3、核酸的提取及含量测定
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告核酸的提取与鉴定实验报告引言：核酸是生命的基础，它存在于细胞的核内，承载着遗传信息的传递和表达。
在现代生物学研究中，核酸的提取与鉴定是非常重要的实验步骤。
本实验旨在探究核酸提取的方法以及鉴定核酸的质量和纯度。
一、核酸提取方法核酸的提取方法有多种，本实验采用了常用的酚-氯仿法。
首先，将待提取的细胞或组织样品加入细胞裂解液中，通过离心将细胞碎片沉淀下来。
然后，使用酚和氯仿进行提取，酚层中含有核酸和脂质，氯仿层中含有蛋白质。
通过离心将酚层和氯仿层分离，进一步提取纯净的核酸。
二、核酸的鉴定1. 纯度检测核酸的纯度是指核酸溶液中核酸与其他杂质的比例。
常用的纯度检测方法有比色法和光谱法。
本实验中使用了光谱法，即通过测量核酸溶液的吸光度来评估其纯度。
纯度越高，吸光度比值（A260/A280）越接近1.8。
实验结果显示，所提取的核酸样品的纯度在可接受范围内。
2. 浓度测定核酸的浓度是指单位体积核酸溶液中核酸的含量。
浓度测定常用的方法有比色法和荧光法。
本实验中采用了比色法，即通过比较核酸溶液的吸光度与标准曲线的关系来确定核酸的浓度。
实验结果显示，所提取的核酸样品的浓度为Xμg/μl。
3. 碱基组成分析核酸的碱基组成是指核酸中腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）的相对含量。
碱基组成分析可以通过核酸测序技术来完成。
本实验中使用了Sanger测序技术，通过测序结果可以确定所提取核酸的碱基组成。
4. 凝胶电泳分析凝胶电泳是一种常用的核酸分析方法，可以根据核酸的大小和电荷来分离核酸。
本实验中使用琼脂糖凝胶电泳，将提取的核酸样品与DNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶槽中，通电分离。
通过观察凝胶上的DNA条带，可以初步判断核酸的大小和纯度。
结论：通过本实验，我们成功提取了核酸样品，并进行了一系列的鉴定实验。
通过纯度检测、浓度测定、碱基组成分析和凝胶电泳分析，我们确定了所提取核酸的质量和纯度。
核酸成分实验报告
一、实验目的1. 学习核酸的提取方法。
2. 鉴定核酸的组成成分，包括戊糖、磷酸和碱基。
3. 掌握比色法测定核酸含量的原理和方法。
二、实验原理核酸是生物体内的重要生物大分子，包括核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）。
核酸的组成成分主要包括戊糖、磷酸和碱基。
本实验通过提取动物组织中的核酸，鉴定其组成成分，并测定核酸含量。
1. 核酸提取：利用组织匀浆和酚-氯仿法提取动物组织中的核酸。
2. 组成成分鉴定：通过酸水解法使核酸水解，然后利用比色法分别测定戊糖、磷酸和碱基的含量。
3. 核酸含量测定：利用定磷法测定核酸中的磷含量，进而推算出核酸含量。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：组织匀浆器、离心机、分光光度计、电炉、水浴锅、试管、吸管、刻度管、容量瓶等。
2. 实验试剂：动物组织匀浆剂、酚、氯仿、异丙醇、NaCl、NaOH、HCl、磷酸二氢钾、钼酸铵、硫酸等。
四、实验步骤1. 核酸提取：（1）取动物组织匀浆剂，加入动物组织匀浆，匀浆后加入酚-氯仿混合液（1:1），充分振荡，静置分层。
（2）将上层含核酸的酚相转移至新试管中，加入等体积的氯仿，充分振荡，静置分层。
（3）将上层含核酸的氯仿相转移至新试管中，加入等体积的异丙醇，充分振荡，静置沉淀。
（4）弃去上清液，将沉淀用少量70%乙醇洗涤，弃去洗涤液，真空干燥，得到核酸粗制品。
2. 组成成分鉴定：（1）戊糖鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入苯酚-硫酸试剂，观察颜色变化。
（2）磷酸鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入钼酸铵试剂，观察颜色变化。
（3）碱基鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入硝酸钠试剂，观察颜色变化。
3. 核酸含量测定：（1）标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的标准磷溶液，测定其在特定波长下的吸光度，绘制标准曲线。
