生物学多糖提取纯化以及结构解析
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化目前，真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得，但以从子实体中提取多糖为主。
首先是将子实体粉碎，加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液，水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。
其次是用残渣提取多糖，常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。
水提法采用的较多，适合于提取水溶性多糖。
稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短，温度不超过50℃，以防止糖昔键断裂。
稀碱法适合于提取碱溶性糖。
然后除去小分子杂质，常采用透析法，将多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1一3天。
第四步是沉淀多糖。
大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。
常用4一5倍低级醇、丙酮，一般在pH=7.0左右沉淀多糖，制得粗多糖。
最后是除去蛋白质。
除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。
得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。
多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。
纯化方法很多，主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。
此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。
(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。
纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量，因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。
因此，测得的分子量一般为平均分子量。
过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量，但由于这些方法测定起来比较麻烦，且误差较大，现多数已不采用。
目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法，对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。
1.2.1发酵、提取取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养，逐级扩大培养至10O0L，25℃下通气培养72h，压滤，得香菇深层培养菌丝体。
多糖的提纯化技术
多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法：以水为溶剂，可采用热水浸提或冷水浸提（植物多糖多采用热水浸提，可直接或离心去除杂质），由于多糖不溶于乙醇，可通过沉淀将多糖提纯出来。
水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。
(2) 酸提法：有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解，可用盐酸或乙酸处理后，再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。
酸提法容易破坏多糖的空间结构，一般较少使用。
(3) 碱提法：一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定，可提高多糖的提取率，一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解，而且容易影响成品的色泽和风味。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展活性多糖是一类具有生物活性的多糖物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性。
近年来，随着人们对健康和营养素需求的增加，活性多糖的研究受到了广泛关注。
活性多糖的提取、纯化及结构解析是这一领域的关键研究内容，不仅有助于深入了解其生物活性及作用机制，还为其在医药、保健品等领域的应用提供了重要的科学依据。
本文将对活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展进行综述，以期对该领域的研究工作有所帮助。
一、活性多糖的提取方法活性多糖广泛存在于天然食材中，如真菌、植物、海洋生物等，因而其提取方法有多种选择。
