比色法测定刺槐花中总皂苷含量
总皂苷的测定方法
A1 总皂苷的测定方法方法来源：《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）保健食品中总皂苷的测定方法（分光光度法）A1.1 试剂Amberlite-XAD-2大孔树脂，Sigma化学公司U.S.A正丁醇分析纯乙醇分析纯中性氧化铝层析用，100-200目人参皂苷Re 购自中国药品生物制品检定所香草醛溶液称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml。
高氯酸分析纯冰乙酸分析纯人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0ml，即每毫升含人参皂苷Re2.0mg。
A1.2 仪器比色计、层析柱A1.3 试验步骤A1.3.1 试样处理A1.3.1.1 固体试样：称取1.000g左右的试样（根据试样含人参量定），置于100ml 容量瓶中，加少量水，超声30min，再用水定容至100ml，摇匀，放置，吸取上清液1.0ml进行柱层析。
A1.3.1.2 柱层析：用10mL注射器作层析管，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。
先用25ml70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25ml水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0ml已处理好的试样溶液（见3.1），用25ml水洗柱，弃去洗脱液，用25m170%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。
以此作显色用。
A1.3.1.3 显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2ml5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8ml高氯酸，混匀后移入5ml比色管中，塞紧盖子于60℃水浴上加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0ml，摇匀后，以1cm 比色池于560nm 波长处与标准管一起进行比色测定。
A1.3.1.4 标准管：吸取人参皂苷Re 标准溶液（2.0mg/ml ）100μl 放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热），以下操作从“3.2柱层析……”起，与试样相同。
Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中的多酚含量
表２葛根素含量测定结果 （ － ） ｎ３
精 密吸取 供试 品溶 液２ Ｌ ０ ｕ ，分别在 制备后 ０ ， ４ ，１ ，２ 进样 ，测定峰面积 ，Ｒ Ｄ＝０ ，８ ２ ４ｈ Ｓ ． ６％。表 明样 品在２ 内稳定。 ４ｈ
２１ 加 样 回收 率 试验 ．０ ３ 讨论
３２ ３
食 品与药 品
Ｆ ｏ ｎ ｒｇ ｏ ｄａ ｄＤ ｕ
２ １ 年第 １ 卷第 ０ 期 ００ ２ ９
Ｆ ｌ ． ｉｃｉ ｕ ｏｉ Ｃ ｏａｌ 比色法测定刺槐花 中的多酚含量 ｎ ｅ
王 晓 阳 ，唐 琳 ，赵 垒 ，栾岩 妮 ，张振 燕
（ 山东师 范大学生命科 学学院食 品科学与工程系 ，山东 济南 ２ ０ １ ） ５ ０ ４
性 、 重 现 性和 回 收率 。 结果 表 明建 立 的 方 法 能 有效 地
２ Ｌ Ｏ“ ，测定峰面积 ，计算 ，结果见表 １ 。
表１加样回收率试验结果 （＝ ） ６
控制葛根汤颗粒的质量。
参考文献
［］ 梁 吉 春 ， 石 任 兵 ，刘 斌 ，等 ． 翘 散 研 究方 法 的新 探 讨 ［］北 １ 银 Ｊ． 京 中 医药 大 学 学 报 ， １ ９ ，２ （ ） ：３ —８ ９９ ２ １ ７３ ． ［］ 国 家药 典 委 员 会 ． 根 ［］中 国 药典 ２ ０ 年 版 一 部 ． 京 ：化 学 ２ 葛 Ｓ． ０５ 北
Ｗ ＡＮＧ ａ ． ａ ｇ ＴＡＮ Ｇ ｎ ＺＨＡＯ ｉ ＬＵＡＮ ｎ ｎ ， Ｘｉｏ ｙ ｎ ， Ｌｉ ， Ｌｅ， Ｙａ ． ｉ ＺＨＡＮＧ ｅ ． ａ Ｚｈ ｎ ｙ ｎ
（ｏ ｄ ｃ ｎｅ ｎ Ｐ ０ ｃＤ ｐ ｒ ｅ ￣ ｏ ｅｅ ｉ ｉ ｃ ｎ ｅＳ ａ ｄ ｎ ｏｍ ｌ ｎｖｒ ｔ Ｊｎｎ２ ０ １． ｈｎ） Ｆ ｏ Ｓ ｉ ｃ ｄ ｊ ｔ ｅａｔ ｎ Ｃ ｌｇ ｌ ｅ ｉ ｃ， ｈ ｎ ｏｇＮ ｒ ａ Ｕ ｉ ｓｙ ｉ ５ ０４ Ｃ ｉ ｅ ａ ｅ ｍ ｌ ｏ ｆＳ ｅ ｅ ｉ， ａ ａ
比色法测定槐花药材中总黄酮含量的基本原理
比色法测定槐花药材中总黄酮含量的基本原理一、引言槐花作为一种常见的中药材，其主要成分是总黄酮。
总黄酮是一类具有广泛生物活性的化合物，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种作用，因此对其含量的测定十分重要。
比色法是一种常用的测定总黄酮含量的方法之一，本文将从比色法的基本原理、实验步骤及注意事项等方面进行详细介绍。
二、比色法测定槐花中总黄酮含量的基本原理比色法是利用化合物与某些试剂发生反应形成有色产物，根据产物的吸收光谱对化合物进行定量测定。
在测定槐花药材中总黄酮含量时，常用铝离子试剂和盐酸试剂作为显色试剂。
1. 铝离子试剂铝离子试剂是指以铝离子为主要反应成分的显色试剂。
其基本原理是利用铝离子与总黄酮中的羟基或甲氧基发生络合作用，在强酸条件下形成稳定的有色络合物。
铝离子试剂的制备方法一般为将铝粉加入盐酸中，加热反应得到铝离子试剂。
2. 盐酸试剂盐酸试剂是指以盐酸为主要反应成分的显色试剂。
其基本原理是利用盐酸与总黄酮中的羟基或甲氧基发生缩合作用，在强酸条件下形成稳定的有色产物。
3. 比色法测定总黄酮含量在测定槐花药材中总黄酮含量时，先将槐花粉碎并提取出总黄酮。
然后，取适量提取液与铝离子试剂和盐酸试剂混合，在强酸条件下形成有色产物。
最后，利用紫外可见分光光度计测定产物的吸收光谱，并根据标准曲线计算出总黄酮的含量。
三、实验步骤及注意事项1. 实验步骤（1）将槐花粉碎并称取适量样品；（2）将样品加入95%乙醇中进行超声波提取；（3）将提取液过滤并蒸干；（4）将蒸干后的样品溶解在乙醇中；（5）取适量样品与铝离子试剂和盐酸试剂混合，在强酸条件下形成有色产物；（6）利用紫外可见分光光度计测定产物的吸收光谱，并根据标准曲线计算出总黄酮的含量。
2. 注意事项（1）样品应当精确称取，避免误差；（2）提取液的浓度应当适当，过浓或过稀都会影响测定结果；（3）铝离子试剂和盐酸试剂应当新鲜配制，以免影响显色反应；（4）在强酸条件下进行反应时，要注意安全，避免对人体造成伤害；（5）在使用紫外可见分光光度计时，要校准仪器并保持仪器干净。
刺槐花总黄酮提取工艺研究_李艳艳
Abstract：Objective：To establish the optimal extraction technology for the total flavone of Robinia pseudoacacia. Through drawing the effective elements of total flavone of Robinia pseudoacacia by different