（2）样品测定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入钼酸铵试剂，测定其在特定波长下的吸光度，从标准曲线上查得磷含量，进而推算出核酸含量。
核酸的提取及其组成成分的鉴定3
钼兰（兰色）Байду номын сангаас钼兰（兰色）
ω-羟基 酮基戊醛 + 二苯胺 羟基γ-酮基戊醛 羟基
操作】 【操作】
1.分离抽提 1.分离抽提 4ml肝匀浆倒入刻度离心管 4ml肝匀浆倒入刻度离心管 肝匀浆倒入 立即加入2%三氯醋酸4ml, 立即加入2%三氯醋酸4ml, 2%三氯醋酸 搅匀 离心（3000转 分钟） 离心（3000转/分，3分钟） 倾去上清液 沉淀物中加入10%NaCl溶液4ml, 10%NaCl溶液 沉淀物中加入10%NaCl溶液4ml, 搅匀 置于沸水浴中加热 分钟， 加热5 置于沸水浴中加热5分钟，用玻棒不断搅拌
测定 4滴 滴 —— 6滴 滴 对照 —— 4滴 滴 6滴 滴
水解液 5% H2SO4 3，5二羟甲苯 ， 二羟甲苯 沸水浴加热数分钟后观察现象 沸水浴加热数分钟后观察现象
(p36） 离心机的使用(p36）
注意事项： 注意事项：
1、离心管必须先平衡后对称放入离心机； 离心管必须先平衡后对称放入离心机； 平衡 离心机 避免液体洒在离心机上；记住位置编号； 避免液体洒在离心机上；记住位置编号； 开机前，检查有无空套管； 2、开机前，检查有无空套管；开机后逐级 加速；如有异常，立即切断电源，排除故障； 加速；如有异常，立即切断电源，排除故障； 3、停机后，旋钮还原。应让离心机自然停 停机后，旋钮还原。 严禁未停转或开机运转时打开机盖。 转；严禁未停转或开机运转时打开机盖。
（1）磷酸的鉴定： 磷酸的鉴定： 取试管2 分别作为测定与对照。 取试管2支，分别作为测定与对照。
测定 水解液 5% H2SO4 钼酸胺试剂 氨基萘酚磺酸 静置数分钟后观察现象 10滴 滴 —— 5滴 滴 20滴 滴 对照 —— 10滴 滴 5滴 滴 20滴 滴
生物化学实验实训报告总结
一、实验背景与目的生物化学实验是生物学与化学交叉的一门实验科学，旨在通过实验手段探究生物体内化学反应的规律和机制。
本次实训报告旨在总结生物化学实验实训过程中的经验与收获，提升对生物化学实验原理和方法的理解，以及实验操作技能。
二、实验内容与过程本次实训涵盖了多个实验项目，包括但不限于以下内容：1. 蛋白质的制备与鉴定- 实验原理：利用硫酸铵盐析法从鸡蛋清中提取蛋白质，并通过比色法测定蛋白质含量。
- 实验步骤：取鸡蛋清，加入硫酸铵溶液，搅拌，离心，取上清液，加入考马斯亮蓝G-250染料，比色测定蛋白质含量。
2. 酶的活性测定- 实验原理：利用底物-酶反应动力学原理，通过测定在一定时间内底物的消耗量或产物的生成量来反映酶的活性。
- 实验步骤：配制底物溶液，加入酶样品，记录反应时间，测定底物消耗量或产物生成量。
3. 核酸的提取与鉴定- 实验原理：利用酚-氯仿法从细胞中提取DNA，通过紫外分光光度法测定DNA 含量。
- 实验步骤：取细胞样品，加入酚-氯仿溶液，振荡，离心，取上清液，测定DNA含量。
4. 生物大分子的电泳分离- 实验原理：利用生物大分子在电场中的迁移速率差异，通过电泳技术实现分离。
- 实验步骤：配制凝胶，加入样品，施加电压，观察电泳结果。
三、实验结果与分析1. 蛋白质的制备与鉴定- 通过硫酸铵盐析法成功提取蛋白质，比色法测定蛋白质含量为1.2mg/mL。
- 结果分析：实验结果表明，硫酸铵盐析法是一种有效的蛋白质提取方法，比色法可以准确测定蛋白质含量。
2. 酶的活性测定- 实验结果表明，在一定时间内，底物的消耗量与酶的活性呈正相关。
- 结果分析：实验结果表明，酶的活性可以通过底物消耗量来反映，为酶活性的研究提供了可靠的方法。
3. 核酸的提取与鉴定- 通过酚-氯仿法成功提取DNA，紫外分光光度法测定DNA含量为50ng/μL。
- 结果分析：实验结果表明，酚-氯仿法是一种有效的DNA提取方法，紫外分光光度法可以准确测定DNA含量。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定实验三酵母核糖核酸的提取及测定⽣物111 杨明轩1102040128⼀、研究背景及⽬的⽣物⼤分⼦通常指的是动物、植物和微⽣物进⾏新陈代谢是所产⽣的蛋⽩质、核酸等有机化合物。
它们不仅是⽣物科学⼯作者研究的重要对象，⽽且与化学、医学和⾷品等⼯业部门有着密切的关系。
核酸作为⽣命体常见⽽重要的⼤分⼦物质，它通过酶解或化学法⽔解可得到4个核苷酸，再经脱磷酸可得4种相应的核苷。
核酸构成遗传物质、传递遗传信息、构成核糖体和酶等⼤分⼦、合成多糖，与正常的⽣命活动密不可分。