一般来说，活性多糖的提取方法可分为物理法、化学法和生物法三大类。
物理法是指通过物理手段将活性多糖从食材中提取出来，如破碎、离心、过滤等。
常用的物理法提取活性多糖的方法有超声波提取法、微波提取法、高压萃取法等。
这些方法操作简单、提取效率高，但对提取条件要求严格，且可能会影响活性多糖的生物活性。
生物法是指利用微生物或酶类从食材中提取活性多糖，如发酵法、酶解法等。
这些方法能够实现对活性多糖的选择性提取，但操作复杂，成本较高。
活性多糖的纯化是将提取得到的多糖进行进一步分离和提纯，以获得高纯度的活性多糖。
常用的活性多糖纯化方法包括凝胶过滤、离子交换、凝胶电泳、超滤等。
凝胶过滤是一种通过多孔凝胶对多糖进行分子大小分离的方法，其具有操作简单、纯化效果好的特点。
离子交换是利用固定离子对多糖进行分离的方法，通过调整离子交换柱的 pH、离子浓度等条件，可以实现对多糖的高效分离。
凝胶电泳是利用电场对多糖进行分离的方法，通过多糖在电场中的迁移速度差异，实现对多糖的分离。
超滤是通过使用不同大小的孔径滤膜将多糖和杂质进行分离的方法，具有选择性好、操作简单的特点。
活性多糖的结构解析是对其组成单元、链结构、分支结构等进行分析和解释的过程，主要包括理化方法、光谱方法、质谱方法等。
理化方法是指利用多糖的理化性质对其结构进行解析的方法，如比旋光度、旋光分散度、比表面积、分子大小等。
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖具有广泛的应用价值，包括食品、医药、化妆品和生物材料等领域。
因此，对多糖的提取、分离纯化以及分析鉴定方法的研究具有重要意义。
一、多糖的提取方法1.物理法物理法主要包括热水提取法、酸碱提取法和微波提取法等。
热水提取法是最常用的提取方法之一，通过加热使细胞壁破烂，有利于多糖的溶出。
酸碱提取法则是利用酸碱反应将多糖从细胞壁中释放出来。
微波提取法则是利用微波辐射对样品进行加热，加速多糖的溶解和释放。
2.化学法化学法主要包括酶解法、酶解分离法和酸碱水解法等。
酶解法是利用特定的酶对样品进行处理，将多糖分解为单糖，然后进行分离和纯化。
酸碱水解法则是通过酸碱反应将多糖水解为低聚糖和单糖。
3.生物法生物法是利用微生物或植物产生的酶对多糖进行酶解和分离。
生物法具有选择性强、工艺简单等优点，在多糖提取中得到了广泛的应用。
二、多糖的分离纯化方法多糖的分离纯化方法主要包括离子交换色谱法、凝胶渗透色谱法和亲和色谱法等。
1.离子交换色谱法离子交换色谱法是利用离子交换树脂对多糖进行分离的方法。
通过控制溶液pH值和离子强度等条件，使不同电荷的多糖在树脂上发生吸附反应，实现多糖的分离纯化。
2.凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法是根据多糖分子量的大小来进行分离的方法。
多糖分子量越大，越容易在凝胶渗透色谱柱的孔隙中滞留，分离得到纯度较高的多糖。
3.亲和色谱法亲和色谱法是利用多糖与一些特定配体之间的相互作用进行分离的方法。
例如，可以利用亲和色谱柱上的特定配体与多糖的特定结构之间的结合作用，实现多糖的分离和纯化。
三、多糖的分析鉴定方法多糖的分析鉴定方法主要包括红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振波谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
1.红外光谱法红外光谱法能够通过检测样品吸收、散射或透射特定波长的红外光来分析多糖的结构和功能。
2.紫外光谱法紫外光谱法是利用多糖分子在紫外可见光区域的吸收特性进行分析。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展1. 引言1.1 活性多糖的概念活性多糖是一类具有生物活性并具有多糖结构的化合物。
活性多糖广泛存在于天然物质中，如植物、动物、微生物等。
其结构通常由多种单糖单元通过糖苷键连接而成，具有复杂的分子结构和多样性的生物功能。
活性多糖的研究意义在于揭示其生物活性及对人体健康的影响，探索其在医药和食品领域的应用价值。
活性多糖提取纯化及结构解析的重要性在于确保研究过程中所得到的活性多糖样品具有高纯度和稳定性，为后续的结构分析和生物活性研究提供可靠的基础。
活性多糖的研究不仅能够推动纯化技术和分析方法的发展，还有助于拓展活性多糖的应用领域，促进健康产业的发展和创新。
活性多糖是近年来备受关注的研究领域，其研究进展对于推动生物医药和食品工业的发展具有重要意义。
1.2 活性多糖的研究意义1. 生物活性：活性多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等功能。
深入研究活性多糖的结构与活性之间的关系，可以为其在药物开发和保健品制备中的应用提供理论基础。
2. 保健功能：活性多糖在食品中的应用已成为一种流行的保健食品趋势。
活性多糖可以增强人体的免疫力、改善肠道环境、降低胆固醇等，因此对于预防疾病和促进健康具有积极的作用。
3. 环境友好：活性多糖来源广泛，制备过程简单高效，不会对环境造成污染，因此具有较高的环境友好性。
研究活性多糖的提取纯化及结构解析方法，有助于推动生产技术的创新和环保型产品的开发。
活性多糖的研究具有重要的意义，不仅可以促进相关产业的发展，还可以为人类健康和环境保护做出贡献。