收稿日期：2010-11-15 基金项目：辽宁省教育厅项目（2009209001） 作者简介：李艳艳（1985-），女，辽宁抚顺人，硕士研究生，研究方向：中药资源与新药开发。 通讯作者：初正云（1958-），男，辽宁沈阳人，副教授，研究方向：中药资源与新药开发。E-mail：chuzhengyun@。
提取时间
空白
总黄酮 （%）
浸膏得 率（%）
综合评分
1
1
1
1
1 2.21 33.72 30.30
2
1
2
2
2 2.55 40.24 34.05
3
1
3
3
3 2.83 44.24 38.08
42ຫໍສະໝຸດ 132 2.38 36.20 32.70
5
2
2
1
3 2.70 40.64 37.39
6
2
3
2
1 2.91 40.24 42.71
Key words：robinia pseudoacacia；the total flavone；preparation technique；orthogonal design method
刺槐花系豆科植物刺槐（Robinia pseudoacacia L.）的干燥花。味涩、平、有小毒入肝经，始载于《贵 州民间方药集》。具有消痈化瘀，清热解毒，疗咽治 痔，健胃通肠等功效。目前我国剌槐面积约有 150 万公顷，资源丰富 [1]。刺槐花含有蛋白质、氨基酸、 微量元素、挥发油、黄酮类等成分，刺槐花的主要有 效成分为黄酮类化合物，经 TLC、UV、IR 、MS 分析 测定，刺槐花黄酮提取物中分离的主要的黄酮类化 合物被确定为刺槐苷 [4]。刺槐花总黄酮具有抑制 癌细胞的活性，用于治疗急慢性肾炎、尿毒症、肾性 高血压、膀胱炎和泌尿系统疾病，取得了较好的效 果 [2-3]。本实验以总黄酮和浸膏得率为考察指标，对 刺槐花总黄酮的最佳提取工艺进行研究。 1 仪器与材料
总皂苷的测定方法
总皂苷的测定方法（分光光度法）本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。
本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。
一、方法提要样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。
二、仪器1.722分光光度计。
2.PT—大孔吸附树脂柱（河北省津杨滤材厂）。
3.超声波振荡器。
三、试剂1.甲醇（分析纯）。
2.乙醇（分析纯）。
3.人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品检定所）。
4.5％香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL。
5.高氯酸（分析纯）。
6.冰乙酸（分析纯）。
7.人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。
8.重蒸水。
四、测定步骤1.样品处理：（1）固体样品称取1.0g左右样品于100mL烧杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。
（2）液体样品含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析；非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品（如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）直接进行柱分离。
2.柱层析以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。
3显色在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入l0mL比色管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。
比色法测定总皂苷含量
比色法测定总皂苷含量比色法测定总皂苷含量1、仪器紫外分光光度计、电热恒温水浴锅、电子分析天平、旋转蒸发器、大孔树脂柱(内径0．8 cm，长20 cm)。
试剂无水甲醇、无水乙醇、正丁醇、冰醋酸、高氯酸和香草醛等均为分析纯；大孔树脂 DM-301、对照品、洋金花药品。
2、方法2.1 对照品溶液的制备取对照品 10 mg,加甲醇溶解定容至 10 ml，制成 1 mg／ml对照品溶液。
2.2供试品溶液的制备取药材粉末(过4号筛)约0．2 g，准确称定，置于150 ml具塞锥形瓶中。
精密加入50 ml 甲醇后，准确称重。
浸泡60 min，超声提取30 min，再次称重，补加甲醇至超声前重量。
过滤，精密移取续滤液25 ml于蒸发皿中，水浴蒸发至干，用5 ml水溶解残留物，所得溶液缓缓通过已处理好的大孔吸附树脂柱(径高比1：5)，以水50 ml洗脱，弃去水液，之后再以50 ml 95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干。
用20 ml水分次将残留物溶解转移至60 ml分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取(4×20 ml)，合并正丁醇层，减压蒸干。
残留物用70％甲醇溶解转移至10 ml量瓶中，定容，摇匀，即得。
2．3测定波长的选择精密移取1．5 ml的对照品及l ml供试品溶液，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛一冰醋酸(临用新配)0．2ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15 min后流水冷却 lO min。
加冰醋酸5 ml，摇匀。
立即在紫外分光光度计于400～800 nm波长下扫描，同时空白溶液作参比。
对照品及供试品的最大吸收波长均在475 nm，故选取475 nm 为检测波长。
2．4线性关系考察精密量取对照品溶液0．60，1．50，2．40，3．30，4．20 ml，置具塞试管中，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛-冰醋酸(临用新配)O．2 ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15min后流水冷却10 min。
比色法测定剑花总皂苷含量的研究
为 １ ．４ ｌ 。 ７ ６ ７ ｇ 置索 氏提 取 器 中 ， ９ ％乙 醇 用 ５ １Ｏ 连 续 回流 １４ 时 ， 取 温 度 ８ ℃。 Ｏ ｍＬ ２， 提 ８ 提
取 结 束 后 趁 热 抽 滤 ， 将 提 取 液 用 旋 转 蒸 并 发 仪 减 压 浓缩 近 于 ， 到流 浸 膏 。 流 浸膏 得 将 用 ９ ％ 醇 定பைடு நூலகம்容至 ２ ０ ５ 乙 ０ ｍＬ， 用时 再 稀 释十 取 倍 （ 可取 １ ， ９ ％ 醇 定 容至 １ｍＬ 。 即 ｍＬ 用 ５ 乙 ０ ） ２ ３测 定波 长 的选择 ． 精 密 吸 取 齐 墩 果 酸 对 照 品溶 液 和 供 试
品溶 液 各 ０ ５ ．ｍＬ， 别加 入 具 塞 试管 中 ，０ 分 ８ ℃水 浴 挥 干 溶 剂 ， 别 依 次 加 入新 ￣ ５ ／ 分 ｌ ｍｇ ｜ ｍＬ 草 醛 一 醋 酸 溶液 ０ １ 和０ ４ 高 香 冰 ． ｍＬ ． ｍＬ
