CD3AK细胞过继免疫治疗的实验研究
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[ 1]
ce lls were a lso increased ,
to 3. 29 and 2. 47 fo ld , respective l y, unde r the co stm i ul a tion o f an ti CD28 anti body. W hen the ra tio o f e ffecti v e ce lls and ta rget ce lls was 80 1, 57. 54% ta rge t ce lls we re k ill ed . As compa red w ith contro,l the percen t of tumor inh i b ition in CD 3AK ce lls treated tumor bearing m ice was 33. 17% , and the inh i b iti on rate o f lung me tastas is w as 39. 70 %. The CD 3AK ce lls trea t m en t was m ore e ffective when comb ined w ith LAK ce lls . CONCLUS ION: yCD 3 cou ld activa te T ce lls and sign ifican tly induce the tu m or supp ressive acti v ity o f CD 3AK ce lls in v itro and in v ivo , wh ich lays a founda ti on for adop tive m i m uno the rapy aga inst tu m ors in clinica lmed icine . [ K eyword s] an ti CD 3 mAb ; CD 3AK ce l;l adop tive m i mu no the rapy
9
1 . 2 . 5
荷 瘤小 鼠 模型 的 建立 及 免疫 治 疗
6
# 给
BALB / c 小鼠皮下接种 Sp2 /0 细胞 , 5 ∀ 10 /只 , 7 d 后即生长实体瘤。以抗小鼠 CD3 mAb 145- 2C11 诱 导 CD3AK 细胞 , 于接种 Sp2 /0 细胞后第 8 天, 静脉 注射 CD3AK 细胞 1 ∀ 10 /只, 连续治疗 2 次 , 间隔
收稿日期 : 2004- 03- 26; 修回日期 : 2004 - 05- 24
。用于肿瘤的 A IT 的免疫细胞
主要有淋巴因子激活的杀伤细胞 ( LAK ) 、肿瘤浸润 淋巴细胞 ( T IL ) 和抗 CD3 单克隆抗体 ( mAb) 激活的 杀 伤 细 胞 ( ant i CD3 mAb act iv ata id k iller cells, CD3AK )。与 LAK 细胞及 T I L 细胞相比较 , CD3AK 细胞具有扩增能力强、体外存活时间较长、细胞毒活 性高、 分泌淋巴因子的能力强和体内外抗肿瘤效果 显著等优点 , 临床应用具有很好的前景。本实验室通 过细胞融合的方法, 得到 1 株分泌抗 CD3 mAb 的杂 交瘤细胞 yCD3 , 并对其特性、特异性及功能进行了 研究。
杀伤率 (% ) = [ ( 实验 组的 A 值 - 靶细 胞自 然 释放 的 A 值 ) - 效应细胞自然释放的 A 值 ) /( 最 大释放组的 A 值 - 靶细 胞自然释放的 A 值 - 效应细胞自然释放的 A 值 ) ] ∀ 100% 。 自然释放率 (% ) = ( 靶 /效细胞 自然释 放的 A 值 /最大 释 放组的 A 值 ) ∀ 100% 。
Experi m ental study of adoptive i mmu notherapy using CD3AK cells
SUN Y ing xun, C HENG Shao hui, YU M ing, HE Yong huai, LA I Chun n ing, LI Yan, S HEN B ei f en*
H TdR 购自中国原子能研究所。 IL 2 购自瑞得合通
制药有 限公 司。细 胞固 定 /破 膜溶 液 ( Cyto fix /Cyto per m )及破膜 /洗涤溶 液 ( per m /w ash so lu t ion ) 购自晶 美公司。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 yCD3 特异性的流式细胞术 ( FCM ) 鉴定 细 胞洗涤后, 加入待测 yCD3 抗体或标记抗体 , 于 4! 反应 20 m in 。加入 GAM F ITC 反应 20 m in , 洗涤后, 加 10 g /L 多聚甲醛固定 , 用 流式细胞仪进 行测定, 以 Ce ll Quest软件系统分析结果。 1 . 2 . 2 淋巴细胞转化试验 分离人外周血单个核细
