯和乙醇肼为原料，四氢呋喃为溶剂，合成了高收率的呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮（AOZ）。

实验结果表明，得到的AOZ收率可达到82.7%，此时的最佳反应条件如下:催化剂用量12%，反应温度75 ℃，反应时间3 h。

随后对AOZ进行结构改造，得到AOZ半抗原衍生物，同时采用戊二醛法将AOZ及其半抗原衍生物与活化的卵血清蛋白（cOV A）和牛血清白蛋白（cBSA）交联，成功制备了免疫原和包被原；通过气相质谱联用仪（GC-MS）、元素分析、紫外分光光度计等手段对半抗原和完全抗原进行鉴定。

GC-MS结果证明了AOZ的成功合成；元素分析数据表明，半抗原顺利合成；紫外扫描数据显示，半抗原与cOV A、cBSA偶联成功，免疫原I、免疫原Ⅱ的偶联比分别为16.74和24.05。

关键词：呋喃唑酮；呋喃唑酮代谢物；半抗原；人工抗原文章篇号：1673-9078(2014)10-182-186 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2014.10.031 Preparation and Identification of Artificial Antigen of FurazolidoneMetaboliteLI Jing-yu1, HE Xiao-wei1, LI Min1, LIU Xiao-yun2, LI Wen-mei1,2(1.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)(2.Wondfo Biotech Co., Ltd, Guangzhou 510663, China)Abstract: The furazolidone metabolite 3-amino-2-oxazolidinone (AOZ) was synthesized at a high yield from the raw materials dimethyl carbonate and ethanol hydrazine hydrate using a catalyst and tetrahydrofuran as a solvent. The results showed that the optimum reaction conditions for maximum AOZ yield (82.7%) were as follows: catalyst dosage, 12%; reaction temperature, 75 ℃; and reaction time, 3 h. Subsequently, a hapten derivative was obtained from the structural transformation of AOZ. Then, immunogens and coating antigens were successfully prepared using a method involving glutaraldehyde to conjugate AOZ and its hapten derivative with activated ovalbumin (cOV A) and bovine serum albumin (cBSA). The hapten and immunogen were identified by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), elemental analysis, and UV spectrophotometry. The GC-MS data demonstrated the successful preparation of AOZ. The elemental analysis indicated successful formation of the hapten. UV spectrophotometry results showed that conjugation of the hapten with cOV A and cBSA was successful, and the conjugation ratios of immunogen I and immunogen II were 16.74 and 24.05, respectively.Key words: furazolidone; furazolidone metabolite; hapten; artificial antigen呋喃唑酮是一种硝基呋喃类抗生素，是一种光谱抗菌药，它对常见的革兰氏阴性菌和阳性菌有抑制作用，可以用于治疗细菌和原虫引起的痢疾、肠炎、胃溃疡等肠道疾病[1]。

