四跨膜蛋白CD151在肝内胆管细胞癌中表达及与临床病理特征的关系
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摘要 目的: 探讨四跨膜蛋白 CD151 在肝内胆管细胞癌中的表达及与临床病 理特征的 关系。方法: 应用 R T- PCR 与 W ester n blot 检 测 36 例肝内胆管细胞癌标本中四跨膜蛋白 CD151 的表达, 免疫组织化学检测 100 例胆管癌组织 中四跨膜 蛋白 CD151 的表达, 分析其与病理特征的关系。结果: 18 例早期复发肝内胆管细胞癌 组织中 CD151 mRN A 的表 达明显高于 未复发组( P < 0. 05) ; 免疫组织化 学检测显示 CD151 蛋白阳性表达率 为 61% ( 61 / 100) , 其表达程度与肿瘤大小、组织分 化程度、T N M 分 期及淋巴结转移有关; 肿瘤越大、分化程度越差、T NM 分期高 及有淋 巴结转 移者 CD151 表 达越高 ( P < 0. 05) 。结论: 肝内胆 管细胞癌 CD151 表达与其恶 性表型相关, 可能参与其侵袭和转移。 关键词 四跨膜蛋白; CD151; 肝内胆管细胞癌; 临床病理特征 中图分类号 R735. 8 文献标识码 A
图 1 A RT-PCR 检测早期复发与未复发肝内胆管细胞癌组织 中 CD151 mRNA 表达; B Western blot 检测早 期复发 与未复 发组织 中 CD151 蛋白表达
2. 2 免疫组织化学检测各组织中 CD151 蛋白表达 CD151 蛋白阳性染色主要定位于癌细胞胞膜, 呈
中国临床医学 2009 年 12 月 第 16 卷 第 6 期 Chinese Journal of Clinical M edicine, 2009. V ol. 16, No. 6
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# 论著 #
四跨膜蛋白 CD151 在肝内胆管细胞癌中表达 及与临床病理特征的关系
曾海英1 樊 嘉2, 3 周 俭2, 3 柯爱武2, 3 施国明2 谭云山1 丁振斌2 吴 彬2 阮 尽2 ( 1. 复旦大学附属中山医院病理科, 上海 200032; 2. 复旦大学附属中山医院肝癌研究所, 上海 200032; 3. 复旦大学附属生物医学研究院, 上海 200032)
基金项目:/ 十一五0 国家科技支撑计划( 2006BAI02A04) 通讯作者 樊 嘉, E- mail: jiafan99@ yahoo . com
肿瘤侵袭转移相关的四跨膜蛋白, 是四跨膜蛋白网 络中最为关键的分子之一[ 2] 。迄今已在结肠癌[ 3] 、 前列腺癌[ 4] 、肝癌[ 5] 等多种肿瘤中发现其过表达与 肿瘤转移与复发密切相关, 但目前其在肝内胆管细 胞癌中的 表达 情况 无相关 报道。本 研究 检测 CD151 在肝内胆管细胞癌患者癌组织中表达, 分析 其表达程度与肝 内胆管细胞癌临床病理 之间的关
系, 对 CD151 在肝内胆管细胞癌的侵袭与转移中作
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Chinese Journal of Clinical Medicine, 2009. Vol. 16, N o. 6
中 国临床医学 2009 年 12 月 第 16 卷 第 6 期
用作初步探讨。 1 资料与方法 1. 1 一般资料 100 例标本取自复旦大学附属中 山医院肝肿瘤外科 2003 ) 2006 年间行根治性切除、 具有完整随访资料的肝内胆管细胞癌患者, 且经术 后经病理 学 证 实诊 断。肝 内 胆 管细 胞 癌 组 织 按 UICC 标准分级及 T NM 分期, 其中男性 54 例, 女 性患者 46 例。所有患者术前均未接受放、化疗, 标 本均在手术切除后 15 min 内采集。 1. 2 试剂 RIP A 试剂, Bradf ord 蛋白浓度测定试 剂盒( 购于碧云天公司) ; T rizo l 试剂( 购自 Invit rog en 公司) ; 逆转录、聚合酶链反应试剂盒( 购于 M BI 公司) ; CD151 及 GAP DH 引物( 由上海申能博彩生 物有限公司合成) ; 鼠抗人 GAP DH 单克隆抗体, 鼠 抗人 CD151 单克隆抗体 ( 购自美国 Abcam 公司) ; H RP- 羊抗鼠二抗, 免疫组织化学 SP 试剂盒及 DAB 试剂盒( 购自上海长岛生物技术公司) 。 1. 3 RT- PCR 检测 CD151 基因表 达 18 例早 期 复发( < 2 年) 和 18 例无复发的肿瘤组织 RNA 提取 参照 T rizo l 试剂盒说明书进行操作; CD151 引物由 Primer 5. 0 引物设计软件进行设计, 选择最佳引物。 CD151 引 物 序 列 为 5- T CCT GCT CCT CATCAT CT T T CT G- 3 ( 上 游 引 物 ) , 5- CCGT GTT CAGCT GCT GGT AGT- 3 ( 下 游 引 物 ) ; 选 取 GAP DH 基 因 作 为 内 参 照 基 因, 引 物 序 列 为 5CCACT AGGCGCT CACT GT T CT- 3( 上游引物) , 5GCGAACT CACCCGT T GACT- 3 ( 下游引物) 。逆 转录参照反应试剂盒说明书; PCR 反应 条件: 94 e 变性 5 m in 后, 开 始 PCR 热循环: 95 e 变性 45 s, 58 e 退火 1 min, 72 e 延伸 1 m in, 共 30 个循环, 最 后 72 e 延伸 10 min。PCR 产物在 2% 琼脂糖凝胶 电泳后, 以图像分析仪进行积分吸光度分析并摄像。 1. 4 West er n blo t 检测 CD151 蛋白表达 收集 18 例早期复发( < 2 年) 和 18 例无复发的肿瘤组织蛋 白后用 Bradf ord 法测定上清液中总蛋白 的浓度,70 e 冻存备用。West ern 杂交依照试剂盒说明的方 法进 行, 15% SDS- PAGE 一 抗 稀 释 度 1 B 200, H RP- 羊抗鼠二抗稀释度 1 B5 000。 1. 5 免疫组织化学检测 CD151 蛋白表达 采用免 疫组织化学 SP 法, 参照 SP 免疫组织化学试剂盒说 明书进行。细胞膜见棕褐色颗粒为 CD151 表 达阳 性细胞。每例切片选 5 个高倍视野, 按阳性细胞数