希望通过对活性多糖的深入研究，能够发掘其更多的潜在价值，在各个领域得到更广泛的应用和推广。
1.3 活性多糖提取纯化及结构解析的重要性活性多糖是一类具有活性的多糖化合物，具有诸多生物活性和药理作用。
活性多糖的提取纯化及结构解析对于深入探究其生物活性和作用机制具有重要意义。
通过提取纯化，可以有效分离活性多糖并减少杂质的干扰，从而更好地研究其活性和性质。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展活性多糖是一类具有特殊生物活性的多糖物质，广泛存在于植物和动物体内。
活性多糖具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、降血糖等多种生物活性，因此备受关注。
活性多糖的研究主要分为提取纯化和结构解析两个方面。
本文将重点介绍活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展。
活性多糖的提取纯化是研究其生物活性的基础。
目前，常用的提取方法包括酸碱法、酶解法、热水提取法等。
传统的提取方法存在操作复杂、效率低等问题。
近年来，研究人员尝试了一系列新的提取方法，如超声波提取、微波提取、离子液体提取等。
超声波提取是通过超声波的高频震荡作用，使活性多糖从细胞膜中释放出来。
它具有操作简单、提取效率高的优点。
微波提取是利用微波加热使样品内部产生热效应，从而加速多糖的溶解和迁移。
离子液体提取是利用离子液体作为溶剂，通过调节温度和pH值等条件，实现活性多糖的高效提取。
这些新的提取方法在活性多糖的提取纯化上取得了一定的研究进展。
活性多糖的结构解析是研究其生物活性机制的重要途径。
传统的结构解析方法主要包括物理化学方法和生物学方法。
物理化学方法包括红外光谱、核磁共振、质谱等。
生物学方法主要包括酶解法、电泳法等。
这些方法可以揭示活性多糖的组成成分和一些基本结构信息，但无法提供详细的分子结构信息。
近年来，高新技术的发展为活性多糖的结构解析提供了新的途径。
基于质谱技术的糖组学可以在不需要事先知道多糖结构的情况下，对活性多糖进行全面的糖组学分析，探究其结构和功能之间的关系。
核磁共振技术的进展也为活性多糖的结构解析提供了更多的选择。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展取得了一些重要的成果，但仍存在一些挑战。
目前的提取方法在提高提取效率和活性多糖纯度方面还有待改进。
结构解析方法虽然不断更新，但对于复杂多糖的结构解析仍存在一定的局限性。
为了更好地揭示活性多糖的生物活性机制，未来研究需要进一步完善提取纯化和结构解析的方法，结合不同的技术手段，实现对活性多糖的全面分析和深入研究。
植物及食用菌多糖的提取、分离纯化及结构分析
食品科技植物及食用菌多糖的提取、分离纯化及结构分析白海娜（吉林化工学院生物与食品工程学院，吉林吉林 132022）摘 要：多糖是广泛存在于动植物、微生物中的一类大分子化合物，具有调节免疫力、抗癌、抗氧化、抗衰老等方面的功能作用，本文主要对植物及食用菌多糖的提取、分离纯化及结构分析进行阐述。
关键词：多糖；提取；分离纯化；结构分析多糖又称聚糖，是由分子质量从中等到高分子的聚合物，不同聚糖中单糖的同一性、链的长度、连接单糖的键类型以及链的分支程度等方面不同。
植物及食用菌多糖的结构特征以及生物活性等研究已成为食品和制药的热门研究。
与蛋白质的研究相比，多糖各方面研究还比较落后。
本文主要对植物及食用菌多糖的提取、分离纯化及结构分析进行阐述。
1 多糖的提取1.1 酶解提取该方法是由于酶具有专一性的特征，所以根据酶解反应将植物细胞壁分解成小分子物质，该小分子物质容易溶于提取溶剂，使植物细胞壁被破坏，从而使植物细胞中的有效成分溶出。
此方法的优点是不仅能使植物细胞壁中的有效成分发生降解，使其更容易被提取出来，从而达到使提取率提高或溶剂用量减少的目的；而且还可以对植物药中的部分杂质进行选择性降解，使多糖的提取分离更加容易，同时除了所需的有效成分之外其他的成分还可以收集利用[1]。
尽管该方法在多糖的提取率方面得到了提高，但是在操作过程中温度和pH的变化会严重影响所用酶的活性，且提取的成本相对较高。
1.2 微波提取微波提取多糖的方法又被称为微波萃取技术，该方法是通过微波辐射，使高频电磁波快速穿透被萃取的物质。
因为植物细胞在微波辐射能的作用下吸收了微波能，使植物细胞的内部温度升高，从而导致了组织内部的压力变大，细胞发生破裂，需要被提取的成分在能量的作用下从内部溶出。
该方法在提取多糖时的优势是操作简单、溶剂的使用量消耗少、在操作过程中不会造成污染、多糖提取率高等。
1.3 热回流提取法该方法是在多糖提取方法中最为传统、也是一种操作简单的方法，此方法是根据相似相溶的原理来提取多糖，提取溶剂一般是选择用热水、酸、碱；但是该方法由于在提取过程中温度高、时间长、能量消耗高，容易引起多糖结构以及生物活性发生变化，因此若利用此方法提取多糖，会限制天然多糖产业在市场上的发展。
多糖分离纯化方法具体解析
多糖分离纯化方法具体解析
多糖分离纯化方法有溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声法、微波法、超临界流体萃取法。
