MTT比色法改进的研究
mtt法实验条件的研究
mtt法实验条件的研究
MTT 法（噻唑蓝比色法）是一种常用的细胞活力检测方法，其原理是利用噻唑蓝（MTT）被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为水不溶性的蓝色甲瓒（formazan），而死细胞则不能还原 MTT。
通过检测甲瓒的生成量，可以间接反映细胞的活力。
以下是一些 MTT 法实验条件的研究方向：
1. 细胞类型和密度：不同类型的细胞对 MTT 法的响应可能不同，因此需要针对不同的细胞类型进行优化。
细胞密度也会影响 MTT 法的结果，通常需要根据实验目的选择适当的细胞密度。
2. MTT 的浓度和孵育时间：MTT 的浓度和孵育时间会影响甲瓒的生成量。
一般来说，MTT 的浓度在 0.5-1mg/mL 之间，孵育时间在 2-4 小时之间。
需要根据细胞类型和实验条件进行优化。
3. 溶剂和缓冲液：MTT 法常用的溶剂是 PBS（磷酸盐缓冲液），但不同的缓冲液可能会影响 MTT 的溶解性和细胞的活力。
因此，需要选择适当的溶剂和缓冲液。
4. 细胞培养条件：细胞的培养条件，如培养基的成分、温度、湿度和二氧化碳浓度等，也会影响 MTT 法的结果。
需要根据细胞类型和实验目的选择适当的培养条件。
5. 甲瓒的溶解和检测：甲瓒的溶解和检测方法也会影响 MTT 法的结果。
常用的甲瓒溶解液是 DMSO（二甲基亚砜），但不同的溶解液可能会影响甲瓒的溶解性和稳定性。
检测方法可以使用酶标仪或分光光度计等。
MTT 法实验条件的研究需要综合考虑细胞类型、MTT 浓度、孵育时间、溶剂和缓冲液、细胞培养条件以及甲瓒的溶解和检测等因素，以获得准确可靠的结果。
改良MTT法测定血清TNF活性
华西医大学报J W C UM S 1997;28(4)∶445～447・技术与方法・改良M TT法测定血清TNF活性3张 平 章崇杰 魏大鹏 赵宗蓉 刘 杰 蔡美英基础医学院免疫学教研室(成都610041) 内容摘要 为寻求一种简便可靠的测定血清肿瘤坏死因子(TN F)活性的方法,作者对经典的四甲基偶氮唑蓝(M T T)比色法进行了改良,采用改良的M T T法测定TN F活性,并与经典的M T T法比较。
结果显示:经改良后的M T T法较经典的M T T比色法稳定,在甲瓒溶解过程中无蛋白凝固沉淀形成,溶解后在3～12小时内不褪色;在靶细胞活性≥95%,细胞数>102 孔时,细胞数与细胞还原M T T产生的甲瓒溶解后的OD值呈线性相关(r=0.87,P<0101),标准品TN F每孔含量与OD值呈负相关(r= -0.79,P<0101)。
用此法检测20份正常人血清,其TN F活性均值为20195±312I U m l。
本法简便易行,稳定可靠,是一种很有价值的测定TN F活性的方法。
关键词 肿瘤坏死因子 四甲基偶氮唑蓝比色法 正常人血清 肿瘤坏死因子(tum o r necro sis facto r, TN F)是体内具有多种生物活性的细胞因子,它在肿瘤坏死,恶病质的发生及炎症过程中起着重要作用。
1983年M o s m ann等[1]首创了经典的四甲基偶氮唑蓝(M T T)比色法测定TN F 的活性。
近年又研究出新的试剂盒。
前者由于血清中的蛋白易形成絮状沉淀,使结果不稳定、重复性差,后者价格昂贵,成本高,不易普及。
为此,我们对经典的M T T法进行了改良,用中性的20%SD S250%DM F取代酸性的0104m o l L 酸化异丙醇测定血清TN F活性,获得满意结果,现报道如下。
1 材料和方法111 试剂和仪器四甲基偶氮唑蓝(M T T,Sigm a),用0101mo l L PBS配制成5ng m l,过滤除菌,4℃避光保存;R P M I 1640(GBCO);胎牛血清(FCS,GBCO);rhTN F (Sigm a),0101mo l L PBS配制成1000I U m l,过滤除菌,-20℃保存;放线菌素D(AM D,Sigm a), 0101mo l L PBS配制成40Λg m l,过滤除菌,-20℃保3四川省卫生厅基金资助项目存;十二烷基磺酸钠(SD S,Serva进口分装);二甲基甲酰胺(DM F,天津化学试剂三厂),双蒸水配制成20% SD S250%DM F的溶解液;异丙醇(重庆东方试剂厂),用盐酸配制成0104mo l L酸化异丙醇;96孔平底细胞培养板(NUN C);二氧化碳培养箱(SH ELLAB);酶联免疫检测仪(华东电子管厂);可调加样器(Gelson)。
MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项
MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项一、MTT原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-2)-3,5-diphenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，须被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
二、MTT溶液的配制方法通常，此法中的MTT浓度为5 mg/mL。
因此，可以称取MTT 0.5 g，溶于100 mL的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22 μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4oC避光保存两周内有效，或配制成5 mg/mL保存在-20oC长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC50的计算方法
小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC50的计算方法一、本文概述本文旨在探讨MTT法（四唑盐比色法）在细胞增殖抑制率测定中IC50（半数抑制浓度）的计算方法。
MTT法是一种广泛应用于生物学、医学等领域的细胞增殖与细胞毒性检测方法，其原理基于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
因此，通过测定甲瓒的生成量，可以间接反映活细胞数量。
而IC50作为评价药物对细胞增殖抑制效果的关键指标，其准确计算对于药物研发、药效评价以及临床用药等方面具有重要意义。
本文将首先介绍MTT法的基本原理和实验步骤，然后重点阐述IC50的计算方法，包括线性回归法、概率单位法等多种方法，并对各种方法的优缺点进行评述。
本文还将讨论影响IC50计算准确性的因素，如实验条件、细胞类型、药物浓度范围等，并提出相应的改进措施。
本文将总结MTT法测细胞增殖抑制率中IC50计算方法的实际应用和前景展望，以期为相关领域的研究提供有益的参考和借鉴。
二、MTT法测细胞增殖抑制率的实验步骤细胞准备：选择适合实验需求的细胞系，并进行传代培养至对数生长期。
确保细胞状态良好，无污染，并且有足够的数量用于实验。
药物准备：根据实验需求，选择待测试的药物，并按照预定的浓度范围进行稀释。
通常，药物浓度设置应覆盖多个数量级，以便更准确地测定IC50值。
细胞接种：将细胞以适当的密度接种到96孔板中。
确保每孔细胞数量一致，以便后续实验结果的准确性。
药物处理：向每个孔中加入不同浓度的药物，同时设置对照组（无药物处理）和空白组（无细胞，仅培养基）。
每个浓度通常设置多个复孔，以减少实验误差。
培养：将96孔板放入培养箱中，按照细胞生长所需的条件进行培养。
培养时间根据细胞类型和实验需求而定，通常为24-72小时。
MTT处理：在培养结束前4小时，向每孔中加入MTT溶液（通常为5mg/mL）。
MTT会被活细胞中的线粒体还原成紫色甲瓒晶体，从而反映细胞的存活情况。
MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法,其检测原理
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等，它的特点是灵敏度高、经济。
学术术语来源---Bio-gide胶原膜体外复合培养犬骨髓间充质干细胞的软骨分化文章亮点：1 实验先采用全骨髓血培养法培养犬骨髓间充质干细胞，继而采用贴壁筛选纯化，方法简便，所获细胞数量及纯度满意，并在体外成功诱导分化出软骨细胞。
2 实验所采用的细胞支架材料为瑞士Geistlich公司生产Bio-gide胶原膜，这是一种由Ⅰ型和Ⅲ型胶原组成复合材料，分为致密层和疏松层，种子细胞接种在胶原膜的较为粗糙的疏松层，而光滑的致密层在体内实验中朝向关节腔，有利于骨髓间充质干细胞的黏附、生长及向软骨细胞的分化，三维立体培养有助于诱导生成的软骨细胞维持表型。
3 实验显示Bio-gide胶原膜与骨髓间充质干细胞复合培养有良好的生物相容性，但能否体内构建组织工程软骨组织，促进软骨细胞的生长，缺损的软骨组织得到完整的修复，尚待进一步研究。
关键词：生物材料；组织工程软骨材料；膜生物材料；骨髓间充质干细胞；Bio-gide胶原膜；组织工程；股骨头坏死；软骨缺损；种子细胞；国家科学自然基金摘要背景：应用组织工程方法修复股骨头坏死后的软骨损伤应解决的2个关键因素是种子细胞和支架材料。
目的：探讨Bio-gide胶原膜体外与犬骨髓间充质干细胞复合成软骨的可行性。