inht ra- hepat ic cho langiocarcinoma. Methods: Expression of CD151 mR NA and pro tein in 36 cases of primar y tumors of intra- hepatic cholang iocar cinoma wer e analyzed by R T- PCR and Western blot, respect ively. Ex pression of CD151 w as fur ther ana lyzed in 100 cases o f pr imary tumo rs of intra- hepatic cholangio carcinoma by immuno hist ochemist ry . Finally , the r elatio n o f CD151 with clinicopatholo gica l characterist ics w as assay ed. Results: Ex pr essio n o f CD151 in 18 cases o f pr imar y tumor w ith r ecurr ent intra- hepat ic cho langiocarcinoma w ere much higher than that of non- recurrent gr oup ( P< 0. 05) . T he hig h CD151 ex pr essio n was sig nificant co rr elatio n w it h the poo r differentiation, hig h T NM staging , lar ge size and lymphat ic metastasis ( P < 0. 05) . Conclusions: T he ov erex pr essio n o f CD151 w as co rr elated w ith malignant pheno type of intra- hepatic cho langiocarcinoma and pr obably implicated in invasion and metastasis.
Expression of Tetraspanin CD151 and Its Relation with Clinicopathological Characteristics in Intra-Hepatic Cholangiocarcinoma ZE N G H ai y ing 1 FA N J ia2, 3 ZH O U J ian2, 3 K E A i w u2, 3 SH I Guomi ng 2 T A N Yunshan1 D I N G Zhenbi n2 W U B in2 R UA N J in 2 1. D ep art ment of P at hol ogy , Zhongshan H osp i t al , F udan Uni ver sit y , S hanghai 200032 China; 2. L i ver Cancer I nsti tute, Zhongshan H osp i tal , Fud an Uni versi ty , Shanghai 200032 Chi na; 3. I nsti tut e of B iomed ical S ci ences , Fudan Univ er si ty , Shanghai 200032 Chi na Abstract Objective: T o examine the ex pr essio n of tetraspanin CD151 and its r elation w ith clinicopatholog ical char acter istics in
占同类计数细胞的百分比, 将染色结果分为阴性与 阳性, 阳性 细 胞面 积 < 50% 为阴 性、\50% 为 阳 性[ 5] 。 1. 6 统计学分析 采用 SPSS12 统计分析软件处 理, 计量资料以均数 ? 标准差表 示, 组 间采用 t 检 验, 计数资料组间分析采用 V 2 检验或精确概率法, P < 0. 05 表示差异有统计学意义。 2结 果 2. 1 早期复发 与不复发 肝内胆管 细胞癌组 织中 CD151 表达 RT- P CR 分析 结果ຫໍສະໝຸດ Baidu显示 ( 图 1 A ) , CD151 和 GAP DH 的阳性表达分别为 761 bp 处和 450 bp 处清晰条带。图像分析仪显示, CD151 表达 在复发组为 2. 17 ? 0. 57、未复发组为 1. 42 ? 0. 39, 两者差异有统计学意义( P < 0. 01) 。West ern blot 检测显示( 图 1 B) , 复发组中 CD151 表达为 1. 92 ? 0. 41, 未复发组为 0. 89 ? 0. 25, 两者有显著差异 ( P < 0. 01) 。