作者简介 : 孙瑛勋 ( 1949 - ) , 女 , 山东蓬莱人 , 高级实验师 . Te: l ( 010) 66931326; Em ai: l sunyx@ amm s . ac . cn
* Correspond ing au thor
1 材料和方法
1 . 1 材料 小鼠骨髓瘤细胞 ( Sp2 /0) 和人 T、B 细胞 抗体, 藻红素 ( PE ) 标 系均为本室保 存。 F I TC 标记 的抗 CD3 、抗 CD4 、抗 CD8及抗 CD25 mAb 、抗 IFN 记的抗 CD3 mAb、抗 IL 2 抗 体均由晶美公 司提供。 F ITC 标记的羊抗小鼠抗体 ( GAM F I TC ) 为本室制备。
论著
文章编号: 1007- 8738( 2005) 02- 0218- 04
CD3AK 细胞过继免疫治疗的实验研究
孙瑛勋 , 程绍辉 , 于 鸣, 贺永怀, 赖春宁, 黎 燕 , 沈倍奋* ( 军事医学科学院基础医学研究所, 北京 100850)
[摘 要] 目 的 : 分 析 抗 CD3 分 子 的 单 克 隆 抗 体 ( mA b )
[ Ab stract]
AI M: To ana l y ze the m i m uno log ica l prope r
ti e s and b io l og ica l ac tivity of a monoclona l an tibody ( mAb) aga inst CD 3 mo lecu le ( yCD 3 ), and to obse rve tu m or supp ressive activity o f CD 3AK ce lls i n v itro and in v iv o. M ETHOD S : FCM was used to te st the spec ificity o f yCD 3 and the m i muno log ica l pheno type and cy tokine production o f CD 3AK .
Institute o f Basic M ed ic ine , A cade m y o f M ilitary M ed ica l Sc i ences , Be ijing 100850 , Ch ina
yCD3 的免疫 学特性和生物学活性 , 观察其激活的免疫活 性细 胞 CD 3AK 体外及动物体 内的抑瘤作用。 方法 : 用流式细胞术 ( FCM ) 测定 yCD 3 的特异性 , 以及 CD 3AK 细 胞的免疫表 型和 产生细胞因子的情况。用 3H TdR 法测定 yCD 3 对淋巴细胞转 化的作用 ; 乳酸脱 氢酶 法 ( LDH ) 测定 CD 3AK 细 胞的 体外 细 胞毒活性。建立荷瘤小鼠模型 , 观察静脉注射 CD 3AK 细胞后 肿瘤生长的情况、转 移灶数 量和小 鼠存活天 数。 结果 : yCD3 与 T 细胞呈特异性 反应 , 5 g yCD3 可竞争 抑制 70% 的标 准 g /L , 并与 I L 2、抗 CD28 抗体 的 CD 3+ 细胞 均有 不同 程度 的 抗 CD 3 抗体与细胞表面 CD 3 分子的 结合。 yCD3 刺激外 周血 淋巴细胞增殖的有效浓度为 8 细胞增多 ; 产生 I L 2 和 IFN 有协同作用。活化 的 CD 3AK 细 胞中 CD 3+ 、 CD8+ 和 CD25+ 增加 , 在抗 CD28 抗体协同刺激下 分别增 加 3 . 29 和 2 . 47 倍。 当效靶细胞比为 80 1 时 , CD3AK 细胞 对体 外肿 瘤细 胞杀 伤 的百分率为 57. 54% 。分组 观察荷 瘤动 物 , CD3AK 细胞治 疗 组的抑 瘤 率 为 33 . 17% , 对 小 鼠 肿 瘤 肺 转 移 的 抑 制 率 为 39 . 70% , 与 LAK 细胞联合治疗的疗效更显著。结论 : yCD3 可 活化 T 细胞 , 诱导的 CD 3AK 细胞在体外及动物体内显示抑制 肿瘤的作用 , 在临床抗肿瘤过继性免疫治疗 中具有重要意义。 [ 关键词 ] 抗 CD 3单克隆抗体 ; CD3AK 细胞 ; 过继性免疫治疗 R 392. 9 [ 文献标识码 ] B [ 中图分类号 ]
+ + + +
Among activa ted ce lls increased .