方法：采用全骨髓血离心法结合贴壁筛选法体外分离培养比格犬骨髓间充质干细胞，观察细胞形态学变化，以细胞表面抗原进行鉴定。
MTT比色法评价医用一次性输血器的细胞毒性
MTT比色法评价医用一次性输血器的细胞毒性摘要】目的:为研究医用一次性输血器的细胞毒性。
方法:参照中华人民共和国关于输血器具生物学试验的标准，采用能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的比色分析方法-MTT比色法，检测医用一次性输血器对小鼠成纤维细胞L929细胞相对增殖率的影响，评价其细胞毒性。
结果:根据细胞毒性反应的评价标准，该次检测的医用一次性输血器呈现高的细胞相对增殖率，其细胞毒性为1级，即无细胞毒性。
结论一次性输血器采用MTT法检测表明，其无细胞毒性，具有良好的安全性。
【关键词】MTT；比色法；一次性输血器；细胞毒性Evaluation on the Cytotoxicity of Disposable blood transfusion device for Medical Useby MTT assayZHOU YixinPU Xiangke【Abstract】Objective To explore the cell toxicity of a kind of medical disposableblood transfusion apparatus. Methods MTT colorimetric analysis, a method which can quickly assess the cell proliferation rate and the cell toxicity, was used to detect the impact on the cell proliferation rate of L929(a mouse fibroblast cell line) caused by the medical disposable transfusion device. The experiment was carried out to evaluate the cell toxicity of the transfusion set according to the biological tests standard of the People's Republic of China(RPC). Results According to cell toxicity evaluation criteria, cells cocultured with the disposable transfusion apparatus still showed high relative growth rate and the cytotoxicity is grade 1 with the reference to the national stands. Conclusion There is no obvious toxicity to cells by using the disposable transfusion device and it will be safe to patients.【Key words】MTT; colorimetric analysis; disposable blood transfusion device;cells toxicity【中图分类号】R385【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)07-0023-02 医用一次性输血器是医疗行业中常用的一类医疗器械，使用量极大，由于一次性输血器直接应用于人体，其材料的安全性直接关系到患者的生命安全。
MTT实验
MTT实验MTT实验原理MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
实验步骤普通MTT法实验步骤：1、接种细胞用含10％胎牛血清的培养液将细胞配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200 μl。
2、培养细胞同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3、显色培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5 mg/ml用PBS配制，pH=7.4)10 μl.继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加100 μl DMSO，振荡10 min，使结晶物充分融解。