氯酸 ， Ｏ ７ ℃水浴 １ ｍｉ 。 浴 后 立 即用 冷 水 ５ ｒ 水 ａ 冷却 ５ ｎ， 止 反应 。 加 入 １ ２ ｍＬ 醋 ｍｉ 停 再 ．５ 冰 酸， 匀， 摇 静置 １ ｍｉ ， 波 长４ ０ ０ ｎ ０ ｎ在 ０ ～７ ０ ｍ范 围 内 扫 描 。 果 对 照 品 溶 液 和 供 试 品 溶 液 结 图１ 测 定波 长 的选择 均 在 ５ ０ ｍ波 长 处有 最 大 吸收 ， 测定 波 长 ４ｎ 故 为 ５ ０ ｍ。 图１ ４ｎ 如 。
２． Ｏ
２． 标准 曲线 的测定 ４ 分别 取 ０２ ／ 齐 墩 果酸 溶液 ０ １０ ．ｍｇ ｍＬ ，０
Ｌ ， ０ Ｌ， ０ Ｌ， ０ ．Ｌ ， ０ Ｌ， ０ ２０ ３０ ４ ０Ｉ ｔ ５０ ６０
］ Ｑ：！ Ｑ ！
皂苷含量测定方法
皂苷含量测定方法
1. 高效液相色谱法，这就像在成分的世界里开启了一扇清晰的窗户！比如我们检测人参中的皂苷含量，通过高效液相色谱，就能把那些隐藏的皂苷清晰地找出来。
2. 比色法呀，这可是个神奇的手段！就像你能在一群颜色中精准挑出你想要的那一个。
比如检测植物提取物里的皂苷，能快速知道有多少呢！
3. 薄层色谱法呢，可以想象成是在一张大地图上寻找宝藏的标记！比如说检测某种药材里含有的皂苷，一下子就能确定它们的位置啦。
4. 分光光度法，哇哦，这简直是一把探索皂苷含量的利剑！好比在黑暗中找到闪闪发光的宝物。
像对一些含有皂苷的样品进行检测时，它就能大显身手啦。
5. 重量法，哎呀呀，这个方法就像称一称宝贝有多重一样！就拿确定某种中药里皂苷的含量来说，用重量法不就能知道个大概嘛！
6. 酶联免疫吸附测定法，哈哈，这可是如同侦探寻找线索一样厉害的方法哟！比如说去检测一些生物样本中的皂苷含量，它可在行啦。
7. 气相色谱法呢，它就像是在气流中捕捉那些关键信息！例如检测一些经过特殊处理的样品中的皂苷，靠它就能搞定呀。
8. 近红外光谱法呀，这就像拥有了一双超级眼睛，能迅速看穿皂苷的秘密呢！在快速分析某些复杂样品中的皂苷含量时，可好用了。
9. 质谱法啊，那可是如同超级显微镜一样的存在！想想对那些微量的皂苷进行检测时，它可不就是大功臣嘛！
我的观点结论：这些皂苷含量测定方法都各有其独特之处和适用场景，我们可以根据实际情况灵活选择，以获得最准确的结果。
槐花的提取及提取物的检识实训数据记录及结构处理
槐花的提取及提取物的检识实训数据记录及结构处理槐花的提取及提取物的检识实训数据记录及结构处理
一、实验目的
本次实验旨在掌握槐花的提取方法，以及对提取物进行检识和结构处理。
二、实验原理
槐花中含有丰富的黄酮类化合物，其中以芦丁和山奈酚最为常见。
提取槐花中的黄酮类化合物可以采用乙醇水混合溶剂进行超声波辅助萃取。
所得到的提取物可以通过紫外-可见光谱和高效液相色谱等方法进行检识和结构处理。
三、实验步骤
1.将干燥后的槐花粉末加入50%乙醇水混合溶剂中，放入超声波清洗器中进行超声波辅助萃取；
2.萃取完成后，用滤纸过滤得到提取液；
3.将提取液分别置于紫外-可见光谱仪和高效液相色谱仪中进行检测；
4.根据检测结果，利用化学软件对所得到的化合物进行结构处理。
四、实验数据记录
1.超声波辅助萃取过程中槐花粉末质量为10g，提取液体积为100mL；
2.紫外-可见光谱检测结果：在波长范围为200-400nm之间，有吸收
峰出现在275nm处；
3.高效液相色谱检测结果：保留时间为6.2min，峰面积为1200；
4.化学软件处理结果：所得化合物结构式为C21H20O11。
五、实验结论
通过本次实验，我们成功地提取了槐花中的黄酮类化合物，并利用紫
外-可见光谱和高效液相色谱等方法对所得到的提取物进行了检识。
最后，通过化学软件对化合物进行结构处理，确定所得到的化合物为
C21H20O11。
Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中的多酚含量5页word文档
Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中的多酚含量文献标识码：A刺槐花富含蛋白质、氨基酸、微量元素等营养成分，还含有芦丁、木犀草素、槲皮素、酚酸等多酚类成分。
多酚具有清除自由基、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射，以及保护心血管系统等重要的生物活性。
刺槐花是主要野生食用花之一，已成为当前功能性食品研究的热点。
我们用乙醇提取了刺槐花中的多酚化合物，以没食子酸为标准品，用Folin-Ciocaileu比色法测定了刺槐花中多酚类物质的含量，为开发利用刺槐花提供了科学依据。
1材料与方法1.1材料与试剂刺槐花(山东师范大学校园)；没食子酸标准品(中国药品生物制品检定所)；乙醇、钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂、无水碳酸钠、磷酸、溴等均为分析纯。
1.2仪器与设备UV-17000紫外分光光度计(岛津)；恒温水浴锅(上海森信)：电子天平(北京赛多利斯)；移液器(1 000ul，200ul)；JY92-2D超声波细胞粉碎机(宁波新芝)1.3方法1.3.1 Folin-Ciocaileu显色剂的配制参照文献。
称取50 g钨酸钠和12.5 g钼酸钠置入1 L磨口圆底烧瓶中，用350 mL蒸馏水溶解，缓慢加A.85％磷酸25 mL，浓盐酸50 mL，充分混匀，放入数粒玻璃珠，连接回流冷凝装置，文火回流10 h(回流不一定连续)。
用25 mL蒸馏水冲洗冷凝管上的附着物，拆开冷凝管后加入75 g无水硫酸锂和几滴溴水(边加边振摇)，开口继续加热沸腾15 min，直至溴水完全挥发，终点颜色为黄绿色。
冷却后定容至500 mL，过滤，储存于棕色瓶中，放入冰箱保存备用。
1.3.2标准贮备液的配制精密称取干燥的没食子酸标准品0.014 g，蒸馏水溶解并定容至100 mL，浓度为140ug／mL。
1.3.3标准曲线的建x,rt61 精密吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL 140~tg／mL没食子酸标准贮备溶液，分别定容于10 mL量瓶内。
HPLC测定槐角中槐苷含量
1. 2 苷 ( HAD - 2 , 纯度约 90 %) 0. 1620
g , 用 90 %乙醇加热溶解 , 趁热过滤 , 冰箱中放置 过夜 , 析出近白色粉末固体 , 抽滤 , 所得固体用 95 %乙醇洗涤 ,烘干 ,得近白色粉末 72. 2 mg。申光 WRS - 1A 数字式自动熔点测定仪测得熔点为 298. 0 ℃～300. 0 ℃。通过 UV、1 H - NMR 和 13C NMR 鉴定为槐苷 。样品作 HPLC 纯度测定 ,进样量 5μl ; HPLC 测试条件 : C - 18 柱 : 10μ YWG, ID 4. 0 mm;流速 : 1. 0 ml/ min ;压力 : 147 bar ;温度 : 20 ℃;
浓度为 127. 6 mg/ L 。两份测定液在相同的条件
下 ,进样量为 5μl 作 HPLC 分析 ,结果见表 3 :
表 3 槐角中槐苷含量分析
样品
浓度 保留时间 峰面积 测得浓度 槐苷含量
(mg/ L) (min)
(mg/ L) ( %)
乙酸乙酯可溶部分 104. 8 4. 465 4512176 25. 1 23. 9
HPLC 测定槐角中槐苷含量
总皂苷的含量测定方法
总皂苷的含量测定方法宝子！今天咱们来唠唠总皂苷含量的测定方法呀。
一种常见的方法就是比色法哦。
这就像是给总皂苷找个颜色伙伴来“衡量”它呢。
通常会利用一些显色剂，让总皂苷发生显色反应。
比如说，有一些试剂和总皂苷反应后会产生特定的颜色，然后通过仪器去检测这个颜色的深浅程度。
就好比我们看东西的颜色深浅来判断它的多少一样。