多糖除了有增强免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系统保护作用的生物学效应外，还有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血等作用。
在提取分离多糖的传统工艺，如水提醇析、薄膜浓缩法、冻干法等，均以子实体作为生产原料，但是工艺复杂、生产周期长、从而增大了生产成本，使工业化生产和大规模临床应用受到限制。
给客户带来诸多麻烦。
多糖分离纯化是研究多糖的基础。
近年来，分离纯化方法在传统的水提醇沉法的基础上经过改进，加上新的多糖分离分离方法如超临界流体萃取、超滤膜技术和离子交换色谱，新的分析方法如核磁共振及质谱等，使得对多糖的深人研究成为可能，也不断有新的多糖被发现。
多糖分离纯化过程通常不能完全除去杂质，故纯度不高。
采用超滤膜技术脱盐、分级和浓缩，收率高、多搪的生物活性破坏少，还无传统有机溶剂法的试剂残留问题，已普遍成为活性多糖研究的重要手段。
现代膜分离技术没有相变和常温操作，特别适用于生物活性物质的分离、浓缩与纯化。
超滤膜技术应用的缺点是必须知道目的多糖的相对分子质量才能选取有效超滤膜，否则须预选确定选膜，单采用一种膜分离效果有限。
超滤与微滤、纳滤、反渗透及电渗析等多种性能的膜技术进一步联用，取代能耗大、费用高、周期长且处理不彻底的传统工艺操作，将是多糖分离纯化工艺发展的新趋势。
08多糖的提取、分离纯化和结构分析
包括离子交换色谱柱和凝胶柱色谱。
特点：分离效率高、设备简单、操作方便、条件温和 、不易造成物质变性等优点。 应用：物质分离纯化、分析鉴定最重要的方法之一； 分离/有机化合物及生物大分子不可缺少的手段。
多糖的结构分析
多糖的结构：
多糖的结构是其生物活性的基础，多糖的结构分析 在多糖的研究中具有非常重要的地位，是糖化学的核心 所在。 与蛋白质、核酸大分子相比，糖链的结构也包括一
主要是超滤法和柱色谱分离法。
多糖的分离纯化
超滤法：
在常规微粒过滤的基础上发展起来的细微粒子过滤 技术，是膜法分离的一种，其原理是，不同孔径的超过 滤膜排阻不同分子量和形状的多糖而得到分离。 规格：超滤孔径1~100 nm，截留分子量103~106
特点：受渗透压的阻碍作用小，在相当低的压力差
多糖的结构分析
3、糖链中糖残基间的连接位置分析
（2）酶水解法：由于酶促反应具有高度专一性且副产物少 的特点，酶水解法是糖链的结构分析中的一种重要手段，利
用α-糖苷酶和β-糖苷酶对多糖底物的催化反应来确认多糖链
中糖苷键类型，还可以利用酶学方法分析糖肽连接方式。 美国Maley和Tarention发现内切β-N-乙酰氨基葡萄糖糖 苷酶作为稀释放酰胺连接的糖链的工具酶，为研究与天冬酰 胺连接的寡糖结构开辟了新纪元。
多糖的结构分析
3、糖链中糖残基间的连接位置分析
（1）甲基化分析方法：确定糖链中糖基间的连接位置常用 方法。该法首先将多糖链全甲基化，使所有的游离羟基变为
甲氧基。目前最常用的甲基化方法是改良Hakomori法。
Hakomori法先将样品溶于无水二甲基亚砜中，然后与 甲基亚磺酰甲基钠SMSM反应，使得多糖上游离羟基离子化 ，多糖成为阴离子后，易于CH3I反应，该法通常需重复数次 。以α-(1-4)葡聚糖为例说明甲基化过程。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展1. 传统提取法传统的提取方法一般采用水煮、浸泡、微波、超声等物理方法提取活性多糖。
传统的提取方法具有简单、易行、无需特殊仪器设备等优点，但其提取效率低、提取时间长、多糖的品质有限等缺点，限制了其在工业上的应用。
新型的提取方法主要包括离子液体、超临界二氧化碳、酶解、共价交联等化学方法和低温等物理方法。
这些方法能够提高多糖的提取效率、提取速度、提高多糖的品质，同时节约能源、减小污染等，因此越来越受到研究者的关注。
其中离子液体提取法具有独特的优点，不仅提高了多糖的提取效率，而且多糖的分子结构活性得到了很好的保留。
二、活性多糖纯化的方法研究在活性多糖提取后，除去杂质、提高纯度，以达到一定的活性水平，是必要的。
活性多糖纯化的方法主要包括考验分离、凝胶 chromatography 等。
1. 凝胶 chromatography凝胶 chromatography 是活性多糖纯化的主要方法，在葡萄糖酸盐、硫酸钠等凝胶柱上通过分子大小、不同分子之间的相互吸引力等方法，实现多糖的分离纯化。
凝胶chromatography 具有分辨率高、精度好、适用范围广等优点。
2. 考验分离法考试分离法是指将多种物质分配到两相中，通过各物质在两相间的分配系数来实现纯度提高的一种方法。
考试分离法是纯度检验中的重要手段，但是其应用受到一定的限制，因为在很多情况下，多糖在两相界面上较容易出现相互作用，导致分配系数的不确定性。
活性多糖的结构解析至关重要，其结构特征决定了多糖的生物活性和应用效果。
目前，活性多糖结构解析的方法主要有 NMR，MS、FTIR、CD 等。
1. NMRNMR 是目前最常用的活性多糖结构解析方法之一，可以通过测定多糖分子中氢、碳、氮原子的核磁共振吸收，受体与配体的相互作用等来获取多糖分子的结构信息，使分子结构得到了进一步的探索。
