结核病实验室诊断201609讲解
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病实验室诊断201609
结核分枝杆菌体外药敏试验
1
挑取菌落 磨菌、稀释
2
接种菌液
3
孵育7-10天
4
显色， 读取结果
结核分枝杆菌液体微量药敏
结核分枝杆菌体外药敏试验
结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验
收集我院2015年8月至11月的临床分离菌株511例， 使用液体微量显色法进行了利福平、异烟肼、链霉素、 乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺对氨基水 杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、 卡那霉素、氯苯吩嗪等十四种抗结核药物的体外药敏试 验 。其中MDR-TB菌株75例（14.7%）。
原理：将病原体DNA扩增、核酸杂交和核酸试纸条检测三种 技术有机地融为一体，在恒温扩增反应中加入两对TB特异 性引物、一对特异性探针，同时 一次性完成TB DNA的扩增及杂交 过程，然后用一次性核酸检测装 置进行定性诊断。 检测目标片段:目标为结核分枝杆菌 特异性IS6110片段。
结核病分子生物学诊断
体外r-干扰素释放试验
γ 干扰素
检测阴性
γ干扰素 检测阳性
TB抗原多肽
T细胞
活化T细胞
γ 干扰素
体外r-干扰素释放试验
特异性
只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆 菌和卡介苗（BCG）无交叉反应 美国FDA数据：特异性97.1%(297/306) 国内临床数据：特异性94.1%(478/508)
二、结核分枝杆菌RNA检测(TB-RNA)
RNA作为临床分子诊断靶标的优点： RNA 拷贝数≥ DNA拷贝数 更具临床意义: 生命力旺盛的病原体RNA转录活跃 RNA远不如DNA稳定，病原体死亡，RNA很快降解 1.交叉污染少 2.较好的愈后指标
结核病的实验室诊断技术及应用
一 个 斑 点 一 个 结 核 效 应 淋 巴 细 胞
=
阳性对照 （PHA）
阴性结果
阳性结果
T-SPOT结果的解读-阳性结果
• 活动性结核病 — 典型结核中毒症状 — 影像学支持 • 潜伏性结核感染 — 无结核中毒症状 — 无其它结核患病证据
— 排除其他诊断
• 陈旧性结核 • MTB感染状态 — 典型结核中毒症状 — 未发现结核患病证据 — 无结核中毒症状 — 既往TB史或明确TB证据 • NTM（四种）感染
产品
•列入欧美25个国家结核诊疗指南
2011年英国NICE指南、2010年美国最新结核诊疗指南、
2010年加拿大结核指南
•美国CDC推荐—卡介苗（BCG）接种人群结核感染检测首选
• 国内风湿科和消化科已列入专家共识
14
快速—T-SPOT的实验步骤
用BD CPT 管或Ficoll提取液收集外周 血单个核细胞
结核特异抗原（ESAT-6/CFP 10）刺激 结核特异的效应T淋巴细胞使其分泌γ干扰素
效应T淋巴细胞分泌的γ-干扰素 与膜板预包被的抗γ-干扰素抗体 结合并固定在细胞周围
过夜孵育，洗板，加入酶标二抗
加入显色液，观察结果
1个斑点=1个效应T细胞
15
实验效果图
空白对照
抗原A ESAT-6 抗原B CFP10
γ -干扰素释放实验（IGRAs)
Interferon-Gamma Release Assays
10
结核杆菌特异抗原：ESAT-6与CFP10
ESAT-6 :
CFP10 :
早期抗原靶6（Early Secreted Antigenic Rarget 6）
培养滤液蛋白10（Culture Filtrate Protein 10）
结核病的实验室诊断方法及评价
耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性，1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行，2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
结核病的实验室诊断方法
结核病的实验室诊断方法结核病实验室检查主要有；涂片染色显微镜检查、分枝杆菌分离培养、分枝杆菌药物敏感性试验、分枝杆菌菌种鉴定、分枝杆菌基因分型、分枝杆菌血清学及核酸扩增检测等。
细菌学检查细菌学检验结果的准确性首先取决于标本的质量。
正确地采集、转送标本，是直接影响检验结果的重要因素和取得准确结果的前提。
各种标本(痰液、血液、伤口分泌物和各种感染等)采集时应充分考虑到选择恰当合理的时问，考虑到可能存在的病原菌的性质，按要求采集标本，这样可使标本包含细菌，并为后续检验步骤打下良好的基础。
