高效液相色谱法研究铝形态的可靠性
高效液相色谱法测定食品中11种合成着色剂及其铝色淀
A理但紐验-佗字分册PTCA(PART B: CHEM. ANAL.)试验与研究DOI : 10.11973/lhjy-hx202012002高效液相色谱法测定食品中11种合成着色剂及其铝色淀黄丽娟'，李道霞；，余晓琴「，李 双2,陈树兵：（1.四川省食品药品检验检测院.成都610097； 2.宁波海关技术中心，宁波315040）摘 要：食晶样品（约2.0 g ）经20 mL 石油瞇振荡除油1.0 min,采用0.1 mol • 氢氧化钠溶 液作为11种合成着色剂及其铝色淀的溶解液，采用高效液相色谱法测定样品溶液中11种合成着色剂及其铝色淀的含量。
以Waters XBridge-C **色谱柱为分离柱，采用0.02 mol • 1乙酸鞍溶液收稿日期：2020-07-30基金项目：国家卫健委食品安全国家标准立项（spaq-2016-174）；浙江省基础公益研究计划项目（LGN18B050002）；原宁波岀入境检验检疫局科技研究项目（甬K04-2017）作者简介：黄丽娟，工程师，硕士研究生，研究方向为食品安全 分析* 通信联系人。
****************和甲醇以不同比例混合的溶液为流动相进行梯度洗脱，用二极管阵列检测器进行测定。
11种合成着色剂及其铝色淀的质量浓度均在0.2〜5.0 mg • 1一7内与其对应的仪器响应值呈线性关系，测定下限（10S/N ）均为0.5 mg • kg 1 o 以空白食品样晶为基体进行加标回收试验，所得回收率为61.0%〜115 %,测定值的相对标准偏差（”=6）为0.50%〜13%。
关键词：高效液相色谱法；合成着色剂；铝色淀；食品中图分类号：0652.63 文献标志码：A 文章编号：1001-4020（2020）12-1254-07合成着色剂及其铝色淀是一类重要的食用色 素，其色彩鲜亮、不易褪色，且价格低廉，尤其受到不法商贩的青睐山。
其中，铝色淀是合成着色剂和铝离子的络合物，有别于水溶性色素，着色力及稳定性更强，在大多数溶剂中能保持粒子状和不溶性.当 pH 为3.5-9.5时其相对稳定，在这个范围以外.色素与铝键会受到破坏，色淀才会解体分离。
高效液相色谱法
2．高效液相色谱法与气相色谱法的比较
（l）气相色谱法：分析对象仅占有机物总数的20％。 高效液相色谱法：分离和分析占有机物总数近80％的那些 高沸点、热稳定性差、离子型化合物及摩尔质量大的物质。
（2）气相色谱：流动相与组分不产生相互作用力，仅起运 载作用。 高效液相色谱法：流动相对组分可产生一定亲和力，并参与 固定相对组分作用的剧烈竞争，流动相对分离起很大作用， 相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数；
高压输液泵应符合下列要求：密封性好，输出 流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速 更换溶剂及耐腐蚀。
高压输液泵
常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。 恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱 柱引起阻力变化无关； 恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力 而变化，故保留时间的重视性差。 目前主要使用恒流泵，又称机械泵，它又分机械注射泵和机械 往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。
（四）检测系统
两种基本类型的检测器： 溶质型检测器：它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应， 属于这类检测器的有紫外、荧光、安培检测器等。 总体检测器：它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应， 属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。 （l）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3）示差折光率检测器 （4）电化学检测器
高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography，HPLC
§1
概 述
Introduction
一、高效液相色谱法概述
高效液相色谱法（HPLC）吸取了气相色谱与经典液相色谱优 点，并用现代化手段加以改进。
引入了气相色谱的理论;
在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器; 具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点;
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告高效液相色谱法，基本原理为影响柱效的主要因素是涡流扩散和传质阻抗。
分为液固吸附色谱法，流动相为液体，固定相是固体吸附剂；液分配色谱法，固定相几乎全是化学键合硅胶，又称化学键合相色谱法等。
（二）塔板理论：塔板理论方程式（高斯方程式）：理论塔板式数：理论塔板高度：（三）速率理论： h=a+b/u+cu影响塔板高度的因素：1、涡流扩散 2、纵向扩散 3、传质阻抗二、气相色谱仪：（1）色谱柱：固定相与柱管组成。
填充柱、毛细管柱；分配柱、吸附柱（2）紧固液：低沸点的液体，操作方式下为液态。
甲基硅油、聚乙二醇等选择原则：按相似性、按主要差别、按麦氏差别选择。
（3）载体：化学惰性的多孔性微粒（4）毛细管色谱柱：开管型、填充型（5）检测器：1、浓度型检测器：热导检测器和电子捕捉检测器2、质量型检测器：氢焰离子化检测器中国药典对气相色谱规定：除检测器种类、紧固液品种及特定选定的色谱柱材料严禁任一修改外，其他均可适度发生改变，色谱图于30min内记录完。
第四节高效液相色谱法1、基本原理：影响柱效的主要因素就是涡流蔓延和传质电阻。
分类：1、液固吸附色谱法：流动相为液体，固定相是固体吸附剂。
2、液——液分配色谱法：紧固二者几乎全系列就是化学键再分硅胶，又称化学键再分相色谱法。
按固定相和流动相的极性2又分：正相色谱法和反相色谱法正相色谱法：流动二者极性大于紧固二者极性的色谱法。
