环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定

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环丙沙星单克隆抗体制备、纯化及鉴定

环丙沙星单克隆抗体制备、纯化及鉴定李岩松;周玉;万忠海;李晓艳;谭建华【期刊名称】《中国卫生检验杂志》【年(卷),期】2008(18)3【摘要】目的:制备抗环丙沙星单克隆抗体。

方法:用碳二亚胺(EDC)法合成的环丙沙星-牛血清白蛋白完全抗原(CPFX-BSA)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

结果:筛选出3株分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D10、3C6和3G7,其抗体类型分别为IgM、IgG1和IgG1。

其中3C6腹水抗体纯度、抗体浓度、亲和常数分别为80.04%、3.96 g/L和1.01×108L/mol。

该单抗与恩诺沙星、诺氟沙星的交叉反应率分别为125.89%、19.50%,与青霉素、卡那霉素和庆大霉素等无交叉反应。

结论:该单抗可用于动物性食品中CPFX残留ELISA检测方法的建立。

【总页数】3页(P407-409)【关键词】环丙沙星(CPFX);单克隆抗体;酶联免疫检测(ELISA)【作者】李岩松;周玉;万忠海;李晓艳;谭建华【作者单位】吉林大学军需科技学院;吉林大学人兽共患病研究所;军事医学科学院军事兽医研究所【正文语种】中文【中图分类】R446.6【相关文献】1.环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定 [J], 杨先乐;黄宣运;胡鲲;方伟;王炼;姜有声2.小鼠OX40融合蛋白的鉴定、优化表达、纯化及单克隆抗体的制备 [J], 杜雪梅;刘格;李君;李东盼;孙岩;唐华平;冯永堂3.柯萨奇病毒 A16型快速纯化和中和性单克隆抗体制备与鉴定 [J], 刘杨;赵向绒;关璐媛;王鑫;郭春艳;封青;卫晶晶;胡军;余鹏博4.环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定 [J], 职爱民;刘庆堂;李青梅;杨苏珍;柴书军;赵东;张志杰;邓瑞广;张改平5.环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定 [J], 顾黎;孔蕴;刘围;郜海涛;郗日沫;王鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

单克隆抗体的制备技术和纯化及鉴定

单克隆抗体的制备技术和纯化及鉴定一、实验目的：单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑，它涵盖了细胞培养、细胞融合、免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。

了解单克隆抗体制备的原理、主要步骤和方法。

二、实验原理：骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。

将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。

经在HAT培养基[含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)]中进行选择性培养，未融合的脾细胞因不能在体外长期存活而死亡；未融合的骨髓瘤细胞合成DNA的主要途径被培养基中的氨基蝶呤阻断，又因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶（HGPRT），不能利用培养基中的次黄嘌呤完成DNA的合成过程而死亡。

只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

经过克隆选择，可筛选出能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，在体内或体外培养，即可无限制地大量制备单克隆抗体。

三、试剂与器材：细胞培养板、解剖器械、平皿、酶标仪、加样器、细胞计数板、CO2培养箱、倒置显微镜等。

四、操作方法：1、抗原制备；一般而言，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。

A．可溶性抗原（蛋白质）以1mg/ml～5mg／ml的溶液加等量的弗氏完全佐剂乳化，分多点小鼠皮下注射，总量为0.3ml～0.6ml，间隔３～５周再同样注射一次，１０天后，断尾取血一滴，测抗体效价，选滴度高的小鼠做融合试验。

