超高效液相色谱_串联质谱法同时测定中成药和保健品中9种抗抑郁药物
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2014 年 8 月 August 2014
Chinese Jour百度文库al of Chromatography
Vo l． 32 No ． 8 822 ～ 826
DOI: 10． 3724 / SP． J． 1123． 2014． 03032
研究论文
超高效液相色谱 － 串联质谱法同时测定 中成药和保健品中 9 种抗抑郁药物
， 市场上一些中成药及保健品
可以治疗或缓解这些症状。一些商贩在利益驱动下 患者 向其中非法添加抗抑郁药物成分以增强疗效 ， 长期使用会产生药物依赖， 使用不当会危害身体健 康， 甚至危及生命
［3 ］
。 因此建立中成药和保健品中
抗抑郁药物的检测方法， 对打击制假贩假行为、 保护 人民身体健康具有重要意义。 目前， 中成药和保健品中精神类药物的检测方 法有薄层色谱法 （ TLC ） MS / MS ） 质谱法 （ LC［4 ］
第8 期
勾新磊， 等： 超高效液相色谱串联质谱法同时测定中成药和保健品中 9 种抗抑郁药物
· 823·
抑郁症是一种常见的心理障碍， 临床表现为持 心情低落、 思维迟缓， 部分患者会伴有狂躁、 续悲观、 焦虑、 失眠等症状
［1 ， 2 ］
西酞普兰、 多塞平、 帕罗西汀、 氟伏沙明、 马普替 阿米替林、 氟西汀、 舍曲林、 氯米帕明 （ 纯度均 ≥ 林、 97% ， 中国药品生物制品检定所 ） ； 甲醇、 乙腈、 正己 烷为色谱纯（ 美国 Fisher 公司 ） ； 二氯甲烷、 丙酮为 Q 超 色谱纯 （ 安徽时联公司 ） ； 实验用水为经 Milli纯水器过滤的去离子水； 其他试剂均为分析纯。 样 品随机购自药店及超市。 1． 2 标准溶液配制 分别准确称取适量上述标准物质， 置于不同容 用 甲 醇 溶 解， 制 得 质 量 浓 度 均 为 1 000 量瓶 中， m g / L 的单标准储备液。 准确移取各单标准储备液 0. 1 m L， 置于 100 m L 容量瓶中， 用甲醇定容， 配制 成 1 m g / L 的混合对照品储备液。 所有标准溶液均 在 4 ℃ 下保存。 1． 3 样品处理 称取 1. 0 g 样品（ 片剂碾碎， 胶囊去壳研细） ， 置 于 50 m L 具塞离心管中， 加入 20 m L 甲醇， 超声提 取 20 m in ， 以 10 000 r / m in 的速率离心 10 m in ， 取 经 0. 22 μm 有 机 滤 膜 过 滤 后， 用 UPLC上清 液， MS / MS 检测。 1． 4 色谱和质谱条件 色谱柱： Waters ACQUITY UPLC BEH C 18 色谱 柱（ 100 m m × 2. 1 m m ，1. 7 μm ； 美 国 Waters 公 B 司） ； 流动相： A 为 0. 1% （ v / v ， 下同 ） 甲酸水溶液， 为乙腈； 流速： 0. 2 m L / m in ； 柱温： 35 ℃ ； 梯度洗脱 20% B ； 1. 0 ～ 7. 0 m in ， 20% B ～ 程序： 0 ～ 1. 0 m in ， 70% B ； 7. 0 ～ 8. 0 m in ，70% B ； 8. 0 ～ 8. 5 m in ， 70% B ～ 20% B ； 8. 5 ～ 10. 0 m in ， 20% B 。 离子源： 电喷雾离子源 （ ESI ） ； 扫描方式： 正离 子扫描； 检测方式： 多反应监测（ MＲM ） 模式； 毛细管 电压： 3. 0 kV； 萃 取 电 压： 5. 0 V； 离 子 源 温 度： 150 ℃ ； 脱溶剂气温度： 350 ℃ ； 脱溶剂气流速： 650 L / h ； 锥孔气流速： 20 L / h 。其他具体实验参数见表 1 。
2 1、 5 μg / L 3 个添加水平下 好， 线性相关系数（ Ｒ ） 均大于 0. 998 ； 目标物的检出限为 0. 006 8 ～ 0. 034 μg / L； 在 0. 5 、 的平均回收率为 77. 7% ～ 100. 8% ， 相对标准偏差为 0. 9% ～ 9. 1% 。本方法准确、 简便、 快速， 可用于中成药和保健
1
1． 1
实验部分
仪器与试剂 Acquity 超高效液相色谱仪， Xevo TQ 串联质
Masslynx 4. 1 工 作 站 （ 美 国 Waters 公 司 ） ； 谱仪， KQ6000V 超声波清洗器（ 昆山超声仪器有限公司 ） ； CＲ22G Ⅲ离心机 （ 日本日立公司 ） ； MilliQ 超纯水 器（ 美国 Millipo re 公司） 。