合格的痰标本在低倍镜视野里上皮细胞应10个，白细胞数应25个。
涂片染色显微镜检查根据我国结核病防治规划的要求，对咳嗽、咳痰13周或有咯血或血痰的肺结核可疑症状者，应留取3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰)进行痰涂片抗酸染色检查。
即时痰为病人就诊时咳出的痰液：清晨痰为清晨深咳出的痰液；夜间痰为就诊前1天晚睡前咳出的痰液。
留取的痰液标本常规涂片后，进行要尔－尼尔逊氏染色法(ziehl-Neelsen)染色。
分枝杆菌分离培养结核分枝杆菌是兼性需氧菌，最适生长温度为37℃，最适pH为6.5～7.2。
分枝杆菌分离培养检查法，是结核病确诊最可靠的方法。
是获得纯培养物进行菌种鉴定、药物敏感性试验以及其他生物学研究的基础。
当前，我国普遍采用改良L-J(改良罗氏)培养基来分离培养结核分枝杆菌。
通常情况下，当每1ml标本中微生物含量达10<sup>2～3</sup> CFU(菌落形成单位)时，即可培养阳性。
分枝杆菌快速培养检查是使用分枝杆菌快速培养仪(MIGT、BacT/A1err、ESP)，通过测定细菌生长代谢检测分枝杆菌生长情况的方法。
在进行分枝杆菌快速培养检查时，标本接种前的祛污染处理，必须严格按照系统说明书中给定的方法进行。
孵育检测过程中系统报告阳性时，相应标本的培养液必须首先进行抗酸染色镜检，发现抗酸菌后方可发出阳性报告。
结核病实验室检查
肺穿刺活检
通过穿刺获取肺部病变组织，进行病理学检查，是确诊结核病的可靠方法。
淋巴结活检
对肿大淋巴结进行穿刺或切除，进行病理学检查，有助于结核病的诊断。
其他检查方法
结核菌素试验
通过皮内注射结核菌素，观察皮肤反 应，用于判断是否感染结核分枝杆菌 。
分子生物学检测
利用聚合酶链式反应（PCR）等技术 检测结核分枝杆菌的核酸，具有较高 的灵敏度和特异性。
结核病实验室检查
汇报人：文小库
2024-01-07
CONTENTS
• 结核病概述 • 结核病实验室检查的重要性 • 结核病实验室检查方法 • 结核病实验室检查结果解读 • 结核病实验室检查的局限性
01
结核病概述
结核病的定义
01
结核病是一种由结核分枝杆菌感 染引起的慢性传染病，主要侵犯 肺部，但其他器官也可受累。
结核病实验室检查通常需要使用昂贵的试 剂和设备，导致检查费用较高，不利于在 资源有限地区推广。
结果解读的局限性
解读难度大
结核病实验室检查结果较为复杂 ，需要专业医生进行解读，对于 基层医疗机构和广大患者来说存
在一定难度。
主观性强
结核病实验室检查结果的解读需 要医生根据患者的临床表现和其 他检查结果进行综合判断，不同 医生之间的主观判断可能存在差
异。
动态监测困难
结核病实验室检查结果的动态监 测对于病情评估和治疗效果判断 具有重要意义，但实际操作中存
在一定困难。
结核病抗药性问题
抗药性普遍存在
结核病菌对抗结核药物产生抗药 性的现象较为普遍，导致治疗时 间延长、疗效下降和复发率增加
。
抗药性监测困难
抗药性监测需要专业的实验室技术 和设备，且监测周期较长，不利于 及时发现和处理抗药性问题。
结核病的实验室诊断分析
率较高，此技术已趋向淘汰
瓶外检测技术
瓶内检测技术 易导致污染及生物安全问题
15－21天
不详
无药敏试剂提供
只有3种一线药物
BACTEC ? MGIT? 960/320
指示器系统
阴性培养2 O2
CO2 O2 CO2
O2 O2
FFFOOF22OFF2FOO22FFFOO22
? 1882年由德国医生Koch发现。 ? 结核分枝杆菌属于厚壁门、裂殖菌
纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝 杆菌属。 ? 分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、 非洲型和田鼠型，而人型结核分枝 杆菌是人类主要的致病菌。
2018/6/17
GDTB
8
结核分枝杆菌 (M.tuberculosis)
生物学主要特点： 1. 细胞壁中含有大量 脂质 2.引起的疾病都呈慢性， 并伴肉芽肿 3.抗酸染色阳性
生长特点：
生长缓慢，繁殖一代在人工培养基内 约需要15～20小时，在静脉感染未经 免疫小鼠肺中约需要15小时，在巨噬 细胞内约需要15～20小时，在家兔角 膜中约需要20～22小时。
实验室检查方法的历史
1880s
1900s 1920s
1930s 1940s 1950s