4、比色：选择490 nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
药物MTT法实验步骤（1）贴壁细胞：1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100 μl,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔；2、5% CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午）加药.一般5-7个梯度,每孔100 μl,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况3、5% CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
MTT比色法在细胞生物学实验教学中的实验安排与效果分析_薛雅蓉
安排
考虑 到 本 实验 的 重 要 性 计了
一
上 述 操作 中
，
，
与 常 规方 法 有 两 点 不 同
。
①加
ＭＴ Ｔ
我 们 经 过反 复 考 虑
“
，
设 前 的 细 胞 浓 度 不 确 定
”
② 学 生 调 节 细胞 浓 度 及 加 样 期
细 胞处 于 室 温 条 件
，
种可用 于
。
用 于 基 础 细 胞 生 物 学 实 验 教 学是 可 行 的
，
能够
同 雌 的 ＭＴ Ｔ
达
有 的 教学 效 果
。
４６
薛雅蓉 等
：
Ｍ ＴＴ 比 色法 在 细 胞 生 物学 实 验教 学 中 的 实验安 排与 效 果分析
（
Ａ
）
（
Ｂ） （ Ｃ）
Ｉ
ｎｔ ｅｒ ｃ ｅ
［
复制 的
、
掺 人 法 结果 平 行
，
２］
，
并
且无 同 位 素 污 染
操作 简 单
、
快速
因 而 得 到 广 泛 的 １
常 规 ＭＴＴ 比 色法应 用 在 实 验教学 中 的 不 足
Ｔ
收稿 日 期
基金 项 目
通讯 作 者
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期
－
０４
－
２０
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修回
日
期
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２０ １ ５
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０７
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Ｓ ｌｏ
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Ａ ｄｊ Ｒ
细胞毒性试验MTT比色法及改进方法
purple color
主要步骤
制备细胞悬液，接种、培养细胞 MTT染色：培养一段时间后，向细胞中加入 MTT溶液，继续在37℃孵育4 h。然后除去培 养液，加二甲基亚砜(DMSO)或盐酸-异丙醇溶 解细胞中的紫色结晶物。 比色：酶联免疫监测仪在490或570nm处测 定溶液的吸光值OD(optical density)。
开始 预实验
细胞接种浓 度
药物浓度
时间控制
污染产生蓝 黑色
离心操作
浓度梯度
5%CO2, 37℃
血清干扰
调零孔与对 照孔
灭菌操作
细胞代数 <30
优质培养板
药品刺激性 大小
悬液均匀度
枪头注细胞 速度
上清液含结 晶物
影响评价结 果
。。。。。。
。。。。。。
翻板
贴壁牢固程 度
MTT改进
XTT
MTS
CCK-8/ WST-8
96孔板
酶标仪
优点
▪灵敏度较传统计数法高 ▪经济
缺点
▪甲臜产物不溶于水，需溶解检测 ▪MTT反应需至少3小时，不适用急性反应
选择适当的细胞接种浓度、药物浓度 设调零孔和对照孔
注事 意项
MTT对菌敏感，应尽量无菌操作 避免血清干扰 现配现用，低温避光，以免分解
需要进一步查阅的操作细节 ---多看文献
优点
缺点
1、使用方便，省去了洗 涤细胞，不需要放射性同 位素和有机溶剂； 2、检测快速； 3、灵敏度高，甚至可以 测定较低细胞密度； 4、重复性优于MTT； 5、对细胞毒性小； 6、为1瓶溶液，毋需预制， 即开即用。
1、价格比较贵。 2、CCK-8试剂的颜色为 淡红色，与含酚红的培养 基颜色接近，不注意的话 容易产生漏加或多加。
噻唑蓝比色法检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌的研究
