过氧化氢的硫酸钛分光光度法

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过氧化氢酶活力的测定实验报告

过氧化氢酶活力的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告

篇一:实验35过氧化氢酶的活性测定

植物在逆境下或衰老时,由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除h2o2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定

【原理】

h2o2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被h2so4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】

研钵;移液管0.2ml×2支,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;分光光度计。

【试剂】

100μmol/Lh2o2丙酮试剂:取30%分析纯h2o257μl,溶于100ml,再稀释100倍;2mol/L硫酸;5%(w/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水。【方法】

1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml 刻度,415nm波长下比色。

2.样品提取和测定:(1)称取新鲜植物组织2~5g(视h2o2含量多少而定),按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管

探讨过氧化氢的四氯化钛分光光度法

探讨过氧化氢的四氯化钛分光光度法

探讨过氧化氢的四氯化钛分光光度法

作者:刘建华

来源:《中国化工贸易·中旬刊》2019年第07期

摘要:通过考察测定实验过程中各种溶液的加入量,摸索过氧化氢含量的测定方法,保证了分析结果更加准确。

关键词:过氧化氢含量;加入量;影响;吸光度

1 原理

过氧化氢用含钛的吸收液吸收,反应生成黄色化合物,在410nm波长下测量吸光度,进行测量。

2 仪器

分光光度计、烧杯、容量瓶、移液管等一般实验仪器。

3 试剂

实验用水为蒸馏水

过氧化氢:30%

硫酸:1mol/L

盐酸溶液:1+9

钛试剂:在50mL烧杯中加入10mL ;1+9的盐酸溶液,称重后,加入约10g四氯化钛(含量为99%),再称重,待四氯化钛完全溶解不冒白烟后将烧杯中的溶液转移到50mL的容量瓶中,用盐酸溶液稀释至刻度,摇匀。由两次称量之差计算钛的含量;从容量瓶中吸取30mL到100mL容量瓶中用盐酸溶液稀释定容,此溶液为1mL含50mg钛的溶液。

吸收液:吸取2mL钛试剂,加入400mL盐酸溶液,加水稀释至1000mL,此溶液1mL含钛1mg。

标准溶液:吸取10mL30%的过氧化氢溶液,用水稀释至150mL,取出2.5mL此液于

250mL锥形瓶中,加20mL ;1mol/L硫酸溶液,用0.05mol/L高锰酸钾标准溶液滴定。根据高锰酸钾溶液的用量计算出过氧化氢的浓度。然后用刚煮沸冷却的水稀释成100ug/mL的过氧化氢标准溶液。

4 根据原有标准绘制标准曲线

取6只具塞比色管,分别加入0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL过氧化氢标准溶液,各加4.00mL盐酸溶液和0.20mL钛试剂,配成0.0、50.0、100.0、200.0、300.0、400.0ug 的过氧化氢标准系列。用水稀释至10mL,摇匀后在410nm波长下测量吸光度。以吸光度和其对应的过氧化氢含量绘制标准曲线。

(完整版)实验40植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定

(完整版)实验40植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定

实验40 植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定

植物在逆境下或衰老时,由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定

【原理】

H2O2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】

研钵;移液管0.2ml×2支,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;分光光度计。

【试剂】

100μmol/L H2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O257μl,溶于100ml,再稀释100倍;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水。

【方法】

1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色。

2.样品提取和测定:(1)称取新鲜植物组织2~5g(视H2O2含量多少而定),按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000 r/min 下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后3000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色。

过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(硫酸钛比色法)

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能影响比色结果。 6、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:12 个月有效。
相关:
编号 CS0001 DF0111 DM0007 TC0699 TC1167
名称 ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) 中性福尔马林固定液(10%) 瑞氏-姬姆萨复合染色液 植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法) 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
注意事项:
1、 本试剂盒亦可用酶标仪进行检测,但检测的样本数相应增多。如果有条件,尽量采用
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分光光度计检测。 2、 H2O2 标准和碱性基液应严格密闭保存,避免挥发,否则效率会下降。 3、 H2O2 标准和酸性基液有一定腐蚀性,请小心操作。 4、 加入碱性基液、硫酸钛溶液时,应直接加入溶液,不要粘到管壁。 5、 过氧化物-钛复合物黄色沉淀溶解于酸性基液时需要一段时间,需完全溶解,否则有可
加入物(ml)
空白管 标准管 测定管
预冷丙酮
1