医学家、诺贝尔奖得主富兰克研究认为，⼈体的⽼化是因其体内的核酸变质减少所致，可见核酸在⽣物正常发育中的重要性。
由于核酸在⽣命体中的物质构成、功能⽅⾯的作⽤，近100年来核糖核酸（RNA）被⼴泛应⽤与⾷品⼯业、医药⼯业和农业⽣产上。
在⾷品⼯业⽅⾯，RNA是开发新型⾷品调味品、保健品必不可少的原料；在医药⼯业上，RNA是⽣产治疗冠⼼病、肿瘤、⼼肌梗塞等疾病药物的原料；在农业上，RNA及其衍⽣物⼴泛⽤作农作物的⽣长促进物质。
⽽在这些领域，所需要的是并不是结构完整的RNA，⽽是其单体核苷酸。
因此，我们需要获得能够在⾷品医药卫⽣领域应⽤的核苷酸。
⽽核酸制品⽆⾮是利⽤其核苷酸或衍⽣物，因⽽⼯业上⽣产核酸的⽬的在于获得纯品核苷酸，以作为⽣产各种药物或测序分析等的原料。
在⼯业⽣产中，还常常考虑到利润和成本的问题。
因⽽实验室⾥提取核酸和将其放到⼯业⼤⽣产中是不同的。
⼯业⽣产对核酸制品的完整性要求不⾼，⽽注重其产率和成本。
考虑核苷酸分⼦的复杂结构，直接化学合成是⼗分困难的。
所以⽬前⼈们主要采取从⽣物体系中分离纯化RNA，将其⽔解并通过其他分离⼿段获得⼩分⼦核苷酸的⽅法。
本实验在于模拟⼯业⽣产的流程，探究提取酵母核糖核酸的⼯艺，掌握提取和测定酵母核糖核酸的⽅法，明确从⽣物体中提取RNA的思路和具体操作⽅法，了解产业开发的思路，体会⼯业化⽣产与实验室科研之间的不同。
动物组织和细胞中核酸的提取和测定_
实验九动物组织和细胞中核酸的提取和测定第一部分动物组织和细胞中DNA和RNA的提取【实验目的】学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法【实验原理】1.从动物组织和细胞中提取DNADNA存在于细胞核中。
提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。
本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。
核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。
这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。
2.从动物组织和细胞中提取RNARNA存在于细胞质及核中，是一种极易降解的核酸分子。
为了快速从细胞中分离完整的RNA，许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。
高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA 酶失活，使释放出的RNA不被降解。
细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，核DNA，蛋白质和细胞残片，通过酚，氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA最终与其它细胞组分分离开来。
【实验材料】1.实验器材研钵和研棒，匀浆机，橡胶刮棒，低温冷冻离心机，恒温水浴，宽口移液管，锤子，塑料袋，涡旋。
2.实验试剂(1)裂解缓冲液：10mmol/L Tris-Cl(PH8.0)，0.1mol/L EDTA(PH8.0)，0.5%(m/V)SDS，20µg/mg无Dnase 的胰RNase，裂解缓冲液的前三种成分可预先混合并于室温保存。
RNase在用前适量加入。
(2)溶液D(变性液)：4mol/L硫氰酸胍，25mmol/L柠檬酸钠.2H20，0.5%(m/V)月桂基肌酸钠，0.1mol/L β-巯基乙醇，将250g硫氰酸胍、0.75mol/L(PH7.0)柠檬酸钠17.6ml和26.4ml10%(m/V)月桂基肌酸钠溶于293ml水中.加入搅拌子于磁力搅拌器上65℃混匀,直至完全溶解。
核酸含量测定 - 定磷法
核酸含量测定 - 定磷法
核酸含量测定是指通过一种叫做定磷法的方法来确定样品中
核酸的含量。
定磷法是一种常用的生化分析方法，通过测定
样品中含有的无机磷的量，来间接推测核酸的含量。
具体操作步骤如下：
1. 取少量待测样品。
2. 将样品加入到酸性溶液中，使细胞壁和膜完全破裂。
3. 加入含有机溶液的磷试剂，使形成可溶性的金黄色磷酸铵
铬(VI)盐。
4. 根据反应生成的黄色物质的吸收特性，在特定波长下用分
光光度计测量吸光度。
5. 根据构建的标准曲线，确定吸光度与磷含量之间的关系，
从而推测样品中核酸的含量。
需要注意的是，定磷法只能测定样品中的总核酸含量，无法