呋喃唑酮单克隆抗体的制备

呋喃唑酮单克隆抗体的制备一、概述呋喃唑酮(furazolidone，简称FZ)是5-硝基糠醛和3-氨基-2-唑烷二酮形成的腙，俗称痢特灵，属于硝基呋喃类药物。

其抗菌谱类似呋喃妥因。

对大肠杆菌、痢疾杆菌等最敏感。

呋喃唑酮是一种广谱抗菌药，细菌不易对其产生耐药性，与磺胺及抗生素也无交叉耐药性，多年来被广泛用于养殖动物疾病防治。

其分子式为：C8H7N3O5，化学结构式为：O O2NNNO O尽管有着这么显著的优越性，呋喃唑酮与其他呋喃类抗生素在近十多年来却被各国陆续叫停。

其原因在于硝基呋喃类的药物及其代谢物对动物有着十分多样的危害性。

主要有以下几个方面：一、毒性作用：长期应用硝基呋喃类药物均有对畜禽产生较大的毒性作用。

大剂量运用对动物的毒性作用更为明显。

二、具有致癌致畸致突变：通过对小白鼠的毒性研究表明，呋喃唑酮可以诱发乳腺癌和支气管癌，并且有剂量反应关系;高剂量饲喂食用鱼和观赏鱼，可诱导鱼的肝脏发生肿瘤。

硝基呋喃类化合物是直接致变剂，其中呋喃它酮为强致癌性药物，呋喃唑酮具中等强度致癌性。

三、代谢产物对人体的危害：其代谢产物能与蛋白质紧密结合，形成稳定的残留物，残留时间达数周之久，甚至在蒸煮、烘烤、磨碎和微波加热过程中也无法有效降解。

从而对人类的健康构成危害。

随着呋喃类抗生素的毒性渐渐为人们所知，许多单位也渐渐意识到这类药物对人体的危害。

但仍有不少的企业贪图此类药物价格低，药效好，而继续使用，导致水产品硝基呋喃类药物残留超标事件屡屡发生，严重威胁着人民身体健康和我国水产品出口贸易。

加强对硝基呋喃类药物残留检测和控制有着十分紧迫的现实意义。

本文拟从呋喃唑酮化合物的代谢入手，讨论其多种的检测途径，并着重介绍呋喃唑酮单克隆抗体的制备技术。

二、呋喃唑酮的药效、药理及代谢呋喃唑酮为黄色结晶性粉末，无臭，味微苦，几乎不溶于水，遇碱分解，在光照下渐变色。

其作用机理是：在呋喃核第五位上引入硝基，硝基是抗菌效力的必要基因。

水产品中呋喃唑酮代谢物快速检测方法

水产品中呋喃唑酮代谢物快速检测方法
组织检测步骤：
1、将样本鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等去皮去脂肪,用均质器均质样本，称取3±0.05g均质物至15ml离心管中。

2、依次加入4ml蒸馏水、0.5ml试剂A和0.6ml衍生化试剂，振荡混匀，在65℃水浴中孵育30min。

3、依次加入1ml试剂B、0.4ml试剂C和1瓶提取剂（4ml），振荡混匀。

4、在室温下（20-25℃）4000r/min离心5min，取2ml上层有机相至5ml离心管中，在50-60℃水浴中用便携式空气吹干仪吹干。

5、取1ml净化剂溶解干燥物，再加入0.5ml试剂D振荡混匀，在室温下（20-25℃）4000r/min离心2min，待检。

结果判定及示意图：
在试纸卡的中央判读区喷有2条线，上面一条为对照线(C线)，下面一条为测试线(T线)。

若样品液中呋喃唑酮代谢物的浓度小于检测限时，则T线显色比C线强，或显色与C线相近；若样品液中呋喃唑酮代谢物的浓度大于检测限时，则T线显色比C线浅很多或T线不显色。

实验设备：
1、呋喃唑酮代谢物快速检测卡；
2、PRO-12L空气吹干仪;
3、HH-1水浴锅；
4、80-2离心机；
5、均质器；
6、掌上电子天平。

《水产品中呋喃唑酮代谢物的快速检测胶体金免疫层析法》江西省地方标准编制说明

《水产品中呋喃唑酮代谢物的快速检测胶体金免疫层析法》江西省地方标准编制说明一、立项背景、意义硝基呋喃类化合物（Nitrofurans）包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃它酮等，是用于人类和动物的广谱性合成抗菌剂，具有致畸、致突变和致癌作用。

水产品养殖过程中使用该药物后，由于其代谢产物始终存在，可直接导致人体产生耐药性或发病。

此类药物的残留问题越来越引起人们的关注。

美国和日本分别于1975年、1977年禁止呋喃唑酮作为医药使用。

美国1993年禁止呋喃唑酮作为兽药。

欧盟在1995年禁止使用呋喃西林，从1997年开始将所有的硝基呋喃类抗生素全部列为违禁药物。

2004年美国FDA公布了禁止在进口动物源性食品中使用的11种药物名单，其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。