用作拆分溶有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用作所含相同官能团物质的拆分。
极性强组分先流入反相色谱法：……………大于……………………… 用于分离非极性至中等极性的分子型化合物2、高效率液相色谱仪：1、高压输液泵2、色谱柱3、进样阀4、检测器：紫外稀释检测器、荧光检测器、热法折光检测器、电化学检测中国药典对高效液相色谱法规定：除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意更改外，其余均可适当改变，色谱图于20min内记录完毕。
第五节色谱系统适用性试验和定量分析方法一、系统适用性试验1、色谱柱的理论板数：2、分离度：应大于1.53、重复性3、拖尾声因子：0.95-1.05之间二、定量测定法：1、内标法加较正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量2、外标法测量供试品中某个杂质或主成分含量3、加较正因子的主成分自身对照法不加较正因子的主成分自身对照法。
高效液相色谱法测定食品中铝元素的含量
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＡｌｕｍｉｎｕｍ ｉｎＦｏｏｄｂｙＨｉｇｈ ＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＬＩＵ Ｙｕ，ＨＡＮ Ｊｉａｊｉｎｇ，ＰＡＮ Ｃｈｕｎｊｉａｏ，ＧＵＯ Ｚｈｏｎｇｑｉｕ，ＷＵ Ｈａｏｔｉａｎ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＬｉａｏｎｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００３６，Ｃｈｉｎａ）
ｓｅｅｄｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＢｏｔｈｔｈｅａｌｕｍｉｎｕｍ ａｎｄｔｈｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆ８ｈｙｄｒｏｘｙｑｕｉｎｏｌｏｎｅｈａｖｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｄｅｔｅｃｔｅｄｔｈｏｕｇｈｔｈｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏ ｃａｌｃｕｌａｔｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｍｅｌｏｎｓｅｅｄｓ，ｗｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄａｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｂａｓｅｄｏｎａｌｕｍ ｓｔａｎｄａｒｄ．
１ 材料与方法
１１ 仪器设备 Ａｇｉｌｅｎｔ１２００（美国安捷伦公司）；ＶＧＴ－１７３０ＴＤ（深圳市兴宏业投资有限公司）．
１２ 试剂 明矾 ＫＡｌ（ＳＯ４）２·１２Ｈ２Ｏ（天津博迪化工股份有限公司）；十二烷基硫酸钠 ＳＤＳ（国药集团化学试
剂有限公司）；８－羟基喹啉 Ｏｘｉｎｅ（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）；ＢＥＳ（北京鼎国昌盛生物 技术有限责任公司）． １３ 样品选择
摘 要：目的 建立食品中铝的高效液相色谱含量测定方法，测定瓜子中铝的含量．方法 铝与 ８－羟基喹啉 的衍生物具有荧光吸收，可在高效液相色谱仪的荧光检测器上检测．以明矾标准品外标法建立标准曲线，从而 计算瓜子中铝的含量．结果 高效液相色谱法测定铝元素含量的精密度（０５４１％）、重复性（０４３７％）、稳定 性（０５５０％）的 ＲＳＤ值均小于 １％，且其加标回收率良好．同时检测过程中挑选的真心瓜子，洽洽瓜子及散装 瓜子 ２均未检出铝成分，而散装瓜子 １中铝的含量则超出国家标准．结论 采用高效液相色谱法分析并测定 瓜子中铝的含量准确且易操作，为食品中铝元素含量测定提供有效的检测方法． 关键词：食品；铝；高效液相色谱法；８－羟基喹啉 中图分类号：Ｏ６５５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００５８４６（２０１８）０３０２６３０５
《中国药典》2015版通则0512高效液相色谱法
通则0512高效液相色谱法高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。
超高液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
（1）色谱柱反相色谱柱：以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径和长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。
（2）检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
高效液相色谱分析
高效液相色谱分析高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于化学、生物学、环境科学等领域的分析方法。
它以液相为载流相，通过对样品溶液进行分离、检测和定量分析。
HPLC基于物质在固定相表面上的分配和吸附性质的差异，通过调节流动相的组成、浓度和温度等参数，实现对样品组分的分离和定量。
高效液相色谱技术具有以下几个优点。
首先，它可以对几乎任何类型和性质的化学物质进行分析。
不同于气相色谱仅适用于气体和挥发性液体的分析，HPLC可以处理各种样品类型，包括有机化合物、小分子药物、天然产物、生物大分子等。
其次，HPLC分析具有高度的灵敏性和选择性。
通过使用不同类型和特定的固定相材料，可以实现对样品成分的高效分离和检测。
此外，HPLC具有较高的分辨率和重现性，使得得到准确和可靠的分析结果成为可能。
高效液相色谱的基本原理是在不同固定相表面上，样品分子在溶剂中以不同的速率分配和吸附。
为了实现对样品的有效分离，需要选择合适的固定相、流动相和检测方法。
固定相通常是多孔性颗粒，如硅胶、气相色谱柱填料等。
流动相是溶解样品的溶剂，其组成和性质对分析结果具有重要影响。
为了实现高效的分离和检测，常常需要优化流动相的组成和流速等参数。