区分DNA和RNA的含量。
如果需要分别测定DNA和RNA，需要采用其他特异性方法，比如荧光比色法或者核磁共振法等。
核酸的提取及含量的测定
地依酚试剂
RNA含量
2.0
40
2.0
80
2.0
2.0
2.0
2.0
0
2.0
120 160 200
各管混匀，置沸水浴25min，冷却，670nm空白管调零，测 各管吸光度
⒉ 计算
标准曲线测得的 × 15/0.5×匀浆总体积/4 × 1/肝重(g) RNA的μ g数
= 1.0g肝组织中含RNA的μ g数
⒋ 纯化RNA
核酸不溶于乙醇等有机溶剂，加2倍体积95%冰乙 醇沉淀RNA，使其与其他杂质分开，再加 1mL0.10mol/LNaOH溶解RNA，得到纯化的 RNA提取液
㈡ 实验操作
新鲜肝组织用冰生理盐水洗去表面的血液， 加0.14mol/LNaCl溶液制成20%匀浆
取匀浆4mL,3500rom离心 15min, 沉淀 上清液,倒入另一离心管,记录体积 加入等体积氯仿-异戊醇混 合液,剧烈震荡10min (用 吸管反复吹打至发白为 止),3500rpm,15min
㈠ 测糖法
核糖
浓HCl,FeCl3
△ 3H2O
糠醛+3,5-二羟甲苯→绿色化合物 （地依酚） 670nm比色
㈡ 实验操作
⒈ 标准曲线的绘制及样品测定
标 1 RNA标准 液 蒸馏水 0.4 1.6 2 0.8 1.2 准 3 1.2 0.8 管 4 1.6 0.4 5 2.0 0 0 2.0 0.5 1.5 空白管 测定管
核酸的提取及含量测定
• 核酸是具有重要生物化学功能的生物大分子， 根据其分子所含糖的种类不同，核酸分为两 大类，含核糖的称为核糖核酸(RNA)，含脱 氧核糖核酸的称为脱氧核糖核酸(DNA)， DNA是遗传信息的携带者，与生物的生长、 繁殖、遗传和变异有密切关系，RNA参与蛋 白质的生物过程，由于核酸具有如此重要的 生物学功能，对核酸的结果与功能的研究已 成为当前生物科学的重要课题之一。
实验十六动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定实验报告
实验十六：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定__实验报告实验十六：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定一、实验目的1.掌握动物组织中核酸的提取方法；2.了解核酸的基本组成成分；3.学会利用分光光度计测定核酸含量；4.通过实验，加强理论与实践的结合，提高实验技能。
二、实验原理核酸是生物体内的一种重要生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两种。
在动物组织中，DNA主要存在于细胞核中，而RNA主要存在于细胞质中。
核酸的提取通常采用酚-氯仿抽提法，其原理是利用两种物质的极性差异进行分离。
酚（Phenol）是一种弱酸，可与水形成氢键，但与氯仿（Chloroform）不溶，因此可以将酚相和水相分离。
在水相中，氯仿与水互不相溶，而酚与氯仿互溶，因此可以将酚从水相中去除。
通过多次抽提，可以将DNA和RNA有效分离。
三、实验步骤1.实验准备（1）实验材料：动物组织（肝脏、肌肉等）、研钵、离心管、移液器、枪头、称量纸、酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇、70%乙醇、0.15mol/L NaCl溶液、0.01mol/L Tris-HCl缓冲液（pH=7.0）、0.001mol/L EDTA溶液（pH=8.0）、0.04mol/L Na2HPO4溶液（pH=7.0）、0.04mol/L NaH2PO4溶液（pH=7.0）、双蒸水。
（2）设备仪器：冷冻高速离心机、漩涡振荡器、电子天平、烘箱、分光光度计。
2.实验步骤（1）样品制备：称取50-100mg动物组织，在研钵中研磨成粉末状，加入适量双蒸水，漩涡振荡器混匀。
将悬浊液转移到离心管中，以12000rpm离心10分钟，弃上清液。
用70%乙醇洗涤沉淀两次，4℃下8000rpm离心10分钟，弃上清液。
将沉淀物真空干燥后保存。
（2）核酸提取：在沉淀物中加入适量酚-氯仿混合液（体积比1:1），用枪头充分振荡混匀。
将混合液转移到离心管中，以12000rpm离心10分钟，将水相和酚相分离。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定（实验报告）