Tubercle bacilli 的发现 Ziehl-Neelsen 染色方法 Mantoux test (TST with tuberculin) Petragnani medium Purified Protein Derivative （PPD ） Lewenstein-Jensen 培养基 Dubos agar, Ogawa 培养基 Middlebrook 7H9
结核病的实验室诊断
主要内容
1 结核病的流行情况 32 结核病的病原学 3 结核病的实验室诊断 34 结核病的分子药敏
结核病诊断TSPOT实验讲课文档
肺结核治疗评估的主要依据之一
18 第18页，共41页。
结核分枝杆菌-实验室检查
缺点：不能区别是否为非结核分枝杆菌 不能区别死活菌。 结核杆菌暴露于异烟肼时，某些条件会失去抗酸性，出现假阴性。
检测灵敏度较低（104-105 个细菌/毫升）。
19 第19页，共41页。
结核杆菌培养
细菌学检查 痰培养、其他标本培养
▪需时长，根据接种量的大小，一般2-8周才能得到肉眼可见菌落。
▪结果受标本保存运送时间、培养基成分和质量、前处理方法等影响， 操作较直接涂片法复杂，需经严格培训 。
▪需培养基凝固灭菌器、离心机、涡旋振荡器、恒温培养箱等设备。
▪成本是直接涂片法的7-8倍。
23 第23页，共41页。
细胞免疫学检查
• 结核菌素皮肤试验（PPD试验） • γ干扰素释放试验（T-SPOT试验）
结核杆菌培养 结核菌培养临床价值—确诊结核
1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+
1份痰标本结核分枝杆菌培养
痰涂片阴性，肺部影像学检查符合活动性肺结核影像学表现+1份痰 标本结核分枝杆菌培养阳性
用于耐多药结核疗效判定
第22页，共2241页。
抗酸杆菌培养优缺点
▪敏感性较直接涂片法高，理论上10-100条菌/毫升可检出阳性； ▪特异性较直接涂片法高，可以从菌落生长速度、色素产生初步判断非 结核分枝杆菌； ▪分离出具有活力的纯培养物，为进一步药敏试验提供基础。
Kang et al Chest. 2007 Sep;132(3):959-65*
91.3% (21/23) 95.9% (70/73) 92.2% (59/64)
Janssens et al ERJ 2007 30(4):722-8
结核病试验室诊断课件
分枝杆菌呈分支状生长， 营养要求比普通细菌高，是一种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。 经石炭酸复红染液着色后，不被盐酸酒精脱色，故称此类细菌为抗酸菌。
分枝杆菌分类
结核分枝杆菌结构
结核分枝杆菌组成： 细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质
细 胞 壁
厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚。 含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。 功能： 保护细菌的固有形态 抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏和 杀伤 如果细胞壁有缺陷，细菌只能在高渗环境下生存，则称此类细菌为L型细菌。
结核病的诊断 诊断发展阶段：经验性、X线影像，細菌学诊断、免疫学（细胞、体液）诊断、分子生物学诊断。 控制结核病的流行，诊断是所有措施中最为关键的一步。
实验室检查
结核病实验室检查包括细菌学检查以及近年来在分子生物学和免疫学等领域建立的检测新技术。 细菌学检查是结核病确诊和治疗的主要依据。 检测新技术为可疑结核病患者的早期诊断与合理治疗带来新的希望。
营养与发育
结核菌是需氧菌，但在含有比较低氧的环境下也能生存，比如骨结核，淋巴结核。 在少量二氧化碳的环境中生长的也很好。 结核菌生长的适宜温度和人体相近为370C 结核菌生长所必需的元素有氧、碳、氮、氢、磷、钾、镁等。
结核分枝杆菌形态
结核菌是兼性需氧菌，无鞭毛、荚膜，无运动能力； 形状：0.3 - 0.6×1 - 4微米的细长杆状，直或稍弯，镜下常堆积成团、成束、排列杂乱无章，也有呈串珠样、链状、索状者。 革兰氏染色阳性，萋-尼氏染色镜下的抗酸杆菌为淡兰色背景下的红色或粉红色细长杆菌。荧光染色镜下的抗酸杆菌在暗色背景下呈黄绿色或橙色荧光。
脂 类（2）
磷脂：刺激机体单核细胞增生，增强菌体成分诱导机体致敏作用。 索状因子：与Mtb毒力密切相关。 硫脂 蜡质：占脂质总量48％，分A、B、C、D。 结核菌酸：促进机体形成结核结节。 分支菌酸：为结核菌菌体的重要成分，与结核菌的抗酸性有关。
实验室检查-第二章 结核病实验室检查 PPT课件
疑似肺结核病人、结核病可疑症状者； 进行疗效考核的病人
痰直接涂片检查法：
涂片、染色、镜检与方法
