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3.3本实验中选择融入了杂化颗粒技术而使pH耐受 范围宽(1-12)的XTerraRP18色谱柱,达到了较好的 分离效果。
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按2.1项下条件进行HPLC分析,比较各色谱图,有10 个峰是10份供试液所共有的,因此确定这10个峰为 共有指纹峰(图1)。同时取麻黄汤及单味药材样品, 按相同条件进行HPLC分析确定各色谱峰来源。通 过对照分析,确定共有峰1、9来源于桂枝;共有峰2、 7来源于苦杏仁;共有峰3、4、5来源于麻黄;共有 峰6, 8, 10来源于甘草。
2.7.2 参照物的选择:在HPLC图谱中选择峰面积 较大,出峰时间适中且稳定的色谱峰作为参照峰, 结果19.862 min的色谱峰符合此条件,经对照品对 照认定为麻黄碱的吸收峰,故选择麻黄碱作为参照 物。
2.7.3 共有峰的相对保留时间相对峰面积指纹图 谱相似度计算:选取色谱图中10强峰,由色谱工作 站辅助自动进行峰匹配,确定10个共有峰。以麻黄 碱色谱峰的保留时间和峰面积积分值为1,各共有 峰相对保留时间及相对峰面积的RSD均在3.0%以内; 以10个共有峰峰面积的均值作模板,利用“相关系 数法”[6]和“夹角余弦法”[7]计算指纹图谱的相 似度,结果见表1和表2,两种方法计算的相似度结 果均在0.99以上。
3.结论
3.1 本研究建立了麻黄汤的RP-HPLC指纹图谱,确 定了10个共有峰,结果表明所建立的指纹图谱的技 术指标稳定、重现性好。本实验方法可为麻黄汤 及其类方的物质基础和配伍规律研究提供分析方 法,也可为麻黄药材及其复方指纹图谱的建立提供 参考。
3.2 本研究全方供试品溶液中麻黄碱、伪麻黄碱 含量均较单味麻黄供试品溶液有所增加。
2.6.3 重复性试验:取同批药材配制成的全方,按 供试品溶液制备方法平行制备5份麻黄汤供试品溶 液,测定液相色谱图,结果各共有峰的相对保留时 间的RSD小于2.7%,相对峰面积的RSD小于2.8%,表 明方法重复性良好。
2.7 麻黄汤指纹图谱的测定及技术参数 2.7.1 样品测定:取10批麻黄汤供试品溶液,分别
2.6 指纹图谱测定的方法学考察
2.6.1 精密度试验:取同一供试品溶液,连续进样 5次,测定HPLC色谱图,结果各共有峰相对峰面积的 RSD小于1.5%,相对保留时间的RSD小于1.2%,表明 仪器精密度良好。
2.6.2 稳定性试验:取同一供试品溶液在室温下 保存,分别于0、2、4、8、16、24 h进样,HPLC检 测,结果其各共有峰的相对保留时间RSD小于1.8%, 相对峰面积RSD小于2.3%,表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。
中井源博
摘要 目的:建立中药复方麻黄汤的指纹图谱。方法:采用 RP-HPLP法,色谱柱为WatersXTerraRP18(3.9 mm×150 mm, 5μ m),流动相为乙腈-10 mmol/L碳酸氢铵溶液(用浓氨水 调pH至9.5),梯度洗脱,检测波长为215nm;流速0.8 ml/min。 结果:以麻黄碱为参照峰,标示出麻黄汤10个共有峰,并说 明了其药材归属。结论:该方法具有较好的分离效果和良 好的精密度,为麻黄汤制剂的质量控制提供了科学依据。
关键词 麻黄汤;高效液相色谱;指纹图谱
1.目的 麻黄汤为医圣张仲景名方,出自《伤寒论》,全方以麻黄为
君,配伍桂枝、杏仁、炙甘草所组成,具有发汗解表、宣肺 平喘之功效[1]，主治太阳伤寒表实证、恶寒发热、头痛身 痛腰痛、无汗而喘[2]。现代药理及拆方实验研究表明,麻 黄汤中麻黄碱和伪麻黄碱的生理活性及药动学不尽相同, 且方中桂枝、杏仁、炙甘草对麻黄碱和伪麻黄碱的药动学 影响较为显著[3-5]。
2.方法 运用RP-HPLC法,通过建立采用传统方法制备的麻
黄汤指纹图谱,为较深入地研究该方有效成分的变 化提供分析手段,同时,以期从多药物、多成分的 系统化角度实现对麻黄汤及相关制剂的质量控制。
实验部分 2.1 仪器与材料 2.2 色谱条件 2.3 检测波长：215 nm 2.4 对照品溶液的制备 2.5 供试品溶液的制备