生物化学实验报告实验三酵母核糖核酸的提取及测定一、研究背景及目的RNA（核糖核酸）属酸性高分子化合物，是遗传信息的载体，由数量不等的核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成。
由于RNA在细胞内能够行使各种各样的生物功能，参与蛋白质生物合成、调控基因表达、作为核酶催化生化反应活性等，对维持生物体的正常发育有着重要作用。
RNA制剂是以RNA及其衍生物为材料，经加工制成的产品，主要包括从富含RNA的生物体中的提取物、自溶物或者降解产物加工制成的各种商品。
核糖核苷酸与其衍生物作为一大类R NA制剂，在生物体内有着诸多的功能，例如：ATP是细胞内的能量通用货币，cAMP作为第二信使传递胞外信号，CoⅠ、CoⅡ、CoA、FAD作为酶的辅因子在催化反应中起重要作用，UDP等作为单糖载体在糖代谢中起着重要作用等。
此外，鸟苷酸（GMP）和肌苷酸（IMP）是强力助鲜剂，胞苷酸（CMP）和尿苷酸（UMP）可作为生产治疗癌症、肝炎及冠心病等药物的原料；在化妆品中加入核酸或其水解物，可促进皮肤蛋白合成，达到养护皮肤的作用；在农业上，RNA降解物具有促进作物生长增产的作用，因此RNA制剂被广泛应用于医药、食品、农业、日化、环境保护等各产业，具有广阔的商业前景，形成了一大新兴产业。
[1]可见，无论是科研工作还是商业产品的生产过程，都需要大量的纯品RNA作为原料。
但是RNA的活化能较高，不易直接合成，而天然材料中的RNA往往与细胞内的其他化合物混在一起，故采用廉价、合适的手段分离纯化得到R NA就显得至关重要。
目前，人们已经摸索出来了多种多样的方法，这些方法各有特点，但其基本的思路和程序大致相似，基本战略也是有规律可循的。
本实验中，我们需要了解R NA制剂开发应用的前景和基本思路，掌握RNA分离纯化的设计思想及主要的操作细节，并以酵母为材料学习RN A提取和测定的基本操作方法。
核酸抽样工作原理
核酸抽样工作原理
核酸抽样工作原理是通过采集样本中的核酸分子，通过特定的处理步骤将核酸分子提取出来进行后续的分子生物学分析。
以下是核酸抽样的基本工作原理：
1. 采样：根据需要，采用合适的方法和工具采集样本，常见的样本包括血液、唾液、粪便、尿液等。
2. 细胞破碎：对于含有细胞的样本，首先需要将细胞破碎，以释放细胞内的核酸。
通常使用化学物质或机械方法破碎细胞。
3. 核酸提取：根据不同的样本类型和需要，选择合适的核酸提取方法。
常用的方法包括酚-氯仿提取法、磁珠提取法、硅胶
柱提取法等。
这些方法可以将核酸从其他非核酸成分分离出来。
4. 纯化和浓缩：提取到的核酸可能会含有其他杂质，需要进行纯化。
常用的纯化方法包括酒精沉淀和筛选PCR纯化试剂盒等。
此外，还可以通过浓缩方法提高核酸的浓度。
5. 质量评估：通过核酸电泳、分光光度计等方法对提取到的核酸进行质量评估，检测核酸的纯度和浓度。
6. 存储：将提取纯化后的核酸样品存储在适当的条件下，如低温、干燥和避光环境中，以保证其稳定性和长期保存。
核酸抽样工作原理是一系列步骤的组合，可以根据不同的实验目的和需求进行调整和优化，以获得高质量的核酸样品。
这些
提取和纯化的步骤对于后续的核酸分析，如PCR、测序等起到了关键作用。
实验十三 动物组织核酸的分离、鉴定和含量测定
二苯胺显色法原理
DNA在酸性条件下加热，其嘌呤碱与脱氧核糖间 的糖苷键断裂，生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶 核苷酸，而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成 ω-羟基-γ-酮基戊糖，与二苯胺试剂反应生成蓝色物 质，在595nm波长处有最大吸收。DNA在 40~400μg范围内，光吸收与DNA的浓度成正比。 在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。
DNA标准曲线的制作和样品测定
管 试 剂 0 对照 DNA标准溶液,ml 0.0 蒸馏水，ml 二苯胺试剂,ml OD595 2.0 4.0 1 0.4 1.6 4.0 2 0.8 1.2 4.0 3 1.2 0.8 4.0 4 1.6 0.4 4.0 5 2.0 0 4.0 号 样品1 2.0 0 4.0 样品2 2.0 0 4.0
动物组织核酸的分离纯化及鉴定
1. 猪肝DNA和RNA的分离 2. 核糖和脱氧核糖的显色实验
3. 核酸的定量和纯度测定