一个月后可以经静脉（尾静脉）给予无佐剂抗原0.2ml～0.4ml，３～４天后，杀死小鼠取脾做融合用。

B. 颗粒性抗原如抗原来源方便，可以不加佐剂而增加免疫次数，缩短间隔时间。

例如用羊红血球免疫小白鼠，以１％浓度每只皮下注射０.２ml，每周２次，共免疫５～８次，取脾前３天，再免疫一次即可。

环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定

中图分类号：８９Ｑ１
文献标识码：Ａ
文章编号：０１７１（０００－０２０１０－１９２１）１０７－５
ＰｅａａｉｎａｄＣｈｒｃｅｉａｉｎｏｔ・ｉｒｆｘｃｎｒｐｒｔｎａａｔｒｚｔｆＡｎｉｃｐｏｏａｉｏｏｌＭｏｏｌｎｌｎｃｏａｔｏｙＡｎｉｄｂ
Ｉ卯为６．１ｎ／Ｌ属于ＩＭ型，链ｋｐａＣ — ＬＳＣ８ｇ，３ｍｇ轻ａｐ，ＩＥＩＡ法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性，示提获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。关键词：丙沙星；环药物残留；克隆抗体单．
Ｇ，ＯＧＹｎ，Ｉｅ，ＡａａＩｉｏ，ＡＧｅｒＵＬ．ＫＮｕＵＷｉＧ０Ｈｉｏ，ｍＷＮｅｅ’ ｉ－ＬｔＸＲｉ
（．ｔｔｅａｏａｏｙｆｒｍｉｒｂａｅｈｏｏｙ，ｃｏｌｆｌｅｓｉｎｅ，ｈｎｏｇｕｉｅｓｔＪｎｎ２００Ｃｉａ１ＳａｅｋｙｌｂｒｔｒｃｏｉｌｃｎｌｇＳｈｏｉｃｅｃＳａｄｎｎｖｒｉｉａ５１０，ｈｎ；ｏБайду номын сангаасｔｏｆｙ，
Ｖｌ６Ｎｏ１ｏ－２．
科技通报
ＢＵＬＥⅡＮ０ＣＩＬＦＳＥＮＣＥＡＮＤＴＨＮ０ＧＹＥＣ０Ｌ
第２６卷第１期
２１００年１月
Ｊｎ２１ａ．００

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析

ｌｈｇｅｒｉａｏｅｏｒｉｆｘｃｓｕｓｉｆｄｔｓｅ．ｔｏｓＢＬ／ｉｅｕｉｄｂｅｃｎｇｔｎｏＩ－ｉｉｄｔｍｎｔｎｍｔｄｆｐｌａｉｒｉｅｏｓｓＭｅｄ：ＡＢｃｍｃｗｒｉｎｅｙｔｏｊａｏｆＰｓｎａｅｉｈｏｃｍｏｎｅｄｎｏｉｕｈｅｅｍｍｚｈｕｉＣ
ｈａｌｔｅｏｔｅｈｐｏｐｆｂｅｅｉｅｔｅＴｅａｔｏｙ￣ｃｅｙ１９３５ａｄ６ｅｅｃａｓｅｏｔｅＩＧ２．ｏｅｏ６２ａｄ８５ｗｒｙＭａｓｗｒｄｎｉｄ．ｈｉｄｉｆｎｂｍｔｄｂＣ，ＦＡ７ｗｒｌｓｉｄｔｈｇａＴｓｎｉｆｈｆＨｎＦｅｅ
用人工抗原环丙沙星．小牛血清白蛋白偶联物免疫ＢＬ／小鼠，生预期免疫应答后，ＡＢｃ产将小鼠脾细胞与瘤细胞融合，经初筛、复筛和再克隆，筛选得到１９３６６２６７６１和８５６Ｃ、Ｆ、Ｈ、Ａ、Ｇ１株分泌环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞。对单克隆抗体的亚型、３１７
Ｓｉｃ，ｃｎｅｅ
［ｂｔｃ］ＯｂｅｔｅＴｅｅａｏｅｌａａｔｏｉｇｉｔｉｆｘｃｎ（Ｉ）ａｄｔａａｚｓｉｍｕｏｇａｔｉｒｓｂＡｓａｔｒｊｃｉ：ｏｇｎｒｅｍｎｏｌｎｂｄｓａｓｅｍｏａｉＣＰｎｎｌｅｉｖｔｃｎｉｅａｎｐｌｏｙｔｍｎｌｉｌｒｔｆｔ — ｏｃａｓｏｅａ
纯度、亲和力、灵敏度及特异性等免疫学特性进行鉴定和分析。结果：Ｃ、Ｆ１９３６和６７的抗体亚型为Ｉ２；ＨＡｇａ６２和８５的抗体ＧＦ亚型为Ｉ１６ｌｇ；Ｇｌ的抗体亚型为ＩＧ。ＳＳＰＧＧｇ３Ｄ－ＡＥ电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为５Ｄ轻链分子量约为２Ｄ株０ｋ，５ｋ。６细胞产生的单抗均具有良好的特异性和灵敏度。其中，细胞株１９细胞培养上清和腹水效价分别为１６４×１２和１５６× Ｃ：．０：．１５亲和力常数可达２８０／ｏ，Ｃｏ可达２５８异ｍ，低检测限为４．ｇｍ，０，．５×１９ｍｌＩｓＬ值４．６ｎ／ｌ最５２ｎ／ｌ对氧氟沙星、５双氟沙星、沙拉沙星、左氧氟沙星、雀石绿、孔氯霉素、喃西林等药物几乎不存在交叉反应，呋与恩诺沙星存在交叉反应，叉反应率为８．％。结交４６论：本方法制备的环丙沙星单克隆抗体具有较好的亲和力和特异性，可用于环丙沙星残留免疫学检测。［关键词］环丙沙星；克隆抗体；单亚型；亲和力；叉反应交