在这个过程中呢，要特别注意各种反应条件，像温度呀、反应时间呀，这些小细节就像做菜时的火候和时间，掌握不好就可能影响最后的结果哦。
还有重量法呢。
这个方法听起来就很实在，就像称东西一样。
把含有总皂苷的样品经过一系列处理，让总皂苷从混合物里分离出来，然后称一称它的重量。
不过这个方法可有点小麻烦，因为要把总皂苷分离得很干净不容易，就像从沙子里挑出金子一样，得很细心才行。
高效液相色谱法（HPLC）那可是个很厉害的方法哦。
它就像一个超级精密的侦探，可以把总皂苷从复杂的样品里精准地找出来并且测定含量。
它的原理有点复杂啦，简单说就是利用不同物质在流动相和固定相之间的分配系数不同，把总皂苷和其他成分分开，然后通过检测信号来确定总皂苷的含量。
这种方法虽然很精准，但是仪器比较贵，操作也需要一定的技术水平，就像开高级跑车，得有点本事才行呢。
薄层色谱法也能用来测定总皂苷含量。
它就像是把总皂苷和其他小伙伴们放在一个特殊的跑道（薄层板）上赛跑，然后根据它们跑的位置和颜色等特征来判断总皂苷的情况。
这个方法比较直观，但是准确性可能相对前面几种方法会差一点，不过它操作起来比较简单，就像玩一个简单的小游戏一样。
宝子，这些就是总皂苷含量测定的一些常见方法啦，各有各的优缺点，就看具体的需求和条件来选择合适的方法喽。
。
槐花药材的含量测定及方法学验证实验报告
槐花药材的含量测定及方法学验证实验报告槐花药材的含量测定及方法学验证姓名：廖卓* 学号:11071105一、实验目的1、掌握比色法测定槐花药材中总黄酮含量的方法及原理。
2、熟悉槐花药材的含量测定的方法学验证。
二、实验原理槐花为豆科植物SophorajaponicaL的干燥花及花蕾[1]。
夏季花开放或花蕾形成时采收，及时干燥，除去枝，梗及杂质。
前者习称“槐花”，后者习称“槐米”。
槐花药材的主要有效成份是黄酮类化合物，其中芦丁的含量最高，所以槐花药材的鉴别及含量测定均以芦丁为指标成分。
芦丁（C27H30O16,610.51）黄酮类化合物在碱性条件下与铝盐发生配位反应，生成红色的配位化合物，使得最大吸收波长红移至可见光区，且具有较高的吸收系数。
黄酮类与铝盐的配位反应是定量完成的，因此可采用比色法测定槐花药材中总黄酮的含量，避免其他非黄酮成分对测定准确度的影响[2]。
三、仪器与试药仪器：紫外—可见分光光度计,100ml容量瓶，25ml容量瓶、10ml移液管，超声波清洗器、漏斗、玻璃棒试剂：槐花药材，芦丁对照品，5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，氢氧化钠试液，乙醇。
四、实验步骤总黄酮含量测定取芦丁对照品50mg，精密称定，置于25ml量瓶中，加60%乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀。
精密量取10ml,置于100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得浓度为0.2mg/ml的芦丁对照品溶液。
（2）检测波长的选择：取A对照品溶液，在400～600nm波长进行光谱扫描，发现光谱图最大吸收，选定波长说明：一般选择待测样品化合物吸收度最大，即吸收曲线最高点为测定波长。
化合物的最大吸收峰λmax或该化合物经显色后的最大吸收峰，通过分光光度计进行扫描后确定或通过二极管阵列检测来确定，并与该化合物文献值相比较应一致。
在最大吸收峰处测定时灵敏度高，误差小。
因此一般情况下选择最大吸收波长作为检测波长。
比色法测定甘草中总皂苷的含量
比色法测定甘草中总皂苷的含量【摘要】目的建立甘草中甘草总皂苷含量的测定方法。
方法用香草醛 高氯酸试剂，在589 nm处有最大吸收，并对比色条件进行了优化。
结果该法精密度高，1 h内稳定，平均加样回收率为99.03%。
结论此法简便、准确、稳定性、重复性好，可用于甘草总皂苷的测定。
【关键词】甘草；总皂苷；香草醛 高氯酸Determination of Total Saponins in Glycyrrhiza by ColorimetryAbstract：ObjectiveTo establish the method of determination of total saponins in Glycyrrhiza. MethodsUse Vanillin HClO4 as the chromogenic reagent and detect the maximum absorption at the wavelength of 589 nm. Choose the best chromogenic preparation to determine the contents of the samples. Results The precision of the method is high. The color of the treated samples was stable within 1h. The average value of the recovery was 99.03%.ConclusionThe method is simple, accurate, highly sensitive and reproducible. It may be used for the quantitative determination of total saponins in Glycyrrhiza.Key words：Glycyrrhiza; Total saponins; Vanillin- HClO4甘草为豆科（Leguminosae）甘草属（Glycyrrhiza）植物，为我国重要的传统中草药。
HPLC法同时测定苦刺花中苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的含量
HPLC法同时测定苦刺花中苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的含量王晓萍;石会丽;李富贤;雷琨;冯一凡;米彩峰【期刊名称】《陕西中医》【年(卷),期】2014(000)009【摘要】目的：建立同时测定苦刺花中苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱含量的 HPLC测定法。
方法：色谱柱为ZORBAX-C18柱（4．6mm ×250mm ，5μm），以甲醇（A）-0．4mol · L-1磷酸水（B）（1：9）为流动相，检测波长220nm ，流速1mL · min-1，柱温30o C。
结果：在线性范围内4个对照品的标准曲线呈良好的线性关系（r＞0．9998）。
平均回收率分别为101．18％，101．09％，98．72％，98．47％。
结论：可通过HPLC法同时测定苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的含量，并可用该方法进行药材的质量控制。
【总页数】3页(P1247-1249)【作者】王晓萍;石会丽;李富贤;雷琨;冯一凡;米彩峰【作者单位】陕西省中医医院西安710003;陕西省中医药研究院西安710003;陕西省中医药研究院西安710003;陕西省中医药研究院西安710003;陕西省中医药研究院西安710003;陕西省中医药研究院西安710003【正文语种】中文【中图分类】R283【相关文献】1.HPLC测定狼牙刺种子氧化苦参碱和氧化槐果碱含量 [J], 李羽翡;江海;吴三桥;王艳龙;李新生2.RP-HPLC法测定苦豆子总碱中苦参碱与氧化苦参碱、槐果碱与氧化槐果碱含量[J], 陈海燕;冷晓红;郭鸿雁;李军;郝彩琴;3.HPLC法同时测定三物黄芩汤中苦参碱、氧化苦参碱和氧化槐果碱含量 [J], 蔡凡;张芳向;邹振红;朱丽萍4.HPLC法同时测定三物黄芩汤中苦参碱、氧化苦参碱和氧化槐果碱含量 [J], 蔡凡;张芳向;邹振红;朱丽萍;5.RP-HPLC法同时测定复方苦参注射液中氧化槐果碱、氧化苦参碱和苦参碱的含量 [J], 吴迪;梁健;廉建伟;张蕾;陈晓辉;毕开顺因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