噻唑蓝比色法检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌的研究王忠朝;范丽苑;蒋俊强;蔡炜;丁一【摘要】目的探讨噻唑蓝(MTT)法用于口腔常见细菌(变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌)活菌计数的可行性及具体应用过程中的实验条件.方法本实验以菌落形成单位(CFU)法为标准对照.实验通过改变比色的波长、反应时间、试剂剂量、细菌菌龄等实验条件,获得MTT法测量常见口腔细菌的一系列参数,对变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌进行活菌计数,并与CFU法所测的细菌数量相比较.结果MTT法在测量变异链球菌时,最佳的检测波长为510 nm,最佳的测定细菌范围是1.5×105～1.0×107 CFU·mL-1.MTT法在测量血链球菌时,最佳的检测波长为545 nm,最佳的测定细菌范围是1.5×105～2.0×1 07CFU·mL-1.MTT法在测量伴放线菌嗜血菌时,最佳的检测波长为557 nm,最佳的测定细菌范围是1.0×106～5.0×107 CFU·mL-1.MTT法与菌落形成单位法的测量结果是一致的,并且对于不同菌龄的变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌均适用.结论 MTT法可以用于检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌等口腔常见细菌的活菌数量,并且具有快速、方便等优点.【期刊名称】《华西口腔医学杂志》【年(卷),期】2010(028)003【总页数】5页(P306-310)【关键词】噻唑蓝比色法;变异链球菌;血链球菌;伴放线菌嗜血菌;活菌计数【作者】王忠朝;范丽苑;蒋俊强;蔡炜;丁一【作者单位】泸州医学院附属口腔医院,口腔内科,四川,泸州,646000;泸州医学院附属口腔医院,修复科,四川,泸州,646000;泸州医学院附属口腔医院,口腔内科,四川,泸州,646000;泸州医学院附属口腔医院,口腔内科,四川,泸州,646000;四川大学华西口腔医院,牙周病科,四川,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】R780.2目前常用的活菌计数方法有菌落形成单位（colony formingunits，CFU）法、比浊法、显微计数法等[1]。
孢子活性的MTT比色法快速检测技术研究
图 4 反应时间对 OD 值的影响 Fig. 4 Effect of reaction time to the OD value
2.5 MTTf 的提取时间的确定 MTTf 在有机溶剂异丙醇中有很高的溶解度 如图 5 所示 用异丙醇提取 MTTf 10min
即可获得最大吸光度 此后 OD 值变化不明显 因此确立标准分析中的提取时间为 10 min 2.6 pH 值的影响
取 1.5 mL 离心管若干 每管中加入 300 µL 孢子悬浮液 再加入 MTT 水溶液 50 水 浴 2h 加入 1mol/L 的盐酸 500 µL 以终止反应 13200 r/min 离心 5min 使孢子沉淀 去上 清液 加入 1000 µL 的异丙醇 重悬浮并静置以提取 MTTf 提取完毕 13200 r/min 离心 5 min 取上清液 加入 96 孔板 150 µL/孔 在酶标仪于 560 nm 处读取 OD 值 1.6 CFU 计数方法
Rapid MTT colorimetric assay for the detection of Metarhizium anisopliae spore viability
ZHAO Yun1 WANG Zhong-Kang 2 PENG Guo-Xiong2, 3 XIA Yu-Xian3 *
(1Genetic Engineering Research Center, Chongqing University; 2Chongqing Engineering Technology Research Center of Fungal Pesticide; 3Key laboratory of Regulating and Controlling Technology for Functional Gene, Chongqing 400045) Abstract: Optimized conditions of MTT colorimetric assay for the Metarhizium anisopliae