2012年12月24日我国农业部发布235号公告《动物性食品中兽药残留最高限量》，呋喃唑酮、呋喃它酮被列为禁止使用药物，在动物性食品中不得检出。

尽管如此，由于作为抗菌药，硝基呋喃类药物具有杀菌能力强、抗菌谱广、价格低廉和疗效好等优点，仍然有养殖户在水产养殖中用于治疗鱼虾肠炎病，残留超标问题一次次困扰着水产品出口企业。

目前，水产品中硝基呋喃类药物的残留检测主要是液质联用的分析手段，该方法虽然检测结果精确，但需要的仪器设备昂贵，分析方法前处理繁琐、溶剂消耗量大、检测周期长、检测成本高，不适于对大量样品进行低成本快速筛选、现场判定的需要。

快速检测技术相对于传统和经典的化学检测与仪器检测而言，其特点是检测所需时间相对较少，对仪器设备等条件要求不高，能携带到交易（生产）现场实施检测，既快速方便，又节约成本。

免疫胶体金快速检测技术被认为是最具应用价值和发展潜力的快速痕量分析技术之一，是二十世纪九十年代新兴的一种新型免疫学检测技术。

其反应所需的原料全部或大部分已整合到试剂中，当待测样品加入到样品膜上后，由于微孔膜的毛细管作用，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，整个反应仅需要3~5分钟，滴样后用肉眼直接判断结果无需特殊仪器设备。

一种检测呋喃唑酮代谢物的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法与应

专利名称：一种检测呋喃唑酮代谢物的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法与应用
专利类型：发明专利
发明人：郝少彦,李春生,刘静静,李玉静,吴萌,杜顺丰,武孝利,曹秀梅,闫玉杰
申请号：CN201610919202.5
申请日：20161021
公开号：CN106483300A
公开日：
20170308
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种检测呋喃唑酮代谢物的胶体金层析试纸条及其制备方法与应用，属于免疫学技术领域和兽药残留分析技术领域。

该试纸条结构包括底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫，试纸条两端设有保护膜，所述样品垫、胶体金垫、包被膜、吸水垫依次粘贴于底板上；胶体金垫上包被有胶体金标记的能识别呋喃唑酮代谢物的单克隆抗体；包被膜上设有偶联呋喃唑酮代谢物的载体蛋白溶液印制的隐形检测线，以及用羊抗小鼠IgG溶液印制的隐形质控线。

本发明的胶体金层析检测试纸条具有便捷、快速、直观、时效性强等特点，适用范围广，成本低便于推广应用。

申请人：河北省科学院生物研究所
地址：050051 河北省石家庄市友谊南大街46号2号楼509
国籍：CN
代理机构：河北东尚律师事务所
代理人：李国聪
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呋喃唑酮代谢物间接竞争化学发光酶免疫法的建立

（４一ＣＢＡ）将ＡＯＺ衍生化为ＣＰＡＯＺ，利用活化酯法将ＣＰＡＯＺ与卵清蛋白（ＯＶＡ）偶联，生成完全抗原ＣＰＡＯＺ — ＯＶＡ。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗稀释倍数进行优化，建立标准曲线，同时对方法的特
２．ＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＦａｓｔＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｏｆＳｈａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ０３０００６，Ｃｈｉｎａ；
３．ＣｈｉｎａＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥｘｅｃｕｔｉｖｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００７３，Ｃｈｉｎａ）
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ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃ＆ｏｌｏｇｒｏｆＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｒｙ
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呋喃唑酮代谢物
间接竞争化学发光酶免疫法的建立
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ｒｅａｃｔｉｏｎ．ＣＰＡＯＺ —ＯＶＡ，ａｓｔｈｅｃｏａｔｉｎｇａｎｔｉｇｅｎ，ｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙａｃｔｉｖａｔｅｄｅｓｔｅｒｍｅｔｈｏｄ．Ａｆｔｅｒｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇｔｈｅｄｉｌｕｔｉｏｎｍｕｌｔｉｐｌｅｏｆｃｏａｔｉｎｇａｎｔｉｇｅｎａｎｄａｎｔｉ —ｂｏｄｙ，ｂｌｏｃｋｉｎｇｂｕｆｆｅｒ，ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｔｈｅｄｉｌｕｔｉｏｎｍｕｌｔｉｐｌｅｏｆｓｅｃｏｎｄａｎｔｉｂｏｄｙ，ａｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ。ａｎｄｉｆｎａｌｌｙｔｈｅｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍ

动物源性食品中呋喃唑酮及其代谢物的检测[1]

动物源性食品中呋喃唑酮及其代谢物的检测郭　桢,连　瑾,吴淑君(广州市农产品质量安全监督检测中心/广州市农业标准与监测中心,广东广州　510308) 摘　要:简述了呋喃唑酮主要代谢物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的稳定特性和致癌特性,介绍了动物源性食品中呋喃唑酮残留物原药分子和代谢物AOZ的检测技术,指出我国相关检测标准的不足,提出以检测代谢物来反映硝基呋喃类的真实残留量,并对今后我国呋喃唑酮的监管工作提出建议。

关键词:动物源性食品;呋喃唑酮;检测中图分类号:S859.84 文献标识码:A 文章编号:1004-874X(2005)05-0057-03 呋喃唑酮(furazolidone),即3-(5-硝基糠醛缩氨基)-2-唑烷酮,又称痢特灵,属硝基呋喃类(nitro2 furans)药物,为广谱抗生素,对革兰阳性及阴性菌均有一定抗菌作用。

由于呋喃唑酮价格低廉且治疗效果好,因此被广泛应用于家禽、家畜、水产类的痢疾、肠炎、球虫病以及火鸡黑头病的预防和治疗中。

但有关研究证明,硝基呋喃类药物及其代谢物具有相当大的毒性,有致畸胎副作用,且能诱发癌症[1],因而引起了人们的高度重视。

1990年7月欧盟颁布2377/90/EEC条例,将硝基呋喃类药物及其代谢产物列为A类禁用药物,规定其在动物源性食品中的残留检测限为1.0μg/kg。

由收稿日期:2005-04-07作者简介:郭桢(1972-),女,博士,农艺师于对呋喃唑酮蛋白结合态残留物的安全性产生怀疑,自1995年起欧盟全面规定禁止使用呋喃类抗菌物质,在动物源性食品中呋喃类残留物的检出限为不得检出[2,3]。

2004年美国FDA公布了禁止在进口动物源性食品中使用的11种药物名单,其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。

我国农业部文件农牧发[2002]1号也规定动物源性食品中呋喃唑酮的检出限为不得检出。

1　呋喃唑酮代谢物及其毒性硝基呋喃类药物常见有4种,即呋喃唑酮、呋喃它酮(furaltadone)、硝基呋喃托英(nitrofurantoin)和硝基糠腙(nitrofurazone),其中呋喃唑酮为硝基呋喃类药物中最具代表性的一种。

呋喃唑酮代谢物(AOZ)ELISA检测试剂盒说明书

呋喃唑酮代谢物（AOZ）ELISA检测试剂盒说明书一、概要用来检测呋喃唑酮代谢物的最常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。

酶联免疫方法结合了色谱技术，采用AOZ衍生物的特异性抗体，具有很高的准确度和灵敏度，较低的操作技术要求和短暂的检测时间，检测样本量大等特点在检测中很好的表现出来。

（本试剂盒的检测时间为1.5小时。

）二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留的AOZ经衍生化后和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃唑酮代谢物的衍生物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物AOZ的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中呋喃唑酮代谢物的残留量。