系列丙酮-H2O2 溶液

1

待测样品


1
碱性基液(直接加入到溶液)
0.2
0.2
0.2
硫酸钛溶液 (直接加入到溶液)
0.1
0.1

工作场所空气中过氧化氢的硫酸氧钛分光光度测定法

工作场所空气中过氧化氢的硫酸氧钛分光光度测定法

工作场所空气中过氧化氢的硫酸氧钛分光光度测定法引言

过氧化氢(H2O2)是一种广泛应用于工业和医疗领域的化学物质,然而,高浓度的过氧化氢可能对工作人员的健康造成危害。因此,准确测定工作场所空气中过氧化氢的浓度对于控制风险和保护工作人员的健康非常重要。本文将详细介绍一种常用的方法——硫酸氧钛分光光度测定法,用于测定工作场所空气中过氧化氢的浓度。

一、原理

硫酸氧钛分光光度法利用过氧化氢与硫酸氧钛反应产生深红色的过氧钛络合物,并通过分光光度计测量络合物的吸光度来确定过氧化氢的浓度。该方法基于过氧化氢与硫酸氧钛在酸性条件下发生氧化还原反应,生成过氧钛络合物的特征吸收峰。

二、实验步骤

1.样品采集:使用合适的气体采样装置,将工作场所空气中的样品收集到样品瓶中。确保采样过程中避免样品受到其他干扰物污染。

2.样品预处理:将收集到的样品与硫酸氧钛试剂在酸性条件下进行反应,并形成红色过氧钛络合物。此时,过氧化氢的浓度与过氧钛络合物的吸光度成正比关系。

3.分光光度计测量:使用可见光或紫外-可见光分光光度计,设置波长为适当的范围(通常为510nm),并调整仪器至零吸光度。然后,将经过反应的样品溶液放

入光度池中,测量吸光度值。

4.标准曲线绘制:准备一系列不同浓度的过氧化氢标准溶液,分别进行样品预处理和分光光度计测量。根据各标准溶液的吸光度值,绘制标准曲线。

5.浓度计算:根据标准曲线,将实际样品的吸光度值转换为过氧化氢的浓度。

三、注意事项

1.保持实验环境清洁,避免其他物质的干扰。

2.使用纯净的试剂和溶剂,并校正仪器零点。

过氧化氢分光光度法测定钛量

过氧化氢分光光度法测定钛量

过氧化氢分光光度法测定钛量

引言:

过氧化氢分光光度法是一种常用的分析方法,可以用于测定各种物质的含量。本文将以过氧化氢分光光度法测定钛量为例,介绍该方法的原理、仪器设备和操作步骤,并对其优缺点进行分析。

一、原理:

过氧化氢分光光度法是基于物质吸收光的比例与其浓度成正比的原理。钛离子在适当的条件下与过氧化氢发生氧化反应生成过氧钛酸,过氧钛酸与铁离子在酸性溶液中形成紫色络合物,该络合物在紫外-可见光区域有特征性的吸收峰。根据吸光度与溶液中钛离子浓度的关系,可以测定钛量。

二、仪器设备:

1. 分光光度计:用于测量溶液的吸光度。

2. 试剂:包括过氧化氢、铁离子和其他辅助试剂。

三、操作步骤:

1. 样品制备:将待测样品溶解于适当的溶剂中,使得溶液中钛离子的浓度在分析范围内。

2. 标准曲线的绘制:取一系列不同浓度的钛标准溶液,分别加入适量的过氧化氢和铁离子,制备出一系列含有过氧钛酸络合物的溶液,并测定其吸光度。根据吸光度与浓度的关系,绘制标准曲线。