检测方法通常使用紫外可见吸收光谱检测，通过测量样品在紫外可见光范围内的吸收强度，可以得到定量信息。
高效液相色谱可以应用于各种分析问题。
例如，在药物研发和质量控制中，HPLC可以用于判断药物纯度、测定活性成分浓度等。
在环境分析方面，HPLC可以用于检测水中的有机物、重金属离子等污染物。
在食品安全和质量监控中，HPLC 可以用于检测食品中的添加剂、农药残留物、重金属等有害物质。
在生物医学研究中，HPLC可以用于分离和定量分析生物样品中的代谢产物、蛋白质、核酸等。
为了实现高效的色谱分离和定量分析，HPLC方法的优化是至关重要的。
首先，需要选择合适的固定相材料、柱尺寸和填充方式等。
简述测定TBA的方法原理
简述测定TBA的方法原理TBA（三丁醇铝）是一种广泛用于工业生产的有机化合物，常用作添加剂、溶剂或催化剂。
测定TBA的方法原理主要包括气相色谱法和高效液相色谱法。
以下将针对这两种方法原理进行详细介绍。
首先是气相色谱法。
该方法是通过气相色谱仪对样品中的TBA进行定性和定量分析，其原理主要利用了气相色谱的特性。
首先，样品需要经过适当的提取和净化处理，比如采用固相微萃取或气相色谱前处理方法来提取TBA。
然后将经过处理的样品注入气相色谱仪的进样口，通过载气（常用的是氮气或氦气）的推动下，样品中的TBA被分离并进入色谱柱。
色谱柱通常是填充有固定相的管状结构，TBA在色谱柱中会随着载气的推动逐渐与固定相作用并发生分离。
最后，通过检测器对色谱柱输出的信号进行检测和分析，便可获得TBA的定性和定量结果。
其次是高效液相色谱法。
该方法原理与气相色谱法有所不同，主要是利用了高效液相色谱仪进行样品分析。
在高效液相色谱法中，样品中的TBA需要先经过适当的提取和净化处理，比如采用液相色谱前处理法或萃取法来提取TBA。
然后将提取后的样品通过色谱柱进样口输入高效液相色谱仪内部，通过高压泵将样品送入固定相填充的色谱柱。
TBA在色谱柱中随着溶剂流动逐渐与固定相相互作用并发生分离。
最后，通过检测器对色谱柱输出的信号进行检测和分析，可以获得TBA的定性和定量结果。
无论是气相色谱法还是高效液相色谱法，都可以通过对浓度已知的TBA标准品进行测量，建立标准曲线来定量分析未知样品中的TBA含量。
在测定过程中需要注意选择适当的色谱柱、检测器和分析条件，并严格控制实验操作流程，以确保获得准确可靠的分析结果。
最后需要指出的是，无论是气相色谱法还是高效液相色谱法，都可以通过耦合其他先进技术或方法来提高对TBA的测定灵敏度和选择性，比如质谱联用、核磁共振等。
同时，对于特定分析要求或复杂样品，还可以结合前处理技术、样品富集技术等来增强测定的准确性和灵敏度。
日本药典中心静脉营养输液中微量铝元素的检出方法介绍解读
发布日期20090728栏目化药药物评价>>化药质量控制标题日本药典中心静脉营养输液中微量铝元素的检出方法介绍作者张星一部门审评三部正文内容近年来,随着一些重大药害事件的逐渐披露,公众对于注射剂的质量问题越来越关注。
药品监管部门也出台了一些列措施来提高注射剂的安全性控制标准。
在国外出现了使用TbrN制剂的肾功能障碍患者出现铝毒性(中枢神经系统或骨)的报道[1],日本药典附录中收载了中心静脉肠外营养输液(Totalbrarenteral Nutrition, TbrN) 中微量铝元素的测定方法的内容。
从2004年7月起[2],FDA要求生产厂家对大多数肠外营养液中的铝进行定量。
大容积的注射用溶液,如葡萄糖、氨基酸、脂肪乳和注射用蒸馏水,要求其铝含量低于25μg/L;但对小溶剂的注射用溶液,如电解质、维生素和微量元素,则没有规定铝含量的上限。
肠外营养液中的铝肠外营养液中并没有补入铝的要求,其中存在的铝属于一种药品污染[3]。
鉴于目前国内营养输液在外科术后康复和肿瘤辅助治疗中应用越来越广泛,而相关“微量铝污染”的质量控制手段尚未见报道,故将《日本药局方第十五改正版》(日文版)(以下简称:日本药典)中“参考情報:16 中心靜脈栄養剤中の微量アルミニウム試験法”相关内容翻译介绍,供国内同行参考,以进行相关的防治和检控工作。
一、日本药典微量铝检测方法[1]现有的微量铝分析方法主要有:1)荧光检测HbrLC法,2)电感耦合等离子体发射光谱法(ICbr-AES)和3)ICbr-MS等。
荧光检测HbrLC法的检测灵敏度约为1μg/L(ppb)。
如使用特别的附属装置ICbr-AES法和ICbr-MS法可以得到更高的检测灵敏度。
由于TbrN是营养剂,含有糖类、氨基酸类、电解质等多样的营养成分,组成很复杂。
由于这些成分对测定有着很大的影响,所以要特别注意根据产品的情况选择合适的分析方法。
考虑到作为分离分析方法的高效液相色谱目前应用很普及,日本药典选用了使用2种荧光性螯和试剂的荧光检测HbrLC法作为TbrN微量铝检测方法:1)羟基喹啉(quinolinol)螯合物法,和2)荧光镓(lumogallion)螯合物法。
高效液相色谱技术分析
高效液相色谱技术分析一、概述高效液相色谱技术是目前分析化学中非常重要的一种分离、检测方法，其应用范围广泛，可以用于药物研究、食品安全、环境污染、生物化学等多个领域。
本文将对高效液相色谱技术进行详细解析，包括其基本原理、仪器设备、应用实例等方面的内容。
二、高效液相色谱技术的基本原理高效液相色谱技术本质上是一种液相色谱技术，其最大的特点是加入了固定化液相。
在传统的液相色谱技术中，液相是直接涂覆在固定相上的，但在高效液相色谱技术中，为了提高色谱分析的效率，常常采用小粒径、高孔径的固相材料作为载体，然后用一定的方法将液相固定在上面。
这种固相材料具有很好的化学稳定性、较大的表面积，可以大大提高分离的精度和速度。
高效液相色谱技术的基本原理是：将样品（物质混合物）经过预处理后，加入到经过固定化液相的柱子中，然后进行溶剂梯度洗脱。
不同成分会根据吸附力、分配系数等量而移动到固相柱某个位置处，从而完成分离和检测的过程。
三、高效液相色谱技术的主要仪器设备1. 高效液相色谱柱高效液相色谱柱是高效液相色谱仪的核心器件，其主要作用是分离洗脱样品中的组分。
市面上常见的柱子材料主要有C18、C8、C4等不同类型，根据分析需要选择不同类型的柱子可以获得更好的分离效果。
同时，考虑柱子长度、直径等因素也是仪器的主要参数。
2. 色谱系统高效液相色谱系统由进样器、泵、检测器、色谱柱等多个部分组成，其中，泵的作用是将流动相压力输送到柱子中，进样器用于自动或手动进样，检测器用于检测分离的组分及其浓度。
同时，为了避免进样到色谱柱之前的样品混合和体积效应，需加滤器、混合器等附件。
