革兰阴性需氧和兼性厌氧性杆菌鉴定—假单胞菌属(微生物检验课件)

标本
分离培养 （血平板）
血标本 增菌
涂片镜检 氧化酶 菌落特征 绿脓素 气味
可疑菌落（性状、色素）
初步鉴定 最后鉴定
色素鉴定 生化反应 42℃生长 分型
O/F：O 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 明胶液化＋
铜绿假单胞菌－－检验方法
❖ 显微镜检查：标本直接涂片革兰染色镜检；鞭毛染色镜检 ❖ 培养：标本接种血平板、Mac平板分离培养，血标本先增菌，
一、假单胞菌属
❖ 假单胞菌科细菌根据rRNA-DNA同源性分为5群，其中Ⅰ群 属于假单胞菌属，共7种细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。
❖ 多为条件致病菌，是医院感染的主要病原菌
假单胞菌属共同点
❖ 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或丛鞭 毛
❖ 专性需氧 ❖ 营养要求不高 ❖ 氧化酶：＋ ❖ O/F：O ❖ Mac生长：＋ ❖ 触酶阳性，有的产生水溶性色素
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斯氏假 单胞菌
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嗜麦芽 鼻疽假 类鼻疽 假单胞 单胞菌 假单胞
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氧化酶试验（＋）
铜绿假单胞菌－－抗原结构和抵抗力
❖ 抗原结构 O抗原：包括外膜蛋白和脂多糖 H抗原
❖ 抵抗力： 对外界环境抵抗力强 对多种抗生素不敏感
铜绿假单胞菌－－临床意义
❖ 致病物质：内毒素、外毒素、胞外酶、菌毛、多糖荚膜、绿 脓菌素
❖ 所致疾病 条件致病菌，经多种途径传播，抵抗力低下时易感 医院感染的重要病原菌 大面积烧伤创面感染的重要病原菌
❖ 细菌耐药机制
外膜通透性降低
产生灭活酶或钝化酶
主动外排系统将抗生素泵出胞外
抗菌药物作用靶位改变
❖ 本菌对氨苄西林、安美汀、四环素、优力新、一、 二代头孢菌素、头霉素、大环内酯类、磺胺等天然 耐药。
❖ 各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可 能发生耐药。
铜绿假单胞菌－－检验程序
涂片 染色镜检
铜绿假单胞菌－－形态染色
❖ 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或丛鞭 毛
Байду номын сангаас
铜绿假单胞菌－－培养特性
❖ 专性需氧、营养要求不高 ❖ 最适温度35℃，20-42 ℃ 生长，4℃不生长 ❖ 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，培养物呈蓝绿色。 ❖ 培养物有生姜气味。
铜绿假单胞菌菌落特征（普通琼脂平板）
铜绿假单胞菌菌落特征（MAC）
试验
铜绿假 荧光假 单胞菌 单胞菌
氧化酶
＋
荧光素
＋/＿
青脓素
＋/＿
动力
＋
葡糖氧化 ＋
乳糖氧化 ＿
蔗糖氧化 ＿
木糖氧化 ＋
赖氨酸脱羧酶 ＿
精氨酸水解酶 ＋
硝酸盐还原 ＋/＿
明胶液化 ＿ / ＋
42℃生长 ＋
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恶臭假 单胞菌
＋ ＋/＿ ＋/＿ ＋ ＋
铜绿假单胞菌－－菌落特征
❖ 典型菌落：扁平湿润，边缘不规则，常呈融合状态，培养基 绿色
❖ 黏液型菌落：菌落凸起，呈粘液状 ❖ 在血平板上形成透明溶血环 ❖ 在SS、Mac上形成不发酵乳糖菌落
铜绿假单胞菌－－生化反应
❖ 氧化酶＋ ❖ O/F：O ❖ 枸櫞酸盐利用＋，还原硝酸盐 ❖ 精氨酸双水解＋ ❖ 明胶液化＋
再转种 ❖ 鉴定：
初步鉴定：菌落特征、水溶性绿色色素、生姜气味、氧化酶、 O/F 全面鉴定：色素不典型者需全面鉴定
铜绿假单胞菌－－分型检查
❖ 血清学分型 ❖ 噬菌体分型 ❖ 质粒指纹图谱分析 ❖ 脉冲场凝胶电泳 ❖ 分型检查意义：对医院感染的流行病学调查有重要意义
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别