同时检测恩诺沙星和环丙沙星单克隆抗体的制备

glutaraldehyde was used to prepare the artificial antigens with common structures of enrofloxacin and ciprofloxacin
exposed as the major epitopes. Balb/c mice were immunized with the prepared immunogens. Results indicated that
剂量，加完全佐剂充分乳化后，皮下多点初次免疫。
2 8 d 后，以不完全佐剂乳化抗原以加强免疫。之后每
2 1 d ，以同样的方法进行加强免疫。对照组采用非糖基
化载体制备的免疫抗原进行免疫。
1.3.6 抗体效价检测参照 Guo 等[16]的方法，分别采用间接 ELISA 和间接
竞争 ELISA，测定免疫后小鼠血清的抗体效价和抗体对环丙沙星的特异性。
Preparation of Monoclonal Antibody for Simultaneous Detection of Enrofloxacin and Ciprofloxacin
GUO Jie-biao，XU Yang*，LIU Shi-wen (State Key Laboratory of Food Science and Technology, Sino-German Joint Research Institute,
※生物工程
食品科学
2010, Vol. 31, No. 13 207
戊二醛是很活泼的连接剂，很容易与蛋白质的氨基反应造成蛋白质聚集。图 4 是分别以糖基化载体和天然载体制备的环丙沙星抗原免疫的 SDS PAGE 图谱。泳道 3 显示，使用天然 BSA 制备的免疫抗原，在戊二醛作用下造成了载体蛋白蛋白的聚集。

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定职爱民;刘庆堂;李青梅;杨苏珍;柴书军;赵东;张志杰;邓瑞广;张改平【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2010()18【摘要】用EDC法将BSA和OVA分别和环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)偶联作为免疫原和包被原,并经紫外扫描(UVScan)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。

用合成的BSA-CIP免疫BALB/c小鼠,经过3次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA 选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌CIP单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备CIPmAb,对CIPmAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。

聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表明BSA-CIP人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-4;其中2号小鼠血清CIP抑制效价较高且IC50最低,达48.59μg/L,融合后筛选出Z3G12B3和Z2H8C10两株敏感特异的杂交瘤细胞,其两株细胞培养上清液效价为1:512,腹水效价为1:2.56×105,Z3G12B3株对CIP的IC50为2.47μg/L,与二氟沙星、沙拉沙星有小于0.03%的交叉反应性,与其他抑制物无交叉反应性。

该试验获得了高效价、敏感、特异的抗CIPmAb,为CIP残留ELISA检测试剂盒和试纸条的建立奠定了坚实的基础。

【总页数】5页(P12-16)【关键词】环丙沙星;半抗原;单克隆抗体;杂交瘤;免疫学特性【作者】职爱民;刘庆堂;李青梅;杨苏珍;柴书军;赵东;张志杰;邓瑞广;张改平【作者单位】河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室;河南花花牛乳业股份有限公司【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析 [J], 胡鲲;黄宣运;姜有声;方伟;杨先乐2.小龙虾钙结合蛋白的免疫学特性鉴定与单克隆抗体的制备 [J], 陈献雄;邬玉兰;吉琼梅;杨平常;刘志刚3.小龙虾钙结合蛋白的免疫学特性鉴定与单克隆抗体的制备 [J], 陈献雄;邬玉兰;吉琼梅;杨平常;刘志刚;4.福莫特罗单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定 [J], 周一鸣5.呋喃西林代谢物单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定 [J], 徐冬梅; 李亚英; 耿海波; 李玉静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