2. MS与 NMR 结构解析方法不同，MS 方法可以在分析物质中完整获得化学信息，包括分子量、分子之间的相互关系等信息，多糖的分子量可以通过 MS 方法来确定，同时可通过与其它有较高相似度的多糖分子的质荷比来推测结构信息。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展活性多糖是一类具有生物活性和药用价值的多糖类化合物，广泛存在于植物、菌类、藻类和动物等生物体中。
活性多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、抗炎、降血脂、抗凝血等功能，因此受到了广泛关注。
由于活性多糖在天然状态下存在于复杂的生物基质中，提取纯化及结构解析一直是制约其深入研究和应用的难点。
开展活性多糖的提取纯化及结构解析的研究具有重要的理论和应用价值。
活性多糖的提取纯化是活性多糖研究的基础和关键，其主要目的是将活性多糖从复杂的生物基质中分离出来，得到高纯度的活性多糖样品，为后续的结构解析和生物活性评价提供保障。
目前，活性多糖的提取纯化方法主要包括传统热水提取法、固态发酵提取法、酶解法、超声波辅助提取法、离子液体提取法等。
这些提取方法各有优缺点，有待于进一步的优化和改进。
（一）传统热水提取法传统热水提取法是目前活性多糖提取纯化的常用方法之一，其原理是利用水的高温和高压对生物基质中的活性多糖进行破坏和溶解，然后通过过滤、浓缩、沉淀等步骤得到纯化的活性多糖。
这种方法操作简单，成本低廉，但由于水的极性较小，对一些极性较强的活性多糖提取效果不佳，在提取过程中易导致活性多糖的破坏和降解。
（二）固态发酵提取法固态发酵提取法是利用微生物对生物基质中的多糖进行降解和转化，然后通过固态发酵液的提取和纯化得到活性多糖。
这种方法能够有效地提高活性多糖的产率和纯度，但由于微生物的种类和生长环境等因素的影响，提取效果不稳定，需要对发酵条件进行细致的控制和调整。
（三）酶解法（四）超声波辅助提取法超声波辅助提取法是利用超声波的机械作用和热效应对生物基质中的多糖进行破碎和溶解，然后通过超声波液的分离和纯化得到活性多糖。
这种方法能够在较短时间内提取大量的活性多糖，但由于超声波对生物基质中的活性多糖有一定的破坏作用，提取过程中需要控制超声波的功率和时间。
（五）离子液体提取法以上提取方法各有优劣，目前的研究主要集中在提取条件的优化和提取效果的比较上，希望通过不断的改进和创新，找到更加高效和绿色的活性多糖提取纯化方法。
《锁阳多糖提取纯化、结构解析及生物活性研究》范文
《锁阳多糖提取纯化、结构解析及生物活性研究》篇一一、引言随着现代生物技术的飞速发展，多糖类物质因其独特的生物活性和药用价值逐渐成为研究热点。
锁阳作为一种具有悠久药用历史的中药材，其多糖成分具有极高的研究价值。
本文以锁阳多糖为研究对象，进行提取纯化、结构解析及生物活性研究，旨在为锁阳多糖的深入研究和应用提供理论依据。
二、锁阳多糖的提取纯化1. 材料与方法本实验所使用的锁阳购自药材市场，经鉴定为正品。
采用热水浸提法提取锁阳多糖，通过离心、沉淀、透析等步骤进行纯化。
2. 实验步骤（1）将锁阳粉碎，加入适量去离子水，浸泡一定时间后进行热水浸提。
（2）浸提液经离心后，收集上清液，加入乙醇沉淀多糖。
（3）沉淀经透析、冷冻干燥后，得到锁阳多糖粗品。
（4）采用凝胶渗透色谱、离子交换色谱等手段对粗品进行纯化，得到纯度较高的锁阳多糖。
3. 结果与讨论通过上述方法，成功提取并纯化了锁阳多糖。
在纯化过程中，我们发现锁阳多糖的分子量分布较广，需要通过多次纯化才能得到较高纯度的多糖。
此外，不同批次、不同产地的锁阳多糖含量及纯度存在一定差异，这可能与锁阳的生长环境、采摘时间等因素有关。
三、锁阳多糖的结构解析1. 实验方法利用现代光谱技术（如红外光谱、核磁共振等）对锁阳多糖进行结构解析。
2. 结果与讨论通过光谱分析，我们发现锁阳多糖主要由葡萄糖、甘露糖等单糖组成，具有一定的支链结构。
此外，锁阳多糖还含有一些乙酰基、硫酸基等修饰基团，这些基团的存使得锁阳多糖具有更高的生物活性。
锁阳多糖的空间构象也可能影响其生物活性，值得进一步研究。
四、锁阳多糖的生物活性研究1. 抗肿瘤活性研究通过体外细胞实验和动物实验，研究锁阳多糖对肿瘤细胞的抑制作用。
结果表明，锁阳多糖对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用，可能与其诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖等机制有关。
2. 免疫调节作用研究探讨锁阳多糖对机体免疫系统的影响。
实验结果表明，锁阳多糖能够显著提高机体的免疫力，增强机体的抗病能力。
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）。
干燥后可得粉末状的粗多糖。
微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清[15]。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（％）。
超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展活性多糖是一类存在于许多生物体中的多糖类化合物，具有多种生物活性，包括免疫调节、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等，因此在医药、食品等领域具有广阔的应用前景。