Key Words T etraspanin; CD151; Intr a- hepatic cholang io ca rinoma; Clinico patholog ical character istics
肝内胆管细胞癌是肝脏常见的恶性肿瘤之一, 发病率逐年上升。肝内胆管细胞癌的局部浸润和淋 巴结转移是影响患者能否进行根治性手术切除的关 键因素。探索其生物学特性对于改善肝内胆管细胞 癌的预后具有重要意 义[ 1] 。CD151 是 最早发现 与
图 1 A RT-PCR 检测早期复发与未复发肝内胆管细胞癌组织 中 CD151 mRNA 表达; B Western blot 检测早 期复发 与未复 发组织 中 CD151 蛋白表达
2. 2 免疫组织化学检测各组织中 CD151 蛋白表达 CD151 蛋白阳性染色主要定位于癌细胞胞膜, 呈
中国临床医学 2009 年 12 月 第 16 卷 第 6 期 Chinese Journal of Clinical M edicine, 2009. V ol. 16, No. 6
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四跨膜蛋白 CD151 在肝内胆管细胞癌中表达 及与临床病理特征的关系
曾海英1 樊 嘉2, 3 周 俭2, 3 柯爱武2, 3 施国明2 谭云山1 丁振斌2 吴 彬2 阮 尽2 ( 1. 复旦大学附属中山医院病理科, 上海 200032; 2. 复旦大学附属中山医院肝癌研究所, 上海 200032; 3. 复旦大学附属生物医学研究院, 上海 200032)
基金项目:/ 十一五0 国家科技支撑计划( 2006BAI02A04) 通讯作者 樊 嘉, E- mail: jiafan99@ yahoo . com
肿瘤侵袭转移相关的四跨膜蛋白, 是四跨膜蛋白网 络中最为关键的分子之一[ 2] 。迄今已在结肠癌[ 3] 、 前列腺癌[ 4] 、肝癌[ 5] 等多种肿瘤中发现其过表达与 肿瘤转移与复发密切相关, 但目前其在肝内胆管细 胞癌中的 表达 情况 无相关 报道。本 研究 检测 CD151 在肝内胆管细胞癌患者癌组织中表达, 分析 其表达程度与肝 内胆管细胞癌临床病理 之间的关
系, 对 CD151 在肝内胆管细胞癌的侵袭与转移中作
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Chinese Journal of Clinical Medicine, 2009. Vol. 16, N o. 6
中 国临床医学 2009 年 12 月 第 16 卷 第 6 期
用作初步探讨。 1 资料与方法 1. 1 一般资料 100 例标本取自复旦大学附属中 山医院肝肿瘤外科 2003 ) 2006 年间行根治性切除、 具有完整随访资料的肝内胆管细胞癌患者, 且经术 后经病理 学 证 实诊 断。肝 内 胆 管细 胞 癌 组 织 按 UICC 标准分级及 T NM 分期, 其中男性 54 例, 女 性患者 46 例。所有患者术前均未接受放、化疗, 标 本均在手术切除后 15 min 内采集。 1. 2 试剂 RIP A 试剂, Bradf ord 蛋白浓度测定试 剂盒( 购于碧云天公司) ; T rizo l 试剂( 购自 Invit rog en 公司) ; 逆转录、聚合酶链反应试剂盒( 购于 M BI 公司) ; CD151 及 GAP DH 引物( 由上海申能博彩生 物有限公司合成) ; 鼠抗人 GAP DH 单克隆抗体, 鼠 抗人 CD151 单克隆抗体 ( 购自美国 Abcam 公司) ; H RP- 羊抗鼠二抗, 免疫组织化学 SP 试剂盒及 DAB 试剂盒( 购自上海长岛生物技术公司) 。 1. 3 RT- PCR 检测 CD151 基因表 达 18 例早 期 复发( < 2 年) 和 18 例无复发的肿瘤组织 RNA 提取 参照 T rizo l 试剂盒说明书进行操作; CD151 引物由 Primer 5. 0 引物设计软件进行设计, 选择最佳引物。 CD151 引 物 序 列 为 5- T CCT GCT CCT CATCAT CT T T CT G- 3 ( 上 游 引 物 ) , 5- CCGT GTT CAGCT GCT GGT AGT- 3 ( 下 游 引 物 ) ; 选 取 GAP DH 基 因 作 为 内 参 照 基 因, 引 物 序 列 为 5CCACT AGGCGCT CACT GT T CT- 3( 上游引物) , 5GCGAACT CACCCGT T GACT- 3 ( 下游引物) 。逆 转录参照反应试剂盒说明书; PCR 反应 条件: 94 e 变性 5 m in 后, 开 始 PCR 热循环: 95 e 变性 45 s, 58 e 退火 1 min, 72 e 延伸 1 m in, 共 30 个循环, 最 后 72 e 延伸 10 min。PCR 产物在 2% 琼脂糖凝胶 电泳后, 以图像分析仪进行积分吸光度分析并摄像。 1. 4 West er n blo t 检测 CD151 蛋白表达 收集 18 例早期复发( < 2 年) 和 18 例无复发的肿瘤组织蛋 白后用 Bradf ord 法测定上清液中总蛋白 的浓度,70 e 冻存备用。West ern 杂交依照试剂盒说明的方 法进 行, 15% SDS- PAGE 一 抗 稀 释 度 1 B 200, H RP- 羊抗鼠二抗稀释度 1 B5 000。 1. 5 免疫组织化学检测 CD151 蛋白表达 采用免 疫组织化学 SP 法, 参照 SP 免疫组织化学试剂盒说 明书进行。细胞膜见棕褐色颗粒为 CD151 表 达阳 性细胞。每例切片选 5 个高倍视野, 按阳性细胞数