品中抗抑郁药物的检测 。 关键词： 超高效液相色谱串联质谱； 抗抑郁药物； 中成药； 保健品 中图分类号： O658 文献标识码： A 8713 （ 2014 ） 08082205 文章编号： 1000-
Simultaneous determination of nine antidepressants in traditional Chinese medicines and health food by ultra performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry
* 通讯联系人． Tel： （ 010 ） 58717610 ， Em ail： gao x ia@ iccas． ac． cn． 基金项目： 北京市自然科学基金项目（ 2122018 ） ； 北京市科学技术研究院创新团队计划项目（ IG200801N / C2 ） ． 0321 收稿日期： 2014-
1 勾新磊 ， 高
峡
1， 2*
2 ， 胡光辉1 ， 刘伟丽1，
（ 1． 北京市理化分析测试中心，北京 100089 ； 2． 国家食品质量安全监督检验中心，北京 100094 ） MS / MS ） 分析方法。 摘要： 建立了同时测定中成药和保健品中 9 种抗抑郁药物的超高效液相色谱 串联质谱（ UPLC以甲醇为提取溶剂， 超声提取， 离心后取上清液， 使用 Waters ACQUITY UPLC BEH C 18 色谱柱（ 100 m m × 2. 1 m m ， 1. 7 μm ） 进行分离， 以乙腈和 0. 1% （ v / v ） 甲酸水为流动相对目标物进行梯度洗脱 。在电喷雾正离子模式下， 采用 9 种抗抑郁药物在 0. 04 ～ 20 μg / L 范围内线性关系良 多反应监测（ MＲM ） 模式进行定性和定量分析 。 结果表明，
、 液相色谱法 （ LC ）
［6 － 8 ］
［5 ］
、 气
MS ） 相色谱质谱联用法 （ GC［9 － 17 ］
、 液相色谱串联
等。 但 TLC 检测结果假
MS 虽然灵敏度高， 阳性率高； LC 灵敏度较低； GC但是部分药物需要进行繁琐费时的衍生化前处理 ； MS / MS 方法因具有灵敏度高、 而 LC检出限低的特 点， 可以进行多组分定性、 定量检测， 是目前报道较 多的方法。现有文献
Abstract： A sensitive m etho d w as develo ped fo r the sim ultaneo us determ inatio n o f nine antidepressants in traditio nal Chinese m edicines and health fo o d by ultra perfo rm ance liquid chro m ato graphytandem m ass spectro m etry （ UPLCMS / MS ） based o n the so nicatio nassisted ex tractio n． The separatio n w as perfo rm ed o n a Waters ACQUITY UPLC BEH C 18 co lum n （ 100 m m × 2. 1 m m ， 1. 7 μm ） by using 0. 1% （ v / v ） fo rm ic acid aqueo us so lutio n and aceto nitrile as the m o bile phases w ith gradient elutio n at a flo w rate o f 0. 2 m L / m in． The electro spray io nizatio n （ ESI） so urce in po sitive io n m o de w as used fo r the analysis o f the nine antidepressants in the m ultiple reactio n m o nito ring （ MＲM ） m o de． The standard curves fo r the nine antidepressants w ere o btained w ith go o d co rrelatio n co efficients （ Ｒ 2 ＞ 0. 998 ） in the co ncentratio n range o f 0. 04 － 20 μg / L． The lim its o f detectio n fo r the nine antidepressants w ere in the range o f 0. 006 8 － 0. 034 μg / L． The average reco veries at three spiked levels （ 0. 