新版 增加痰标本留痰场所的描述 增加镜检结果报告最低视野数量的要求
8
内容
实验室检查要求-培养和药敏
旧版
无
新版
增加培养和药敏的对象
培养对象
用于确定诊断
第二章 结核病实验室检查
实验室部分总体介绍
标 题
包含
单一------全面
内
范围
容
检查 方法
2
标题
旧指南
“痰涂片检查与质量 控制”
新指南
“结核病实验室检查”
3
包含范围
旧指南 涂片相关内容：
新指南
生物安全 实验室检查要求：
涂片 培养 药敏
4
旧指南
涂片
检查方法
新指南
涂片 培养 药敏试验
5
内容
实验室生物安全
旧版 无
新版 生物安全级别要求：
法律法规：
《病原微生物实验室生物安全管理条例》 《实验室生物安全通用要求》 《人间传染的病原微生物名录》 《医疗机构临床实验室管理办法》
结核菌操作的生物安全级别要求：
大量活菌操做：生物安全三级（BSL-3） 样本检测：生物安全二级（BSL-2）
12
内容
实验室登记报告
旧指南
本章节无明确表述
新指南
登记报告： 涂片 培养 药敏
13
内容——新指南
年
痰涂片检查登记本
第页
实验 序号
日期 姓名 性别 年龄
精选结核病的实验室诊断资料81页PPT
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
精选结核病的实验室诊断资料
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法， 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样 一种的 网，触 犯法律 的人， 小的可 以穿网 而过， 大的可 以破网 而出， 只有中 等的才 会坠入 网中。 ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏，庇 护着我 们大家 ；它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍
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检验科任易
1. 结核病背景资料 2. 结核病常规检验 3. 结核病实验室诊断 4.体外r-干扰素释放试验 5.小 结
背景—结核病流行现状
全球有三分之一人口（20亿） 感染了结核杆菌
我国现患肺结核病人达500万， 占全球病人总数的1/4
背景—结核病感染、传播、发病过程
播散
空洞的结核病人以及健康人显著升高。但是CRP正常不能 排除结核病。
——Infection.17(1):13-4,1989 Jan-Feb
• 辅助治疗检测：肝功能、肾功能、血脂、血糖。。。。 • NSE 、AFU等指标用于鉴别诊断。 • CA 125标志的使用，可以作为结核病疗效判断指标。结核病与肺部
• 在微生物分类中，结核分枝杆菌属于 放线菌门、放线菌纲、放线菌目、分 枝杆菌科、分枝杆菌属
• 分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、 非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆 菌是人类主要的致病菌
背景—结核分枝杆菌基础
• （1）结核杆菌可经多途径感染，由呼吸道、消化道和破损皮肤侵入 机体，最常见为经呼吸道感染引起肺结核。
1.结核抗体 2.结核蛋白 芯片
3.体外r-干 扰素试验
4.结核杆菌 分泌抗原
1.实时荧光 定量PCR
2.DNA
3.RNA 4.耐药基因 突变 5.菌型鉴定 6.测序
1.HPLC 2.质谱技术 3.流式技术
结核分枝杆菌形态学检测
涂片
染色
镜检
1.直接抹片法 2.离心制片法
1.抗酸染色 2.荧光染色
1.普通显微镜 2.荧光显微镜 3.自动阅片技术
结核杆菌离心制片技术
2015年7月至2015年11月，对本院257例痰液和纤维支气管镜灌洗液进行 直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：
直 接
离心制片法
涂
合计
片
阳性
阴性
法
阳 性
41
0
41 (15.9%)
阴 性
17
199
216 (84.1%)
合
58
199
计 （22.6%） (77.4%)
257
的肺结核患者血清PCT水平并不会明显增高，故可用于PTB和CAP的鉴别诊
断，但当PCT水平大于正常值时，其预后价值较差。可作为肺结核和肺结核
伴感染诊断的辅助指标。
——[Eur Respir J 2011; 37(2):371]
结核病实验室诊断技术简介
细菌学
免疫学
分子生物学
其他
1.涂片 2.培养 3.药敏 4.菌型鉴定
JID 2012:205 (Suppl 2), S147.