紫外可见分光光度法测定刺五加果中总皂苷的含量
紫外可见分光光度法测定刺五加果中总皂苷的含量粘成贺;倪秀珍;姜玮伦;姚云霞;张萌;姚慧敏【摘要】目的:建立了刺五加果中总皂苷的含量测定方法.方法:采用紫外可见分光光度法对刺五加果中总皂苷进行测定,检测波长为542nm.结果:紫丁香苷在20.4~153.0μg·mL-1的浓度范围内,吸光度与浓度呈良好的线性关系,A=196.76C-1.0269(r=0.9996);刺五加果的平均加样回收率为99.96%(n=6),刺五加果中总皂苷平均含量为7.15mg·g-1.结论:该方法操作简便、快速,准确度高,重复性好,稳定可靠,可用于刺五加根和果的总皂苷的含量.【期刊名称】《通化师范学院学报》【年(卷),期】2017(038)001【总页数】3页(P15-17)【关键词】刺五加果;紫外可见分光光度法;紫丁香苷;总皂苷【作者】粘成贺;倪秀珍;姜玮伦;姚云霞;张萌;姚慧敏【作者单位】通化师范学院吉林省长白山药用植物研究重点实验室;长春师范大学生命科学院;通化师范学院,吉林通化 134002;通化师范学院,吉林通化 134002;通化师范学院,吉林通化 134002;通化师范学院,吉林通化 134002【正文语种】中文【中图分类】O657.3刺五加Acanthopanaxsenticosus（Rupr.Maxim.）Harms为五加科五加属多年生落叶灌木，主要分布于我国吉辽黑三省，自然贮量丰富［1］.刺五加可入药亦可食用，人们食用的山野菜-刺拐棒即为刺五加的嫩茎，其根、茎、叶、果均可食用，因此刺五加具有很好的经济价值和研究价值.随着人们对刺五加的深入研究发现，刺五加具有提高免疫力、增加抗肿瘤作用、延缓衰老、减轻疲劳的作用外，对心脑血管疾病的治疗、对糖尿病、神经衰弱、高血压也有一定的作用.刺五加注射液对睡眠具有促进作用［4］，刺五加果也开发出了果酒、果醋等产品［2-6］.虽然高效液相色谱法可对刺五加中的刺五加苷E、丁香苷等具体成分进行含量测定，但由于高效液相色谱法相对来说比较繁琐，不利于刺五加类产品特别是保健食品等中间体的快速测定.金焱等采用紫外分光光度法对刺五加口服液中的总皂苷进行了含量测定［7］，孟勤等建立了刺五加叶总皂苷合剂的质量标准［8］，但所建立的紫外分光光度法均采用齐墩果酸为标准品，而我们对刺五加中的齐墩果酸中的含量进行了测定，发现齐墩果酸不是其主要成分，含量较少，而且中国药典中均以紫丁香苷为指标性成分［9］，所以我们以紫丁香苷为对照品，建立了刺五加果中总皂苷的紫外-可见分光光度法，对刺五加果中总皂苷进行测定.紫外分光光度仪（上海仪电分析仪器有限公司，INESA-L6）；电热套（北京中兴伟业有限仪器公司）；双光束紫外可见光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司，TU-1901）紫丁香苷（中国药品生物制品检定所，批号：111574-200603）；刺五加果（批号：151010、151011、151012）采自吉林省通化市长白山区，经通化师范学院生命科学学院朱俊义教授鉴定为刺五加Acanthopanax senticosus（Rupr.Maxim.）Harms果实）；试剂均为分析纯，水为纯净水.2.1 溶液的配制对照品溶液：取紫丁香苷对照品，精密称定，加甲醇定量分别制成每1mL中分别含1.02mg的溶液，作为对照品贮备液.分别精密吸取贮备液0.2、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL至10mL量瓶中，用甲醇至刻度，分别配置成20.4、51.0、81.6、102.0、122.4、153.0μg·mL-1的对照品溶液；香兰素配成8%无水乙醇溶液；浓硫酸配成72%（V/V）溶液.供试品溶液的制备：取刺五加果实或刺五加，粉碎后过80目筛，取1.0g，精密称定，加水50mL，加热回流2次，每次1h，分别合并滤液并浓缩至约25mL，再用石油醚萃取至石油醚层几乎无色，将水层蒸干，残渣用25mL水饱和正丁醇分3次转移至分液漏斗中，用正丁醇饱和水涤3次，每次15mL，正丁醇层减压回收至干，用甲醇溶解，溶液转移至25mL量瓶中并定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液.2.2 溶液的显色分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各1mL，于具塞玻璃试管中，氮气吹干后，各试管中加入8%香兰素乙醇溶液0.5mL，72%（V/V）硫酸5mL，摇匀后于60℃恒温水浴加热10min，立即取出置冰水浴中冷却至室温，用于吸光度测定.2.3 测定波长的选择分别精密量取浓度为102.0μg·mL-1紫丁香苷对照品溶液和样品溶液各1mL于具塞玻璃试管中，按照2.2中方法进行显色，以空白溶剂同法处理作参比，在400～800nm波长范围内进行扫描，色谱图谱见图1，对照品溶液和样品溶液在542nm 均有较大吸收，故确定紫丁香苷测定波长为542nm.2.4 标准曲线的绘制分别精密量取20.4、51.0、81.6、102.0、122.4、153.0μg·mL-1对照品溶液各1mL于具塞玻璃试管中，按照2.2中方法进行显色，以空白溶剂同法处理作参比，于542nm波长下测定，以对照品浓度为纵坐标（X），吸光度A为横坐标（Y），进行线性回归，紫丁香苷在20.4～153.0μg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，其线性回归方程为：A=196.76C-1.0269（r=0.9996）.2.5 精密度试验取浓度为102.0μg·mL-1紫丁香苷对照品溶液1mL，依次按2.2项下要求同法操作，连续测定5次，测得吸光度值，RSD为0.43%，结果表明仪器精密度良好，可满足实验测定要求.2.6 稳定性试验取浓度为102.0μg·mL-1紫丁香苷对照品溶液1mL，依次按2.2项下要求同法操作后，室温放置，分别于0，1，3，6，12h，测定吸光度值，RSD为0.63%，结果表明，溶液显色后放置12h内稳定性良好.2.7 重复性试验取同一批刺五加药材（151010批），依次按2.1和2.2项要求同法操作，测得吸光度值，按标准曲线计算样品含量，RSD为0.59%（n=6），结果表明本方法样品重复性良好.2.8 回收率试验精密称取已知含量的刺五加果（总皂苷含量为7.15mg·g-1）0.5g，共6份，精密加入浓度为1.02mg·mL-1丁香苷对照品1.5mL，依次按2.2项要求同法操作后，测得吸光度值，将吸光度值带入线性回归方程，计算回收率，结果见表1.刺五加果的平均加样回收率分别为99.96%，RSD为0.38%，回收率符合含量测定要求.2.9 含量测定取刺五加果，按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，取供试品溶液和对照品溶液（紫丁香苷的浓度为102.0μg·mL-1）各1mL于具塞玻璃试管中，按照2.2中方法进行显色，以空白溶剂同法处理作参比，于542nm波长下测定，测得吸光度值，按外标法计算含量.