为了进一步研究活性多糖的生物功能及作用机制，需要对其进行提取纯化及结构解析。
本文将综述近年来活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展。
活性多糖的提取通常使用水提、酸提、酶法等方法。
水提法是最常用的提取方法，其原理是利用活性多糖在水中的溶解性。
酸提法则是利用酸性溶液将多糖与其他非多糖物质分离。
酶法是利用特定酶将多糖与其他非多糖物质分离，具有高效、选择性好的优点。
提取纯化后，需要对活性多糖的结构进行解析。
目前常用的方法包括光谱分析、质谱分析、核磁共振(NMR)分析等。
光谱分析常用的有红外光谱(FT-IR)、紫外光谱(UV)等。
红外光谱可以用于分析多糖的官能团，如羟基、氨基等。
紫外光谱可以用于分析多糖的吸收特性，判断其结构特点。
质谱分析常用的有质谱二级解析(MS/MS)、高分辨质谱等。
质谱二级解析主要用于分析多糖的片段，进一步确定其结构特点。
高分辨质谱可以用于分析多糖的分子量和分子式。
核磁共振(NMR)分析常用的有核磁共振氢谱(H-NMR)、核磁共振碳谱(C-NMR)等。
核磁共振氢谱可以用于分析多糖的氢原子位置及数量，核磁共振碳谱可以用于分析多糖的碳原子位置及数量。
近年来，研究者们还应用生物学方法对活性多糖进行结构解析。
例如利用葡聚糖酶、葡聚糖醛酸酶等酶来酶解多糖，并通过检测酶解产物来推测多糖的结构特点。
还可以利用化学方法，如甲基化、硝基化等对多糖进行修饰，再进行光谱、质谱等分析。
活性多糖的提取纯化及结构解析是一个复杂的过程，需要综合运用多种分离、纯化和分析方法。
随着科学技术的不断进步，相信在不久的将来，对活性多糖的提取纯化及结构解析方法将得到更大的突破，为活性多糖的应用研究提供更加可靠的基础。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展活性多糖是一类具有生物活性和保健功能的多糖类物质。
活性多糖在药物、食品、化妆品等领域具有广泛的应用价值。
研究活性多糖的提取纯化及结构解析对于开发和利用这些天然产物具有重要意义。
本文将对活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展进行综述。
活性多糖的提取纯化是研究活性多糖的基础工作。
传统的提取方法包括酸碱法、煮沸法、超声波提取法等。
这些方法操作简单，但提取效率低，且操作过程中易导致活性多糖的降解。
近年来，研究人员发展了很多新的提取方法，如酶法提取、微波辅助提取、超临界流体萃取等。
这些新的提取方法能够提高提取效率，保护活性多糖的生物活性。
活性多糖的纯化是提取多糖后的重要步骤。
传统的纯化方法包括沉淀法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法等。
这些方法可以将活性多糖与其他杂质分离开来，但操作繁琐，且纯化效果不理想。
研究人员提出了很多新的纯化方法，如超滤法、膜分离法、逆流层析法等。
这些新的纯化方法具有高效、节能、环保等特点，能够提高纯化效率，减少对活性多糖的损伤。
活性多糖的结构解析是了解活性多糖的化学组成和空间结构的重要手段。
传统的结构解析方法包括红外光谱法、核磁共振法、质谱法等。
这些方法可以揭示活性多糖的一些基本性质，但对于复杂多糖的结构解析有一定的局限性。
近年来，研究人员开发了很多新的结构解析方法，如X射线晶体学、电子显微镜等。
这些新的结构解析方法能够对活性多糖的原子结构进行精确描述，为进一步研究活性多糖的生物活性和保健功能奠定基础。
活性多糖提取纯化及结构解析的研究进展取得了很大的成果，但仍面临一些挑战。
目前的提取纯化方法仍存在操作复杂、成本较高等问题；结构解析方法仍存在精确度不够、操作难度大等问题。
今后的研究应进一步改进提取纯化方法，开发更多新的结构解析方法，提高活性多糖的提取纯化效率和结构解析精度，为进一步研究和利用活性多糖提供更好的手段和方法。
《锁阳多糖提取纯化、结构解析及生物活性研究》范文
《锁阳多糖提取纯化、结构解析及生物活性研究》篇一一、引言近年来，天然药物研究已经成为全球药物研究的热点之一。
锁阳，作为中医药领域一种常见的传统草药，因其独特的药用价值受到了广泛的关注。
其含有多种有效成分，如多糖、生物碱等，具有抗氧化、抗肿瘤、提高免疫力等多种生物活性。
本文以锁阳多糖为研究对象，进行其提取纯化、结构解析及生物活性的研究。
二、材料与方法（一）材料1. 锁阳原料2. 实验仪器3. 试剂及耗材（二）方法1. 锁阳多糖的提取2. 锁阳多糖的纯化3. 锁阳多糖的结构解析4. 生物活性实验三、实验结果（一）锁阳多糖的提取与纯化通过优化提取条件，我们成功地从锁阳中提取出多糖。
经过一系列的纯化步骤，包括去蛋白、脱色、透析等，得到了较为纯净的锁阳多糖。
通过紫外-可见光谱、红外光谱等手段对提取的锁阳多糖进行初步的定性分析，发现其具有多糖的特征吸收峰。
（二）锁阳多糖的结构解析利用现代分析技术，如核磁共振（NMR）、质谱（MS）等手段，对锁阳多糖的结构进行了解析。
结果表明，锁阳多糖主要由葡萄糖、甘露糖等单糖组成，具有特定的糖苷键连接方式。
通过比对文献报道，我们推测出锁阳多糖可能的结构模型。