3. 检测器高效液相色谱检测器常见的有UV-Vis分光光度计、荧光检测器、光散射检测器等多种类型，这些检测器可以用于分析化学、生物化学等领域。
四、高效液相色谱技术的应用实例1. 分析药物高效液相色谱技术可以用于药物分析，如对丙磺舒钠等药物分析可采用该技术，可获得极好的分离效果和灵敏度。
分析化学高效液相色谱法
分析化学高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种分离和测定化学物质的重要分析方法，具有高分离效率、高灵敏度、宽线性范围和广泛的应用范围等优点。
下面将从仪器原理、工作原理和应用等方面对HPLC进行详细分析。
一、仪器原理：HPLC仪器主要由溶剂系统、进样器、柱温箱、液相分离柱、检测器和数据处理系统等组成。
1.溶剂系统：通常采用双头柱泵供应稳定的流动相。
溶剂通过比例调节阀混合形成所需的溶剂混合物。
2.进样器：它将少量的样品溶液注入到流动相中，通常使用自动进样器进行样品进样。
3.柱温箱：控制流动相的温度，以提高分离的效果。
柱温一般在室温到高温之间进行控制。
4.液相分离柱：是HPLC的核心部分，其中填充有液相固定相。
根据不同的分析目标和样品性质，可以选择不同类型的液相柱，如反相色谱柱、离子交换柱等。
5.检测器：常见的检测器有紫外-可见光谱检测器（UV-VIS）、荧光检测器、折射率检测器等。
根据不同化学物质的性质和要求，可以选择不同的检测器。
6.数据处理系统：包括记录和处理仪器所得到的信号。
常见的数据处理系统有计算机数据采集系统，可以进行数据的分析和处理，生成相应的色谱图。
二、工作原理：HPLC通过运用固定相与移动相之间的亲疏水性差异来实现化学物质的分离。
样品在液相中与固定相发生相互作用，不同化合物的相互作用程度不同，因此在液相中呈现出不同的流动速度。
根据样品分离的顺序，不同的化合物在一定时间内通过液相分离柱，进而被检测器检测到。
HPLC中的流动相一般由溶剂和缓冲液组成，并通过色谱柱中的固定相将待测试的物质分离开来。
其中，缓冲液（通常称为背后电解质）可以调节流动相的pH值，改变待测试物质的性质，从而影响其分离。
三、应用：HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全和生化分析等领域。
1.药物分析：HPLC可以用于药物分析中，以检测药物的含量、纯度和杂质成分。
药物的测定可以通过校准曲线来进行分析。
2.环境检测：HPLC可以用于环境监测中，例如水质分析、大气污染物分析等。
高效液相色谱(HPLC)简介
2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性；
按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。
常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、
乙腈、水。
采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动
相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积，损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱 子。如使固定液溶解流失，酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并 在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测 器时，流动相不应有紫外吸收。
高效液相色谱（HPLC）简介
目
1, 液相色谱分析法的发展 2, 高效液相色谱的特点 3, 高效液相色谱仪简介 4, 液相色谱法介绍 5, 分析方法的选择 6, 实际分析操作过程
录
1、液相色谱分析法的发展
20世纪初： 俄国植物学家茨维特提出经典液 相色谱法。经典液相色谱法包括柱色 谱、薄层色谱、纸色谱。 20世纪60年代末： 随着色谱理论的发展、高效细微 固定相的开发、高压恒流泵及高灵敏 度检测器的应用，高效液相色谱法得 到了突破性的发展。
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机 化合物有响应。 特点： 灵敏度高；
线性范围宽；
流通池可做得很小(1mm × 10mm ，容积 8μL)； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
b. 光电二极管阵列检测器
紫外检测器的重要进展；
高效液相色谱方法及应用
高速、高效、高灵敏度、高自动化。
1.1.2 与气相色谱法比较
应用范围广、更利于选择最佳分离条件且可在常 温下操作。
1.1.3 高效液相色谱法的特点
（1）分离效能高 （2）选择性高 （3）检测灵敏度高 （4）分析速度快 适合于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离 分析方法。
1.2 高效液相色谱法的分类
按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类 1.2.1 吸附色谱（Adsorption
Chromatography） 1.2.2 分配色谱（Partition Chromatography） 1.2.3 离子色谱（Ion Chromatography） 1.2.4 体积排阻色谱（Size Exclusion
2.3.3 柱温箱的温度控制要求比较精确，因 为流体的粘度受温度的影响较大。
2.4 检测器
2.4.1 检测器的性能指标 （1）噪声 （2）基线漂移 （3）灵敏度 （4）线性范围 （5）检测器的池体积
2.4.2 检测器的种类
2.4.2.1 紫外吸收检测器
（ultraviolet－visible detector，UVD ）
• 进样系统：进样器，进样阀。 • 分离系统：色谱柱，恒温箱。 • 检测系统记录系统：检测器、记录装置
2.1 高压输液系统
2.1.1 贮液罐 2.1.2 流动相脱气
（1）吹氦脱气法 （2）加热回流法 （3）抽真空脱气法 （4）超声波脱气法 （5）在线真空脱气法
2.1.3 高压输液泵
（1）恒流泵：输出恒定体积流量的流动相 （2）恒压泵：又称气动放大泵，输出恒定压力的泵。
Chromatography） 1.2.5 亲和色谱（Affinity Chromatography）