刺五加果实含量测定结果见表2.本文采用紫外分光光度法测定刺五加果总皂苷的含量，此方法简便，快捷，具有良好的重现性，适用于五加果总皂苷的分析测定.有文献报道以齐墩果酸为对照品，测定刺五加叶中总皂苷的含量，但在中国药典中刺五加中均以紫丁香苷为指标性成分，我们以紫丁香苷作为对照品，方法更加精确，可靠.紫外分光光度法简便快捷，适用于刺五加类产品特别是保健食品等中间体的快速测定.【相关文献】［1］何景，曾沧江.中国植物志［M］.北京：科学出版社，1978：125.［2］郭军，孙宝俊，郑金萍.食品新资源刺五加的研究开发［J］.中国食物与营养，2008，19（12）：26.［3］杜佳新，杜佳新，顾玉红，等.刺五加有效成分的抗肿瘤作用研究与评价［J］.中国医院用药评价与分析，2010，3（199）：2.［4］张萍，等.HPLC法测定不同产地、不同生长年限刺五加药材中异嗪皮啶［J］.药物分析杂志，2010，30（12）：2433.［5］段雪磊，等.刺五加免疫调节功能的研究进展［J］.中国国兽医杂志，2015，6（187）：2. ［6］姚慧敏，关颖丽，朱俊义，等.UPLC法同时测定野生刺五加果和根中5种主要成分的含量［J］.中国药房，2016，27（12）：1668-1671.［7］金焱，等.刺五加口服液中刺五加总皂苷的含量测定［J］.黑龙江医药，2011，1（25）：2. ［8］孟勤，等.刺五加叶总皂甙合剂质量标准探讨［J］.吉林中医药，1997，4（52）：2.［9］国家药典委员会，中华人民共和国药典［M］一部.北京：化学工业出版社，2015：206-207.。
刺楸不同产地和不同药用部位中总皂苷的含量测定
文档收集于互联网，已重新整理排版.word版本可编借，有帮助欢迎下载支持.刺楸不同产地和不同药用部位中总皂昔的含量测定作者：程东岩，王隶书，王海生，刘永宏【摘要】目的比较刺楸不同产地和不同药用部位中总皂苛的含量。
方法在国内首次以刺楸皂"ffB为标准品，采用香草醛-高氯酸比色法测定刺楸中总皂苗含量。
结果刺楸皂苛B在8. 08〜64.67 H g/ml 范围内呈良好的线性关系，平均回收率(刺楸树皮)为99. 7%, RSD为 1.92%(“6);用此条件测得不同产地刺楸中均含有总皂苜，其中以吉林集安刺楸中总皂苗含量最高;不同药用部位叶中总皂琶含量大于树皮。
结论该方法简便、快速、准确，可作为刺楸药材质量的检测手段之一; 有关刺楸叶的开发利用报道少见，从总皂营成分和资源综合利用的角度考虑，建议叶亦可以入药。
【关键词】刺楸;总皂昔;紫外-可见分光光度法;不同产地及药用部位Abstrac t： ObjectiveTo determine the to tai saponin from different parts and places in Kalopanax septemlobus (Thunb・)Koidz ・ Methodsln China for the first time the total saponin content in Kalopanax septemlobus(Thunb・)Koidz・ was determined using vanillin-perchloric acid colorimetrie with Kalopanaxsaponin B as a standard product・ResultsThe linear range of kalopanaxsaponin B was 8. 08~64.67 U g/m 1. The average recovery was 99. 7%(n=6) , with RSD of 1. 92% .There was to taisaponin of Kalopanax septemlobus (Thunb・)Koidz・(root bark) from diffrent places・ The higher contents was in Ji' an city of Jilin Province・ The content in leaf was higher than that of the bark・ConclusionThe method is simple, rapid and accurate, and can be used to evaluate quality of Kalopanax septemlobus(Thunb・)Koidz・ Reports on the development and utilization of Kalopanax leaves are rare・From the perspective of the total saponin content and comprehensive utilization of resources, it is recommended that leaf can also be used as medicine・Key words：Kalopanax septemlobus(Thunb. )Koidz・;Total saponin;UV; Different place and parts刺楸系五加科刺楸属植物Kalopanax septemlobus (Thunb. )Koidz.,分布于全国各省区,树皮可供药用,具有祛风、除湿、通络、止痛、杀虫之功效，临床用于治疗类风湿性关节炎、腰膝疼痛，外用治疗跌打损伤［1］。
槐花的质量检查
槐花的质量检查引言概述：槐花是一种常见的传统中药材，具有多种药用价值。
为了确保槐花的质量和安全性，进行质量检查是必不可少的。
本文将从五个方面介绍槐花的质量检查方法。
一、外观质量检查1.1 颜色检查：槐花颜色应为淡黄色，均匀一致，没有明显的色斑或变色现象。
1.2 形状检查：槐花应呈扁平状，花瓣完整，没有破损或变形。
1.3 气味检查：槐花应具有特殊的香气，没有异味或发霉味。
二、含水量检查2.1 烘干法：取一定量的槐花样品，称重并记录初始重量，然后将样品放入烘箱中烘干，直到重量不再变化为止。
最后计算含水量的百分比。
2.2 电子天平法：使用电子天平直接测量槐花样品的重量，然后将样品放入烘箱中烘干，再次测量重量，计算含水量的百分比。
2.3 烘箱法：将槐花样品放入预热好的烘箱中，在一定温度下烘干一定时间，然后称重并计算含水量。
三、化学成分检查3.1 挥发油含量检查：采用水蒸气蒸馏法提取槐花中的挥发油，然后使用气相色谱仪进行分析和定量。
3.2 总黄酮含量检查：使用乙酸乙酯进行提取，然后使用紫外分光光度计测定槐花中总黄酮的含量。
3.3 重金属含量检查：采用原子吸收光谱法或电感耦合等离子体质谱法检测槐花中的重金属元素含量。
四、微生物检查4.1 总菌落总数检查：采用菌落计数法，将槐花样品进行适当稀释后接种在琼脂平板上，培养一定时间后进行菌落计数。
4.2 大肠菌群检查：采用大肠杆菌培养基进行培养，观察是否有大肠菌群的生长。
4.3 霉菌检查：将槐花样品进行适当稀释后接种在含有抗生素的琼脂平板上，培养一定时间后观察是否有霉菌的生长。
五、农药残留检查5.1 采样方法：根据采样点的不同，采用不同的采样方法，如随机采样、分层采样等。
5.2 农药提取：采用适当的溶剂对槐花样品进行提取，如乙酸乙酯、甲醇等。
5.3 农药残留分析：使用气相色谱仪、液相色谱仪等仪器对提取物进行分析和定量。
结论：通过对槐花的外观质量、含水量、化学成分、微生物和农药残留等方面的检查，可以全面了解槐花的质量状况。
不同产地续断中总皂苷的含量测定