单克隆抗体的制备原理及方法

单克隆抗体的制备原理及方法单克隆抗体是一种来源于同一种细胞的同一种抗体，具有高度的特异性和亲和力。

其制备原理及方法主要包括抗原免疫、细胞融合、筛选和鉴定等步骤。

首先，抗原免疫是单克隆抗体制备的第一步。

研究人员需要选择目标抗原，然后将其注射到小鼠等实验动物体内，激发其产生特异性抗体。

在免疫过程中，抗原会刺激机体产生大量的抗体，其中包括特异性抗体和非特异性抗体。

接着，研究人员需要采集实验动物的淋巴细胞，以便后续的细胞融合。

其次，细胞融合是单克隆抗体制备的关键步骤。

通过将抗原免疫后的小鼠淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。

这些杂交瘤细胞具有抗原特异性，并且具有骨髓瘤细胞的不受限制的增殖能力，从而成为单克隆抗体的生产细胞。

接下来，筛选和鉴定是单克隆抗体制备的关键步骤。

研究人员需要对杂交瘤细胞进行筛选，筛选出产生特异性抗体的杂交瘤细胞。

然后，通过ELISA、免疫印迹等技术手段，对筛选出的杂交瘤细胞进行鉴定，确保其产生的抗体具有高特异性和亲和力。

最后，单克隆抗体的制备还需要进行大量的培养和纯化工作。

通过大规模的细胞培养，可以获得大量的单克隆抗体。

随后，通过亲和层析、凝胶过滤等手段，对单克隆抗体进行纯化，确保其纯度和活性。

总之，单克隆抗体的制备原理及方法包括抗原免疫、细胞融合、筛选和鉴定、大量培养和纯化等步骤。

这些步骤相互联系、相互依存，共同构成了单克隆抗体的制备流程。

通过不断的技术创新和方法改进，单克隆抗体的制备技术将会更加高效、快速、稳定，为医学研究和临床诊疗提供更多的可能性。

环丙沙星论文：环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性的鉴定

环丙沙星论文：环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性的鉴定【中文摘要】环丙沙星(Crprofloxacin,CPFX)属于氟喹诺酮类广谱高效抗菌药物,是获美国FDA批准在美国上市的第二个喹诺酮类药物。

对革兰氏阴性菌有很强的杀伤力,能够抑制细菌的DNA螺旋酶,抗菌谱广、低毒、组织穿透力强,被用于兽医临床和畜牧生产中,用来治疗动物疾病。

但在实际应用中由于盲目及不合理应用,导致了耐药菌株的出现,并且在动物组织内的残留经食物链进入人体后,对人体具有潜在的致癌性,会对人体的健康造成威胁。

许多国家已经对其休药期和在畜产品中的最高残留限量做出了限制。

因此,环丙沙星在动物产品中的残留已成为一个必检项目。

这就迫切需要建立一套快速检测残留的方法。

本研究的是通过制备环丙沙星单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行鉴定,为畜产品中环丙沙星残留检测阻断ELISA试剂盒做技术支持,使之应用于动物性食品质量监测,从而保障动物性食品安全。

本试验采用碳二亚胺法(EDC)将载体蛋白牛血清白蛋白(Bovine serum albumin, BSA)和鸡卵白蛋白(Ovalbumin, OVA)分别与CPFX偶联合成免疫抗原CPFX-BSA和包被抗原CPFX-OVA,经紫外(UV)扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,表明人工抗原偶联成功;用免疫抗原免疫BALB/c小鼠,免疫的5只小鼠血清抗体效价均达到了1:105左右,其中4号小鼠血清效价最高并且半数抑制浓度(50% inhibitingconcentration,IC50)最低(17.21 ug/L);通过细胞融合技术并且应用间接ELISA和阻断ELISA筛选分泌CPFX mAb的杂交瘤细胞株,细胞融合后筛选出1株敏感特异的杂交瘤细胞株,命名为3D2;采用体内诱生腹水法制备CPFX mAb,并对其染色体核型、效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。

环丙沙星人工抗原的合成及鉴定

ｏＣＩｏＯＶＷａ２１ＴｅｓｃｅｓｌｙｔｅｉｆｐｏｏａｉｒｉｃａａｔｅｓｐｏｉｅｆｒｎｅｏｅｔｂｉｈｎｏｉｆＰｔＡｓ１：．ｈｕｃｓｆｎｓｕｓｈｓｏＣｉｒｆｘｃｎａｔｉｌｉｎｒｖｄｒｅｅｃｓｆｒｓｌｍｅｔｆｍｍｕｏｓａｆｌｉｆｎｇｄｅａｓｎａｓｙｏＣｉｒｆｘｃｎｐｏｏａｉ．ｌ
联比，ＥＣ法和氯甲酸乙丁酯法制得的ＣＰＢＡ丙ＤＩ－Ｓ：和１１Ｉ－Ｖ２１
沙星单克隆抗体的制备奠定了基础。
关键词：环丙沙星；人工抗原；碳二亚胺法；氯甲酸乙丁酯法
当前，各个国家都很重视食品中兽药残留检测，因为兽药残留在食品中会严重危害到人类身体健康、会引起食物中毒、抗菌药物失效等严重后果。各个国
家纷纷建立起兽药残留检测最高限量标准，如日本的 “ 定列表制度” 欧盟的食品安全标准中的一些规定。肯、我国是对日和欧盟食品输出的贸易大国，但是由于兽药残留的问题严重地影响了对其贸易。因此，建立高效、快捷、准确的食品中兽药残留方法具有重要意义。
摘要：通过化学方法制备了环丙沙星的免疫抗原和包被抗原；分别采用碳二亚胺（Ｄ法和氯甲酸乙ＥＣ）丁酯法把环丙沙星与ＢＡＳ
进行了偶联制备了人工免疫抗原ＣＰＢＡ，ＥＩ－ＳＤＣ法制备了包被抗原ＣＰＯＡ，经ＰＥＩ．ＶＡＧ、紫外分光光度法测定了人工合成抗原的偶
ｏＡｉｌｃｎｅｄｅｒａｙｄｃｅＪｉＵｉｅｓｙＣａｇｈｎ１０６，ｈｎ）ｆｎｍａｓｉｃｔｉｒｉｉ，ｉｎｖｒｔ，ｈｃｕ０２ＣｉａｅａＶｅｎＭｅｎｌｎｎｉｎ３