spores viability was established by evaluating influences of spore concentration, MTT final concentration, temperature, incubation time, extract time for MTTf and pH. Reliable and sensitive standard assay method was established and applied in spore viability measurement. This is a new quality analysis method for oil-miscible preparation of fungal bio-pesticide. Key words: Dehydrogenase activity, optical density, standard curve
MTT方法总结详解甄选范文
MTT方法总结详解MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。
formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm和570nm 处进行比色。
所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。
MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。
(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。
终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。
(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。
以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线。
四唑盐(MTT)比色法检测细胞活力
四唑盐(MTT)比色法检测细胞活力一、实验目的掌握MTT法检测细胞活力的方法。
二、实验原理四甲基偶氮唑盐(MTT)为淡黄色粉末，水溶性好，易通过细胞膜而进入细胞。
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶于水的紫色结晶物甲躜，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
一般情况下结晶物的生成量与活细胞数成正比。
酸性异丙醇、十二烷基硫酸钠(SDS)或二甲亚砜(DMSO)均能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，溶液颜色的深浅与所含的甲躜量成正比。
用酶标仪在5 7 0nm波长处测定其吸光度OD值(A570nm)，可间接反映活细胞数。
MTT法简单快速、准确，广泛用于新药筛选、细胞毒性试验及肿瘤放射敏感性等实验中。
它与前述细胞计数法等方法相关性良好，也可用MTT法测定细胞生长曲线。
三、实验器材仪器二氧化碳培养箱、酶标仪、9 6孔细胞培养板、可调微量移液器、微孔板振荡器等。
试剂MTT溶液：MTT溶于pH7.4的0。
0 1mol／L PBS液中，磁场搅拌3 0分钟，过滤除菌，配制成2m9／ml的MTT液，4℃冰箱贮存。
二甲亚砜(DMSO)分析纯。
细胞培养基。
材料对数生长期的KB细胞或其他贴壁培养传代细胞。
四、实验步骤接种细胞取对数生长期细胞，0.2 5％胰酶消化，加含血清培养基终止消化并吹打成单细胞悬液(悬浮细胞则不需消化)，台盼蓝染色计数(取5 0l细胞悬液，加等量的0.4％台盼蓝染液，正置或倒置显微镜下用血细胞计数板计数活细胞，不着色者为活细胞)后稀释,以6000--40000个细胞／孔接种于96孔培养板(应根据细胞体积及生长速度确定接种浓度，使实验结束时吸光度与活细胞数呈线性关系，吸光度在0．2,--1．5之间)，每孔接种体积为l00>1，另外设空白对照孔，只加完全培养基。
在37℃、含5％CO2、饱和湿度的培养箱内常规培养一段时间(根据实验目的决定培养时间长短。
如果是药物处理需要在培养24小时后换成含不同度实验药物的培养液和对照药或培养基对照，每孔l00μ1，每组设4个复孔，继续培养48h)。
NK细胞系细胞毒效应MTT比色法优化条件探讨
NK细胞系细胞毒效应MTT比色法优化条件探讨
李爱玲;孙汭;张建华;孙安源;田志刚
【期刊名称】《中国免疫学杂志》
【年(卷),期】2002(018)010