3. 测定样品的吸光度:将待测样品按照相同的方法处理,并测定其吸光度。

4. 计算样品中钛的浓度:根据标准曲线,确定待测样品中钛的浓度。

四、优缺点分析:

1. 优点:过氧化氢分光光度法测定钛量简单、快速,结果准确可靠。该方法具有较高的灵敏度和选择性,适用于各种样品类型的分析。

2. 缺点:该方法对样品的前处理要求较高,需要将钛离子与过氧化氢和铁离子反应生成络合物,因此可能会受到其他物质的干扰。此外,过氧化氢的稳定性较差,容易分解,因此需要在实验过程中保持其稳定性。

实验植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定

实验植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定

实验40 植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测

植物在逆境下或衰老时,由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性及植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定

【原理】

H2O2及硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅及H2O2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】

研钵;移液管0.2ml×2支,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;分光光度计。

【试剂】

100μmol/L H2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O2 57μl,溶于100ml,再稀释100倍;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水。

【方法】

1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸

馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色。

2.样品提取和测定:(1)称取新鲜植物组织2~5g(视H2O2含量多少而定),按材料及提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000 r/min下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后3000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol 硫酸5ml,待完全溶解后,及标准曲线同样的方法定容并比色。

过氧化氢含量测定

过氧化氢含量测定

过氧化氢含量测定

一、 实验原理

过氧化氢与硫酸钛反应生成过氧化物-钛复合物黄色沉淀,可被硫酸溶解后,在415nm 波 长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与过氧化氢浓度呈线性关系。

二、 仪器与试剂

仪器和用具:研钵;移液管 0.2ml X 2支,5ml X 1支;容量瓶10ml X 7个,离心管5ml x 8支;离心机;分光光度计。

试剂:100卩mol/L H2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O2 57卩l ,溶于100ml ,再稀释100 倍; 2mol/L 硫酸;5%(W/V 硫酸钛;丙酮;浓氨水。

三、 实验方法

1,

_________________________________ 试剂 1

2 3 4 5 6 7 100umol/L H 2Q 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

4C 下预冷丙酮 1.0 0.9 0.8 0.6

0.4 0.2 0 5%硫酸钛 0.1

0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 浓氨水 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1

4000r/min 离心5min ,弃上清液留沉淀,然后再向每管中加 2mol 硫酸5ml ,摇匀,待沉淀 溶解后,在415nm 波长下比色,测其吸光值,绘制标准曲线。

2,样品提取与测定

(1) 称取小麦叶片1g 左右,剪碎加2ml 预冷丙酮和少量石英砂,研磨成匀浆后,转入离 心管中,再用5ml 预冷丙酮洗研钵,加入离心管中,4000r/min 离心5min ,弃上清液即为样 品提取液。

(2) 取样品提取液1ml ,弃上清液,沉淀用丙酮反复洗(去除绿色),3-5次,然后加入硫 酸钛和浓氨水,待沉淀形成后4000r/min 离心5min ,弃上清液留沉淀,加入5ml 硫酸,摇匀, 待沉淀溶解后在415nm 波长下比色,测其吸光值。

过氧化氢酶活力的测定实验报告

过氧化氢酶活力的测定实验报告

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篇一:实验35过氧化氢酶的活性测定

植物在逆境下或衰老时,由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除h2o2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定

【原理】

h2o2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被h2so4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】

研钵;移液管0.2ml×2支,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;分光光度计。

【试剂】

100μmol/Lh2o2丙酮试剂:取30%分析纯h2o257μl,溶于100ml,再稀释100倍;2mol/L硫酸;5%(w/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水。【方法】

1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml 刻度,415nm波长下比色。

2.样品提取和测定:(1)称取新鲜植物组织2~5g(视h2o2含量多少而定),按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管