仪器分析高效液相色谱法
仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是目前广泛应用于仪器分析领域的一种重要分析方法。
它通过利用柱子中流动的流动相和样品的物理化学性质的相互作用，使样品组分在柱子中发生分离，再通过检测器对各组分进行定量或定性分析。
仪器分析高效液相色谱法主要由流动相供给系统、进样器、柱子、检测器和数据处理系统等组成。
流动相供给系统通过恒压或恒流的方式将流动相送入进样器中，进样器将样品注入柱子中，柱子根据物理化学性质的差异，使不同组分发生分离，之后检测器检测进入检测器的各组分的浓度，并通过数据处理系统对数据进行分析和整理。
高效液相色谱法具有分离效率高、分离时间短、适用范围广等特点。
与传统的液相色谱法相比，高效液相色谱法的流动相的流速更高，柱子填充物颗粒更小，从而大大提高了分离效率。
同时，高效液相色谱法对样品的需求量较小，具有较好的分析灵敏度。
因此，高效液相色谱法被广泛应用于生物、环境、食品、药物、化工等领域的组分分析和质量控制。
在生物领域中，高效液相色谱法常用于生物样品中代谢产物和药物的分析。
通过绑定柱子、手性柱子以及使用不同的检测器，可以对复杂的生物样品中的不同组分进行准确的分析和定量测试。
例如，对尿液中的代谢产物进行分析可以帮助人们了解人体健康状态，对药物的残留物进行分析可以保证食品和水的安全等。
在环境领域中，高效液相色谱法常用于水质、大气和土壤等环境样品中有机污染物的分析。
通过连接各种不同相的柱子，可以对复杂的环境样品中的有机污染物进行有效的分离，使用紫外-可见光检测器或质谱检测器可以对分离后的各组分进行检测和定量。
在食品领域中，高效液相色谱法常用于食品中添加剂、农药残留物和食品中的有害物质的分析。
通过选择合适的柱子和检测器，可以对复杂的食品样品进行分离和检测，以保证食品的安全性和质量。
在药物领域中，高效液相色谱法常用于药品中活性成分和杂质的分析。
石墨铝复合材料中主元素al成分的测试标准和方法
石墨铝复合材料中主元素al成分的测试标准和方法石墨铝复合材料中铝（Al）成分的测试标准和方法可以根据不同的应用和需求选择。
以下是一些常见的测试标准和测试方法：
1. 化学分析方法：通过化学溶解样品，使用滴定法、分光光度法、原子吸收法等方法测定铝的含量。
这种方法适用于高纯度样品的分析，测试结果准确度高。
2. 燃烧法：将样品在高温下燃烧，生成的气体被吸收后进行测定。
该方法适用于大块样品和不易溶解的样品，如废旧金属等。
测试结果受燃烧温度和气氛影响较大。
3. X射线荧光光谱法（XRF）：利用X射线照射样品，激发样品中的元素发出荧光，通过测量荧光光谱中特定波长的光强度来确定铝的含量。
该方法具有非破坏性和快速性，适用于多种材料和样品。
4. 能量色散X射线荧光光谱法（EDXRF）：与XRF类似，但使用能量色散探测器来测量荧光光谱，可以同时测量多种元素。
该方法具有更高的灵敏度和准确性，但测试结果受样品表面状态和厚度影响较大。
5. 电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）：将样品溶液通过电感耦合等离子体炬进行原子化，铝原子被激发后发出特征光谱，通过测量光谱强度确定铝的含量。
该方法具有高灵敏度、高精度和多元素同时测定的优点，适用于各种材料和样品的分析。
需要注意的是，不同的测试方法具有不同的适用范围和特点，应根据具体的测试需求选择合适的测试方法和标准。
同时，测试结果的准确性和可靠性还受到测试设备、操作人员技能等因素的影响，因此建议在专业实验室进行测试，以保证测试结果的可靠性。
仪器分析—高效液相色谱法
仪器分析—高效液相色谱法高效液相色谱（HPLC）是一种分离和定量化学物质的分析技术。
它广泛应用于生物医药、食品安全、环境监测等领域。
HPLC的原理基于样品在流动相中的分配行为，通过调节流动相成分和流速，实现对样品中化合物的分离和定量。
HPLC的特点之一是分离效率高。
其分析柱内有高效填料，通常是细小颗粒的吸附剂，能够提供大的表面积，有效地增加了分析柱与流动相接触的面积，从而提高了分离能力。
此外，在HPLC中还可以根据需要选择适当的流动相，调节柱温和压力等条件，进一步优化分析条件，提高分离效果。
其次，HPLC的灵敏度高。
在HPLC中，使用的检测器通常有紫外-可见光谱法、荧光法、质谱法等。
这些检测器可以实现对特定化合物的高选择性检测，而且还能够对不同化合物进行同时检测。
对于低浓度的化合物，可以通过选择合适的检测器和优化分析条件，提高检测灵敏度，使得即使在样品中含量很低的化合物也能够被准确地检测到。
此外，HPLC在分析速度和样品处理方面也比较快捷。
与传统的柱色谱技术相比，HPLC使用的高压泵可以提高流动相的速度，从而缩短分析时间。
对于样品预处理方面，使用HPLC时只需要进行简单的处理，如溶解样品并过滤，就可以直接进入分析阶段。
这使得HPLC具有高通量分析的优势，能够在短时间内快速分析大量样品。
此外，HPLC还可与其他技术结合应用。
例如，HPLC-质谱联用技术可以实现对样品中化合物的分离和结构的同时鉴定，具有非常高的分析灵敏度和选择性。
HPLC还可以与色谱预处理、液相萃取和样品前处理等技术结合，提高样品的净化效果和检测灵敏度。
综上所述，HPLC是一种高效、灵敏和多功能的分析技术，被广泛应用于各个科学领域。
它的分离效率高，灵敏度高，分析速度快，样品处理简便，可以与其他技术结合使用，提高分析的效果和可靠性。
在今后的科学研究和实际应用中，HPLC将继续发挥重要的作用。
《仪器分析》4-高效液相色谱法
(4) 示差折光检测器： 是一种中等灵敏度(10–6 g/mL)的通用型检测器。
是利用纯流动相和含有待测组分的流动相之间折射率的 差别进行检测的。
可分为三类：反射式；折射式（偏振式）和干涉式。常 用前两种。
优点：灵敏度适宜，操作简便是一种通用型的检测器； 缺点：对温度变化敏感，不能用于梯度洗脱。 应用范围：聚合物、糖。还用于分析以紫外检测和荧光
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药典中的液相色谱检测器
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常用的检测器:
(1) 紫外光度检测器：是一种选择性浓度检测器，仅 对那些在紫外波长有吸收的物质有响应。
作用原理：基于待测试样对特定波长的紫外光有选择 性的吸收，试样浓度与吸光度的关系服从比尔定律。