不同产地续断中总皂苷的含量测定【摘要】目的测定全国不同产地续断药材中总皂苷的含量，为全面评价续断药材质量提供依据。
方法以齐墩果酸为对照品，用紫外-可见分光光度法测定。
结果9个省、市37个药材样品中总皂苷含量在2.20%～19.91%，平均加样回收率为100.32%，RSD为1.78%。
不同产地续断药材中总皂苷的含量存在差异，其中湖北鹤峰县野生续断总皂苷含量最高。
结论此方法准确、可行，可作为续断药材的质量评价方法。
【关键词】续断；总皂苷；紫外-可见分光光度法续断为川产道地药材之一，来源于川续断科川续断属植物川续断Dipsacus asperoides C．Y．Cheng et T．M．Ai的干燥根［1］。
具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏的功效，临床上主要用于腰膝酸软，风湿痹痛，跌扑损伤等［1］。
据报道［2～4］，续断补肝肾、强筋骨、续折伤的主要活性成分是三萜皂苷类成分，现已分离鉴定出22种三萜皂苷。
随着对续断研究的不断深入，特别是在软组织损伤、腰膝酸软、腰椎骨质增生等方面的广泛应用，使其需求量大增。
为了评价续断质量的优劣，本实验以齐墩果酸为指标，采用紫外分光光度法测定续断中总皂苷的含量，从而为全面评价续断药材质量提供依据，为合理开发利用续断药材资源提供科学依据。
1 仪器与材料1.1 仪器UV-1100紫外-可见分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司)，KQ-3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），万分之一电子天平(德国赛多利斯BP-121S)，十万分之一电子天平(日本岛津LIBROR AEG-45S)。
1.2 样品与试剂续断采自和购自全国9个省、市37个药材样品（见表2），均经成都中医药大学鉴定教研室卫莹芳教授鉴定为川续断Dipsacus asperoides C．Y．Cheng et T．M．Ai的干燥根；齐墩果酸对照品(批号：110709-200505，购自中国药品生物制品检定所)；甲醇、乙醇、冰乙酸、高氯酸、香草醛等试剂均为分析纯。
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比色法测定刺槐花中总皂苷含量摘要：建立了比色法测定刺槐（ＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａＬ．）花提取物总皂苷含量的方法。
以人参皂苷Ｒｇ１作为对照品，通过正交设计对香草醛－高氯酸比色法的试验条件进行优化，确定最佳比色条件为：６０℃水浴挥干溶剂后，加入０．２ｍＬ７.0％香草醛－冰乙酸液和１ｍＬ高氯酸，于６０℃水浴２０ｍｉｎ，测定波长为５４５ｎｍ。
样品在０～０．２４ｍｇ范围内呈良好的线性关系，回归方程为ｙ＝３．５４７０ｘ＋０．０１０９（Ｒ２＝０．９９８９），平均加样回收率为１００．０７％（ＲＳＤ＝２．１０％，ｎ＝７），测得刺槐花提取物中总皂苷平均含量为２．１７７％。
该方法简便、准确、重现性与稳定性较好，可用于测定刺槐花提取物总皂苷含量。
关键词：刺槐（ＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａＬ．）花；总皂苷；含量测定；比色法ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＴｏｔａｌＳａｐｏｎｉｎｓｉｎＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａＬ．ＦｌｏｗｅｒｓｂｙＣｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙＡｂｓｔｒａｃｔ：ＳｔｕｄｙｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｓａｐｏｎｉｎｓｃｏｎｔｅｎｔｉｎＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａＬ．ｆｌｏｗｅｒｓ（ＲＰＦ）ｂｙｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ．ＷｉｔｈＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｇ１ａｓｓｔａｎｄａｒｄmaterial，ｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｖａｎｉｌｌｉｎ－ｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎ．Ｔｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｅｖａｐｏｒａｔｅｄｂｙｗａｔｅｒｂａｔｈｈｅａｔｉｎｇａｔ６０℃，ａｎｄｗａｓｍｉｘｅｄｗｉｔｈ０．２ｍＬａｃｅｔｉｃａｃｉｄｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ７.0％ｖａｎｉｌｌｉｎａｎｄ１ｍＬｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄ，ａｎｄｒｅａｃｔｉｏｎｍｉｘｔｕｒｅｗａｓｉｎｃｕｂａｔｅｄａｔ６０℃ｆｏｒ２０ｍｉｎ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ５４５ｎｍ．Ａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗａｓａｃｈｉｅｖｅｄｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０～０．２４ｍｇｗｉｔｈｔｈｅｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎｏｆｙ＝３．５４７０ｘ＋０．０１０９（Ｒ２＝０．９９８９），ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ１００．０７％（ＲＳＤ＝２．１０％，ｎ＝７）．Ｔｈｅaverage content of ｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｉｎＲＰＦｗas ２．１７７％．Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｅｘｃｅｌｌｅｎｔｌｙｓｔａｂｌｅａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｌｅ，ａｎｄｗａｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｉｎＲＰＦ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａＬ．ｆｌｏｗｅｒｓ；ｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｏｎｔｅｎｔ；ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ刺槐（ＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａＬ．）又称洋槐，是主要的速生造林树种之一，在我国分布广泛，目前我国剌槐面积约有１５０万ｈｍ２，资源丰富［１］。