肿瘤 的过 继 性细 胞免 疫治 疗 ( adopt iv e ce llular m munotherapy i , AC I或 A I T ) 是指向肿瘤患者转输具 有抗肿瘤活性的免疫细胞 ( 特异性和非特异性的 ) 直 接杀伤肿瘤或 激发机体的免 疫应答杀伤肿 瘤细胞。 也可作为手术、放疗、化疗的补充, 提高疗效和改善 患者生存的质量。因此, 近年来一直是肿瘤生物治 疗中最活跃的领域
因此近年来一直是肿瘤生物治疗中最活跃的领域it的免疫细胞主要有淋巴因子激活的杀伤细胞lak肿瘤浸润淋巴细胞til和抗cd3单克隆抗体mab激活的杀伤anti2cd3mabactivataidkillercellscd3aklak细胞及til细胞相比较cd3ak细胞具有扩增能力强体外存活时间较长细胞毒活性高分泌淋巴因子的能力强和体内外抗肿瘤效果显著等优点临床应用具有很好的前景
3
H TdR assay was used to m easure the transfo r
m ation of l ymphocytes activa ted by yCD 3. LDH assay was used to ana lyze the cy to tox ic acti v ity o f CD 3AK in v itro. M ice bear i ng tumors w ere used to obse rve the an ti tu m on e ffect o fCD3 AK ce lls . RESULTS : yCD 3 cou l d b ind spec ific a lly to T ce lls. 5 g yCD 3 could compe titive l y inh i b it 70% o f standard an ti CD 3 antibody to b ind w ith CD 3 m o l ecu l e s on ce llmemb rane . 8 g /L o f yCD 3 stm i u lated the p ro liferation o f pe riphe ra l b lood l ymphocytes , wh ich cou ld be fur ther boos ted by IL 2 or an ti CD 28 antibod ies. CD 3AK ce lls , CD3 , CD8 , and CD 25 IL 2 and IFN produc ing CD3
3
溶液 ( 氯化硝基四氮唑蓝 4 m g、氧化型辅酶 & 10 m g 及吩秦二甲酯硫酸盐 1 m g 加水至 2 mL, 溶解。取上 液 1 . 6 mL 加 1 m o l/L 乳酸钠 0 . 4 mL, 0 . 1 mo l /L PB p H 7 . 4 加至 10 mL ) 100 L, 于室温作用 10 m in , 加 0 . 1 m o l/L 柠檬酸 25 L 终止反应。用酶联仪于波长 570 测量吸光度 ( A )值。 ∋计算公式 :
ce lls were a lso increased ,
to 3. 29 and 2. 47 fo ld , respective l y, unde r the co stm i ul a tion o f an ti CD28 anti body. W hen the ra tio o f e ffecti v e ce lls and ta rget ce lls was 80 1, 57. 54% ta rge t ce lls we re k ill ed . As compa red w ith contro,l the percen t of tumor inh i b ition in CD 3AK ce lls treated tumor bearing m ice was 33. 17% , and the inh i b iti on rate o f lung me tastas is w as 39. 70 %. The CD 3AK ce lls trea t m en t was m ore e ffective when comb ined w ith LAK ce lls . CONCLUS ION: yCD 3 cou ld activa te T ce lls and sign ifican tly induce the tu m or supp ressive acti v ity o f CD 3AK ce lls in v itro and in v ivo , wh ich lays a founda ti on for adop tive m i m uno the rapy aga inst tu m ors in clinica lmed icine . [ K eyword s] an ti CD 3 mAb ; CD 3AK ce l;l adop tive m i mu no the rapy
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1 . 2 . 5