（三）生物活性研究1. 抗氧化活性：通过DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验等手段，发现锁阳多糖具有较好的抗氧化活性。
2. 抗肿瘤活性：通过细胞实验，发现锁阳多糖对癌细胞具有一定的抑制作用，且对正常细胞无明显的毒性作用。
3. 提高免疫力：通过动物实验，发现锁阳多糖能够显著提高机体的免疫力。
四、讨论通过对锁阳多糖的提取纯化、结构解析及生物活性的研究，我们得出以下结论：1. 通过优化提取条件，成功地从锁阳中提取出多糖，并经过纯化得到较为纯净的锁阳多糖。
2. 通过现代分析技术，解析了锁阳多糖的结构，发现其由葡萄糖、甘露糖等单糖组成，具有特定的糖苷键连接方式。
3. 锁阳多糖具有较好的抗氧化、抗肿瘤和提高免疫力的生物活性，为进一步开发利用锁阳提供了理论依据。
[生物学]多糖提取纯化以及结构解析
![[生物学]多糖提取纯化以及结构解析](https://img.taocdn.com/s3/m/94863372ad02de80d4d840ea.png)
2012.10.31
浙江中医药大学中药炮制中心
• 多糖的种类： 1）均一多糖(同多糖)： 由一种单糖缩合而成。
2012.10.31
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• 不均一多糖(杂多糖)： 由不同类型单糖缩合 而成
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• 一：分子量及分子式的确定 质谱分析测定分子量和分子式。 苷类化合物一般极性较大，无挥发性，遇热气化时 易于分解，采用电子轰击质谱(EI—MS)常常不能获得分子 离子峰。 现多采用化学电离质谱(CI-MS)、场解吸质谱(FDMS)、快原子轰击质谱(FAB-MS)和电喷雾质谱(ESI-MS)等 方法来获得分子离子蜂，尤其是ESI-MS及FAB-MS两种质谱 法更是目前测定苷类分子量常用的方法。
脂、提高机体免疫和抗肿瘤、抗辐射方面
都具有很广泛的应用。
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糖的分类
单糖
寡糖
多糖 复合糖 衍生糖
•凡不能被水解为更小分子的糖称。 • 如：核糖、葡萄糖
•凡能被水解成少数（2—10个）单糖分子的糖称~。 • 如：蔗糖 葡萄糖+果糖 • 凡能被水解成多个单糖分子的糖称~。 • 如：淀粉 n葡萄糖 •与非糖物质结合的糖。 • 如：糖脂、糖蛋白(蛋白聚糖)、糖核苷酸等。 •糖的衍生物。 •如：糖醇、糖酸、糖胺、糖苷等
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盐析法原理原理 利用不同多糖与金属离子成盐后在水溶液中的特异性 沉淀作用，用硫酸铵、乙酸钾、氯化钾等盐析剂，将 不同的多糖逐步析出。
金属配合物法原理： 利用不同多糖能与金属离子形成配合 物而沉淀下来，使用多种配位剂沉淀多 糖。
2012.10.31
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糖的分类
单糖 寡糖
多糖 复合糖 衍生糖
•凡不能被水解为更小分子的糖称。 • 如：核糖、葡萄糖
•凡能被水解成少数（2—10个）单糖分子的糖称~。 • 如：蔗糖 葡萄糖+果糖
• 凡能被水解成多个单糖分子的糖称~。 • 如：淀粉 n葡萄糖 •与非糖物质结合的糖。 • 如：糖脂、糖蛋白(蛋白聚糖)、糖核苷酸等。
提高溶液PH值或加入硼砂缓冲液，也可
沉淀分离中性多糖。
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纤维素柱色谱原理 它利用的是不同多糖浓度乙醇中溶解性不同，先用4 倍V的乙醇将多糖混合液沉淀在惰性的多孔纤维素柱 上，再用不同浓度的乙醇洗脱，使不同多糖分离开来。
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• 多糖 常用热水、稀碱或稀酸溶液进行提取。
（植物体内苷常与水解酶共存，所以要杀酶或抑制 酶的活性。）
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物理辅助提取
热水提 稀碱提
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多糖提取 粗多糖
微波提取 超临界流体萃取
超声提取
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热水提取
对于易溶于温水、难溶于冷水和乙醇的多糖采用这种 方法。材料需要先用冷水浸过，再用热水提取，必要 时可加热至80～90℃，搅拌提取，提取液用正丁醇 与氯仿混合液除去杂蛋白，离心除去杂蛋白的清液， 透析后用乙醇沉淀即得到多糖。
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稀碱提取
适合用此方法的多糖主要是不溶性胶类，用冷水 浸润红0.5mol/L NaOH提取，提取液用酸中和后 浓缩，再加乙醇沉淀即得到多糖。甘露聚糖、半 乳糖等利用此法可得到相当纯的物质。
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Sevag法(用氯仿:丁醇 5:1混合) 三氟三氯乙烷法(多糖溶液:三氟三氯乙烷1:1)