【摘要】@@ 自然杀伤细胞(NK)以其独特的抗病毒、抗肿瘤活性而成为机体的第一道防线.由于NK细胞数量少,且无特异性表面标志,难以获取高纯度的NK细胞,一度成为深入研究NK细胞的障碍.
【总页数】2页(P687-687,689)
【作者】李爱玲;孙汭;张建华;孙安源;田志刚
【作者单位】山东省医学科学院肿瘤生物治疗研究中心,山东,250062;山东省医学科学院肿瘤生物治疗研究中心,山东,250062;山东省医学科学院肿瘤生物治疗研究中心,山东,250062;山东省医学科学院肿瘤生物治疗研究中心,山东,250062;中国科学技术大学免疫学研究所,中国科学技术大学生命科学院,安徽,2230026
【正文语种】中文
【中图分类】R392
【相关文献】
1.MTT比色法在LAK和NK细胞毒活性检测中的应用 [J], 李秀森;柯志勇
2.MTT比色法测定细胞毒效应的应用进展 [J], 张建华;田志刚
3.酶反应比色法检测NK细胞介导的细胞毒作用问题的初步探讨 [J], 牛青霞;赵承彦;靖志安;曾一峰
4.MTT比色法评价掺锶羟磷灰石固溶体细胞毒性 [J], 傅远飞;陈德敏;张建中
5.MTT比色法检测MGC803^T细胞毒效应的研究 [J], 胡荫;尹维刚;许佐良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
利用MTT法测定抗癌药物顺铂对Hela细胞增殖的抑制效果.doc
利用MTT法测定抗癌药物顺铂对Hela细胞增殖的抑制效果摘要：目的：采用唾哇蓝(MTT)比色法来检测Hela细胞相对数和相对活力，利用已知浓度细胞培养后的吸光度生成细胞成长趋势曲线，从而推测抗癌药物顺铂对Hela细胞增殖的抑制效果。
方法：采用MTT法先测出一组Hela细胞浓度的吸光值的指数方程，同时培养加入不同浓度的顺铂的Hela细胞，最后根据指数方程来计算不同浓度的顺铂抑制后的Hela细胞数量。
结果：抗癌药物顺铂对Hela 细胞增殖有抑制效果，不同浓度的顺铂抑制的效果都不一样，几乎呈线性关系。
结论：采用MTT法检测有助于指导临床选择化疗药物剂量,提高化疗效果；顺铂对癌细胞的增殖有一定的抑制作用。
关键词：MTT比色法顺铂Hela细胞前言检测细胞存活与增殖，过去常用的方法有染料排斥法和掺入同位素的释放法。
前者易受主观因素影响，误差大；后者因放射线同位素污染环境，并需要价格昂贵的仪器设备，整个过程所需时间长，实际应用受到限制。
1983年Mos- manntl〕首创了MTT比色分析法，其基本原理是活细胞线粒体脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色甲瓒(Formazan)，从而可用比色法推测活细胞浓度〔1〕。
由于MTT法简单、灵敏、稳定;其检测结果与同位素掺入法有良好的一致性，同时又可避免同位素污染及特殊设备的需要，故可代替同位素掺入法，有效地应用于淋巴细胞转化[2j，IL一2[a]，抗肿瘤药物的筛选等研究中。
我们以检测抗癌药物顺铂对Hela细胞增殖活性的抑制效果为例，对MTT法的操作步骤及条件进行了探讨，还探讨一下不同浓度的顺铂对癌细胞抑制效果。
1材料与方法1.1细胞培养将吹打的单细胞悬液调整细胞浓度约为500000个/ML，再稀释细胞浓度直到每孔的细胞约为10000个、5000个、2500个、1250个L、625个等这五个梯度，将其接种到96孔板内，一般同一浓度的细胞接种4孔作为重复实验，同时分别做一组空白对照和一组未知细胞浓度；与此同时，制造一组药物处理组细胞，有调整细胞浓度为20000～30000/ML，每孔接入200ul，使每孔细胞数为5000个左右，最后同时放到培养箱内培养，24～36h后吸掉药物处理组的培养液加入不同浓度梯度的顺铂（1 ug/ml、5 ug/ml、10 ug/ml、15ug/ml）〔2〕各200ul，继续培养。
MTT比色法抗肿瘤药物筛选实验条件和数据优化探索_黄银久
OptimizationofExperimentalConditionsandDataProcessingofinvitro MTTColorimetricAssayforAnti-tumorDrugScreening
抗 肿瘤 药物筛 选实 验的 主要因 素 -细胞密 度 、实验 操作 环节 、OD值选取 、以 及数 据的优 化处 理进 行实验 探讨 。 结 果表明 , 当检测 化合物 6 h～ 72 h的抑制 活性时 , 种细胞 密度 2 000个 /孔 为宜 。 同时 , 采 用本文所提 的实验 条 件 和数据处 理办法 , 可以实现 实验结果 的准确可靠 , 3次测 试偏差不超 过 10 %。
