植物组织培养知识点归纳教学提纲

第一章

1、植物组织培养：是指在离体条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞、原

生质体等进行培养，使其长成完整植株

2、外植体：在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物上提取下来的、接种在培养基上的

无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。

3、愈伤组织：指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。

4、应用

一、农业上的应用

1. 种苗快速繁殖(rapid propagation)

2.无病毒苗(virus free)的培养

3.在育种上的应用(breeding)

（1）倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显；

（2）克服远缘杂交的不亲合性和不孕性（胚培养）；

（3）保存种质

（4）创造变异

二、在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。用于基因工程技术创造植物新种质。用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。

三、利用组织培养材料作为植物生物反应器

第二章

1、细胞全能性（Totipotency）：指任何具有完整的细胞核的植物细胞都拥有形成一个完整植

株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。

2、细胞分化（cell differentiation）：指导致细胞形成不同结构，引起功能或潜在的发育方式

改变的过程。

3、脱分化（Dedifferentiation）：指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构

和功能而恢复分生状态，形成无组织结构细胞团或愈伤组织

的过程。

4、再分化（Redifferentiation）：指脱分化的细胞重新恢复分化能力，形成具有特定结构和功

能的细胞、组织、器官甚至植株的过程。

5、植物组织培养中常遇到的问题以及解决措施

一、污染及防治：

1、真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌污染，只

要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可使用。

2、用抗生素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常生长。

二、褐变及防止

（1）选择合适的外植体

（2）合适的培养条件

（3）使用抗氧化剂

（4）连续转移

三、玻璃化问题及其防止

（1）增加培养基溶质水平，降低培养基水势；

（2）减少培养基含氮化合物用量；

（3）增加光照；

（4）增加容器通风，进行CO2施肥，对减轻试管苗玻璃化现象有明显作用；

（5）降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻试管苗玻璃化现象发生；

（6）降低培养基细胞分裂素含量，加入适量脱落酸。

四、其他问题和解决措施

（一）初始培养阶段：

1、培养物水浸状、变色、坏死、茎断面干枯

改进措施：调换其他杀菌剂或降低浓度，缩短消毒时间；试用其他部位，生长初期取材。

2、长期培养培养物几乎无反应

改进措施：更换基本培养基或调整培养基成分，尤其是调整盐离子浓度，增加生长素用量，试用2,4-D，调整培养温度。

3、愈伤组织生长过旺、疏松，后期水浸状

改进措施：减少激素用量，适当降低培养温度，调整无机盐（尤其是铵盐）含量，适当提高琼脂用量增加培养基硬度。

4、愈伤组织太紧密、平滑或突起，粗厚，生长缓慢

改进措施：减少细胞分裂素用量，调整细胞分裂素与生长素比例，降低糖浓度。

5、侧芽不萌发，皮层过于膨大，皮孔长出愈伤组织

改进措施：减少激素用量，采用较老化枝条。

（二）继代培养阶段

1、苗分化量少、速度慢、分枝少、个别苗细高

改进措施：增加细胞分裂素，降低温度，改善光照，改单芽继代为团块（丛芽）继代。

2、苗分化过多，生长慢，畸形，节间极短，苗丛密集，微型化

改进措施：减少或停用细胞分裂素一段时间，调节温度。

3、分化率低，畸形，培养时间长时苗再次愈伤组织化

改进措施：减少生长素用量，适当降温。

4、叶粗厚变脆

改进措施：减少激素用量，避免叶片接触培养基。

5、再生苗的叶缘、叶面等处偶有不定芽分化出来

改进措施：适当减少细胞分裂素，或分阶段地利用这一再生方式。

6、丛生苗过于细弱，不适于生根或移栽

改进措施：减少细胞分裂素，免用赤霉素，延长光照时间，增强光照，及时转接，降低接种密度。

7、幼苗淡绿，部分失绿

改进措施：针对营养元素亏缺情况调整培养基，调好PH值，调控温度、光照。

8、幼苗生长无力、发黄落叶、有黄叶、死苗夹于丛生苗中

改进措施：及时转接、降低密度，调整激素配比和营养元素浓度，改善瓶内气体状况，控制温度。

（三）生根阶段

1、久不生根，基部切口无适宜愈伤组织

改进措施：选用适宜的生长素或增加生长素用量，适当降低无机盐浓度。

2、愈伤组织生长过快、过大，根茎部肿胀或畸形，几条根并联或愈合。

改进措施：调换生长素种类或几种生长素配合使用，降低浓度，附加VB2或PG 等减少愈伤等。

6、操作技术 一、洗涤技术

2、塑料用品洗涤

3、金属用品洗涤

二、灭菌技术 1、灭菌

（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法

（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌干热消毒灭菌。 （3）塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌；

（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌；浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用。

（5）接种室灭菌

接种室→紫外灯照射→空气消毒灭菌

超净工作台→紫外灯照射、70%—75%的酒精擦洗→培养材料的接种 （6）外植体灭菌

流水冲洗10—20min 或更长时间→70%—75%酒精中浸泡30s →0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min 左右、在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min 左右→蒸馏水冲洗4—5次→备用

第三章

新的塑料器皿打开即用 已用过的塑料

器皿

2%NaOH 浸泡

12h

清水冲洗 2%—5%盐酸浸泡30min

清水冲洗

蒸馏水冲

洗

晾干备用

热洗衣粉水洗净

冲洗 擦干