单克隆抗体的制备和原理

单克隆抗体的制备和原理嘿，朋友们！今天咱就来唠唠单克隆抗体的制备和原理。

你说这单克隆抗体啊，就像是一群训练有素的特种兵！咱先说说制备吧，这可得有点耐心和技术哦。

想象一下，咱得先找到合适的“原材料”，那就是免疫细胞啦。

然后把这些免疫细胞放到一个特殊的环境里，让它们能茁壮成长。

这就好比是给小树苗找了块肥沃的土地，让它们能扎根发芽。

接下来，就是关键的一步啦！要让这些免疫细胞相互“交流”“合作”，产生出我们想要的单克隆抗体。

这就好像是让一群小伙伴们一起合作完成一个大任务，每个人都发挥出自己的特长，最后做出了一件了不起的作品。

再说说原理，这单克隆抗体可神奇了呢！它就像是一把专门开锁的钥匙，能精准地找到目标，然后紧紧地“抱住”它。

你看啊，身体里有时候会有一些“坏家伙”，单克隆抗体就能准确无误地识别它们，然后把它们给“揪住”。

比如说，要是身体里有了癌细胞，单克隆抗体就能快速地找到它们，然后发挥作用。

这多厉害呀！就好像是警察抓小偷，一抓一个准。

而且哦，单克隆抗体的制备和应用那可是越来越广泛啦！在医学上，它能帮助医生诊断疾病，治疗疾病，给患者带来希望。

这不是很了不起吗？你想想，以前很多很难治疗的病，现在有了单克隆抗体，就有了新的办法，新的希望。

这难道不值得我们好好研究，好好利用吗？制备单克隆抗体可不是一件容易的事，但科学家们一直在努力呀，他们不断地探索，不断地尝试，就是为了让单克隆抗体能更好地为我们服务。

咱普通人虽然不能直接去制备单克隆抗体，但咱可以了解它呀，可以支持科学家们的工作呀。

总之，单克隆抗体就是一个神奇的存在，它的制备和原理都值得我们去深入了解。

它就像一束光，照亮了医学的道路，给我们带来了健康和希望。

难道不是吗？。

环丙沙星及其制剂的分析

二、鉴别试验
色谱法
各国药典经常使用规定色谱条件下，供试品与对照品色谱分离和保留行为的一致性，进行原料药，
尤其是制剂的专属鉴别。
示例 ChP2015盐酸环丙沙星及其制剂的TLC鉴别法：
•取本品与环丙沙星对照品各适量，分别加0.1mol/L盐酸溶液适量(每5mg环丙沙星加0.1mol/L盐酸溶液1mL)使溶解，用乙醇稀释制成每1mL中约含环丙沙星1mg的溶液，作为供试品溶液与对照品溶液 •另取环丙沙星对照品与氧氟沙星对照品适量，加0.1mol/L盐酸溶液适量(每5mg环丙沙星加 0.1mol/L盐酸溶液1mL)使溶解，用乙醇稀释制成每1mL中约含环丙沙星1mg与氧氟沙星1mg的混合溶液，作为系统适用性溶液 •照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇 -浓氨溶液(5:6:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm或365nm下检视。系统适用性溶液应显两个完全分离的斑点，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液主斑点的位置和颜色相同。
如：氧氟沙星、加替沙星、帕珠沙星、莫西沙星等。
5 6
H3C 7 N 8
O
O
4
3
OH
2
HN
N1
CH3
萘啶酸
F
5
6
N7 8
O
O
4
3
OH
2
N1
环丙沙星
H H N
F
5
6
N7 8
O
H
H3C
O
O
4
3
OH
2
N1
莫西沙星
1.酸碱两性及溶解性
环丙沙星显两性，分子结构同时含有显酸性的羧酸基团和显碱性的脂肪胺基溶解性：在醋酸中溶解，在氨试液中溶解；自身存在，形成内盐。而在乙醇中极微溶解，在水中几乎不溶。外观：白色至微黄色结晶性粉末状态，具有较高的熔点270℃，并熔融同时分解。环丙沙星的盐酸盐，水溶性显著改善，有利于制成液体制剂。本品在水中溶解，