三、适用范围可定性、定量检测动物组织（鸡、猪、牛等）、牛奶、蜂蜜和鸡蛋样本中的呋喃唑酮代谢物的残留量。

四、交叉反应率呋喃唑酮代谢物…………………………………… 100%呋喃它酮代谢物…………………………………小于 0.1%呋喃妥因代谢物…………………………………小于 0.1%硝基糠腙（呋喃西林）代谢物…………………小于0.1%呋喃唑酮…………………………………………………16.3%呋喃它酮………………………………………………小于1%呋喃妥因………………………………………………小于1%硝基糠腙（呋喃西林）………………………………小于1%五、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置┅┅均质器┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅洗耳球┅┅容量瓶： 100ml、1L┅┅玻璃试管：10ml┅┅聚苯乙烯离心管：2ml、10ml、50ml┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、100ml～1000ml多道 250ml试剂：┅┅乙酸乙酯（分析纯）┅┅正己烷（或正庚烷）（分析纯）┅┅三水合磷酸氢二钾（分析纯）┅┅浓盐酸┅┅氢氧化钠（分析纯）┅┅二水合亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5·NO·2H2O）（分析纯）（供奶、鸡蛋样用）┅┅七水合硫酸锌(ZnSO4·7 H2O) (分析纯)（供奶、鸡蛋样用）┅┅去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原）2、标准液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb,0.05ppb,0.15ppb,0.45ppb,1.35ppb,4.05ppb 3、高浓度标准品：（1ml/瓶）100ppb4、酶标二抗浓缩液 1.5ml ……………………红色帽5、抗体浓缩液 0.8ml……………………绿色帽6、底物液 A 液 7ml ……………………白色帽7、底物液 B 液 7ml ……………………红色帽8、终止液 7ml ……………………黄色帽9、20×浓缩洗涤液 40ml………………………透明帽10、2×浓缩复溶液 50ml……………………蓝色帽11、2-硝基苯甲醛 15.1mg……………………黑色帽七、溶液的配制配液1: 衍生化试剂向装有2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加甲醇溶解定容至10ml（浓度为10mM）。

抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体的制备

抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体的制备
王倩倩;杨功俊
【期刊名称】《中国家禽》
【年(卷),期】2016(38)24
【摘要】硝基呋喃类药物具有广谱抗菌作用,广泛应用于家禽细菌性传染病的防治,但其在动物体内残留的代谢产物,对人体具有致癌、致突变的特性。

研究将硝基呋喃类药物呋喃唑酮上的硝基还原为氨基,再将还原产物与载体蛋白用重氮化法进行偶联,从而获得呋喃唑酮代谢物(AOZ)的免疫抗原和检测抗原。

用免疫抗原免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生腹水等过程,获得了抗AOZ的单克隆抗体,并通过建立间接ELISA方法对获得的单克隆抗体进行鉴定。