荷 瘤小 鼠 模型 的 建立 及 免疫 治 疗
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# 给
BALB / c 小鼠皮下接种 Sp2 /0 细胞 , 5 ∀ 10 /只 , 7 d 后即生长实体瘤。以抗小鼠 CD3 mAb 145- 2C11 诱 导 CD3AK 细胞 , 于接种 Sp2 /0 细胞后第 8 天, 静脉 注射 CD3AK 细胞 1 ∀ 10 /只, 连续治疗 2 次 , 间隔
收稿日期 : 2004- 03- 26; 修回日期 : 2004 - 05- 24
。用于肿瘤的 A IT 的免疫细胞
主要有淋巴因子激活的杀伤细胞 ( LAK ) 、肿瘤浸润 淋巴细胞 ( T IL ) 和抗 CD3 单克隆抗体 ( mAb) 激活的 杀 伤 细 胞 ( ant i CD3 mAb act iv ata id k iller cells, CD3AK )。与 LAK 细胞及 T I L 细胞相比较 , CD3AK 细胞具有扩增能力强、体外存活时间较长、细胞毒活 性高、 分泌淋巴因子的能力强和体内外抗肿瘤效果 显著等优点 , 临床应用具有很好的前景。本实验室通 过细胞融合的方法, 得到 1 株分泌抗 CD3 mAb 的杂 交瘤细胞 yCD3 , 并对其特性、特异性及功能进行了 研究。
杀伤率 (% ) = [ ( 实验 组的 A 值 - 靶细 胞自 然 释放 的 A 值 ) - 效应细胞自然释放的 A 值 ) /( 最 大释放组的 A 值 - 靶细 胞自然释放的 A 值 - 效应细胞自然释放的 A 值 ) ] ∀ 100% 。 自然释放率 (% ) = ( 靶 /效细胞 自然释 放的 A 值 /最大 释 放组的 A 值 ) ∀ 100% 。
Experi m ental study of adoptive i mmu notherapy using CD3AK cells
SUN Y ing xun, C HENG Shao hui, YU M ing, HE Yong huai, LA I Chun n ing, LI Yan, S HEN B ei f en*
H TdR 购自中国原子能研究所。 IL 2 购自瑞得合通
制药有 限公 司。细 胞固 定 /破 膜溶 液 ( Cyto fix /Cyto per m )及破膜 /洗涤溶 液 ( per m /w ash so lu t ion ) 购自晶 美公司。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 yCD3 特异性的流式细胞术 ( FCM ) 鉴定 细 胞洗涤后, 加入待测 yCD3 抗体或标记抗体 , 于 4! 反应 20 m in 。加入 GAM F ITC 反应 20 m in , 洗涤后, 加 10 g /L 多聚甲醛固定 , 用 流式细胞仪进 行测定, 以 Ce ll Quest软件系统分析结果。 1 . 2 . 2 淋巴细胞转化试验 分离人外周血单个核细
作者简介 : 孙瑛勋 ( 1949 - ) , 女 , 山东蓬莱人 , 高级实验师 . Te: l ( 010) 66931326; Em ai: l sunyx@ amm s . ac . cn
* Correspond ing au thor
1 材料和方法
1 . 1 材料 小鼠骨髓瘤细胞 ( Sp2 /0) 和人 T、B 细胞 抗体, 藻红素 ( PE ) 标 系均为本室保 存。 F I TC 标记 的抗 CD3 、抗 CD4 、抗 CD8及抗 CD25 mAb 、抗 IFN 记的抗 CD3 mAb、抗 IL 2 抗 体均由晶美公 司提供。 F ITC 标记的羊抗小鼠抗体 ( GAM F I TC ) 为本室制备。
论著
文章编号: 1007- 8738( 2005) 02- 0218- 04
CD3AK 细胞过继免疫治疗的实验研究
孙瑛勋 , 程绍辉 , 于 鸣, 贺永怀, 赖春宁, 黎 燕 , 沈倍奋* ( 军事医学科学院基础医学研究所, 北京 100850)
[摘 要] 目 的 : 分 析 抗 CD3 分 子 的 单 克 隆 抗 体 ( mA b )
[ Ab stract]
AI M: To ana l y ze the m i m uno log ica l prope r
ti e s and b io l og ica l ac tivity of a monoclona l an tibody ( mAb) aga inst CD 3 mo lecu le ( yCD 3 ), and to obse rve tu m or supp ressive activity o f CD 3AK ce lls i n v itro and in v iv o. M ETHOD S : FCM was used to te st the spec ificity o f yCD 3 and the m i muno log ica l pheno type and cy tokine production o f CD 3AK .