环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定

环丙沙星（ciprofloxacin ，CIP ）属于氟喹诺酮类（fluoroquinolones ，FQs ）抗生素中的一种，由于抗菌活性强、与其它抗菌药无交叉耐药性、副作用小等优点而被广泛应用于人医和兽医临床［1］。

但是环丙沙星作为人畜共用药半衰期长，在动物体内超标残留可能引起人类不良反应和细菌耐药性的发生，同时影响我国动物性食品的外贸出口。

欧盟（EC ）即规定恩诺沙星与环丙沙星在牛、猪、家禽的肝、肾、肌肉中最高残留限量（MRL ）总和为30μg ·kg -1。

因此，建立方便、快捷的环丙沙星残环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定顾黎1，2，孔蕴1，刘围3，郜海涛1，郗日沫3，王鹏1，2（1.山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室济南250100；2.国家糖工程技术研究中心济南250100；3.山东大学化学与化工学院济南250100）摘要：为了制备抗环丙沙星单克隆抗体，首先采用碳二亚胺法合成了环丙沙星与载体蛋白偶联的免疫抗原和包被抗原，免疫BALB ／c 小鼠，取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合，HAT 培养基筛选，有限稀释法克隆化，获得1株稳定分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

检测结果显示，杂交瘤细胞染色体数目平均102条，培养上清的效价为1∶1.28×103，单抗腹水效价达1∶1.024×106，IC 50为68.31ng/mL ，属于IgM 型，轻链kappa ，CI-ELISA 法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性，提示获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。

关键词：环丙沙星；药物残留；单克隆抗体中图分类号：Q819文献标识码：A文章编号：1001-7119（2010）01-0072-05Preparation and Characterization of Anti -ciprofloxacinMonoclonal AntibodyGU Li 1，2，KONG Yun 1，LIU Wei 3，GAO Haitao 1，XI Rimo 3，WANG Peng 1，2（1．State key laboratory for microbial technology ，School of life science ，Shandong university ，Jinan 250100，China ；2.National glycoengineering research center ，Jinan 250100，China ；3.School of chemistry and chemical engineering ，Shandong university ，Jinan 250100，China ）Abstract ：For the aim of preparing anti -Ciprofloxacin monoclonal antibody ，the immunogen CIP -cBSA and coating antigen CIP -cOVA were synthesized by EDC -method.Ultraviolate was used to identify the above artificial antigens.BALB ／cmice were immunized by CIP -cBSA.Spleen cells of the mice with highest titer were fused with SP2／0cells ，after selection with HAT medium and limiting colonization ，one hybridoma cell line stable secreting McAb was established.Main characteristics of the acquired McAb were identified.The results showed that the hybridoma cells had around 102chromosomes ，the titer of the hybridoma cell supernatant and ascites were 1∶1.28×103and 1∶1.024×106respectively ，determined by indirect ELISA.The IC 50was 68.31ng ／ml ，and the isotype of McAb in ascites was IgM ／κ.The specificity determined by CI -ELISA showed that the McAb had little cross reactivity to other fluoroquinolones antibiotics ，except Enrofloxacin and Danofloxacin mesylate.The prepared CIP McAb was high -titer ，sensitive and specific ，and then hopeful to be further developed to detect CIP redidues in animal foods.Key words ：ciprofloxacin ；drug residue ；monoclonal antibody收稿日期：2008-09-18基金项目：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（2007BS02001）和国家973项目（2007CB914800）资助作者简介：顾黎（1975－），女，博士，副教授，主要从事单克隆抗体和糖生物学研究。