钛盐光度法测定fenton氧化中的过氧化氢

钛盐光度法测定fenton氧化中的过氧化氢

钛盐光度法测定fenton氧化中的过氧化氢

钛盐光度法是一种常用的分析化学方法,可以用于测定过氧化氢的含量。在Fenton氧化反应中,过氧化氢是一种重要的中间产物,因此钛盐光度法可以用于监测Fenton氧化反应的进程。

钛盐光度法的原理是基于过氧化氢与钛盐反应生成过氧钛酸的特性。

过氧化氢在酸性条件下与钛盐反应,生成过氧钛酸,过氧钛酸与过量

的钛盐形成蓝色络合物,其吸光度与过氧化氢的浓度成正比。

在Fenton氧化反应中,过氧化氢的含量可以通过钛盐光度法进行测定。具体操作步骤如下:

1. 取适量的反应液样品,加入适量的硫酸使其酸化。

2. 加入适量的钛盐试剂,使反应液中的过氧化氢与钛盐反应生成过氧

钛酸。

3. 加入过量的钛盐试剂,使过氧钛酸与钛盐形成蓝色络合物。

4. 使用紫外可见分光光度计测定反应液中蓝色络合物的吸光度。

5. 根据标准曲线计算出反应液中过氧化氢的浓度。

需要注意的是,在进行钛盐光度法测定时,反应液中的其他物质可能会影响测定结果。因此,在进行测定前需要对反应液进行预处理,如去除杂质、调整pH值等。

总之,钛盐光度法是一种简单、快速、准确的测定过氧化氢含量的方法,可以用于监测Fenton氧化反应的进程。在实际应用中,需要注意对反应液进行预处理,以保证测定结果的准确性。

过氧化氢标准曲线

过氧化氢标准曲线

STD1STD2STD3STD4STD5STD60501002003004000.0410.1330.2410.4540.6250.8510.0440.1350.2420.4520.6280.8520.044

0.136

0.242

0.456

0.63

0.855

STD1STD2STD3STD4STD5STD60501002003004000.043

0.135

0.242

0.454

0.627

0.853

吸光度均值

吸光度

过氧化氢的四氯化钛分光光度法

过氧化氢含量以下是数据处理:

过氧化氢含量

2015年3月3日

紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性

紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性

紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性

一、本文概述

本文旨在探讨紫外分光光度法在测定土壤过氧化氢酶活性中的应用。过氧化氢酶是一种重要的土壤酶,其在土壤生物化学过程中起着至关重要的作用,如有机物的分解、营养元素的转化和循环等。因此,准确测定土壤过氧化氢酶活性对于理解土壤生物地球化学过程、评估土壤健康状况以及指导农业生产具有重要意义。

紫外分光光度法作为一种常用的生物化学分析方法,具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点,在土壤酶活性测定中得到了广泛应用。本文将详细介绍紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性的原理、步骤、注意事项以及可能的影响因素,以期为相关领域的研究人员提供有益的参考和借鉴。本文还将对紫外分光光度法在土壤酶活性测定中的优势和局限性进行讨论,以期推动该方法的不断完善和优化。

二、材料与方法

1 土壤样品:采集自不同环境条件下的土壤样品,包括农田、森林、草地等。采集后,将土壤样品风干、研磨,并通过2mm筛网筛选,备用。

2 试剂:过氧化氢(H2O2)、磷酸盐缓冲液、硫酸钛溶液、浓硫酸等。所有试剂均为分析纯,购自正规化学试剂供应商。

3 仪器:紫外可见分光光度计、离心机、电子天平、恒温水浴锅、研钵、筛网等。

1 土壤过氧化氢酶活性的提取:取适量土壤样品,加入磷酸盐缓冲液,充分摇匀后,在恒温水浴锅中恒温振荡提取一定时间。提取结束后,将提取液离心,取上清液作为测定过氧化氢酶活性的待测液。

2 紫外分光光度法测定过氧化氢酶活性:取一定量待测液,加入一定量的过氧化氢溶液,充分摇匀后,在恒温条件下反应一定时间。反应结束后,加入硫酸钛溶液终止反应,并生成有色络合物。在紫外可见分光光度计上,以波长415nm测定吸光度值。