核酸是一类生物高分子化合物，存在于一切生物体内， 是组成细胞的重要成分。它以与蛋白质结合的形式—— 核蛋白存在于细胞中，是生命的基本物质之一，具有储 存、复制生物体遗传信息的功能，也是蛋白质合成不可 缺少的物质，因此它对于生物体的生长、遗传、变异等 现象起着重要的决定作用。核酸分为两大类——核糖核 酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA) 。 核酸完全水解产生嘌呤和嘧啶等碱性物质、戊糖（核糖 或脱氧核糖）和磷酸的混合物。核酸部分水解则产生核 苷和核苷酸。每个核苷分子含一分子碱基和一分子戊糖， 一分子核苷酸部分水解后除产生核苷外，还有一分子磷 酸。核酸的各种水解产物可用层析或电泳等方法分离鉴 定。
DNA和RNA的结构
组成核酸的戊糖有两种。DNA所含的糖为 β-D2-脱氧核糖；RNA所含的糖则为β-D-核糖。
测定核酸含量实验报告
一、实验目的1. 掌握定磷法测定核酸含量的原理与方法。
2. 学习核酸提取、纯化及定量测定的基本操作。
3. 了解实验数据的处理与分析方法。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，由核苷酸单元组成。
本实验采用定磷法测定核酸含量，其原理如下：1. 核酸分子中含有一定比例的磷，RNA中含磷量为10%，DNA中含磷量为8%。
2. 用强酸将核酸分子中的有机磷消化成为无机磷，使之与钼酸铵结合成磷钼酸铵。
3. 在还原剂存在的情况下，Mo6+被还原成Mo4+，与试剂中的其他MoO42-结合成Mo(MoO4)2或Mo3O8，形成蓝色化合物，称为钼蓝。
4. 在一定浓度范围内，蓝色的深浅与磷含量成正比，可通过比色法测定核酸含量。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：- 粗核酸- 克氏烧瓶（50ml）- 小漏斗（4cm）- 容量瓶（100ml、50ml）- 吸管- 试管（X18cm）- 722型或XX型分光光度计- 电炉- 水浴锅2. 实验试剂：- 标准磷溶液：将磷酸二氢钾于100℃烘至恒重，准确称取溶于少量蒸馏水中，转移至500ml容量瓶中，加入5ml 5mol/L硫酸溶液及氯仿数滴，用蒸馏水稀释至刻度，此溶液每毫升含磷400μg。
临用时准确稀释20倍。
- 定磷试剂：17%硫酸：17ml浓硫酸缓缓加入83ml水中。
2%钼酸铵溶液。
四、实验步骤1. 核酸提取：取一定量的粗核酸，加入适量的水，用玻璃棒搅拌，使核酸充分溶解。
然后加入一定量的强酸，使核酸分子中的有机磷消化成为无机磷。
2. 核酸纯化：将消化后的核酸溶液通过离心、沉淀等方法进行纯化。
3. 核酸定量测定：a. 准备标准曲线：取一定量的标准磷溶液，分别加入定磷试剂，制备标准曲线。
b. 样品测定：取一定量的纯化后的核酸溶液，加入定磷试剂，制备样品溶液。
在分光光度计上测定样品溶液的吸光度，通过标准曲线计算出样品中核酸含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：根据标准磷溶液的浓度和吸光度，绘制标准曲线。
关于核酸的实验报告
一、实验目的1. 掌握核酸提取、纯化的基本原理和操作方法。
2. 了解紫外分光光度法测定核酸含量的原理和方法。
3. 学会使用核酸纯化试剂盒和分光光度计。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA。
DNA主要存在于细胞核中，而RNA则主要存在于细胞质中。
核酸提取、纯化是研究核酸结构、功能的基础。
1. 核酸提取：利用细胞壁和细胞膜的破坏，将核酸从细胞内释放出来。
2. 核酸纯化：通过去除杂质，提高核酸的纯度。
3. 核酸定量测定：利用紫外分光光度法，根据核酸的吸光度与浓度的关系，计算核酸的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌、Tris-HCl缓冲液、NaCl溶液、SDS溶液、酚/氯仿/异戊醇混合液、乙醇、无水乙醇、DNA/RNA提取试剂盒、核酸纯化柱等。
2. 实验仪器：高速离心机、分光光度计、移液器、漩涡混合器、PCR仪等。
四、实验步骤1. 核酸提取（1）将大肠杆菌接种于LB培养基中，37℃培养过夜。
（2）取适量菌液，加入Tris-HCl缓冲液和NaCl溶液，混匀。
（3）加入SDS溶液，混匀。
（4）加入酚/氯仿/异戊醇混合液，剧烈振荡，静置。
（5）取上层水相，加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，剧烈振荡，静置。
（6）取上层水相，加入2倍体积的无水乙醇，混匀，静置。
（7）离心，弃上清液，用70%乙醇洗涤沉淀，干燥。
2. 核酸纯化（1）将干燥的核酸沉淀溶于适量TE缓冲液中。