结构：
1－低压汞灯 2－透镜 3－遮光板 4－测量池 5－参比池 6－紫外滤光片 7－双紫外光敏电阻
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⑶ 色谱柱 GC柱很长，特别是毛细管柱可长至几十米至上百米，柱效
很高(理论塔板数N = 104~106)。HPLC柱较短，一般为15~25 cm，柱效(理论塔板数N = 103~104)，低于GC柱。 ⑷ 检测器
与GC相比，HPLC检测器种类较多。 ⑸ 制备色谱
GC难以制备样品，因为进样量小，难以收集或被破坏。 HPLC可进行制备，即制备色谱。
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2. 进样系统
在高效液相色谱中，常用的进样方式： 高压阀进样：优点是能用于高压，适于大体积进样，重现性
好；缺点是进样阀进样时需排掉一部分试样，不同的进样 量需用不同的定量管，同时峰的扩展也比注射进样大。 微量注射器进样：也可由微量注射器注入取样环少量样品， 即采用较大体积取样环而进少量试样，进样量由注射器控 制，试样不充满取样环，只填充一部分体积。
固相萃取-液相色谱法在铝材轧制油油液监测中的应用
的偏 差 。滴定 法 虽 然操 作 较 为 简便 ， 不需 要 仪 器设 备 ， 是 操作 繁琐 、 时较 长 ， 只 能 给 出 各 种 添加 但 费 且
剂的总量 ， 不能反应各种添加 剂在使用过程 中各 自 的变化 隋况 。气 相 色谱法 虽然 能够 给 出醇类 和 酯类 的测定 结果 ， 对 于 酸 类 添 加 剂 ， 但 由于 其 极 性 较 强 ，
１ ２ 标 样 的配制 。
测， 常用 的方 法 主要 有 红 外 光 谱 法 、 定 法 ］ 滴 、 气相 色谱 法 等 方 法 。。红 外 光 谱 法 虽 然 能 够 测 。 定醇 类 、 酸类 、 类 三 种类 型添 加剂 各 自的 总量 ， 酯 但
不 能得 到三种 添 加 剂 各 自详 细 的组 成 ， 且 受 基体 并 的影 响较 大 ， 当基体 变化 时 ， 测定 结果 就 会 产生 较 大
酸 为分析 纯试 剂 ， 超纯 水 。
１ １２ ．． 仪 器
Ｗａｅｓ０ ｔ ６０型液 相色 谱 高 压 泵 ， ｔｒ ４４型 示 ｒ Ｗａ ｓ １ ｅ２ 差 折光 检测 器 ，ｍ ｏ ｅ 色谱 工 作 站 ， Ｅ ｐｗ ｒ 以上 均为 美 国
沃特斯公 司产品； 迪马公 司 ｐｏｌ ｌａ圈相萃取小 ｒ ｕ ｓｉ ｅ ｔｉｃ 柱 （ ０ ０ ｒ ／ Ｅ ， ｉｉ ｒ １０ ｇ ６ｍ ） ｍ ｌｐ ｅ超纯 水器 。 ａ ｌｏ
呈 良好 的线性关 系（ 线性相关系数大于 ０ ９９ ） ．９ ５ 。
关键 词 ： 材轧制油 ； 加剂 ； 铝 添 固相 萃 取 ； 液 监 测 油
中 图分 类 号 ！ 【 ６ ３ Ⅱ ６ ．９ ２ 文献标识码 ！ Ａ
０ 前 言 铝材 轧制 油是 铝箔 、 铝板 、 带加 工 过程 中极 为 铝 重要 的辅 助材料 ， 主要 由轻质 矿物 油 和 添加 剂 组成 ，
铝液相较于铝锭的好处
铝液相较于铝锭的好处1.引言1.1 概述铝液相相比于铝锭在铝制品生产领域具有许多优势，这是近年来越来越受到关注的一种生产方式。
通过将铝锭融化，形成铝液相，生产过程得到了极大的简化和改进。
铝液相的优点不仅体现在提高生产效率上，还包括降低能源消耗等方面。
铝液相的生产方式可以极大地提高生产效率。
相比传统的铝锭生产流程，铝液相生产方式允许较大规模的连续生产，避免了单次铝锭的制造和后续的加工工序，生产效率大幅提升。
此外，铝液相生产方式还可以实现自动化控制，提供更高的操作灵活性，同时降低了人力成本。
同时，铝液相生产方式相较于铝锭还能够降低能源消耗。
在铝锭的生产过程中，需要进行多次的高温熔炼和冷却，耗费大量的燃料和电能。
而使用铝液相生产方式，只需要将铝锭融化一次，并保持在较低的温度下进行连续生产，显著减少了能源消耗。
这不仅降低了生产成本，也符合节能减排的环保理念。
然而，铝锭生产方式也存在一些不足之处。
首先，生产过程繁琐，涉及多个步骤和环节，容易出现生产线上的问题，增加了生产的难度和复杂性。
其次，铝锭的质量相对不稳定，由于生产条件和原材料的差异，铝锭中可能存在杂质或其他不良成分，降低了产品的质量和可靠性。
综上所述，铝液相生产方式相较于传统的铝锭具有明显的优势。
它不仅提高了生产效率，降低了能源消耗，还可以有效解决了铝锭生产中的一些问题。
因此，推动铝液相的发展，将在铝制品生产领域发挥重要的作用，具有巨大的潜力和前景。
1.2 文章结构文章结构部分的内容：文章将按照以下结构展开讨论铝液相相较于铝锭的好处。
首先，我们将在引言部分对文章进行概述，介绍铝液相与铝锭的基本概念和区别。
接下来，我们将详细阐述铝液相的好处，包括提高生产效率和降低能源消耗。
然后，我们将探讨铝锭的局限性，包括生产过程繁琐和质量不稳定。
最后，在结论部分我们将总结铝液相的优势，并探讨推动铝液相发展的因素。
通过这样的结构安排，我们将全面分析铝液相与铝锭的差异和优势，为读者提供更深入的了解和启发。
高效液相色谱法测定铝酸钠溶液中的有机酸.
高效液相色谱法测定铝酸钠溶液中的有机酸蒋新宇来，陈晓青，肖建波（中南大学化学化工学院，长沙４１００８３）摘要：建立了铝酸钠溶液中有机酸的高效液相色谱测定方法。
铝酸钠溶液样品经简单处理后，在ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色谱柱上，以ＫＨ２ＰＯ，．Ｈ３Ｐ０４一甲醇．水为多元流动相。
等度洗脱，在１０ｍｉｎ内可完成草酸、酒石酸、乙酸、丁二酸、丁烯二酸和戊二酸等有机酸的分离测定。
方法线性关系良好（ｒ＝０．９９５２～０．９９９９），样品加标回收率在８０．２％～１２７．６％之间，相对标准偏差均在６．９％以下。
关键词：铝酸钠溶液；有机酸；高效液相色谱法中图分类号ｉ０６５７．７文献标识码ｉＡ文章编号：１０００－０７２０（２００８）１１－０１４－０４铝酸钠溶液作为氧化铝工艺过程中重要的中间产物，其溶液的结构、组成等对分解、蒸发、过滤等工艺有着极大的影响。
随着选矿拜耳法生产线的投入使用、沉降和分解添加剂的采用，开展铝酸钠溶液中有机物的含量及其赋存状态的研究，建立铝酸钠溶液中有机物的系统分析方法，对氧化铝分解、蒸发工艺的深入研究和实际生产过程控制都有着十分重要的意义－ｌ。
ｊ。
对于铝酸钠溶液中有机酸的分析，国内一般仍采用氧化滴定法、电位法或测定化学耗氧量等测定有机物总量的方法【４Ｊ，最近陈晓青等才用离子色谱法测定了铝酸钠溶液中的有机酸”。