5 ，1 ，5 μg / L ） w ere 77. 7% － 100. 8% w ith the relative standard deviatio n o f 0. 9% － 9. 1%． The m etho d is accurate ，sim ple ， rapid and feasible fo r the sim ultaneo us determ inatio n o f the antidepressants in traditio nal Chinese m edicines and health fo o d． Key words： ultra perfo rm ance liquid chro m ato graphytandem m ass spectro m etry （ UPLCMS / MS ） ； antidepressants ； traditio nal Chinese m edicines ； health fo o d
2* 2 GOU Xinlei1 ，GAO Xia 1， ，HU Guanghui1 ，LIU Weili1，
（ 1． Beij in g Cen tr e for Phys ical an d Chem ical A n alys is ，Beij in g 100089 ，Chin a ； 2． Chin a Food Qu ality Safety Su per v is ion an d In s pection Cen ter ，Beij in g 100094 ，Chin a ）
Table 1 Analyte Citalo pram Do x epin Paro x etine Fluvo x am ine Mapro tiline Am itriptyline Fluo x etine Sertraline Clo m ipram ine * Quantitative io n．
［9 ， 10 ］
主要针对苯二氮类、 巴比
而对于中成药和 妥类等镇静安神类药物进行检测， 保健品中添加的能缓解烦躁、 焦虑等症状的抗抑郁 目前还未见报道。 本文建立了同时检 药物的检测， 测中成药和保健品中 9 种抗抑郁药物的超高效液相 MS / MS ） 分析方法。 该方法 串联质谱 （ UPLC色谱准确、 简便、 快速， 为中成药和保健品中抗抑郁药物 的检测及监控提供了科学依据和技术支持 。
Chinese Jour百度文库al of Chromatography
Vo l． 32 No ． 8 822 ～ 826
DOI: 10． 3724 / SP． J． 1123． 2014． 03032
研究论文
超高效液相色谱 － 串联质谱法同时测定 中成药和保健品中 9 种抗抑郁药物
， 市场上一些中成药及保健品
可以治疗或缓解这些症状。一些商贩在利益驱动下 患者 向其中非法添加抗抑郁药物成分以增强疗效 ， 长期使用会产生药物依赖， 使用不当会危害身体健 康， 甚至危及生命
［3 ］
。 因此建立中成药和保健品中
抗抑郁药物的检测方法， 对打击制假贩假行为、 保护 人民身体健康具有重要意义。 目前， 中成药和保健品中精神类药物的检测方 法有薄层色谱法 （ TLC ） MS / MS ） 质谱法 （ LC［4 ］
第8 期
勾新磊， 等： 超高效液相色谱串联质谱法同时测定中成药和保健品中 9 种抗抑郁药物
· 823·
抑郁症是一种常见的心理障碍， 临床表现为持 心情低落、 思维迟缓， 部分患者会伴有狂躁、 续悲观、 焦虑、 失眠等症状
［1 ， 2 ］
西酞普兰、 多塞平、 帕罗西汀、 氟伏沙明、 马普替 阿米替林、 氟西汀、 舍曲林、 氯米帕明 （ 纯度均 ≥ 林、 97% ， 中国药品生物制品检定所 ） ； 甲醇、 乙腈、 正己 烷为色谱纯（ 美国 Fisher 公司 ） ； 二氯甲烷、 丙酮为 Q 超 色谱纯 （ 安徽时联公司 ） ； 实验用水为经 Milli纯水器过滤的去离子水； 其他试剂均为分析纯。 样 品随机购自药店及超市。 1． 2 标准溶液配制 分别准确称取适量上述标准物质， 置于不同容 用 甲 醇 溶 解， 制 得 质 量 浓 度 均 为 1 000 量瓶 中， m g / L 的单标准储备液。 准确移取各单标准储备液 0. 1 m L， 置于 100 m L 容量瓶中， 用甲醇定容， 配制 成 1 m g / L 的混合对照品储备液。 所有标准溶液均 在 4 ℃ 下保存。 1． 3 样品处理 称取 1. 0 g 样品（ 片剂碾碎， 胶囊去壳研细） ， 置 于 50 m L 具塞离心管中， 加入 20 m L 甲醇， 超声提 取 20 m in ， 以 10 000 r / m in 的速率离心 10 m in ， 取 经 0. 