（2）将溶液加入核酸纯化柱中，用TE缓冲液洗柱。
（3）用适量无水乙醇洗柱，收集洗脱液。
3. 核酸定量测定（1）取适量核酸溶液，用紫外分光光度计测定其在260nm和280nm处的吸光度。
（2）根据核酸的摩尔吸光系数（A260=50μM^-1·cm^-1），计算核酸的浓度。
五、实验结果与分析1. 核酸提取实验成功提取了大肠杆菌的核酸，且纯度较高。
2. 核酸纯化实验成功纯化了核酸，且纯度较高。
3. 核酸定量测定实验测定了核酸的浓度，结果如下：A260 = 0.6A280 = 0.5核酸浓度= 0.3 μg/μL六、实验结论1. 实验成功提取、纯化了大肠杆菌的核酸。
实验三酵母核糖核酸的提取及组分鉴定一目的了解并掌握稀碱
实验五酵母核糖核酸的提取及组分鉴定一、实验目的1、了解并掌握稀碱法提取核糖核酸（RNA）的原理和方法；2、掌握苔黑酚显色法鉴定RNA组分的基本原理和操作方法。
二、实验原理酵母中含有丰富的RNA，含量达2.67%~10.0%，而DNA含量很少，仅为0.03%~0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
提取制备RNA的方法较多，一般有苯酚法，去污剂法、浓盐法和稀碱法等。
其中苯酚法是实验中最常见的方法。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
本实验用稀碱法提取RNA。
先用稀碱（本实验用0.04mol/L的NaOH溶液）使酵母细胞裂解，RNA可溶于稀碱溶液，在碱性提取液中加入酸性乙醇可使核糖核酸沉淀出来，由此即可得到RNA的粗制品。
RNA含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加入硫酸煮沸可使RNA水解，从水解液中可用定糖、定磷和加银沉淀等方法测出上述组分的存在。
三、仪器、试剂和材料1、仪器（1）100mL烧杯1个；（2）移液管：2.0mL1个，5.0mL1个，1.0mL4个；（3）量筒：10mL1个，50mL1个；（4）试管：15mL4个；（5）恒温水浴锅（6）离心机；(7）布氏漏斗；（8）抽滤瓶；（9）研钵；（10）滴管；（11）洗耳球；（12）电子天平。
2、试剂（1）0.04mol/L的NaOH溶液；（2）95%乙醇；（3）乙醚；（4）1.5mol/L的硫酸；（5）浓氨水；（6）0.1mol/L的硝酸银；（7）酸性乙醇溶液：0.3mL浓盐酸加入30mL乙醇中；（8）三氯化铁浓盐酸溶液：2mL10%的三氯化铁溶液加到400mL浓盐酸中。
（9）苔黑酚乙醇溶液：称取6g苔黑酚溶于100mL 95%乙醇中（可在冰箱中保存1个月）；（10）2.5%钼酸铵溶液3、材料干酵母粉四、操作步骤1、酵母RNA 提取称2g干酵母粉置于研钵中，加少许石英砂和2mL0.04mol/LNaOH溶液，在研钵中充分研磨，然后将匀浆液转移到100mL的烧杯中，再用8mL0.04mol/LNaOH溶液分两次洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中，沸水浴上加热30min，经常搅拌。
核酸采样提取实验报告
核酸采样提取实验报告引言核酸是生物体中重要的遗传物质，对于研究生物学和医学非常关键。
核酸提取是研究核酸功能、结构和遗传变异的基础工作。
本实验旨在通过核酸提取实验，从细胞中提取纯化核酸，为后续的实验研究提供可靠的物质基础。
材料与方法材料- 红血球样品- 实验室试剂：细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、氯仿、异丙醇、等温RNA扩增试剂盒等。
方法1. 取一定量的红血球样品，进行室温区域的处理。
2. 使用细胞裂解缓冲液将样本细胞裂解。
3. 使用蛋白酶K消化蛋白质，破坏蛋白质酶，标记物质间的非共价键。
4. 加入等温RNA扩增试剂盒，进行核酸扩增反应。
5. 使用异丙醇沉淀核酸蛋白质，通过离心分离纯化核酸。
6. 将沉淀的核酸用氯仿提取，并进行洗涤和纯化。
7. 使用实验室的分析设备检测纯化后的核酸浓度和纯度。
结果与讨论我们成功进行了红细胞样品的核酸提取实验，并获得以下结果：1. 样品细胞经过裂解后，观察到细胞内核酸被释放，溶液呈现浑浊状态。
2. 经过蛋白酶K酶处理后，观察到蛋白质被消化，溶液变得透明。
3. 经过等温RNA扩增反应，观察到核酸扩增产物呈现明亮带状，表示核酸的扩增成功。
4. 经过异丙醇沉淀和氯仿提取后，观察到沉淀物中含有丰富的核酸。
5. 使用分析设备检测核酸浓度和纯度时，获得核酸浓度为X ng/μL，纯度（OD260/OD280）为X。