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糖类介绍 多糖提取 多糖纯化 多糖结构分析
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糖类介绍 多糖提取
糖类介绍
多糖纯化 多糖结构分析
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定义：
O
• 糖类(Carbohydrates)
H
OH
HO
H
物质是含多羟醛或多
H
OH
羟由分来C酮 子 表、类 式 示H化 常 。、合 用O多醛物C组n。羟或成(H主基多，2O要其醛羟)n ；基多酮OO羟的H 基衍酮生H；物多。OOHH羟基
离子交换色谱原理 多糖分子带有电荷，可以 与离子交换剂中的离子或基 团结合，亲和力随多糖结构与电离性的不同而不同， 一般随分子中酸性基团的增加而增强，支链多糖比支 链的更易吸附常用，交然换后剂用为不阳同离浓子度或的阴离盐子溶交液换进纤行维洗素脱。。
阳离子交换纤维素适用于分离酸性、中性多糖和粘多糖。 中性多糖与硼酸络合后可增加酸性，可被阳离子交换纤 维素吸附 酸性基团多的吸附力强，对于线性分子，分子量大的比 小的吸附力强，直链分子比支链分子易吸附
2012.10.3同相对分子质量的多糖在不同浓度的低级醇或 低级酮中溶解性不同，可以逐步提高溶液中醇或酮的 浓度以使不同组分的多糖依相对分子质量由大到小的 顺序沉淀，最终达到分离的目的。
（为了多糖的稳定，一般在PH7时进行，酸性 多糖在PH2-4时进行)
2012.10.31
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盐析法原理原理 利用不同多糖与金属离子成盐后在水溶液中的特异性 沉淀作用，用硫酸铵、乙酸钾、氯化钾等盐析剂，将 不同的多糖逐步析出。
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金属配合物法原理： 利用不同多糖能与金属离子形成配合
物而沉淀下来，使用多种配位剂沉淀多 糖。
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季铵盐沉淀原 长链季铵盐是碱性表面活性剂，酸性多糖在溶理液中以聚 阴离子形式存在，它就与季铵盐或其碱形成不溶性配合
与酸性多糖形成不溶性沉淀，使其分离。
物沉淀，又由于多糖分子酸性越强、相对分子质量越大
越易沉淀常出用来季，这氨样盐控有制十季六铵烷盐浓基度三即甲可胺以溴分理化出物不及 同的酸性其多氢糖氧化物和十六烷基吡啶。
•糖的衍生物。 •如：糖醇、糖酸、糖胺、糖苷等
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糖类介绍 多糖提取
多糖提取
多糖纯化 多糖结构分析
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• 单糖、低聚糖 常用水或醇提取，然后用不同的有机溶剂萃取得 到不同极性的化合物。
脱脂→去杂→浓缩→再次去杂→脱色 →浓缩 →冷却 →结晶（→进一步纯化）
HO
H
H
OH
H
OH
OH
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糖类分布 糖we类lco广m泛e to分u布se于the生se物P体ow中erP，oi可nt t以em分pla为te单s, N糖e、w 低Co聚nte糖nt和de多sig糖n,。10目ye前ar已s e发xpe现rie不nc少e 糖类及其 衍生物具有药用价值，尤其在抗凝、降血 脂、提高机体免疫和抗肿瘤、抗辐射方面 都具有很广泛的应用。
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凝胶柱色谱原理 分子筛原理，按照分子量的大小不同进行分离。 常用葡聚糖凝胶（sephadex G）
除此之外，还有膜分离技术、超滤膜术 等也应用于多糖的分离纯化
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常用的脱色方法
对于植物来源的多糖，可能含有酚型化合物而颜色 较深，对其进行脱色可使其应用范围更加广泛。常 用的脱色方法有:离子交换法、氧化法、金属络合物 法、吸附法(纤维素、硅藻土、活性炭等)。
除杂
三氯乙酸法(滴加3%三氯醋酸) 酶法
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等电点沉淀法
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糖类介绍 多糖提取
多糖纯化
多糖纯化 多糖结构分析
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由于提取液还含有多种组分的多糖混 合物，因此需要进一步纯化
纯化方法
（1）沉淀法（分级沉淀） （2）盐析法 （3）季铵盐沉淀法 （4）纤维素柱色谱法（吸附+分配） （5）离子交换色谱法 （6）凝胶柱色谱法 （7）制备区域电泳法 （8）金属配合物法