inht ra- hepat ic cho langiocarcinoma. Methods: Expression of CD151 mR NA and pro tein in 36 cases of primar y tumors of intra- hepatic cholang iocar cinoma wer e analyzed by R T- PCR and Western blot, respect ively. Ex pression of CD151 w as fur ther ana lyzed in 100 cases o f pr imary tumo rs of intra- hepatic cholangio carcinoma by immuno hist ochemist ry . Finally , the r elatio n o f CD151 with clinicopatholo gica l characterist ics w as assay ed. Results: Ex pr essio n o f CD151 in 18 cases o f pr imar y tumor w ith r ecurr ent intra- hepat ic cho langiocarcinoma w ere much higher than that of non- recurrent gr oup ( P< 0. 05) . T he hig h CD151 ex pr essio n was sig nificant co rr elatio n w it h the poo r differentiation, hig h T NM staging , lar ge size and lymphat ic metastasis ( P < 0. 05) . Conclusions: T he ov erex pr essio n o f CD151 w as co rr elated w ith malignant pheno type of intra- hepatic cho langiocarcinoma and pr obably implicated in invasion and metastasis.
Expression of Tetraspanin CD151 and Its Relation with Clinicopathological Characteristics in Intra-Hepatic Cholangiocarcinoma ZE N G H ai y ing 1 FA N J ia2, 3 ZH O U J ian2, 3 K E A i w u2, 3 SH I Guomi ng 2 T A N Yunshan1 D I N G Zhenbi n2 W U B in2 R UA N J in 2 1. D ep art ment of P at hol ogy , Zhongshan H osp i t al , F udan Uni ver sit y , S hanghai 200032 China; 2. L i ver Cancer I nsti tute, Zhongshan H osp i tal , Fud an Uni versi ty , Shanghai 200032 Chi na; 3. I nsti tut e of B iomed ical S ci ences , Fudan Univ er si ty , Shanghai 200032 Chi na Abstract Objective: T o examine the ex pr essio n of tetraspanin CD151 and its r elation w ith clinicopatholog ical char acter istics in
占同类计数细胞的百分比, 将染色结果分为阴性与 阳性, 阳性 细 胞面 积 < 50% 为阴 性、\50% 为 阳 性[ 5] 。 1. 6 统计学分析 采用 SPSS12 统计分析软件处 理, 计量资料以均数 ? 标准差表 示, 组 间采用 t 检 验, 计数资料组间分析采用 V 2 检验或精确概率法, P < 0. 05 表示差异有统计学意义。 2结 果 2. 1 早期复发 与不复发 肝内胆管 细胞癌组 织中 CD151 表达 RT- P CR 分析 结果ຫໍສະໝຸດ Baidu显示 ( 图 1 A ) , CD151 和 GAP DH 的阳性表达分别为 761 bp 处和 450 bp 处清晰条带。图像分析仪显示, CD151 表达 在复发组为 2. 17 ? 0. 57、未复发组为 1. 42 ? 0. 39, 两者差异有统计学意义( P < 0. 01) 。West ern blot 检测显示( 图 1 B) , 复发组中 CD151 表达为 1. 92 ? 0. 41, 未复发组为 0. 89 ? 0. 25, 两者有显著差异 ( P < 0. 01) 。
Key Words T etraspanin; CD151; Intr a- hepatic cholang io ca rinoma; Clinico patholog ical character istics
肝内胆管细胞癌是肝脏常见的恶性肿瘤之一, 发病率逐年上升。肝内胆管细胞癌的局部浸润和淋 巴结转移是影响患者能否进行根治性手术切除的关 键因素。探索其生物学特性对于改善肝内胆管细胞 癌的预后具有重要意 义[ 1] 。CD151 是 最早发现 与