根据以上结果，我们可以得出结论：本实验成功从红细胞样品中提取到了纯化的核酸。
通过核酸的浓度和纯度检测，可以确保提取到的核酸质量良好，可以作为后续实验的可靠物质基础。
然而，在实验过程中，我们也发现了一些问题：1. 在样品处理过程中，需要严格避免污染和RNA酶的介入，以确保提取到的核酸的纯度。
2. 实验操作中需要注意溶液配制的准确性，以免对提取结果产生干扰。
3. 核酸浓度和纯度的检测结果对实验结果的准确性至关重要，因此在操作过程中需要仔细操作。
结论本实验成功进行了核酸提取实验，并获得了红细胞样品中的纯化核酸。
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一、核酸提取
㈠ 原理 ⒈ 破碎细胞：
匀浆、超声震荡、酶解等，因动物组织含有核 酸酶，在一定温度下，该酶可被Ca2+,Mg2+等激活， 为避免核酸酶对核酸的水解，与核酸提取液中加入 适量螯合剂（如EDTA，柠檬酸等），除去这些离子， 整个过程在低温下进行。
⒉ 提取核糖核蛋白(RNP)
在生物体内核酸多以核蛋白的形式存在于组 织中，根据核糖核蛋白(RNP)和脱氧核糖核蛋白 (DNP)在不同浓度电解质溶液中溶解度明显差别进 行分离。故用0.14mol/LNaCl溶解提取核糖核蛋白。 核蛋白 0.14mol/LNaCl 1.0mol/LNaCl
㈡ 实验操作
⒈ 标准曲线的绘制及样品测定
标 1 RNA标准液 蒸馏水 0.4 1.6 2 0.8 1.2 准 3 1.2 0.8 管 4 1.6 0.4 5 2.0 0 0 2.0 0.5 1.5 空白管 测定管
地依酚试剂 2.0
RNA含量 40
2.0
80
2.0
120
2.0
160
2.0
200
2.0
鉴定或定量测定 沉淀(RNA),先用1mL0.1MNaOH溶解， 后用蒸馏水定容至15mL
二、RNA定量测定
RNA
水解
强酸
含氮碱基+戊糖+磷酸
测定三者中的任何一种成分即可计算核酸的含量， 有三种方法：测糖法、测磷法、紫外吸收法
㈠ 测糖法
核糖
浓HCl,FeCl3
△ 3H2O
糠醛+3,5-二羟甲苯→绿色化合物 （地依酚） 670nm比色
沉淀
上清液,倒入另一离心管,记录体积 加入等体积氯仿-异戊醇混 合液,剧烈震荡10min (用 吸管反复吹打至发白为 止),3500rpm,15min
上清液,倒入另一离心管中,记录体积
加2倍体积95%冰乙醇玻璃 棒搅拌，3500rpm15min 鉴定或定量测定 沉淀(RNA),先用1mL0.1MNaOH溶解， 后用蒸馏水定容至15mL
0
2.0
各管混匀，置沸水浴25min，冷却，670nm空白管调零，测各 管吸光度
⒉ 计算
标准曲线测得的 × 15/0.5×匀浆总体积/4 × 1/肝重(g) RNA的μ g数
= 1.0g肝组织中含RNA的μ g数
新鲜肝组织用冰生理盐水洗去表面的血液， 加0.14mol/LNaCl溶液制成20%匀浆
取匀浆4mL,3500rom离心15min,
沉淀
上清液 加入等体积氯仿-异戊醇混 合液,剧烈震荡10min (用 吸管反复吹打至发白为 止),3500rpm,15min
上清液 加2倍体积95%冰乙醇玻璃 棒搅拌，3500rpm15min
⒋ 纯化RNA
核酸不溶于乙醇等有机溶剂，加2倍体积95%冰乙 醇沉淀RNA，使其与其他杂质分开，再加 1mL0.10mol/LNaOH溶解RNA，得到纯化的RNA提取 液
㈡ 实验操作
新鲜肝组织用冰生理盐水洗去表面的血液， 加0.14mol/om离心15min,
核酸的提取及含量测定
• 核酸是具有重要生物化学功能的生物大分子， 根据其分子所含糖的种类不同，核酸分为两 大类，含核糖的称为核糖核酸(RNA)，含脱 氧核糖核酸的称为脱氧核糖核酸(DNA)，DNA 是遗传信息的携带者，与生物的生长、繁殖、 遗传和变异有密切关系，RNA参与蛋白质的 生物过程，由于核酸具有如此重要的生物学 功能，对核酸的结果与功能的研究已成为当 前生物科学的重要课题之一。
RNP
DNP
溶解度大
溶解度小 （仅为水中1%）
溶解度小
溶解度大 (比在水中大2倍)
• 此外，两种核蛋白溶解度与pH值有关 RNP：pH2.0-2.5时最低 DNP：pH4.2时溶解度最低 故调节溶液pH也可促使两者分离，将 0.14mol/LNaCl的pH为4，使两者分开。
⒊ 去除蛋白质
用蛋白质变性剂或水解使RNA与蛋白质分离，故加 入蛋白质变性剂如氯仿、异戊醇、SDS、热酸等， 使蛋白质变性沉淀，从而核酸和蛋白质分离，经离 心后溶液分为三层：上中下分别是核酸溶液、变性 蛋白质凝胶和氯仿