研究结果为开发AOZ的ELISA检测试剂盒奠定了基础。

【总页数】3页(P63-65)
【作者】王倩倩;杨功俊
【作者单位】扬州市畜牧兽医站;中国药科大学
【正文语种】中文
【中图分类】S852.4
【相关文献】
1.抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用
2.呋喃唑酮代谢物单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法
3.抗呋喃唑酮代谢物单链抗体基因构建及蛋白结构分析和活性
鉴定4.呋喃唑酮代谢物人工抗原的制备与鉴定5.抗呋喃唑酮代谢物衍生物单链抗体-AP酶融合蛋白表达条件优化
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ｈｅＴｄｅｉｒｖａｉｔｖｅｓｏｆＦｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅＭｅｔａｂｏｌｉｔｅｈａｄａｇｏｏｄｅｆｅｃｔｏｎｎｔａｉｂｏｄｙｉｎｈｉｂｉｉｔｏｎ．Ｔｈｒｏｕｈｔｇｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｉｔｏｎｏｆｎｔａｉｂｏｄｙｆｉｔｅｒ．Ｎｏ．７ａｎｄＮｏ．８ｎｔａｉｓｅｒｕｍｓｂｏｈｈｔａｄｉｇｈｈｔｉｔｅｒｎｄａｈＪｈｇｓｅｃｐｉｉｆｃｉｔｙｆｅａｔｕｒｅｓ，ｏｆｗｈｉｃｈＮＯ．８ａｎｉｔｓｅｒｕｍｐｒｏｖｉｄｅｄｉｇｈｈｅｒａｎｉｔｂｏｄｙｔｉｔｒａｅｎｄｉｇｈｈｅｒａｆｉｆｎｉｙ．ｔＴｈｒｏｕｇｈ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｏｆ４ＦｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅＭｅｔａｂｏｌｉｔｅＲｅｓｉｄｕｅｓ，ｉｒｒｇｎｕｎｏｇｅｎａｎｄｃｏａｔｉｎｇｎｔａｉｇｅｎｗｅｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ．Ｔｈｅｎ，４ｉｍｍｔｍｏｇｅｎｗｅｒｅ
关键词：呋喃唑酮代谢物；抗体；间接ＥＬＩＳＡ文章篇号：１６７３．９０７８（２０１３）２．３６２ — ３６６
Ｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇ０ｆａｎｔｉｂｏｄｙｏｆＦｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅＭｅｔａｂｏｌｉｔｅ
（１．华南理工大学轻工与食品学院，广东广州５１０６４０）（２．广州万孚生物技术有限公司，广东广州５１Ｏ５３０）
摘要：利用呋喃唑酮的４种代谢物合成免疫原以及包被原，用４种免疫原各免疫两只新西兰大白兔，得到８份抗血清，再纯化抗血清采用间接ＥＬＩＳＡ方法，筛选出ＯＤ值明显高于阴性样本的血清用于以后的实验，同时对抗体的效价进行测定。实验检测结果
ｕｓｅｄｔｏｉｍｍｕｎｉｚｅ２ＮｅｗＺｅａｌｎｄａｒａｂｂｉｔｓ．８ｎｔａｉｓｅｒｕｍｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｎｄａｐｕｒｉｉｆｅｄ．ＵｓｉｎｇｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄ，ｈｅｔＯＤｖａｌｕｅｗｈｉｃｈｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｎｅｇａｉｔｖｅｓａｍｐｌｅｓｏｆｓｅｒｕｍｗｅｒｅｆｉｌｔｅｒｅｄｏｕｔｎｄｕａｓｅｄｉｎｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｎｄｔａｈｅｎａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．ｈｅＴｒｅｓｕｌｔｓｉｍｐｌｉｅｄｗｈｎｃｅｏａｔｉｎｇａｎｔｉｇｅｎＡａｎｄＢｃｏａｔｅｄｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒｐｌａｔｅｓ．Ｎｏ．７ａｎｄＮｏ．８ａｎｔｉｓｅｒｔｍａｓｈａｄａｇｏｏｄａｉｎｆｉｔｙｏｎｔｈｅｃｏａｉｔｎｇａｎｔｉｇｅｎ．
现代食品科技
Hale Waihona Puke ＭｏｄｅｒｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．２
呋喃唑酮代谢物抗体的制备与筛查
杨悦熙，李敏，李文美，何小维
ＹＡＮＧＹｕｅ－ｘｉ，ＬＩＭｉｎ。ＬＩＷｅｎ．ｍｅｉ二，ＨＥＸｉａｏ－ｗｅｉ
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙａｎｄＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，Ｃｈｉｎａ）（２．ＷｏｎｄｆｏＢｉｏｔｅｃｈＣｏ．，Ｌｔｄ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５３０，Ｃｈｉｎａ）
表明，当用包被原Ａ和包被原Ｂ包被酶标板时，７号和８号抗血清对该包被抗原有很好的亲和性，呋喃唑酮代谢物衍生物对抗体有很好的抑制。通过效价检测，７号和８号抗血清均具有高效价、高特异性的特点，其中８号抗血清的效价更高，亲和力更强。再通过进一步对两种包被原和两彩元血清进行筛查，选择Ｂ包被原和８号兔子的抗体清用于ＥＬＩＳＡ法的建立。