Keywords:MTTcolorimetricassay;experimentalcondition;data;optimization
目前抗 肿 瘤 药 物体 外 筛 选的 方 法 很 多 , 主 要 有 MTT比色法 [ 1-5] 、3H-TdR掺入 法 [ 3, 6] 、酸 性 磷酸 酶 法
(1.蚌埠 医学院生 物科学系 , 安徽 蚌埠 233030;2.贵州 大学精细 化工研究开 发中心 , “绿色农 药与生物工 程 ” 教育部重 点实验室 , 贵州 贵阳 550025)
摘 要 :MTT比色法是 一种重要的 体外抗肿 瘤药物筛选 方法 。 以 PC-3细胞系 为研究对 象 , 对 影响 MTT比色法
40 2 激 光 生 物 学 报 第 18卷
不涉 及使用 放 射 性元 素 [ 1] , 且结 果 与 同 位素 掺 入 法 一 致等优点 , 在 很 多 实 验室 被 广 泛使 用 作 为 抗 肿 瘤 药 物体外筛 选的常 用方法 。 但是 MTT比色 法实验 环 节 要求严格 , 结 果 重复 性 差 。有 关 MTT比 色法 体 外 抗肿瘤药物筛选实验细节方面的优化处理未见报 道 。本文以 前列腺 癌细 胞 系 PC-3 为 研 究对 象 , 对 该 方 法实验条 件和实 验数据的 优化进 行了初步 探索 。
mtt比色法
mtt比色法mtt比色法是一种快速、精确，可以用来估计活性物质含量的实验方法，是国际上通用的测定实验技术之一。
mtt比色法通过测定细胞增殖或新陈代谢，以测定一种化合物对细胞的毒性、活性、药理作用。
其基本原理是，当细胞被外界刺激后，其内的酯酶将酶Mtt（3-甲基-2-甲基哌嗪脱氧核苷）水解为亚甲基橙色绝对酸（Mtt），经酒精溶剂抑制其光致变色，以亚甲基橙色溶液在490nm处吸收率表征当量活性物质含量。
mtt比色法可快速准确测定活性物质含量，本法解决了传统的低效、高消耗的问题，使少量试样分析更加准确。
传统的比色分析方法如光度测定、荧光测定，都有其固有的缺陷，不但操作复杂，耗时，而且测量精度也不够，而mtt比色法不仅操作简便，而且准确度高，是一种非常有效的实验方法。
mtt比色法可以用来估计活性物质含量，可以从细胞外添加特定的激活物质（如抗生素、抗癌药物），测量细胞抵抗抗生素或抗肿瘤药物或其他药物的能力，从而确定细胞的药敏性。
mtt比色法也可以应用在定量计算基因表达量上，可以根据细胞增殖和新陈代谢的变化，来估计特定激活物质的影响。
mtt比色法的操作也很简单，在实验室中，需要准备mtt溶液，将细胞悬浮液加入到一种富含活性物质的培养基中，处于室温恒温器中，按照完成培养所需的时间，加入mtt溶液，放在离心机中，将血清沉淀，最后在490nm波长处用紫外可见分光光度计测定吸收值。
mtt比色法以快速、精确而闻名，它能够测定细胞激活物质的含量，从而可以估计一种化合物对细胞的毒性、活性和药理作用，它的简便性使得它得到了广泛的应用，在许多科学研究领域，mtt比色法得到了广泛的应用，比如动物毒理学、药物及抗肿瘤药物研究、临床诊断中需要及细胞生物学研究等。
总而言之，mtt比色法是一种快速、准确、可以用来估计活性物质含量的实验方法，由于它的操作简单、准确度高，得到了广泛的应用，是实验技术的一种重要分支，为科学研究做出了重要的贡献。
MTT比色法测定药物对晶体上皮细胞增殖的影响
MTT比色法测定药物对晶体上皮细胞增殖的影响
张敏
【期刊名称】《中华实验眼科杂志》
【年(卷),期】1997(000)004
【摘要】目的筛选防治后囊混浊的药物。
方法进行人胚胎晶体上皮细胞（ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ，ＬＥＣ）的培养并用ＭＴＴ比色法检测了肝素，氟脲嘧啶，双氯灭痛，顺铂以人胚胎晶体上皮细胞增殖的影响。
结果肝素１００～２５００Ｕ／ｍｌ，氟脲嘧啶０．１～１００μｇ／ｍｌ，顺铂１０～５００μｇ／ｍｌ作用２４ｈ和７２ｈ对胚胎晶体上皮细胞增殖有明显抑制作用（Ｐ〈０．０５），作用７２ｈ抑制率高于２４ｈ（Ｐ〈０．０５）。
【总页数】1页(P233)
【作者】张敏
【作者单位】河南医科大学附属第一医院眼科;河南医科大学附属第一医院眼科【正文语种】中文
【中图分类】R776.1
【相关文献】
1.MTT法测定化疗药物及郑氏植物蛋白对肿瘤原代细胞体外增殖的影响 [J], 任金荣;艾军;张雪莉;何兰欣;郑振海
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3.MTT比色法测定7株抗hIL-5mAb对TF-1细胞的增殖抑制活性 [J], 史皆然;方佳;孙滨;卢芳;陈常庆
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