Institute o f Basic M ed ic ine , A cade m y o f M ilitary M ed ica l Sc i ences , Be ijing 100850 , Ch ina
yCD3 的免疫 学特性和生物学活性 , 观察其激活的免疫活 性细 胞 CD 3AK 体外及动物体 内的抑瘤作用。 方法 : 用流式细胞术 ( FCM ) 测定 yCD 3 的特异性 , 以及 CD 3AK 细 胞的免疫表 型和 产生细胞因子的情况。用 3H TdR 法测定 yCD 3 对淋巴细胞转 化的作用 ; 乳酸脱 氢酶 法 ( LDH ) 测定 CD 3AK 细 胞的 体外 细 胞毒活性。建立荷瘤小鼠模型 , 观察静脉注射 CD 3AK 细胞后 肿瘤生长的情况、转 移灶数 量和小 鼠存活天 数。 结果 : yCD3 与 T 细胞呈特异性 反应 , 5 g yCD3 可竞争 抑制 70% 的标 准 g /L , 并与 I L 2、抗 CD28 抗体 的 CD 3+ 细胞 均有 不同 程度 的 抗 CD 3 抗体与细胞表面 CD 3 分子的 结合。 yCD3 刺激外 周血 淋巴细胞增殖的有效浓度为 8 细胞增多 ; 产生 I L 2 和 IFN 有协同作用。活化 的 CD 3AK 细 胞中 CD 3+ 、 CD8+ 和 CD25+ 增加 , 在抗 CD28 抗体协同刺激下 分别增 加 3 . 29 和 2 . 47 倍。 当效靶细胞比为 80 1 时 , CD3AK 细胞 对体 外肿 瘤细 胞杀 伤 的百分率为 57. 54% 。分组 观察荷 瘤动 物 , CD3AK 细胞治 疗 组的抑 瘤 率 为 33 . 17% , 对 小 鼠 肿 瘤 肺 转 移 的 抑 制 率 为 39 . 70% , 与 LAK 细胞联合治疗的疗效更显著。结论 : yCD3 可 活化 T 细胞 , 诱导的 CD 3AK 细胞在体外及动物体内显示抑制 肿瘤的作用 , 在临床抗肿瘤过继性免疫治疗 中具有重要意义。 [ 关键词 ] 抗 CD 3单克隆抗体 ; CD3AK 细胞 ; 过继性免疫治疗 R 392. 9 [ 文献标识码 ] B [ 中图分类号 ]
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Among activa ted ce lls increased .
肿瘤 的过 继 性细 胞免 疫治 疗 ( adopt iv e ce llular m munotherapy i , AC I或 A I T ) 是指向肿瘤患者转输具 有抗肿瘤活性的免疫细胞 ( 特异性和非特异性的 ) 直 接杀伤肿瘤或 激发机体的免 疫应答杀伤肿 瘤细胞。 也可作为手术、放疗、化疗的补充, 提高疗效和改善 患者生存的质量。因此, 近年来一直是肿瘤生物治 疗中最活跃的领域
因此近年来一直是肿瘤生物治疗中最活跃的领域it的免疫细胞主要有淋巴因子激活的杀伤细胞lak肿瘤浸润淋巴细胞til和抗cd3单克隆抗体mab激活的杀伤anti2cd3mabactivataidkillercellscd3aklak细胞及til细胞相比较cd3ak细胞具有扩增能力强体外存活时间较长细胞毒活性高分泌淋巴因子的能力强和体内外抗肿瘤效果显著等优点临床应用具有很好的前景
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H TdR assay was used to m easure the transfo r
m ation of l ymphocytes activa ted by yCD 3. LDH assay was used to ana lyze the cy to tox ic acti v ity o f CD 3AK in v itro. M ice bear i ng tumors w ere used to obse rve the an ti tu m on e ffect o fCD3 AK ce lls . RESULTS : yCD 3 cou l d b ind spec ific a lly to T ce lls. 5 g yCD 3 could compe titive l y inh i b it 70% o f standard an ti CD 3 antibody to b ind w ith CD 3 m o l ecu l e s on ce llmemb rane . 8 g /L o f yCD 3 stm i u lated the p ro liferation o f pe riphe ra l b lood l ymphocytes , wh ich cou ld be fur ther boos ted by IL 2 or an ti CD 28 antibod ies. CD 3AK ce lls , CD3 , CD8 , and CD 25 IL 2 and IFN produc ing CD3
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溶液 ( 氯化硝基四氮唑蓝 4 m g、氧化型辅酶 & 10 m g 及吩秦二甲酯硫酸盐 1 m g 加水至 2 mL, 溶解。取上 液 1 . 6 mL 加 1 m o l/L 乳酸钠 0 . 4 mL, 0 . 1 mo l /L PB p H 7 . 4 加至 10 mL ) 100 L, 于室温作用 10 m in , 加 0 . 1 m o l/L 柠檬酸 25 L 终止反应。用酶联仪于波长 570 测量吸光度 ( A )值。 ∋计算公式 :