22 μm 有 机 滤 膜 过 滤 后， 用 UPLC上清 液， MS / MS 检测。 1． 4 色谱和质谱条件 色谱柱： Waters ACQUITY UPLC BEH C 18 色谱 柱（ 100 m m × 2. 1 m m ，1. 7 μm ； 美 国 Waters 公 B 司） ； 流动相： A 为 0. 1% （ v / v ， 下同 ） 甲酸水溶液， 为乙腈； 流速： 0. 2 m L / m in ； 柱温： 35 ℃ ； 梯度洗脱 20% B ； 1. 0 ～ 7. 0 m in ， 20% B ～ 程序： 0 ～ 1. 0 m in ， 70% B ； 7. 0 ～ 8. 0 m in ，70% B ； 8. 0 ～ 8. 5 m in ， 70% B ～ 20% B ； 8. 5 ～ 10. 0 m in ， 20% B 。 离子源： 电喷雾离子源 （ ESI ） ； 扫描方式： 正离 子扫描； 检测方式： 多反应监测（ MＲM ） 模式； 毛细管 电压： 3. 0 kV； 萃 取 电 压： 5. 0 V； 离 子 源 温 度： 150 ℃ ； 脱溶剂气温度： 350 ℃ ； 脱溶剂气流速： 650 L / h ； 锥孔气流速： 20 L / h 。其他具体实验参数见表 1 。
2 1、 5 μg / L 3 个添加水平下 好， 线性相关系数（ Ｒ ） 均大于 0. 998 ； 目标物的检出限为 0. 006 8 ～ 0. 034 μg / L； 在 0. 5 、 的平均回收率为 77. 7% ～ 100. 8% ， 相对标准偏差为 0. 9% ～ 9. 1% 。本方法准确、 简便、 快速， 可用于中成药和保健
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1． 1
实验部分
仪器与试剂 Acquity 超高效液相色谱仪， Xevo TQ 串联质
Masslynx 4. 1 工 作 站 （ 美 国 Waters 公 司 ） ； 谱仪， KQ6000V 超声波清洗器（ 昆山超声仪器有限公司 ） ； CＲ22G Ⅲ离心机 （ 日本日立公司 ） ； MilliQ 超纯水 器（ 美国 Millipo re 公司） 。
品中抗抑郁药物的检测 。 关键词： 超高效液相色谱串联质谱； 抗抑郁药物； 中成药； 保健品 中图分类号： O658 文献标识码： A 8713 （ 2014 ） 08082205 文章编号： 1000-
Simultaneous determination of nine antidepressants in traditional Chinese medicines and health food by ultra performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry
* 通讯联系人． Tel： （ 010 ） 58717610 ， Em ail： gao x ia@ iccas． ac． cn． 基金项目： 北京市自然科学基金项目（ 2122018 ） ； 北京市科学技术研究院创新团队计划项目（ IG200801N / C2 ） ． 0321 收稿日期： 2014-
1 勾新磊 ， 高
峡
1， 2*
2 ， 胡光辉1 ， 刘伟丽1，
（ 1． 北京市理化分析测试中心，北京 100089 ； 2． 国家食品质量安全监督检验中心，北京 100094 ） MS / MS ） 分析方法。 摘要： 建立了同时测定中成药和保健品中 9 种抗抑郁药物的超高效液相色谱 串联质谱（ UPLC以甲醇为提取溶剂， 超声提取， 离心后取上清液， 使用 Waters ACQUITY UPLC BEH C 18 色谱柱（ 100 m m × 2. 1 m m ， 1. 7 μm ） 进行分离， 以乙腈和 0. 1% （ v / v ） 甲酸水为流动相对目标物进行梯度洗脱 。在电喷雾正离子模式下， 采用 9 种抗抑郁药物在 0. 04 ～ 20 μg / L 范围内线性关系良 多反应监测（ MＲM ） 模式进行定性和定量分析 。 结果表明，
、 液相色谱法 （ LC ）
［6 － 8 ］
［5 ］
、 气
MS ） 相色谱质谱联用法 （ GC［9 － 17 ］
、 液相色谱串联
等。 但 TLC 检测结果假
MS 虽然灵敏度高， 阳性率高； LC 灵敏度较低； GC但是部分药物需要进行繁琐费时的衍生化前处理 ； MS / MS 方法因具有灵敏度高、 而 LC检出限低的特 点， 可以进行多组分定性、 定量检测， 是目前报道较 多的方法。现有文献