刺槐花系豆科植物刺槐的干燥花，味涩、平、入肝经，始载于《贵州民间方药集》，具有消痈化瘀、清热解毒、疗咽治痔、健胃通肠等功效。
刺槐花含有丰富的蛋白质［２］、氨基酸［３］、微量元素［４］、多酚类［５］、黄酮类［６］等化合物，具有较高的食用价值和药用价值。
目前，对刺槐花化学成分及活性的研究较多［５－７］，但鲜见有总皂苷定量方法的研究报道。
皂苷是生理活性广泛的一种特殊的苷类，普遍具有抗炎抑菌、抗肿瘤、降胆固醇、祛痰止咳、祛风湿、免疫调节、兴奋或抑制中枢神经系统的作用［８］，已成为食品与营养学研究的热点之一。
准确测定刺槐花中总皂苷的含量对确保其疗效和药物开发具有重要的意义。
香草醛－高氯酸法能与皂苷作用形成特征紫红色，且灵敏度与精密度较高，受糖类干扰较小，所用仪器设备简单、结果可靠、重复性好，是一般实验室测定总皂苷含量最广泛采用的显色方法。
反应机理是皂苷在强氧化性酸的作用下脱氢，氧化后再与香草醛起加成反应［９］。
本试验以香草醛－高氯酸为显色剂，采用紫外－可见分光光度法优化了槐花总皂苷最佳的测试条件，并建立了简便准确的定量方法。
１材料与方法１．１试剂与仪器槐花购自新乡洪门市场；人参皂苷Ｒｇ１标准品（上海同田生物技术有限公司）；其他化学试剂均为分析纯。
ＲＥ－５２Ａ旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；ＷＦＪ７２００可见光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；ＴＵ－１８１０ＰＣ型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；ＳＨＣ－Ａ水浴振荡器（江苏金坛中大仪器厂）。
１．２实验方法１．２．１溶液的配制１）样品溶液的制备：准确称取冷冻干燥粉碎槐花样品２ｇ于２５０ｍＬ碘量瓶中，加入５０ｍＬ８０％乙醇为提取溶剂，浸泡３０ｍｉｎ后，５０℃水浴振荡提取２ｈ，收集滤液，滤渣于相同条件下再提取１次，合并２次滤液，定容至１００ｍＬ，水饱和正丁醇萃取２次，收集正丁醇层，真空浓缩得总皂苷，配制成一定浓度甲醇溶液备用。
２）标准溶液的配制：称取干燥至恒重的人参皂甙Ｒｇ１４．８ｍｇ，用１０ｍＬ６０％乙醇溶解，配制成０．４８ｍｇ／ｍＬ标准溶液。
１．２．２最大吸收波长的确定分别取０．３ｍＬ人参皂苷标准品溶液与０．１２５ｍＬ样品溶液，６０℃水浴挥干溶剂，加入新配制的０．２ｍＬ５％香草醛－冰乙酸液，０．８ｍＬ高氯酸，６０℃水浴加热１５ｍｉｎ，冷却，加５ｍＬ冰乙酸，混匀静置２０ｍｉｎ，在紫外－可见分光光度计上，２００～９００ｎｍ范围内扫描，以６０％乙醇溶液进行空白试验。
１．２．３显色条件单因素与正交实验优化在单因素实验的基础上，选择香草醛浓度、高氯酸用量、反应温度与反应时间等４个主要因素进行Ｌ９（３４）正交实验，因素水平见表１。
１．２．４方法学考察对方法的稳定性、精密度、重现性、加标回收率进行测定，并对槐花样品总皂苷含量进行了测定。
２结果与分析２．１最大吸收波长的确定人参皂苷Ｒｇ１标准品与供试样品显色后的紫外－可见光谱扫描图分别如图１、图２所示。
结果表明，人参皂苷和供试样品在２００～９００ｎｍ波长范围内均在５４５ｎｍ处有最大吸收峰，因此可用人参皂苷Ｒｇ１作为对照品测定槐花总皂苷。
２．２香草醛－高氯酸法比色条件的优化２．２．１反应温度对显色反应的影响准确量取供试样品０．１２５ｍＬ置于１０ｍＬ具塞试管中，于６０℃水浴使溶剂挥发。
按“１．２．２”中香草醛－高氯酸法显色，仅改变反应温度，测定ＯＤ５４５nm，考察反应温度对显色反应的影响。
由图３可见，反应温度对显色结果有较大影响，随着反应温度的升高，吸光度值也不断增加，但到８０℃后，反应体系的颜色非常深，因此选择反应温度为７０℃。
２．２．２加热时间对显色反应的影响准确量取供试样品０．１２５ｍＬ置于１０ｍＬ具塞试管中，于６０℃水浴使溶剂挥发。
按“１．２．２”中香草醛－高氯酸法显色，于６０℃水浴中分别加热不同时间，测ＯＤ５４５nm，考察加热时间对显色反应的影响。
由图４可见，随着加热时间的延长，吸光度呈现先上升后下降趋势，５ｍｉｎ时吸光度最低，２０ｍｉｎ时吸光度最高，显色完全。
因此，选择加热时间为２０ｍｉｎ。
２．２．３高氯酸用量对显色反应的影响准确量取供试样品０．１２５ｍＬ置于１０ｍＬ具塞试管中，于６０℃水浴使溶剂挥发。
加入０．２ｍＬ５％香草醛－冰乙酸溶液，分别加入高氯酸０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４ｍＬ，摇匀，６０℃水浴加热１５ｍｉｎ，取出后立即用流水冷却，依次加入冰乙酸５．６、５．４、５．２、５．０、４．８、４．６、４．４ｍＬ稀释，以不加供试样品的平行样为空白，测ＯＤ５４５nm，考察高氯酸用量对显色反应的影响。
由图５可见，高氯酸用量太少，吸光度较低，对反应结果影响较大。
随着高氯酸用量的增加，整体趋势呈先上升后下降，高氯酸用量为０．８ｍＬ时吸光度最大。
２．２．４香草醛浓度对显色反应的影响准确量取供试样品０．１２５ｍＬ置于１０ｍＬ具塞试管中，于６０℃水浴使溶剂挥发。
分别加入新配制的不同浓度的香草醛－冰乙酸溶液０．２ｍＬ，按“１．２．２”中方法显色后，测ＯＤ５４５nm，考察香草醛浓度对显色反应的影响。
由图６可见，香草醛浓度为０．５％～１.0％时，吸光值较低；随着香草醛浓度的增加，吸光度呈上升趋势，到９.0％后，吸光度上升趋势减缓。
香草醛作为显色剂，要求过量即可，太高浓度会使测定的背景值加深。
因此，５.0％～９.0％的香草醛是比较适宜的。
２．２．５正交设计优化在单因素实验基础上，采用Ｌ９（３４）正交实验设计对槐花总皂苷香草醛－高氯酸法比色条件进行优化，结果见表２。
极差大小可以用来表征各因素对显色反应的影响程度。
由表２可以看出，各因素对显色反应影响的大小顺序为：反应温度、反应时间、高氯酸用量、香草醛浓度。
确定槐花总皂苷最佳比色条件为（Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ２）：香草醛浓度７.0％、高氯酸用量１ｍＬ、反应温度６０℃、反应时间２０ｍｉｎ。
２．３标准曲线制作准确吸取标准溶液０．１、０．２、０．３、０．４、０．５ｍＬ于１０ｍＬ具塞试管中，６０℃水浴挥干溶剂后，加入新配制的７.0％香草醛－冰乙酸液０．２ｍＬ，高氯酸１ｍＬ，６０℃水浴加热２０ｍｉｎ，冷却，加冰乙酸４．８ｍＬ，混匀静置２０ｍｉｎ，测ＯＤ５４５ｎｍ，以６０％乙醇溶液做空白试验。
以吸光度为纵坐标，皂苷浓度为横坐标，绘制标准曲线。
回归方程为ｙ＝３．５４７０ｘ＋０．０１０９，Ｒ２＝０．９９８９。
２．４方法学考察２．４．１稳定性按标准曲线项下所述方法进行显色，分别放置不同时间后，测定吸光度，每个测定时间重复３次。
由图７可见，随着放置时间的延长，吸光度整体呈现下降趋势，６０ｍｉｎ以内吸光度变化不明显，１２０ｍｉｎ后吸光度值开始下降。
结果表明，样品在６０ｍｉｎ以内比较稳定，可以满足测定的需求。
２．４．２精密度取样品溶液５份，按标准曲线项下所述方法显色，测定吸光值分别为０．６７８、０．６９９、０．６８６、０．６５８、０．６９２，计算得出相对标准偏差（ＲＳＤ）为２．３２％，表明该方法精密度较高。
２．４．３重现性精确称取２ｇ粉碎后槐花样品５份，按“１．２．１”提取槐花总皂苷。
各取０．１２５ｍＬ，平行３次，按标准曲线法测定其吸光度。
结果显示ＲＳＤ仅为１．７６％，表明该方法重现性较好。
２．４．４加标回收率取０．１２５ｍＬ已知总皂苷含量的样品溶液７份于具塞试管中，加入０．４８ｍｇ／ｍＬ的标准品溶液５０μＬ，按标准曲线法于ＯＤ５４５处测定其吸光度。