过氧化氢的硫酸钛分光光度法

过氧化氢的硫酸钛分光光度法

过氧化氢的硫酸钛分光光度法

过氧化氢为无色、无气味的液体,具有苦涩味、易分解为水和氧气,是一种强氧化剂。劳动

场所多使用过氧化氢剂杀菌消毒,工业中多用于淀粉增白,或者作为强氧化剂用于食品或者

食品包装消毒杀菌,还可以用于液体燃料推进剂等。毒理学研究证实,一定量的过氧化氢对

人体黏膜有强烈的刺激损伤作用。因而对作业场所空气中过氧化氢的检测意义重大。

目前检测作业场所空气中过氧化氢的标准方法为四氯化钛分光光度法(GBZ/T 160.32-2004)[1],该方法中显色剂四氯化钛具遇水产生而反应不易保存,实验中制备的钛试剂有效浓度

过低导致测量结果偏差较大,重现性不好。另外四氯化钛为需进口,费用昂贵货期长,钛试

剂制备过程中由于在相对较小封闭空间内(容量瓶里)迅速剧烈反应产生大量的气体和热量

容易引发安全事故,因而对于操作者的操作要求很高而限制了实际应用。针对这问题,通过

查找资料制定检测方案[2],应用硫酸钛为显色剂,并实际应用对比,得到了良好的效果。1.1仪器

4.2.1大型气泡吸收管。

4.2.2空气采样器,0~3L/min。

4.2.3刻度试管,10ml。

4.2.4分光光度计。

1.2试剂

实验用水为蒸馏水。

4.3.1硫酸,ρ20=1.84g/ml,优级纯。

4.3.2盐酸,ρ20=1.18g/ml。

4.3.3盐酸溶液:100ml盐酸加入到900ml水中。

4.3.4钛试剂:在100 ml高脚烧杯中,加入10ml硫酸溶液,称量后,加入约42g硫酸钛,搅

拌溶解,如未溶解完全加入适量硫酸溶液;再用硫酸溶液稀释定容成1ml含50mg钛的溶液。

过氧化氢含量测定

过氧化氢含量测定

实验40 植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定

植物在逆境下或衰老时,由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定

【原理】

H2O2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】

研钵;移液管0.2ml×2支,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;分光光度计。

【试剂】

100μmol/L H2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O257μl,溶于100ml,再稀释100倍;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水。

【方法】

1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色。

2.样品提取和测定:(1)称取新鲜植物组织2~5g(视H2O2含量多少而定),按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000 r/min 下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后3000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色。

测定h2o2氧化应激指标试剂

测定h2o2氧化应激指标试剂

测定h2o2氧化应激指标试剂

过氧化氢(H2O2)是生物体内最常见的活性氧分子,不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。生命体内积累的H2O2可能会导致细胞膜脂质过氧化损害,加速细胞的衰老和解体,同时也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。因此,准确测定H2O2的含量对于了解细胞的氧化应激状态具有重要意义。

过氧化氢检测试剂盒是一种常用的测定H2O2氧化应激指标的试剂。这种试剂盒的检测原理是H2O2与硫酸钛反应生成的过氧化物-钛复合物黄色沉淀,溶解于强酸中后,其黄色深浅与过氧化氢浓度在一定范围内呈线性关系,因此可以通过比色法检测412nm 处的吸光度来测定H2O2的含量。

此外,还有其他一些方法可以测定H2O2的含量,如荧光法、化学发光法等,这些方法也都有相应的试剂盒可供选择。在选择具体的测定方法和试剂时,需要根据实验的具体需求和条件来进行选择。

硫酸钛检测过氧化氢含量的原理

硫酸钛检测过氧化氢含量的原理

硫酸钛检测过氧化氢含量的原理

硫酸钛检测过氧化氢含量的原理是:过氧化氢与硫酸钛反应生成过氧化物钛复合物黄色沉淀,可被硫酸溶解后,在412nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与过氧化氢浓度呈线性关系。