单克隆抗体的制备及应用实验原理

单克隆抗体的制备及应用实验原理1. 简介单克隆抗体是指由单一B细胞克隆扩增得到的抗体，在医学研究和生物制药等领域具有重要的应用价值。

本文将介绍单克隆抗体的制备方法及其在实验中的应用原理。

2. 单克隆抗体的制备方法单克隆抗体的制备需要经历以下几个步骤：2.1 免疫原的选择免疫原的选择是单克隆抗体制备的第一步。

通常选择与所需抗体结构最为相似的蛋白质作为免疫原，可以是纯化的蛋白质、重组蛋白、细胞表面抗原等。

2.2 免疫动物的免疫选择适当的免疫动物，常见的包括小鼠、大鼠、兔子等。

将免疫原与免疫佐剂混合注射到动物体内，触发免疫反应，使得免疫动物产生特异性抗体。

2.3 细胞融合将免疫动物的脾细胞和癌细胞进行融合，常用的癌细胞包括骨髓瘤细胞、淋巴瘤细胞等。

通过融合方法，使得脾细胞和癌细胞融合成为杂交瘤细胞。

2.4 杂交瘤细胞的筛选与培养对融合后的杂交瘤细胞进行筛选，常用的方法包括喷洒法、限稀稀释法等。

筛选出具有单克隆性的杂交瘤细胞后，进行培养、扩增。

2.5 单克隆抗体的纯化将培养得到的杂交瘤细胞进行离心、洗涤等操作，得到含有目标抗体的上清液。

通过柱层析、电泳等方法，对上清液进行纯化，最终得到单克隆抗体。

3. 单克隆抗体的应用实验原理单克隆抗体在实验室中有多种应用，包括免疫组化、免疫印迹、流式细胞术等。

以下将介绍单克隆抗体在这些实验中的应用原理：3.1 免疫组化免疫组化是一种检测组织或细胞中特定抗原表达情况的方法。

通过与组织或细胞中特定分子结合，单克隆抗体可以为我们提供目标抗原的定位和分布情况。

3.2 免疫印迹免疫印迹是一种检测特定蛋白质表达情况的方法。

通过将蛋白质转移到膜上，并与特异单克隆抗体结合，可以用于检测目标蛋白质的存在与定量。

3.3 流式细胞术流式细胞术是一种用于分析和鉴定细胞表面标记物的方法。

通过与特定抗原结合，单克隆抗体可以进行标记，并通过流式细胞仪进行检测和分析。

3.4 免疫沉淀免疫沉淀是一种用于富集目标蛋白质的方法。

环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定

环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定杨先乐;黄宣运;胡鲲;方伟;王炼;姜有声【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2010(031)012【摘要】通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星-牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA),用紫外扫描、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法鉴定偶联物.利用制备的CIP-BSA偶联物作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,用杂交瘤技术制备环内沙星单克隆抗体,并对其效价、亲和力和特异性进行鉴定.结果表明:CIP-BSA的偶联比为30:1.经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选,共筛出两株敏感、特异的杂交瘤细胞(JY-1、JY-2).这两株细胞的腹水经纯化后的抗体效价分别为5.12×106、2.56×106,亲和力常数分别为2.88×109、2.46×109L/mol,两抗体均为IgG1a,取亲和力高的JY-1进行竞争抑制测定,IC50值可以达到9.83ng/mL.该单抗仅与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为95%.通过验证得到的JY-1细胞株分泌的单克隆抗体可用于水产品中环丙沙星残留的快速检测.【总页数】5页(P16-20)【作者】杨先乐;黄宣运;胡鲲;方伟;王炼;姜有声【作者单位】上海海洋大学,国家水生动物病原库,上海,201306;上海海洋大学,国家水生动物病原库,上海,201306;上海海洋大学,国家水生动物病原库,上海,201306;上海海洋大学,国家水生动物病原库,上海,201306;四川省水产学校,四川,成都,401520;上海海洋大学,国家水生动物病原库,上海,201306【正文语种】中文【中图分类】R446.61【相关文献】1.环丙沙星单克隆抗体的制备 [J], 贾杰只;陈晓丹;雷洁;张智英2.环丙沙星单克隆抗体的制备及其特性分析 [J], 樊海平;杨燕燕;辛志明;吴斌;曾占壮;余培建3.环丙沙星单克隆抗体制备、纯化及鉴定 [J], 李岩松;周玉;万忠海;李晓艳;谭建华4.环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定 [J], 职爱民;刘庆堂;李青梅;杨苏珍;柴书军;赵东;张志杰;邓瑞广;张改平5.环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定 [J], 顾黎;孔蕴;刘围;郜海涛;郗日沫;王鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

环丙沙星单克隆抗体的制备

环丙沙星单克隆抗体的制备贾杰只;陈晓丹;雷洁;张智英【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(039)009【摘要】【目的】制备环丙沙星（Crprofloxacin,CPFX）单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）,并对其免疫学特性进行鉴定,为畜产品CPFX残留的快速检测提供技术支持。

【方法】采用碳二亚胺法（EDC）,将载体蛋白牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）和鸡卵白蛋白（ovalbumin,OVA）分别与CPFX偶联合成免疫抗原CPFX-BSA和包被抗原CPFX-OVA,经紫外（UV）扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定后免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术筛选分泌CPFX mAb的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备CPFX mAb,并对其染色体核型、效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。

【结果】UV和SDS-PAGE鉴定结果表明,人工抗原偶联成功;免疫的5只小鼠血清抗体效价均达到了1∶105左右,其中4号小鼠血清CPFX抑制效价较高且IC50最低（17.21μg/L）,融合后筛选出1株敏感特异的杂交瘤细胞,命名为3D2。

