最全的G418筛选稳定表达细胞系总结1

最全的G418筛选稳定表达细胞系

G418是一种广谱抗生素，可以选择性地杀死没有正确整合的质粒DNA转染的

细胞，从而筛选出具有稳定表达的细胞系。G418筛选是基因转染中常用的一种选

择方法，通过对G418敏感性的筛选来选择转化基因。本文将G418筛选步骤和优

化方案。

G418筛选步骤

细胞株选取

首先需要选取稳定转染所需的细胞株。需要保证选取的细胞株生长健康、分裂

正常、易于培养以及不易死亡。常用的细胞株有293T、CHO、HEK293。

转染

在开始筛选之前，需要将目的基因转染进入所选细胞株。目前常用的转染方法

有磷酸钙共沉淀法、电转染法和脂质体转染法等，需要根据实际情况选择转染方法。

初步筛选

完成转染后，需要在培养基中加入G418，通常的加药浓度不超过1mg/mL，

推荐浓度为400μg/mL。在转染后24-48小时内开始进行初步筛选，通过观察细胞的生长状态以及基因表达情况来判断筛选效果。

细分筛选

初步筛选后，需要将G418的浓度逐步增加，通常第二轮加药浓度是初步筛选

浓度的2倍，第三轮加药浓度是第二轮的2倍。逐渐递增药物浓度，可以让敏感

的细胞死亡，生存的细胞逐渐表达目的基因，从而得到稳定的细胞株。

稳定维持

筛选到稳定的细胞后，需要对细胞进行定期维护。通常可以在培养基中加入适

当的G418浓度，维持稳定表达的转染细胞。

优化方案

药物浓度

G418的加药浓度直接影响到细胞死亡率和筛选效果。在进行筛选前需要先进

行剂量反应实验，通过不同浓度药物的处理，检测细胞生长状态和基因表达情况。

细胞密度

传统细胞密度在98%时，死亡率是最高的。因此，为了降低G418对细胞的毒性，可以将细胞密度控制在70-80%左右。同时，过稀的细胞密度也会影响到筛选效果，因此需要根据实际情况进行调整。

培养时间

筛选时间也直接影响到G418对细胞的毒性程度和筛选效果。不同的细胞株和实验条件下，对筛选时间的选择有所不同。通常初步筛选时间在24-48小时，细分筛选筛选时间需要根据实际情况进行判断。

G418筛选方法是一种高效的稳定细胞系筛选方法。通过细胞株选取、转染和药物浓度以及细胞密度等多个环节的优化，可以获得高效的稳定表达细胞系。的筛选步骤和优化方案可以有效的指导实验操作。