检测时,首先配置一定浓度的硫酸钛溶液和过氧化氢标准溶液,然后对待测样品进行前处理,如离心、过滤等。接着将一定量的样品加入试管中,加入硫酸钛溶液,充分混合后,进行颜色测定。最后根据颜色深浅,利用标准曲线求得过氧化氢的含量。

总的来说,硫酸钛法是一种简单、快速、有效的过氧化氢检测方法。

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过氧化氢的硫酸钛分光光度法

过氧化氢为无色、无气味的液体,具有苦涩味、易分解为水和氧气,是一种强氧化剂。劳动

场所多使用过氧化氢剂杀菌消毒,工业中多用于淀粉增白,或者作为强氧化剂用于食品或者

食品包装消毒杀菌,还可以用于液体燃料推进剂等。毒理学研究证实,一定量的过氧化氢对

人体黏膜有强烈的刺激损伤作用。因而对作业场所空气中过氧化氢的检测意义重大。

目前检测作业场所空气中过氧化氢的标准方法为四氯化钛分光光度法(GBZ/T 160.32-2004)[1],该方法中显色剂四氯化钛具遇水产生而反应不易保存,实验中制备的钛试剂有效浓度

过低导致测量结果偏差较大,重现性不好。另外四氯化钛为需进口,费用昂贵货期长,钛试

剂制备过程中由于在相对较小封闭空间内(容量瓶里)迅速剧烈反应产生大量的气体和热量

容易引发安全事故,因而对于操作者的操作要求很高而限制了实际应用。针对这问题,通过

查找资料制定检测方案[2],应用硫酸钛为显色剂,并实际应用对比,得到了良好的效果。1.1仪器

4.2.1大型气泡吸收管。

4.2.2空气采样器,0~3L/min。

4.2.3刻度试管,10ml。

4.2.4分光光度计。

1.2试剂

实验用水为蒸馏水。

4.3.1硫酸,ρ20=1.84g/ml,优级纯。

4.3.2盐酸,ρ20=1.18g/ml。

4.3.3盐酸溶液:100ml盐酸加入到900ml水中。

4.3.4钛试剂:在100 ml高脚烧杯中,加入10ml硫酸溶液,称量后,加入约42g硫酸钛,搅

拌溶解,如未溶解完全加入适量硫酸溶液;再用硫酸溶液稀释定容成1ml含50mg钛的溶液。

4.3.5吸收液:取20ml钛试剂,加入200ml硫酸溶液,用水稀释至1000ml,此溶液1ml含

1mg钛。

4.3.6标准溶液:取10ml浓过氧化氢用水稀释至150ml。取出2.5ml此液于250ml锥形瓶中,加20ml硫酸溶液(1mol/L),用高锰酸钾溶液(0.2mol/L)滴定。根据高锰酸钾溶液的用量

计算出过氧化氢的浓度。然后用刚煮沸放冷的水稀释成100g/ml过氧化氢标准溶液。或用国

家认可的标准溶液配制。

1.3样品的采集、运输和保存

现场采样按照GBZ 159执行。

在采样点,用1只装有10.0ml吸收液的大型气泡吸收管,以1L/min流量采集空气样品,直

到吸收液呈现淡黄色为止。

采样后,封闭试管进出气口,立即置清洁的容器内运输和保存。样品应在12h内测定。

1.4分析步骤

4.5.1对照试验:将装有10.0ml吸收液的大型气泡吸收管带至采样点,除不连接空气采样器

采集空气样品外,其余操作同样品,作为样品的空白对照。

4.5.2样品处理:用采过样的吸收管中的吸收液洗涤进气管3次,并从进气管将吸收液吹入

刻度试管中,混匀,供测定。若吸收液中过氧化氢浓度超过测定范围,可用吸收液稀释后测定,计算时乘以稀释倍数。

4.5.3标准曲线的绘制:取6只具塞比色管,分别加入0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml 过氧化氢标准溶液,各加2.0ml硫酸溶液和0.2ml钛试剂,配成0.0、50.0、100.0、200.0、300.0、400.0g过氧化氢标准系列。用水稀释至10ml,摇匀后,在410nm波长下测量吸光度。每个浓度重复测定3次,以吸光度均值对相应的过氧化氢的含量(g)绘制标准曲线。