背景—结核分枝杆菌基础
• 结核分枝杆菌（M. tuberculosis） 简称为结核杆菌（tubercle bacilli）。早在1882年，德国细菌 学家柯赫（Robert Koch）就已证明 结核分枝杆菌是结核病的病原菌。 本菌可侵犯全身各组织器官，但以 肺部感染最多见。
诊断
Disseminates Diagnosis
康复
发作
治疗 Recovery
Onset Treatment
细菌在人 体复制
潜伏感染 染
肺病或其他疾病
≥ 2 个月（months）
时间表Time
痊愈
复发
背景—当前结核病的研究
新型抗结核药物(50%) 新型快速诊断技术(40%) 新型结核疫苗(10%)
• （2）结核杆菌无内毒素和外毒素，也不产生侵袭性酶，其致病性主 要与其细胞壁内含大量脂质有关。主要包括：
• ①磷脂：可刺激单核细胞增生，与结核结节和干酪样坏死形成有关 • ②分枝菌酸：与抗酸染色性有关 • ③索状因子：可破坏细胞线粒体膜，与慢性肉芽肿形成有关 • ④硫酸脑苷酯：抑制吞噬溶酶体形成，具有抗吞噬作用 • ⑤ 蜡质D，可刺激机体的迟发型超敏反应。 • （3）结核杆菌主要引起细胞免疫反应，属于传染性免疫
药物 RFP INH SM EMB CPM OFX ETH PAS LVF MOF RFB AMI KAN CLO
耐药 例数
80 146 94
58 50 61 41 49 53
62
60 11 13 87
耐药率 %
15.7
28.6
18.4
11.4
9.8
11.9
8.0
9.6
结核病患者的常规检验
• 三大常规（血常规、尿常规、大便常规）
• 血沉
• 血流变检测
• 肺结核患者血液粘滞性、凝固性、聚集性 均增高，血流缓慢，易于促成肺内微血栓 形成
常规检测，无特异性。
——《微循环学杂志》
结核病患者的常规检验
• 腺苷脱氨酶（ADA）:其血清/浆膜腔积液比值更有意义。 • C反应蛋白 （CRP）: X线提示有空洞的结核病人比没有
结核分枝杆菌体外药敏试验
1
挑取菌落 磨菌、稀释
2
接种菌液
3
孵育7-10天
4
显色， 读取结果
结核分枝杆菌液体微量药敏
结核分枝杆菌体外药敏试验
结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验
收集我院2015年8月至11月的临床分离菌株511例， 使用液体微量显色法进行了利福平、异烟肼、链霉素、 乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺对氨基水 杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、 卡那霉素、氯苯吩嗪等十四种抗结核药物的体外药敏试 验 。其中MDR-TB菌株75例（14.7%）。
结论：离心制片法的确能提高结核杆菌涂片检测的阳性率。
结核杆菌自动阅片技术
• 2016年2月至2016年3月，本院对308例涂片进行人工阅片 和计算机自动阅片比对试验；结果符合的为286例，总符 合率为92.58%。
结核分枝杆菌体外药敏试验
固体 培养法
结核杆菌体外 药敏试验
MIC 测定法
液体 仪器法
液体 微量法
结核分枝杆菌体外药敏试验
Drug free Isoniazid Ethambutol
Inoculum media 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml
10-3
++++
++
3
10-5
26
9
0
% resistant
34.6
0.1Biblioteka Interpretation
Resistant Susceptible
肿瘤患者均升高。
——《中国实用内科杂志》2003年 第2期
结核病患者的常规检验
• 超敏C反应蛋白：肺结核是结核分枝杆菌感染导致机体细胞免疫功能下降的
慢性呼吸道传染病，患者血清中HS—CRP、免疫球蛋白、补体可发生改变。
• 降钙素原（PCT）
——《中国实验诊断学》 2009年01期
• 肺结核患者血清PCT水平明显低于社区获得性肺炎（CAP）患者，HIV阴性