；而国外对铝酸钠溶液中有机酸的分析大都已采用离子色谱法、气相色谱法及毛细管电泳法等现代分析测试手段［６埘］，但这些方法一般要进行预分离或衍生化等繁琐的前处理。
高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定有机酸比气相色谱法选择性好、准确度高。
丁明玉等研究了有机酸在阴离子交换色谱中的保留行为和多峰现象【９Ｊ，赵景婵等研究了有机酸类化合物的反相高效液相色谱法的分离条件，给出了流动相最佳ｐＨ的选择通式ｕ０｜。
但由于铝酸钠溶液的高离子强度和ｐＨ，目前只有Ｗｈｅｌａｎ等对铝酸钠溶液中有机酸的ＨＰＩ￡分离进行了一定的探讨和应用研究［１１｜，尚未见有关采用ＨＰＬＣ测定铝酸钠溶液中有机酸的报道。
高效液相色谱质检方法
定期更换 色谱柱， 避免色谱 柱堵塞或 损坏
定期清洗 进样器， 避免样品 残留影响 分析结果
定期更换 流动相， 避免流动 相变质影 响分析结 果
定期检查 并校准仪 器的各个 参数，确 保分析结 果的准确 性
定期备份 仪器的数 据和设置， 防止数据 丢失
更换流动相：定期更换流 动相，保持色谱柱的清洁 和性能稳定
清洗色谱柱：定期清洗色 谱柱，去除杂质和污染物
更换密封圈：定期更换密 封圈，防止漏液和污染
检查气路系统：定期检查 气路系统，确保气压稳定 和流量准确
清洁检测器：定期清洁检 测器，保持检测灵敏度和 准确性
检查电路系统：定期检查 电路系统，确保仪器正常 工作和数据准确
压力波动：检查泵是否正常工作，更换密封圈或清洗管道
01
高效液相色谱法简 介
高效液相色谱仪介 02 绍
高效液相色谱法在 03 药 品 检 测 中 的 应 用
高效液相色谱法在 04 食 品 检 测 中 的 应 用
高效液相色谱法的 05 维 护 与 保 养
高效液相色谱法简介
高效液相色谱法 是一种分离分析 技术，利用液体 作为流动相，通 过色谱柱将混合 物中的各组分分 离。
汇报人：xx
控制系统：控制整个仪器的操作和运 行
01
样品预处理：将样品 溶解在适当的溶剂中， 并进行过滤、脱气等
处理。
02
进样：将处理好的样 品注入高效液相色谱
仪的进样器中。
03
流动相的输送：通过 高压泵将流动相输送
到色谱柱中。
04
色谱柱的分离：样品中的 各组分在色谱柱中分离， 根据其不同的分配系数和 保留时间，依次流出色谱
分析精度高：能够 准确检测药品中的 微量成分
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高效液相色谱法研究铝形态的可靠性练鸿振1,2 毕树平31 田笠卿2(南京大学化学系1,现代分析中心2,南京210093)摘 要 高效液相色谱法在铝形态的研究中发挥着举足轻重的作用,而铝形态的易变性和复杂性要求色谱条件无侵入性和检测手段具有形态选择性。
文中列举了若干实例说明高效液相色谱法在铝形态分析中的常用方法和注意事项。
关键词 高效液相色谱,铝形态,可靠性,评述 2003204225收稿;2004201215接受本文系国家自然科学基金(N o.20075011)和南京大学分析测试基金(N o.CA323)资助课题1 引 言从环境方面看,溶解态的铝并不多,有毒铝就更少,但却影响着整个生态系统。
有机物能去铝毒,却是铝溶解的主要诱因和铝迁移的主要载体1;从生命方面看,铝与阿尔茨海默症等疾病之间的潜在关系越来越明朗2,而人们日常摄入铝量却居高不下。
可以说,铝的毒性和生态效应问题是关乎国计民生的大事。
铝在自然环境和生物体系中以各种络合物的形态存在,铝的生态效应和毒性取决于其存在形式。
目前已经达成一致共识的是:从毒性的角度来看,操作定义上的不稳定无机单核铝(labile m onomeric Al ,Al i )包括游离水合铝离子及其无机络合物有毒,其中最毒的铝形态(m ost toxic Al ,Al mt )为最不稳定的游离铝离子和单核羟基铝Al 3+、Al (OH )2+和Al (OH )+2,而铝2氟络合物的毒性要小得多,铝与有机配体形成的络合物则基本无毒。
铝形态的多样性和复杂性使得铝形态的区别不是简单地建立在价态不同的基础上,而是与其特殊的配位性质和聚集倾向有关。
无论是铝的物种分级(fractionation )还是形态分析(speciation ),色谱方法都是首选的手段。
高效液相色谱法(HP LC )的优势在于它不是一个测定操作定义上形态的方法,在大部分情况下可以得到单一形态,但存在的问题是色谱洗脱需要花费一定的时间,加上固定相和流动相的影响,往往会导致铝形态的变化。
尽管HP LC 的分离过程与检测手段相互独立,可以实现最终测量的最佳化,但铝的光学活性和电化学活性都比较低,与环境和生物系统中实际存在量相匹配的检测技术,特别是形态选择性检测技术还相当缺乏。
关于以上两个问题,在实际分析过程中必须引起高度重视。
2 分离过程的稳定性在测定某一体系中的总铝浓度时,人们往往采取一些强迫手段,如消化、加热、萃取、调整介质的pH 值和离子强度、加入侵入性的螯合试剂以及反应促进剂等,以达到最大响应值,即所谓的“最佳化”,这实际上把所有形态的铝进行了强制统一3～5。
而铝形态分析的方法,必须对体系扰动极小,尽量保持原生体系不变,总铝测定时非最佳条件下得到的响应值也许正是某一种或某几种形态的响应值。
为了保持铝形态的稳定性,分析中要注意以下几方面问题。
2.1 降低固定相的侵入性铝大多以与小分子(LMW )配体形成的离子形式存在,或以有机大分子(H MW )络合物的形式存在,一般能溶于水,这就要求固定相亲水。
强烈疏水的固定相对自然环境中存在的铝形态如羟基铝几乎没有保留,而对生命物质中存在的铝形态如蛋白铝结合能力又太强。
离子交换色谱(IEC )和尺寸排阻色谱(SEC )是最常用的分离模式,前者特别是Milacic 等和Sanz 2Medal 等建立的离子交换快速蛋白质液相色谱(fast protein liquid chromatography ,FP LC )在实际铝形态的分析方面已有重大突破,而后者仍主要用于第32卷2004年12月分析化学(FE NXI H UAX UE ) 评述与进展Chinese Journal of Analytical Chemistry 第12期1677～1682铝的物种分级。
这两种方法所用的流动相均为水溶性的缓冲体系,是保持铝形态稳定的基本保证。
在低容量阳离子交换柱Dionex CG 2上,所有不稳定单核铝Al (OH )(3-n )+n ]转变为Al 3+,与Al 2F 络合物(AlF 2+、AlF +2)、有机铝等分离6～8。