4.5.4样品测定:用测定标准系列的操作直接测定样品溶液和空白对照溶液;样品的吸光度

值减去空白对照的吸光度值后,由标准曲线得过氧化氢的含量(g)。

1.5计算

4.6.1按式(2)将采样体积换算成标准采样体积。

4.6.2按公式(4)计算空气中过氧化氢的浓度:

m

C =———— (4)

Vo

式中:C-空气中过氧化氢的浓度,mg/m3;

m-测得样品溶液中过氧化氢的含量,g;

Vo-标准采样体积,L。

4.6.3时间加权平均容许浓度按GBZ 159规定计算。

2.结果与讨论

2.1 标准曲线、最低检出限及线性范围按照##仪器操作条件及步骤进行测定,过氧化氢浓度

为0-40ug/ml ,标准曲线线性良好,回归方程:Y=0.0386X+0.0673 ,相关系数为0.9995,用

分光光度计连续测量样品空白11次,统计空白标准差为S=0.0384 ,按L=3S(L 为检出限)计算,方法的最低检出限为1.24ug/ml 。

2.2方法精密度和准确度实验[3]1:

按工作场所中合格样品的加标回收实验,取测定后样品分别加入不同量的标准物质,按照

1.4仪器操作条件及步骤进行测定,重复测定6次,计算平均值、回收率和相对标准偏差(

2.3方法的精密度和准确度2:取环境标准样品 BWZ6817-2016不确定度为2%编号 201916, 201918 用本改进方法测量过氧化氢,反复测定6次,计算结果的平均值,均在允许范围内,

说明该方法的精密度和准确度满足要求。

2.4问题与讨论

工作场所空气中过氧化氢的测定方法为四氯化钛分光光度法(GBZ/T 160.32-2004),标准

中显色剂为四氯化钛。四氯化钛不稳定,遇空气中水发生反应,与盐酸溶液反应强烈,在密

闭的空间内产生大量的热和烟气极不安全,溶液的有效浓度低,测量的准确度低精密度差,

测量结果的重现性不理想。同时由于四氯化钛国内不生需要进口而费用昂贵。

盐酸由于易挥发因而制备钛试剂过程中需要特别注意盐酸溶液的选择。

应用硫酸钛作为显色剂,其试剂纯度较高,分子结构稳定,易于保存,同时在国内有生产因

而降低了成本。

在高脚烧杯中使用硫酸钛代替四氯化钛制备钛试剂,避免了剧烈反应产热产烟气带来的危险。四氯化钛分光光度法(GBZ/T 160.32-2004)测量显色温度应该大于20℃,室温过低显色剂

反应不完全,影响比色。

吸收管和比色管应该在使用前使用氢氧化钠溶液(0.05mol/L)进行微波清洗后,再用去离子水

清洗干净。

采样过程中应该注意防尘和剧烈、温度过高环境。在安装采样设备时,工作人员应使用PE

手套哦,防止采样器的污染。

小结

本文对标准中四氯化钛分光光度法(GBZ/T 160.32-2004)四氯化钛改为硫酸钛,并实际应用,改进后具有精密度好,准确度可靠等优点,标准样品测量结果与质控样品标示值符合对

应要求。在日常检测中,结果稳定重复性好。

参考文献

[1]中华人民共和国国家卫生部,中华人民共和国国家职业卫生标准[S](GBZ/T

160.32-2004)5-6

[2]国家环境保护总局,空气和废气监测分析方法(第四版)[M]北京:中国环境科学出版社200313-14

[3]国家质量监督检验检疫总局[S]GB/T6379.2-2004测定方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法

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