Abstract： A sensitive m etho d w as develo ped fo r the sim ultaneo us determ inatio n o f nine antidepressants in traditio nal Chinese m edicines and health fo o d by ultra perfo rm ance liquid chro m ato graphytandem m ass spectro m etry （ UPLCMS / MS ） based o n the so nicatio nassisted ex tractio n． The separatio n w as perfo rm ed o n a Waters ACQUITY UPLC BEH C 18 co lum n （ 100 m m × 2. 1 m m ， 1. 7 μm ） by using 0. 1% （ v / v ） fo rm ic acid aqueo us so lutio n and aceto nitrile as the m o bile phases w ith gradient elutio n at a flo w rate o f 0. 2 m L / m in． The electro spray io nizatio n （ ESI） so urce in po sitive io n m o de w as used fo r the analysis o f the nine antidepressants in the m ultiple reactio n m o nito ring （ MＲM ） m o de． The standard curves fo r the nine antidepressants w ere o btained w ith go o d co rrelatio n co efficients （ Ｒ 2 ＞ 0. 998 ） in the co ncentratio n range o f 0. 04 － 20 μg / L． The lim its o f detectio n fo r the nine antidepressants w ere in the range o f 0. 006 8 － 0. 034 μg / L． The average reco veries at three spiked levels （ 0. 5 ，1 ，5 μg / L ） w ere 77. 7% － 100. 8% w ith the relative standard deviatio n o f 0. 9% － 9. 1%． The m etho d is accurate ，sim ple ， rapid and feasible fo r the sim ultaneo us determ inatio n o f the antidepressants in traditio nal Chinese m edicines and health fo o d． Key words： ultra perfo rm ance liquid chro m ato graphytandem m ass spectro m etry （ UPLCMS / MS ） ； antidepressants ； traditio nal Chinese m edicines ； health fo o d
2* 2 GOU Xinlei1 ，GAO Xia 1， ，HU Guanghui1 ，LIU Weili1，
（ 1． Beij in g Cen tr e for Phys ical an d Chem ical A n alys is ，Beij in g 100089 ，Chin a ； 2． Chin a Food Qu ality Safety Su per v is ion an d In s pection Cen ter ，Beij in g 100094 ，Chin a ）
Table 1 Analyte Citalo pram Do x epin Paro x etine Fluvo x am ine Mapro tiline Am itriptyline Fluo x etine Sertraline Clo m ipram ine * Quantitative io n．
［9 ， 10 ］
主要针对苯二氮类、 巴比
而对于中成药和 妥类等镇静安神类药物进行检测， 保健品中添加的能缓解烦躁、 焦虑等症状的抗抑郁 目前还未见报道。 本文建立了同时检 药物的检测， 测中成药和保健品中 9 种抗抑郁药物的超高效液相 MS / MS ） 分析方法。 该方法 串联质谱 （ UPLC色谱准确、 简便、 快速， 为中成药和保健品中抗抑郁药物 的检测及监控提供了科学依据和技术支持 。