阳离子交换FP LC 柱M ono S 可以定量测定对铝的毒性研究尤为重要的各种单核铝Al 3+、Al (OH )2+、Al (OH )+2等9～11。
以上的方法在天然水、土壤溶液和茶叶浸泡液中铝形态研究方面都已得到成功应用。
阴离子交换FP LC 柱M ono Q 可以分离Al 2柠檬酸(citrate ,Cit )、Al 2草酸(oxalate ,Ox )及其它带负电荷的铝络合物,可用于植物浆液中小分子有机物结合铝的形态分析12;还可以分析血清中的铝形态13,并进一步得到铝与转铁蛋白(trans ferring ,T f )的C 2端或N 2端结合的信息14。
凝胶柱Superose 12HR 和Bio 2G el P2已分别用于茶叶浸泡液中有机结合铝和土壤溶液中低分子量有机酸结合铝的物种分级15,16。
Superdex 75HR (6.5～100kD )和Superdex Peptide HR (0.1～12kD )柱可以使有机铝分级,得出森林土壤渗滤水中铝形态的分子量分布17。
用Superdex 75HR 柱分析森林土壤提取物中的铝形态,还可以得到土壤溶液中大分子量腐殖质结合铝和小分子量络合物如AlF 2+、Al 2Ox 、Al 2Cit 等11。
Seubert 等18专门制作了同时具有阳离子交换和尺寸排阻功能的色谱柱,分析了pH 3～5时的Al 3+及其F 、Ox 、Cit 络合物,络合物既可以根据电荷多少又可以根据尺寸大小分离,该方法不但能够测定单配体体系,也能够测定多配体体系,所涉及的8种形态几乎都得到了良好的分离,而且在该色谱环境中,这些铝形态与外层配位(outer coordination sphere )络合物如Al (S O 4)+和Al (HPO 4)+不同,具有很好的稳定性。
他们19又制成有类似特殊性质的阴离子交换树脂,并将这种树脂与阳离子交换树脂配套使用,通过阀切换,使色谱柱体系交替呈现阴、阳离子交换性质,能够将阴、阳离子一次洗脱,而且可以提高带相同电荷的形态的分离度,但铝形态与离子交换剂相互作用,从而导致分解的可能性也增加了,特别是系统呈阴离子交换性质时,高配位Al 2F 络合物易分解,得不到单一形态;随着摩尔比的下降和pH 值的升高,Al 2Cit 络合物的生成路线为AlCit →AlCit -→Al (Cit )3-2;Al 2Ox 络合物无论是AlOx -2还是AlOx 3-3都没有好的峰形,原因在于它们在色谱分离的过程中就已分解。
与最不稳定的配合形态的反应速率相比,HP LC 是个慢的方法,室温下铝对于水的内层配位(inner coordination sphere )配体交换速率大约为1H z 。
尖锐的、明确定义的色谱峰意味着有关的形态得到了最好的分离,也可能意味着原生形态的分解产物得到了良好的分离,所以选择色谱柱时要最大限度地避免形态分解。
高效亲和色谱(affinity chromatography ,AC )可用于测定人体血清中T f 结合铝,只有亲和的Al 2T f 才有荧光响应20。
不难理解,高效疏水作用色谱(hydrophobic interaction chromatography ,HIC )应该在生命体系铝形态的分析中发挥更大的作用,HIC 填料孔径大,疏水基团的链长短,密度低,对蛋白铝的作用较小,既能有效分离不同蛋白结合的铝,又能保持蛋白铝的活性。
2.2 使用弱侵入性的衍生试剂柱前衍生2RP 2HP LC 法是一种重要的测定铝的方法。
在过去的20年中,许多衍生试剂如82羟基喹啉(82H Q )等用于环境和生物样品中铝的测定3～5,但这些试剂对铝的攻击性太强,不但能与不稳定的无机单核铝配位,还能夺取无毒形态中的铝,引起对有毒形态的过高估计。
而分析环境和生物样品中有毒尤其是最毒的无机单核铝形态,比起单纯测定总铝更有意义,是铝形态研究中的关键的具有挑战性的问题,这是因为,毒性越大的铝形态往往越不稳定。
另外,从毒性的角度来看,人们关心的是毒性最大的一组形态的总量,而不是每一种形态的量21。
与82H Q 相比,黄酮醇桑色素(m orin )和槲皮素(quercetin )对铝的攻击性要弱得多,被认为是具有“微小扰动(minimized disturbance )”的试剂,只能结合一些最不稳定的单核铝形态22,23,而这种劣势恰恰是形态分析所需要的。
Bi 等24,25建立了柱前桑色素衍生2RP 2HP LC 分离-荧光检测直接测定无机单核铝的新方法。
该方法的最大特点是只有最不稳定的游离铝和羟基铝能够被桑色素夺取,显示出独特的对毒性最大的铝形态(Al mt =Al 3++Al (OH )2++Al (OH )+2)的选择性。
针对无机单核铝的易变性,在优化的实验条件下,铝2桑色素络合物的荧光响应在6.0×10-9～6.0×10-5m ol/L 浓度范围内呈线性,检出限为2.0×10-9m ol/L ,在迄今为止的以桑色素为反应试剂检测铝的所有方法中,本法的线性范围最宽,8761 分析化学第32卷检出限最低,而且几乎不受共存离子的影响。
特别适用于环境和生物样品中最毒铝的直接测定。
Bi 等26等还建立了柱前槲皮素衍生2RP 2HP LC 分离2紫外检测直接测定天然水中无机单核铝的方法,测定了毒性最大的铝形态Al mt ,检出限为1.0×10-7m ol/L ,水样中的其它离子不干扰测定,铁的干扰可用1,102邻菲 啉消除。
该法的主要优势在于槲皮素无毒无害,且存在于人体内,为利用体内自身配体活体检测有毒铝形态提供了一种前驱方法。
还通过RP 2HP LC 分离了铝与桑色素及槲皮素生成的不同络合物,结合摩尔比方法,得到了这些络合物的配位比。
结果显示,铝与桑色素生成1∶1和2∶1两种络合物,而槲皮素只形成一种1∶1的络合物,从而进一步提出了这些络合物的可能结构和形成机制24。
2.3 维持流动相与样品介质的一致尽量避免系统峰出现是常规HP LC 分析的基本要素,如以阳离子交换柱Dionex CS2(Dionex CG 2为保护柱)分离天然水中的AlF +2、AlF 2+、Al 3+,保持进样溶液的组成和pH 与流动相一致,才能避免系统峰对测定的干扰7。
对铝形态的分离来说,要尽量选用与样品介质pH 、离子强度一致的流动相,避免流动相对铝形态稳定性的影响。
例如在用SEC 法研究以花岗岩为基岩的云杉林中天然水中的铝形态时,色谱柱为Superose 12HR ,流动相为0.05m ol/L NaAc 20.05m ol/L H Ac ,pH 调节到4.6,与水样的pH 一致27。