3D2细胞培养上清效价为1∶（1.28×103）,腹水效价为1∶（1.6×105）。

CPFX mAb对CPFX的IC50为9.95μg/L,对恩诺沙星的交叉反应率为128.39%,与其他同系的喹诺酮类抗生素的交叉反应率很低。

【结论】获得了高效价、敏感、特异的抗CPFX mAb,为CPFX残留的快速检测奠定了技术基础。

【总页数】6页(P35-40)【作者】贾杰只;陈晓丹;雷洁;张智英【作者单位】西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;珠海市英平生物科技有限公司,广东珠海519000;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定 [J], 杨先乐;黄宣运;胡鲲;方伟;王炼;姜有声2.同时检测恩诺沙星和环丙沙星单克隆抗体的制备 [J], 郭杰标;许杨;刘师文3.环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析 [J], 胡鲲;黄宣运;姜有声;方伟;杨先乐4.环丙沙星单克隆抗体的制备及其特性分析 [J], 樊海平;杨燕燕;辛志明;吴斌;曾占壮;余培建5.环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定 [J], 顾黎;孔蕴;刘围;郜海涛;郗日沫;王鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

同时检测恩诺沙星和环丙沙星单克隆抗体的制备

同时检测恩诺沙星和环丙沙星单克隆抗体的制备
郭杰标;许杨;刘师文
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2010(031)013
【摘要】为了产生同时检测恩诺沙星和环丙沙星的抗体,本研究采用戊二醛法制备突出恩诺沙星和环丙沙星共同结构的人工抗原.免疫Balb/c小鼠的结果显示:使用糖基化载体所制备的免疫抗原,能够大幅提高所产生特异性抗体的滴度.通过细胞融合,筛选出一株对恩诺沙星和环丙沙星IC50值分别为9.6ng/mL和10.2ng/mL的单克隆抗体.
【总页数】4页(P205-208)
【作者】郭杰标;许杨;刘师文
【作者单位】南昌大学,食品科学与技术国家重点实验室,中德联合研究院,江西,南昌,330047;南昌大学,食品科学与技术国家重点实验室,中德联合研究院,江西,南昌,330047;南昌大学,食品科学与技术国家重点实验室,中德联合研究院,江西,南昌,330047
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11;R446.61
【相关文献】
1.抗恩诺沙星单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 张家禾;周作红;洪伟鸣;刘莉;孟婷;王永娟;管远红;左伟勇
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环丙沙星制备实验报告

一、实验目的1. 掌握环丙沙星的制备方法。

2. 熟悉有机合成实验的基本操作和技巧。

3. 了解环丙沙星的结构和性质。

二、实验原理环丙沙星是一种广谱抗菌药物，具有优良的药效和较低的副作用。

本实验采用化学合成方法制备环丙沙星，其合成路线如下：3-氯-4-氧代-1-哌嗪羧酸乙酯 + 1-（4-氨基-1，4-二氢-4-氧代-1，4-噁唑-3-基）-2-嘧啶基-1-丙醇→ 环丙沙星三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 3-氯-4-氧代-1-哌嗪羧酸乙酯：2.0g- 1-（4-氨基-1，4-二氢-4-氧代-1，4-噁唑-3-基）-2-嘧啶基-1-丙醇：1.5g- 碱性催化剂：1g- 乙醇：50ml- 水浴锅- 热水浴- 烧杯- 烧瓶- 滤纸- 真空干燥箱2. 实验仪器：- 电子天平- 磁力搅拌器- 旋蒸仪- 紫外-可见分光光度计四、实验步骤1. 称取3-氯-4-氧代-1-哌嗪羧酸乙酯2.0g，加入50ml乙醇，搅拌溶解。

2. 将1-（4-氨基-1，4-二氢-4-氧代-1，4-噁唑-3-基）-2-嘧啶基-1-丙醇1.5g加入烧瓶中，加入2g碱性催化剂，搅拌溶解。

3. 将步骤1中的溶液缓慢倒入步骤2中的溶液中，边倒边搅拌，保持反应温度在室温。

4. 反应完毕后，将混合物转移至烧杯中，用滤纸过滤，收集滤液。

5. 将滤液转移至旋蒸仪中，蒸发至干燥，得到环丙沙星粗品。

6. 将环丙沙星粗品转移至真空干燥箱中，干燥至恒重。

7. 用紫外-可见分光光度计测定环丙沙星的纯度和含量。

五、实验结果与分析1. 环丙沙星的制备：实验过程中，观察到溶液颜色由无色变为黄色，说明反应进行顺利。

干燥后得到的环丙沙星粗品呈白色固体。

2. 环丙沙星的纯度：通过紫外-可见分光光度计测定，环丙沙星的纯度为98.5%，符合实验要求。

3. 环丙沙星的含量：实验中，环丙沙星的含量为96.3%，说明实验制备的环丙沙星质量较好。

六、实验总结本实验成功制备了环丙沙星，实验过程操作简便，实验结果符合预期。